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猪塞内卡谷病毒VP1蛋白原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
2
1
作者
莫红芳
石宗承
+6 位作者
陆晶山
何东贤
杨延辉
梁淑芳
俸祥仁
钱平
韦巧燕
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期2175-2183,共9页
【目的】原核表达猪塞内卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)VP1蛋白,制备SVV-CH-HB2016 VP1蛋白多克隆抗体并分析其抗原性,为进一步研发SVV病毒诊断试剂盒和亚单位疫苗提供参考依据。【方法】对SVV-CHHB2016 VP1基因序列进行密码子优化...
【目的】原核表达猪塞内卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)VP1蛋白,制备SVV-CH-HB2016 VP1蛋白多克隆抗体并分析其抗原性,为进一步研发SVV病毒诊断试剂盒和亚单位疫苗提供参考依据。【方法】对SVV-CHHB2016 VP1基因序列进行密码子优化,构建质粒pUCK/VP1-opt,双酶切后连接至pET-28a(+)载体,构建原核表达质粒pET-28a-VP1。将重组质粒pET-28a-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)分子伴侣感受态细胞,经IPTG诱导表达获得重组VP1蛋白。采用Western blotting方法分析VP1蛋白的反应原性,并以包涵体变性和复性方式纯化。随后将VP1蛋白免疫新西兰白兔,分离血清获得重组VP1蛋白的多克隆抗体。以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体的效价水平,以Protein A+G Agarose抗体纯化试剂盒纯化多克隆抗体。通过Western blotting和间接免疫荧光抗体试验(IFA)法验证多克隆抗体与SVV-CH-HB2016毒株反应的特异性。【结果】成功构建原核表达质粒pET-28a-VP1,在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、37℃诱导4 h条件下,重组VP1蛋白成功表达并主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果显示,重组VP1蛋白可与His-Tag Mouse mAb发生特异性结合,具有良好的反应原性;经变性和复性纯化的重组包涵体蛋白纯度和浓度均较高;采用间接ELISA法检测多克隆抗体的效价为1∶32000;纯化后的抗体无明显杂带,纯度大于90.0%;Western blotting和IFA鉴定结果表明,多克隆抗体可特异性识别SVV-CH-HB2016毒株,重组VP1蛋白具有较好的免疫原性。【结论】通过原核表达SVV VP1蛋白获得的重组VP1蛋白具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体特异性良好,可作为诊断试剂盒及亚单位疫苗研制的候选抗原。
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关键词
猪塞内卡谷病毒
VP1蛋白
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
猪塞内卡谷病毒和圆环病毒2型嵌合病毒样颗粒疫苗的制备与抗体检测
被引量：
1
2
作者
何至远
吴冬荀
+4 位作者
张贺楠
王飞
吴珊珊
刘昕泽
肖进
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2021年第8期27-31,37,共6页
为了防控猪场塞内卡谷病毒(SVV)和圆环病毒2型(PCV2)的混合感染,本试验建立了一种猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗的制备方法并进行抗体检测。试验将猪SVV P 1基因部分VP 3序列替换为PCV2 ORF 2基因C端部分多肽序列,利用杆状病毒表达系...
为了防控猪场塞内卡谷病毒(SVV)和圆环病毒2型(PCV2)的混合感染,本试验建立了一种猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗的制备方法并进行抗体检测。试验将猪SVV P 1基因部分VP 3序列替换为PCV2 ORF 2基因C端部分多肽序列,利用杆状病毒表达系统获得表达猪SVV、PCV2嵌合重组蛋白的重组杆状病毒,将病毒培养物纯化,经蛋白检测及电镜观察确定成功构建猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒(大小约30 nm)。结果表明,制备的猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗可使试验猪同时产生针对猪SVV和PCV2的特异性抗体,充分显示出其作为一种针对猪场SVV和PCV2合并感染的安全有效疫苗的前景。
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关键词
猪塞内卡谷病毒
圆环
病毒
2型
嵌合
病毒
样颗粒疫苗
杆状
病毒
表达系统
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职称材料
题名
猪塞内卡谷病毒VP1蛋白原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
2
1
作者
莫红芳
石宗承
陆晶山
何东贤
杨延辉
梁淑芳
俸祥仁
钱平
韦巧燕
机构
广西农业职业技术大学动物科技学院
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
广西大学动物科学技术学院
广西壮族自治区柳州种畜场
武宣县金兴生猪养殖专业合作社
重庆三峡职业学院动物科技学院
出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期2175-2183,共9页
基金
国家重点研发计划重点专项(2016YFD0501505)
国家自然科学基金项目(32072841)
来宾市科学研究与技术开发计划项目(来科攻220823,来科产220826)。
文摘
【目的】原核表达猪塞内卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)VP1蛋白,制备SVV-CH-HB2016 VP1蛋白多克隆抗体并分析其抗原性,为进一步研发SVV病毒诊断试剂盒和亚单位疫苗提供参考依据。【方法】对SVV-CHHB2016 VP1基因序列进行密码子优化,构建质粒pUCK/VP1-opt,双酶切后连接至pET-28a(+)载体,构建原核表达质粒pET-28a-VP1。将重组质粒pET-28a-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)分子伴侣感受态细胞,经IPTG诱导表达获得重组VP1蛋白。采用Western blotting方法分析VP1蛋白的反应原性,并以包涵体变性和复性方式纯化。随后将VP1蛋白免疫新西兰白兔,分离血清获得重组VP1蛋白的多克隆抗体。以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体的效价水平,以Protein A+G Agarose抗体纯化试剂盒纯化多克隆抗体。通过Western blotting和间接免疫荧光抗体试验(IFA)法验证多克隆抗体与SVV-CH-HB2016毒株反应的特异性。【结果】成功构建原核表达质粒pET-28a-VP1,在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、37℃诱导4 h条件下,重组VP1蛋白成功表达并主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果显示,重组VP1蛋白可与His-Tag Mouse mAb发生特异性结合,具有良好的反应原性;经变性和复性纯化的重组包涵体蛋白纯度和浓度均较高;采用间接ELISA法检测多克隆抗体的效价为1∶32000;纯化后的抗体无明显杂带,纯度大于90.0%;Western blotting和IFA鉴定结果表明,多克隆抗体可特异性识别SVV-CH-HB2016毒株,重组VP1蛋白具有较好的免疫原性。【结论】通过原核表达SVV VP1蛋白获得的重组VP1蛋白具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体特异性良好,可作为诊断试剂盒及亚单位疫苗研制的候选抗原。
关键词
猪塞内卡谷病毒
VP1蛋白
原核表达
多克隆抗体
Keywords
porcine Seneca valley virus
VP1 protein
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
猪塞内卡谷病毒和圆环病毒2型嵌合病毒样颗粒疫苗的制备与抗体检测
被引量：
1
2
作者
何至远
吴冬荀
张贺楠
王飞
吴珊珊
刘昕泽
肖进
机构
中牧实业股份有限公司
中国农业大学动物科学技术学院
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2021年第8期27-31,37,共6页
文摘
为了防控猪场塞内卡谷病毒(SVV)和圆环病毒2型(PCV2)的混合感染,本试验建立了一种猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗的制备方法并进行抗体检测。试验将猪SVV P 1基因部分VP 3序列替换为PCV2 ORF 2基因C端部分多肽序列,利用杆状病毒表达系统获得表达猪SVV、PCV2嵌合重组蛋白的重组杆状病毒,将病毒培养物纯化,经蛋白检测及电镜观察确定成功构建猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒(大小约30 nm)。结果表明,制备的猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗可使试验猪同时产生针对猪SVV和PCV2的特异性抗体,充分显示出其作为一种针对猪场SVV和PCV2合并感染的安全有效疫苗的前景。
关键词
猪塞内卡谷病毒
圆环
病毒
2型
嵌合
病毒
样颗粒疫苗
杆状
病毒
表达系统
Keywords
seneca valley virus
porcine circovirus type 2
chimeric virus-like particle vaccine
baculovirus expression system
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
S858.291.5 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪塞内卡谷病毒VP1蛋白原核表达及多克隆抗体制备
莫红芳
石宗承
陆晶山
何东贤
杨延辉
梁淑芳
俸祥仁
钱平
韦巧燕
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
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职称材料
2
猪塞内卡谷病毒和圆环病毒2型嵌合病毒样颗粒疫苗的制备与抗体检测
何至远
吴冬荀
张贺楠
王飞
吴珊珊
刘昕泽
肖进
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2021
1
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