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猪冠状病毒检测方法的研究进展
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作者 王一丹 《现代畜牧兽医》 2025年第6期81-85,共5页
猪腹泻病是生猪养殖中常见的疾病,主要由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)等猪冠状病毒引起,可使仔猪死亡率升高及生长迟缓,从而导致巨大经济损失,并... 猪腹泻病是生猪养殖中常见的疾病,主要由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)等猪冠状病毒引起,可使仔猪死亡率升高及生长迟缓,从而导致巨大经济损失,并对生物安全和公共健康构成潜在风险。此外,在养殖过程中,多种猪冠状病毒混合感染的情况时有发生,极大地增加了猪腹泻病的诊断难度与防控复杂性。因此,为有效应对这一现状,建立一种高效且精确的检验手段显得尤为关键。文章对当前猪冠状病毒诊断技术的研究进展进行了综述,包括各类传统检测技术以及新兴的分子生物学、免疫学检测等手段,旨在为猪腹泻病的科学防控提供参考,助力生猪养殖业的健康可持续发展。 展开更多
关键词 猪冠状病毒 混合感染 鉴别诊断 新型检测技术
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猪氨基肽酶N作为受体介导猪冠状病毒感染的研究进展 被引量:2
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作者 韦欣欣 李泽辉 +1 位作者 靳晓慧 魏战勇 《河南农业科学》 北大核心 2021年第8期1-8,共8页
猪氨基肽酶N(Porcine aminopeptidase N,pAPN)广泛地存在于猪组织细胞的膜表面,是一类对锌离子依赖性较强的膜结合Ⅱ型的金属跨膜糖蛋白。猪氨基肽酶作为一种功能性受体与猪冠状病毒的相互作用是目前猪冠状病毒研究热点之一。pAPN作为... 猪氨基肽酶N(Porcine aminopeptidase N,pAPN)广泛地存在于猪组织细胞的膜表面,是一类对锌离子依赖性较强的膜结合Ⅱ型的金属跨膜糖蛋白。猪氨基肽酶作为一种功能性受体与猪冠状病毒的相互作用是目前猪冠状病毒研究热点之一。pAPN作为多种冠状病毒的受体,主要是通过识别和黏附冠状病毒S蛋白的受体结合域(Receptor binding domain,RBD)从而介导感染。综述了pAPN受体与不同猪冠状病毒结合机制方面的研究进展,分析不同猪冠状病毒在侵染宿主时与受体结合方式的异同,并对pAPN受体抑制剂的相关研究进行探讨,为研究猪冠状病毒感染机制提供参考,也为针对pAPN蛋白开发阻断冠状病毒感染的药物奠定基础。 展开更多
关键词 病毒 氨基肽酶N 猪冠状病毒 受体 受体抑制剂
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2种猪冠状病毒双重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:3
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作者 温海京 贾超伟 +3 位作者 刘芊麟 张喜喜 刘鑫宇 周双海 《北京农学院学报》 2019年第1期51-55,共5页
【目的】建立一种可同时检测2种猪冠状病毒即猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的双重RT-PCR检测方法并进行临床应用。【方法】对TGEV和PEDV的单项RT-PCR方法分别进行条件优化后对2种病毒的双重RT-PCR进行条件优化并进... 【目的】建立一种可同时检测2种猪冠状病毒即猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的双重RT-PCR检测方法并进行临床应用。【方法】对TGEV和PEDV的单项RT-PCR方法分别进行条件优化后对2种病毒的双重RT-PCR进行条件优化并进行特异性与敏感性试验,然后用单项RT-PCR方法和双重RT-PCR对临床样品进行比较检测。【结果】双重RT-PCR检测方法的PEDV与TGEV的检测敏感度分别为59、49copies/μL,该方法对当前常见猪源RNA病毒的检测结果都为阴性。该方法对2013—2016年18个猪场的235份仔猪腹泻样品的检测结果显示,PEDV和TGEV的个体阳性率分别为73.6%和2.1%,与单项RTPCR方法检测结果无显著性(P>0.05)差异,临床样品中PEDV的猪场阳性率与个体阳性率都极显著(P<0.01)高于TGEV。【结论】建立了一种有较高灵敏性与特异性的PEDV与TGEV的双重RT-PCR检测方法,近年来猪传染性腹泻样品中PEDV检出率极显著高于TGEV。 展开更多
关键词 猪冠状病毒 传染性胃肠炎病毒 流行性腹泻病毒 双重RT-PCR
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猪冠状病毒与SARS-CoV-2的S基因及其蛋白结构差异分析 被引量:1
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作者 徐鑫 黄甜 +6 位作者 张云静 杨仕标 肖燕 赵文华 邓均华 黄柏成 田克恭 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期83-87,共5页
自2019年12月以来,由SARS-CoV-2感染造成的COVID-19对全球人类的健康构成了巨大威胁。为研究SARS-CoV-2与猪冠状病毒之间的相关性,本实验采用生物信息学分析方法对SARS-CoV-2和常见猪冠状病毒的纤突(S)蛋白氨基酸序列进行遗传进化分析、... 自2019年12月以来,由SARS-CoV-2感染造成的COVID-19对全球人类的健康构成了巨大威胁。为研究SARS-CoV-2与猪冠状病毒之间的相关性,本实验采用生物信息学分析方法对SARS-CoV-2和常见猪冠状病毒的纤突(S)蛋白氨基酸序列进行遗传进化分析、对S蛋白S1亚基的受体结合域空间结构进行相似性分析,并采用双抗原夹心ELISA试剂盒检测了常见猪冠状病毒阳性血清中的SARS-CoV-2抗体。结果显示,SARS-CoV-2与猪冠状病毒的遗传关系较远,其S1亚基的受体结合域空间结构差异大,常见猪冠状病毒阳性血清中的SARS-CoV-2特异性抗体均为阴性。表明SARS-CoV-2与猪冠状病毒亲缘关系远,难以通过感染猪进而接触人类以实现跨物种感染,威胁公共卫生安全的风险极小。本研究为COVID-19病原溯源与跨物种生物安全性分析提供基础。 展开更多
关键词 病毒 新型病毒 猪冠状病毒 纤突蛋白 抗体
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猪冠状病毒性疫病的诊断与控制探讨 被引量:4
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作者 陈乃华 《农业与技术》 2016年第2期127-127,共1页
本文主要是针对猪冠状病毒性病的诊断以及控制进行了全面的分析研究,并且在这个基础之上提出了下文中的一些内容,希望能够给予同行业人员提供参考。
关键词 猪冠状病毒 性疫病 诊断 控制
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新型冠状病毒及其与猪冠状病毒的相关性和启示 被引量:1
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作者 黄柏成 肖燕 田克恭 《猪业科学》 2020年第1期98-100,共3页
2019年底新型冠状病毒(SARS-Co V-2)造成了对人类健康构成了巨大威胁的疫情,但其与猪冠状病毒基因组序列相似性低,在决定病毒宿主嗜性和毒力的纤突(spike,S)蛋白结构上具有较大差异,据此推测不能构成跨种传播。对蝙蝠携带冠状病毒多样... 2019年底新型冠状病毒(SARS-Co V-2)造成了对人类健康构成了巨大威胁的疫情,但其与猪冠状病毒基因组序列相似性低,在决定病毒宿主嗜性和毒力的纤突(spike,S)蛋白结构上具有较大差异,据此推测不能构成跨种传播。对蝙蝠携带冠状病毒多样性和分布区域的研究可有助于分析其对人类和养殖业的威胁,在公共卫生中具有积极意义。针对突发疫病,快速响应获得原始材料数据有助于疫病诊断、治疗和预防研究的开展。多种人冠状病毒S蛋白被证明是最适合开发的疫苗及治疗性抗体靶标,可在动物疫苗等产品的设计中借鉴。 展开更多
关键词 新型病毒 猪冠状病毒 纤突蛋白 诊断
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体制备
7
作者 叶晨倩 李智丽 +11 位作者 叶曼青 秦文珍 杨心雨 翟雪滢 郑浩 童武 李国新 于海 童光志 单同领 娄华 孔宁 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期164-170,共7页
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新发的病原体,引起仔猪腹泻、脱水和呕吐等症状。本研究以PDCoV的RNA为模板,扩增PDCoV N基因,将其插入原核表达载体pColdⅠ中,构建PDCoV N-pColdⅠ质粒;通过BL21(DE3)原核表达和纯化获得高纯度的PDCoV N蛋... 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新发的病原体,引起仔猪腹泻、脱水和呕吐等症状。本研究以PDCoV的RNA为模板,扩增PDCoV N基因,将其插入原核表达载体pColdⅠ中,构建PDCoV N-pColdⅠ质粒;通过BL21(DE3)原核表达和纯化获得高纯度的PDCoV N蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备PDCoV N蛋白多克隆抗体。结果显示:原核表达的PDCoV N蛋白为可溶性蛋白,分子量约为40 kDa;通过ELISA、Western blot和IFA鉴定可知,本研究制备的PDCoV N多克隆抗体均具有良好的效价,可为深入开展PDCoV相关的基础和应用研究提供工具。 展开更多
关键词 德尔塔病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体
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猪δ冠状病毒对断奶仔猪肠道细胞外基质及其动态变化的影响
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作者 阮诗慧 刘春艳 +6 位作者 韦洋洋 何逸懿 吴绮雯 熊云霞 杨雪芬 王丽 易宏波 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期3297-3307,共11页
【目的】探讨猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)对断奶仔猪肠道细胞外基质(extracellular matrix,ECM)及其动态调控因子的影响,以缓解猪病原体感染和改善仔猪肠道健康。【方法】试验选取16头健康的8日龄仔猪(杜×长... 【目的】探讨猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)对断奶仔猪肠道细胞外基质(extracellular matrix,ECM)及其动态调控因子的影响,以缓解猪病原体感染和改善仔猪肠道健康。【方法】试验选取16头健康的8日龄仔猪(杜×长×大),随机分为2组:对照组和PDCoV组,每组8头。对照组口腔灌服20 mL DMEM,PDCoV组口腔灌服20 mL PDCoV细胞培养液(10~8 TCID50/mL),间隔8 h再灌服1次。攻毒后第3天屠宰所有仔猪,采集中段空肠和远端回肠样品,进行肠道胶原蛋白(collagen)、纤维黏连蛋白1(fibronectin,FN1)、整合素(integrin,ITG)及其相关调控因子等ECM相关指标的检测。【结果】与对照组相比,PDCoV组仔猪空肠白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8基因mRNA表达量均显著增加(P<0.05)。Masson染色显示,PDCoV攻毒增加了空肠胶原蛋白的沉积。与对照组相比,PDCoV组仔猪空肠FN1、回肠ITGA1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05)。在空肠中,PDCoV组仔猪的ECM调控因子基质金属蛋白酶-2(MMP2)、MMP9、纤溶酶原激活物(PAs)、运输和高尔基体组织2(TANGO2)基因mRNA表达量均显著低于对照组(P<0.05),内质网通道蛋白(SEC6A1)、磷酸二酯酶4δ(PDE4D)基因mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,PDCoV组仔猪回肠中MMP2、PAs、SEC6A1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05),MMP9基因mRNA表达量显著增加(P<0.05)。通过Spearman相关性分析可知,调控因子MMP2、TANGO2、PAs与促炎症因子IL-1β、IL-8基因mRNA表达量呈显著负相关(P<0.05),与转化生长因子-β(TGF-β)基因mRNA表达量呈显著正相关(P<0.05);SEC6A1、PDE4D与IL-1β、IL-6、IL-8基因mRNA表达量呈显著正相关(P<0.05),PDE4D与TGF-β基因mRNA表达量呈显著负相关(P<0.05)。【结论】灌服PDCoV会降低仔猪肠道中纤维黏连蛋白和整合素的表达,并通过调节ECM调控因子的表达量,引起断奶仔猪肠道中胶原蛋白沉积,影响肠道中ECM的动态变化,破坏肠道稳态健康。 展开更多
关键词 δ病毒(PDCoV) 断奶仔 细胞外基质 基质金属蛋白酶
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猪德尔塔冠状病毒感染与抗感染研究进展
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作者 毛福超 翟崇凯 +4 位作者 田文静 王聪慧 宋敏杰 王迎鲜 张贺伟 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1281-1291,共11页
猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型肠道冠状病毒,主要感染哺乳仔猪,临床表现为腹泻、呕吐、脱水等症状,发病率可达100%。PDCoV严重危害新生仔猪健康,现已成为引起猪群腹泻的主要病原体之一。PDCoV通过膜融合... 猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型肠道冠状病毒,主要感染哺乳仔猪,临床表现为腹泻、呕吐、脱水等症状,发病率可达100%。PDCoV严重危害新生仔猪健康,现已成为引起猪群腹泻的主要病原体之一。PDCoV通过膜融合及受体介导的内吞作用侵入宿主细胞,S蛋白是病毒侵入细胞的主要结构,表面氨基肽酶N、小窝蛋白是病毒侵入细胞的关键位点。此外,表面氨基肽酶N目前被认为是PDCoV跨物种传播的重要位点。细胞通过干扰素(IFN)基因表达、胆固醇代谢及N蛋白泛素化等途径引发抗感染。PDCoV通过自身结构蛋白、辅助蛋白及非结构蛋白等通过干扰IFN的表达及诱导侵染细胞凋亡等途径产生免疫逃避,进而持续侵染宿主细胞。目前用于预防和控制PDCoV感染的商业疫苗或抗病毒药物多在试验研发阶段或初上市阶段,其对PDCoV的预防和控制的临床效果亟需市场验证。尤其是针对病毒复制、免疫逃逸、抗PDCoV宿主因子等靶点开发的抗病毒药物或疫苗,为未来开发新型疫苗或抗病毒药物研发提供了新的研究方向和坚实的基础。笔者通过阐述PDCoV与宿主之间的感染和抗感染机制,探究多种抗病毒药物抑制PDCoV感染的潜在作用机制,为研究PDCoV致病机制、抗PDCoV感染治疗以及新药物的开发提供参考。 展开更多
关键词 德尔塔病毒(PDCoV) 致病性 免疫逃逸 病毒机制
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2023年湖南省东部地区屠宰场猪德尔塔冠状病毒感染状况调查
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作者 邓国强 黄建龙 +4 位作者 张朝阳 郑辉 毛仕勇 李世强 张智勇 《湖南畜牧兽医》 2024年第6期17-18,28,共3页
为了解湖南省猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的感染情况和流行态势,2023年在湖南省东部的郴州、长沙、益阳、株洲、岳阳进行了采样调查,共采集180份猪脾脏组织,用PDCoV荧光RT-PCR检测方法进行核酸检测,并对结果进行分析。结果显示:检出PDCoV... 为了解湖南省猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的感染情况和流行态势,2023年在湖南省东部的郴州、长沙、益阳、株洲、岳阳进行了采样调查,共采集180份猪脾脏组织,用PDCoV荧光RT-PCR检测方法进行核酸检测,并对结果进行分析。结果显示:检出PDCoV阳性样品41份,阳性率为22.78%;郴州、长沙、益阳、株洲、岳阳PDCoV的阳性率分别为75.00%、0、2.50%、0、50.00%;9个屠宰场中4个检出PDCoV,占比为44.44%。结果表明:湖南省猪群PDCoV感染率较高,湘东南地区的感染率显著高于湘东北地区。 展开更多
关键词 屠宰场 核酸检测 流行病学调查 德尔塔病毒 感染率 卡方检验
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体2D7的制备与生物学特性鉴定 被引量:1
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作者 张宁 赵平 +12 位作者 刘思雨 赵硕 陈忠伟 何颖 欧阳康 卢冰霞 蒋家霞 郭旋 林昌华 赵武 黄伟坚 秦毅斌 赵凌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期115-125,共11页
为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后... 为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后获得PDCoV-N重组蛋白,将其进行纯化后再免疫小鼠,制备针对PDCoV-N蛋白的mAb,并进行了抗体的效价测定、免疫荧光(IFA)、Western blot、亚类的鉴定、mAb特异性的鉴定。结果,成功构建pColdⅡ-PDCoV-N重组原核表达质粒,SDS-PAGE显示重组N蛋白成功表达,分子质量约为38 kDa;经小鼠免疫、细胞融合、亚克隆筛选获得1株分泌PDCoV-N蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株;制备的腹水经间接ELISA方法测定抗体的效价为2.048×10^(6)。IFA、Western blot试验表明该mAb可以与PDCoV-N蛋白及全病毒特异性结合,亚类鉴定其亚型为IgG1,轻链为κ链。该mAb只与PDCoV反应,而与其他猪肠道病毒无交叉反应,表明本研究制备的mAb具有良好的特异性。本研究成功制备了PDCoV-N蛋白的mAb,为进一步研究PDCoV的生物学特性和诊断试剂的开发提供技术支持。 展开更多
关键词 德尔塔病毒 N蛋白 单克隆抗体
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稳定表达猪德尔塔冠状病毒N蛋白的Vero细胞系的建立及鉴定 被引量:1
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作者 钱炳旭 薄宗义 +7 位作者 白雪雁 张成成 郭梦娇 李梦娇 廖凯 薛峰 吴艳涛 张小荣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期56-61,共6页
为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)核衣壳(N)蛋白的非洲绿猴肾(Vero)细胞系,本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒pLVX-PDCoV-N,利用慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,慢病毒感染Vero细胞,... 为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)核衣壳(N)蛋白的非洲绿猴肾(Vero)细胞系,本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒pLVX-PDCoV-N,利用慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,慢病毒感染Vero细胞,嘌呤霉素加压筛选目的细胞。RT-PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,Western blot和IFA试验表明N蛋白可在细胞系中稳定表达。应用制备的细胞系对临床PDCoV阳性血清样品进行检测,与ELISA检测结果符合率达到100%。本研究成功建立了稳定表达PDCoV N蛋白的Vero细胞系,为PDCoV N蛋白生物学特性研究和PDCoV的临床检测、流行病学调查奠定了基础。 展开更多
关键词 德尔塔病毒 核衣壳(N)蛋白 病毒 稳转细胞系
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猪德尔塔冠状病毒病流行现状与防控策略
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作者 孙涛 《浙江畜牧兽医》 2024年第5期26-27,共2页
猪德尔塔冠状病毒病属于我国二类传染病,是由猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)引起的,2007年,科研人员在亚洲豹猫和一些鸟类样本中检测到了该病毒,这表明该病毒可以感染哺乳动物及鸟类,尤其是规模化养猪场最易造成该病毒的广泛传播,一旦感染,仔... 猪德尔塔冠状病毒病属于我国二类传染病,是由猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)引起的,2007年,科研人员在亚洲豹猫和一些鸟类样本中检测到了该病毒,这表明该病毒可以感染哺乳动物及鸟类,尤其是规模化养猪场最易造成该病毒的广泛传播,一旦感染,仔猪成活率和生长速度都会受到直接影响,可引起5-15日龄哺乳仔猪腹泻、呕吐、脱水、食欲不振等临床症状,导致机体迅速脱水后脏器衰竭而亡,给猪场带来一定的经济损失。 展开更多
关键词 成活率 二类传染病 德尔塔病毒 规模化养 防控策略 科研人员 流行现 临床症
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基于转录组测序技术分析猪德尔塔冠状病毒感染ST细胞机制的初步研究 被引量:2
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作者 谢永生 张昆丽 +1 位作者 张建峰 贺东生 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期236-244,共9页
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染可导致仔猪出现水样腹泻和死亡,严重危害猪的健康。为研究PDCo V感染引起宿主细胞基因转录水平的变化及初步研究其感染机制,本研究提取PDCo V感染组和不感染该病毒的阴性对照组ST细胞样品总RNA,构建二者的c... 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染可导致仔猪出现水样腹泻和死亡,严重危害猪的健康。为研究PDCo V感染引起宿主细胞基因转录水平的变化及初步研究其感染机制,本研究提取PDCo V感染组和不感染该病毒的阴性对照组ST细胞样品总RNA,构建二者的cDNA文库后采用Illumina HiSeq 6000高通量测序平台进行转录组测序(RNA-Seq)。结果显示,所有样品的测序错误率均≤0.03%;Q20/%和Q30/%分别达98%和94%以上;GC含量在51.09%~55.15%;相关性分析结果显示,阴性对照组及感染组细胞样品各组内的R值均>0.9,上述结果表明测序数据可靠,可用于后续转录组学数据分析。采用ggplot2软件分析两组细胞组内测序结果的相关性,并以相关系数R>0.9判定各组内测序数据的准确性;采用DESeq2软件并以P<0.05和log2(Fold change)>1为条件筛选两组细胞中转录显著差异基因;采用ClusterProfiler R软件对转录显著差异基因进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析;采用Pheatmap软件对各组ST细胞中与免疫反应相关的转录显著差异基因进行聚类分析;随机选择9个转录显著差异基因经RT-q PCR验证RNA-Seq的结果。筛选结果显示,与阴性对照组细胞相比,共筛选出5719个转录显著差异基因,其中3573个转录显著上调基因,2146个转录显著下调基因。GO功能和KEGG信号通路富集分析结果显示,转录显著上调的基因与ST细胞的免疫应答、防御反应等功能有关;转录显著下调的基因与细胞的氧化还原和新陈代谢等功能有关;转录显著上调的基因参与细胞因子受体互作、天然免疫反应相关、肿瘤坏死因子等的信号通路;转录显著下调的基因与细胞物质代谢信号通路有关,包括氨基酸代谢、脂代谢、乙醛酸和二羧酸代谢等信号通路。与免疫反应相关的转录显著差异基因的聚类分析结果显示,与阴性对照组细胞相比,PDCo V感染的ST细胞中白细胞介素基因(IL-1R1、1L-6、IL-10RB、IL-15和IL-12A等)、抗病毒基因(MX1、OAS)和干扰素基因(INFAR1、IFN-ALPHAOMEGA)的转录水平均显著上调。上述结果表明PDCo V感染后,ST细胞的天然免疫反应被激活,但细胞的代谢反应降低,这更有利于减弱病毒在ST细胞中的复制,起到一定的抗病毒效果。9个转录显著差异基因的RT-q PCR结果与RNA-seq结果基本一致,表明转录组测序数据可靠。本研究为进一步解析PDCo V的感染机制提供参考依据。 展开更多
关键词 德尔塔病毒 转录组测序 转录显著差异基因
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枯草芽孢杆菌4种环脂肽抗猪δ冠状病毒的研究
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作者 朱桃 张双玉 +5 位作者 张路阳 钟纯燕 陈悦雯 李基棕 李彬 罗楚平 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第4期182-186,192,共6页
为探究从枯草芽孢杆菌Bs 916中提取的表面活性素、罗克霉素、泛革素及杆菌霉素L 4种抗菌肽对猪δ冠状病毒(PDCoV)的抗病毒作用。首先采用CCK-8法确定抗菌肽对细胞无毒性的最佳浓度范围,随后分别采用RT-qPCR、Western blot及IFA 3种方法... 为探究从枯草芽孢杆菌Bs 916中提取的表面活性素、罗克霉素、泛革素及杆菌霉素L 4种抗菌肽对猪δ冠状病毒(PDCoV)的抗病毒作用。首先采用CCK-8法确定抗菌肽对细胞无毒性的最佳浓度范围,随后分别采用RT-qPCR、Western blot及IFA 3种方法检测Bs 916中4种环脂肽对PDCoV的抗病毒效果。结果显示,4种环脂肽在浓度≤50μg/mL时对细胞无毒性,同时具有良好的抗病毒效果。相同条件下,罗克霉素抗病毒效果最佳,其次为表面活性素。本研究从枯草芽孢杆菌Bs 916中提取的表面活性素、罗克霉素、泛革素及杆菌霉素L可抑制PDCoV在细胞中的增殖,具有良好的抗病毒作用,其中以罗克霉素和表面活性素的抗病毒效果最佳,可为抗PDCoV药物研发提供理论支持。 展开更多
关键词 表面活性素 罗克霉素 泛革素 杆菌霉素L δ病毒
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猪δ冠状病毒重庆流行株的诊断与N基因序列分析
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作者 吴学婧 于吉锋 +4 位作者 叶勇刚 肖璐 毛从剑 曹冶 康润敏 《畜禽业》 2024年第2期1-8,共8页
2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronav... 2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),命名为CQ2023株。该毒株N基因序列全长1029 bp,与30株GenBank中登录的参考毒株N基因序列比对显示,核苷酸序列相似性为96.7%~99.4%,其中PDCoV CQ2023株与CHN-HeN06-2022株的相似性最高,为99.4%。遗传进化分析显示PDCoV CQ2023株属于国内流行株,与国内PDCoV毒株CHN-HeN06-2022等处于同一进化分支,亲缘关系最近。该次研究成功鉴定出该猪场腹泻疫情由PDCoV感染引起,并进行了N基因序列分析,为PDCoV的流行病学研究、遗传进化、预防及诊断试剂的研究提供数据支持。 展开更多
关键词 δ病毒 诊断 N基因 遗传进化分析
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白原核表达及其多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 赵梓桥 张昆丽 +4 位作者 张春红 翟少伦 康欣桐 黄淑坚 张建峰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1798-1806,共9页
【目的】构建猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)核衣壳(N)蛋白原核表达系统并制备多克隆抗体,为新型疫苗、诊断试剂研发及PDCoV致病机制的深入研究提供基础。【方法】提取PDCoV HeN17株RNA,经RT-PCR扩增,将N基因克隆至p... 【目的】构建猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)核衣壳(N)蛋白原核表达系统并制备多克隆抗体,为新型疫苗、诊断试剂研发及PDCoV致病机制的深入研究提供基础。【方法】提取PDCoV HeN17株RNA,经RT-PCR扩增,将N基因克隆至pGEX-6P-1载体构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行IPTG诱导表达。利用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化重组蛋白,采用3C蛋白酶去除标签。以纯化后的N蛋白为免疫原免疫3月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价,并通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)和免疫沉淀(IP)试验对其进行鉴定。【结果】成功构建原核表达载体pGEX-6p-1-PDCoV-N,获得的PDCoV-N-GST重组蛋白主要以可溶性形式表达,大小约69 kD,经去除GST标签可获得单一目的蛋白条带,经测定蛋白浓度为12.6 mg/mL,获得的PDCoV-N蛋白能与PDCoV阳性血清反应产生单一特异性条带。制备的兔源抗PDCoV-N多克隆抗体效价达1∶4096000,可特异性识别pCAGGS-Flag-N转染HEK-293T细胞中表达的Flag-N蛋白和PDCoV感染LLC-PK1细胞中表达的PDCoV-N蛋白,且能检测到PDCoV-N真核表达载体pCAGGS-Flag-N转染HEK-293T细胞中表达的PDCoV-N蛋白。【结论】成功构建高效PDCoV-N原核表达系统,获得纯度好、浓度高且免疫原性佳的PDCoV-N蛋白,制备的兔源抗PDCoV-N多克隆抗体效价高,具有较强亲和力和特异性,可用于Western blotting、IFA和IP检测。 展开更多
关键词 德尔塔病毒(PDCoV) N蛋白 原核表达 多克隆抗体
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猪德尔塔冠状病毒病的诊断与防治
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作者 朱家春 《今日畜牧兽医》 2024年第3期104-106,共3页
猪德尔塔冠状病毒属于较为严重的猪类传染病,可感染不同生长阶段的猪群,其中以5~15日龄哺乳仔猪最易感,主要症状包括高热、咳嗽、打喷嚏、流涕、呼吸困难、腹泻等,且哺乳仔猪感染后死亡率高达30%~40%,而成年猪、生长猪及生产母猪症状表... 猪德尔塔冠状病毒属于较为严重的猪类传染病,可感染不同生长阶段的猪群,其中以5~15日龄哺乳仔猪最易感,主要症状包括高热、咳嗽、打喷嚏、流涕、呼吸困难、腹泻等,且哺乳仔猪感染后死亡率高达30%~40%,而成年猪、生长猪及生产母猪症状表现轻微,一般可不治而愈,猪德尔塔冠状病毒的出现给世界养猪业造成了巨大的经济损失。研究显示,猪德尔塔冠状病毒与α-冠状病毒具有相似的临床症状和病理变化,感染后可引起猪只的水样腹泻、脱水和死亡。据此,本文结合猪德尔塔冠状病毒病诊断进行探讨,并结合实际提出相应的防治措施,旨在为生猪养殖产业安全发展提供参考。 展开更多
关键词 德尔塔病毒 流行特点 防治措施
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以原核表达的猪δ冠状病毒N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立 被引量:16
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作者 张帆帆 宋德平 +8 位作者 郭楠楠 叶昱 周信荣 李安琪 张敏 彭棋 陈燕君 黄冬艳 唐玉新 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期795-799,共5页
为建立检测血清中猪δ冠状病毒(PDCoV)抗体的间接ELISA方法,本研究根据PDCoV的N基因序列设计特异性引物,扩增出N蛋白全基因序列,将其克隆至低温表达载体p Cold I中并转入BL21,诱导表达获得大小约为41 ku的可溶性目的蛋白;western blot... 为建立检测血清中猪δ冠状病毒(PDCoV)抗体的间接ELISA方法,本研究根据PDCoV的N基因序列设计特异性引物,扩增出N蛋白全基因序列,将其克隆至低温表达载体p Cold I中并转入BL21,诱导表达获得大小约为41 ku的可溶性目的蛋白;western blot试验表明所表达的蛋白具有反应活性。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立了PDCoV间接ELISA抗体检测方法。结果表明,本研究建立的ELISA方法阴阳性临界值为0.316,与猪流行性腹泻病毒等6种猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,重复性和稳定性均较好。应用建立的间接ELISA方法,对收集自江西各地区282份猪血清进行检测,阳性率为12.8%(36/282),表明PDCoV在我省猪群中普遍存在。本实验建立的PDCoV抗体捕获间接ELISA为临床上猪群PDCoV感染监测和流行病学调查提供了实验依据。 展开更多
关键词 δ病毒 N蛋白 原核表达 间接ELISA
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国内首株猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus)的分离鉴定 被引量:52
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作者 陈建飞 王潇博 +5 位作者 焦贺勋 时洪艳 张鑫 刘建波 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期171-174,共4页
猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新出现的猪冠状病毒,于2012年首次在香港的猪群中发现。2014年2月美国在腹泻仔猪和母猪的粪便中首次检测到PDCoV,随后,韩国和我国大陆也从腹泻猪的临床样品中检测到PDCoV。目前... 猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新出现的猪冠状病毒,于2012年首次在香港的猪群中发现。2014年2月美国在腹泻仔猪和母猪的粪便中首次检测到PDCoV,随后,韩国和我国大陆也从腹泻猪的临床样品中检测到PDCoV。目前,只有美国成功分离到2株PDCoV。为分离鉴定PDCoV,本研究将PDCoV阳性样品无菌处理后接种猪肾细胞(LLC-PK)并连续传代培养。通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光和基因序列测定对细胞培养物进行鉴定。结果表明我们成功分离到国内首株PDCoV并将其命名为NH株。M基因的系统发育分析表明NH株与中国、美国及韩国的PDCoV亲源关系较近。本研究为进一步研究PDCoV的致病性和致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 德尔塔病毒 细胞培养 分离 鉴定
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