猪内源性逆转录病毒检测的三重PCR方法的建立及其在五指山猪组织样品检测中的初步应用

1

作者 瑞雪 张云航 +7 位作者 李杨 谭晨 蔡艺菲 刘园园 曹宗喜 张艳 孙瑞萍 刘光亮 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3548-3554,共7页

本研究旨在建立可同时检测猪基因组中的猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)并鉴别PERV-A、PERV-B、PERV-C三种亚型PERV的三重PCR检测方法。根据PERV不同亚型囊膜(env)基因设计特异性引物,经反应条件和反应体系优... 本研究旨在建立可同时检测猪基因组中的猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)并鉴别PERV-A、PERV-B、PERV-C三种亚型PERV的三重PCR检测方法。根据PERV不同亚型囊膜(env)基因设计特异性引物,经反应条件和反应体系优化后对该方法进行特异性、敏感性及重复性试验验证。结果表明:本研究建立的三重PCR检测方法特异性强,可特异性扩增三种亚型PERV目的基因,对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒扩增结果呈阴性;该方法的敏感性较好,对PERV-A、PERV-B、PERV-C质粒标准品的检测下限分别为1×10^(2)、1×10^(3)和1×10^(2)拷贝·μL^(-1);采用建立的三重PCR方法检测103份组织样品,其中PERV-A的阳性率为100%(103/103),PERV-B的阳性率为100%(103/103),PERV-C的阳性率为54%(56/103),与经典单重PCR方法进行比较,符合率分别为100%、100%、96.6%。本研究成功建立了一种特异性强、敏感性较好、快速简便的三重PCR方法,可用于PERV三种亚型同时检测的鉴别诊断,为筛选无PERV的猪源供体器官提供技术支撑。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒 囊膜基因 三重PCR检测方法 组织样品

在线阅读 下载PDF 职称材料

湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒的研究 被引量：12

2

作者 邢晓为 薛立群 +2 位作者 黄生强 黎淑娟 王维 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期799-804,共6页

为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据,从湖南沙子岭猪的保种群内随机采集31头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的前病毒DNA和mRNA,并对PCR扩增的灵... 为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据,从湖南沙子岭猪的保种群内随机采集31头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的前病毒DNA和mRNA,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。多组织RT-PCR检测3头沙子岭猪肾、心、肝、肺、脾等组织中PERV的表达情况,了解其在各组织中的分布情况;最后,扩增、测序该猪种的env基因,结果用NCBI中的BLAST软件进行分析。PCR和RT-PCR结果表明,所检测的31头沙子岭猪均带有PERV前病毒DNA,耳样组织中均有PERV mRNA表达,其中有2头个体携带env-A、env-B、env-C3种囊膜蛋白基因,而其余的29头个体只带有env-Ae、nv-B两种囊膜蛋白基因,未检测到env-C基因。多组织RT-PCR扩增结果表明,3头沙子岭猪的肾、心、肝、肺、脾等组织中,pol、gage、nv-A、env-B基因均有表达,未检测到env-C基因表达。测序沙子岭猪的env基因,结果发现,沙子岭猪env-B和env-C基因与其他猪种序列比较分别存在2和10个碱基的差异,而env-A基因序列没有差异,说明不同的猪种之间env基因存在多态性。以上结果表明,沙子岭猪种群携带PERV,其亚型主要以PERV-A,B为主;PERV在该猪种肾、心、肝、肺、脾等多种组织中的分布没有明显组织特异性,且93.5%(29/31)个体表现为env-C基因缺失,提示沙子岭猪作为候选猪种可能在异种移植中具有较好的应用前景。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒 亚型 沙子岭猪 异种移植 组织分布

在线阅读 下载PDF 职称材料

湖南大围子猪内源性逆转录病毒的研究 被引量：6

3

作者 邢晓为 薛立群 +2 位作者 莫朝辉 黄生强 王维 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期838-842,共5页

目的:研究湖南大围子猪携带的内源性逆转录病毒(porcineendogenousretrovirus,PERV),为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据。方法:从湖南大围子猪的保种群内随机采集42头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中P... 目的:研究湖南大围子猪携带的内源性逆转录病毒(porcineendogenousretrovirus,PERV),为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据。方法:从湖南大围子猪的保种群内随机采集42头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中PERV前病毒DNA和mRNA,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。扩增、测序大围子猪的PERVenv基因,结果用美国生物信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)的BLAST软件进行分析。结果:所检测的42头大围子猪均带有PERV前病毒DNA,耳样组织中均有PERVmRNA表达,所有个体携带env-A,env-B和env-C3种囊膜蛋白基因。测序结果表明,大围子猪env-A和env-C与GenBank登录其他猪种序列(AY288779,AY534304)相比分别存在1和8个碱基的差异,而env-B基因没有碱基差异。结论:大围子猪种群携带PERV,而且均具有转录活性,亚型主要为PERV-ABC;大围子猪的PERVenv-A,env-C存在基因多态性,从生物安全性方面考虑,该猪种不宜作为异种移植供体。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒 大围子猪 亚型 异种移植

在线阅读 下载PDF 职称材料

湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒的检测及亚型分析 被引量：4

4

作者 黎淑娟 邢晓为 +3 位作者 薛立群 黄生强 袁洪 王维 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期530-534,共5页

为探明湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒携带情况及病毒亚型分布,应用gag,pol特异性引物,对31头湖南沙子岭猪耳部组织的DNA,RNA样品进行了PCR,RT-PCR检测,依据env基因表型env-A,env-B,env-C,鉴定了每头猪携带PERV亚型.结果表明,在所检31头... 为探明湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒携带情况及病毒亚型分布,应用gag,pol特异性引物,对31头湖南沙子岭猪耳部组织的DNA,RNA样品进行了PCR,RT-PCR检测,依据env基因表型env-A,env-B,env-C,鉴定了每头猪携带PERV亚型.结果表明,在所检31头个体中,93.5%的个体基因组中同时有PERV的A,B 2种亚型(记为env-AB),另外6.5%的个体基因组中则同时有PERV的A,B,C 3种亚型(记为env-ABC),所有个体的耳样组织中均未检测到单独存在的PERV的A,B或C亚型.说明湖南沙子岭猪中存在PERV序列,且能以mRNA的形式表达,病毒亚型以env-AB为主. 展开更多

关键词 异种移植 猪内源性逆转录病毒 病毒亚型 湖南沙子岭猪

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪内源性逆转录病毒在家猪细胞中的检测 被引量：1

5

作者 冯瑞兵 王健 +2 位作者 段钟平 赵军 刘青 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期470-473,共4页

目的研究家猪(大白猪×杜洛克猪)体内猪内源性逆转录病毒(PERV)的存在和表达。方法采用PCR方法检测猪外周血单个核细胞、肝细胞中PERV前病毒序列;用RT-PCR方法检测家猪血清中PERVRNA序列。结果PCR方法测定猪外周血单个核细胞、肝细... 目的研究家猪(大白猪×杜洛克猪)体内猪内源性逆转录病毒(PERV)的存在和表达。方法采用PCR方法检测猪外周血单个核细胞、肝细胞中PERV前病毒序列;用RT-PCR方法检测家猪血清中PERVRNA序列。结果PCR方法测定猪外周血单个核细胞、肝细胞阳性率分别为40%、100%,RT-PCR方法测定家猪血清阳性率为33.3%。结论家猪体内有PERV的存在和表达,但其外周血单个核细胞、血清PERV的阳性率分别较中国实验用小型猪、大白猪为低,说明不同猪种之间PERV的存在和表达存在较大差异,筛选PERV基因拷贝数低甚至无PERV存在和表达的猪种是今后猪器官细胞医学应用的一个方向。 展开更多

关键词 家猪 猪内源性逆转录病毒 聚合酶链反应 逆转录-聚合酶链反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

壳聚糖纳米纤维支架对猪肝细胞分泌猪内源性逆转录病毒的影响

6

作者 韩冰 施晓雷 +5 位作者 肖江强 张悦 褚薛慧 顾劲扬 顾忠泽 丁义涛 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期609-614,共6页

探讨壳聚糖纳米纤维支架对肝细胞的PERV分泌量以及其感染性的影响。将新鲜分离的猪肝细胞接种于壳聚糖纳米纤维支架或普通条件下连续培养7 d,分为实验组(Nano组)和对照组(Hep组)。每天收集培养液检测逆转录酶(RT)活性,并通过RT-PCR和实... 探讨壳聚糖纳米纤维支架对肝细胞的PERV分泌量以及其感染性的影响。将新鲜分离的猪肝细胞接种于壳聚糖纳米纤维支架或普通条件下连续培养7 d,分为实验组(Nano组)和对照组(Hep组)。每天收集培养液检测逆转录酶(RT)活性,并通过RT-PCR和实时定量PCR测定PERV RNA水平。通过western blot检测细胞裂解液中PERV gag 30蛋白含量。细胞培养液体外孵育HEK293细胞以测定其感染性。结果表明:实时定量PCR、RT活性以及western blot具有相似的变化趋势。在体外培养10 h和2 d出现PERV分泌高峰然后逐渐下降。除第6 dPERV RNA水平和第5 d蛋白水平实验组明显高于对照组外,其余均无明显差异。体外感染实验无HEK293细胞感染。壳聚糖纳米纤维支架会延长猪肝细胞的PERV分泌时间但对分泌量以及体外感染性并无明显影响,可安全用于生物人工肝。 展开更多

关键词 壳聚糖纳米纤维支架 猪肝细胞 猪内源性逆转录病毒 生物人工肝

在线阅读 下载PDF 职称材料

四种小型猪内源性逆转录病毒基因研究

7

作者 李金泽 岳敏 +2 位作者 张建明 王玉珏 顾为望 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第10期82-82,共1页

目的检测中国四种小型猪在PERV拷贝数上的差异,试图找出不含或含有较低拷贝数的一个个体或一个品种。方法采用半定量PCR方法检测了我国四种小型猪内源性逆转录病毒基因的拷贝数。结果贵州小型猪、五指山猪、西藏小型猪、巴马小型猪的PER... 目的检测中国四种小型猪在PERV拷贝数上的差异,试图找出不含或含有较低拷贝数的一个个体或一个品种。方法采用半定量PCR方法检测了我国四种小型猪内源性逆转录病毒基因的拷贝数。结果贵州小型猪、五指山猪、西藏小型猪、巴马小型猪的PERV的拷贝数分别是34.12±16.96,29.38±13.83,28.71±14.11,27.12±14.43(F=0.614,P=0.609),EnvA的拷贝数分别是9.78±5.48,10.06±5.34,10.23±5.71,10.51±6.23(F=0.044,P=0.988),EnvB的拷贝数分别是24.14±11.26,20.72±8.36,18.35±8.50,17.60±8.65(F=1.512,P=0.221)。尚不能认为四个猪种间PERV、EnvA、EnvB的拷贝数之间的差异具有统计学意义。结论与已报道的其它猪种相比,四种常用的小型猪内源病毒负载量较低,充分证明了其用于异种器官移植研究的可行性。 展开更多

关键词 小型猪 猪内源性逆转录病毒 拷贝数 半定量PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪内源性逆转录病毒(PERV)γ1长末端重复序列(LTRs)的分子特性及鉴定

8

作者 Jae-Won Huh 晋大鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第1期197-197,共1页

猪基因组中的猪内源性逆转录病毒(PERV)γ1可能是异种移植(从猪到人)中的有害因子。众所周知,长末端重复序列(LTRs)是强启动元件,能够控制PERV元件和邻近功能基因片段的转录活性。本试验通过生物信息学和试验分析对猪组织中PERVγ1 LTR... 猪基因组中的猪内源性逆转录病毒(PERV)γ1可能是异种移植(从猪到人)中的有害因子。众所周知,长末端重复序列(LTRs)是强启动元件,能够控制PERV元件和邻近功能基因片段的转录活性。本试验通过生物信息学和试验分析对猪组织中PERVγ1 LTRs的转录活性进行了研究。经RT-PCR扩增及测序鉴定出69个不同的LTR转录元件。并根据种内变异将69个LTR元件分为6个类型(15个亚型),包括串联重复序列,插入和缺失(INDEL)。更值得注意的是,所有的种内变异都发生在LTR元件的U3区域。本试验结果表明,不同PERV LTR转录体的分子特性及鉴定为进一步研究PERV及其转录奠定了基础。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒γ1 长末端重复序列 转录

在线阅读 下载PDF 职称材料

中国两头乌猪品种内源性逆转录病毒基因研究 被引量：7

9

作者 王亚楠 刘静 +1 位作者 刘榜 张庆德 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第3期70-74,共5页

目的对5个中国两头乌猪品种(通城猪、东山猪、沙子岭猪、赣西两头乌猪和金华猪)及3个国外品种(大白猪、长白猪和杜洛克猪)猪内源性逆转录病毒(PERV)的核心蛋白(gag)基因、多聚酶(pol)基因、囊膜(env)基因的3个亚型A、B、C,分别从DNA和RN... 目的对5个中国两头乌猪品种(通城猪、东山猪、沙子岭猪、赣西两头乌猪和金华猪)及3个国外品种(大白猪、长白猪和杜洛克猪)猪内源性逆转录病毒(PERV)的核心蛋白(gag)基因、多聚酶(pol)基因、囊膜(env)基因的3个亚型A、B、C,分别从DNA和RNA水平上进行研究,以发现中国两头乌猪品种在异种器官移植中的资源优势。方法利用PCR方法在DNA水平上对PERV基因的三个亚型进行鉴定,并通过半定量PCR方法在RNA水平上检测通城猪和大白猪PERV各亚型在心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪、淋巴和脑组织中的表达谱。结果4个华中两头乌猪种中env-AB型为主要PERV亚型,分别占被测总数的92%～100%。在这4个品种中均没有检测到C亚型,金华猪以及3个国外猪种中均检测到了C亚型,病毒亚型种类也更丰富。半定量PCR实验结果显示gag、pol基因在两个品种9个组织中广泛表达,env-A在通城猪的心、肝、肺、脂肪和淋巴组织中表达量较低,env-B在通城猪的心脏和淋巴组织中表达量较低,而env-B在大白猪的肾脏中表达很低,其他所测8个组织中表达量都较高。结论通城猪、东山猪、赣西两头乌猪和沙子岭猪可以做为较佳的异种移植候选供体,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒 华中两头乌 金华猪 基因 组织表达谱

在线阅读 下载PDF 职称材料

版纳微型猪近交系基因组中内源性逆转录病毒序列拷贝数分析 被引量：1

10

作者 黄晓洁 陈苹 +3 位作者 曾嵘 马康涛 曾养志 周春燕 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期370-374,共5页

目的:检测分析版纳微型猪近交系基因组中内源性逆转录病毒(porc ine endogenous retrovirus,PERV)序列的拷贝数,从而为猪源移植物的异种移植筛选理想供者。方法:用PERV的pol,env各亚型基因及envA/C重组体的特异性引物,对4个近交系亚系... 目的:检测分析版纳微型猪近交系基因组中内源性逆转录病毒(porc ine endogenous retrovirus,PERV)序列的拷贝数,从而为猪源移植物的异种移植筛选理想供者。方法:用PERV的pol,env各亚型基因及envA/C重组体的特异性引物,对4个近交系亚系共50头以及5头欧洲大白猪的外周血单核细胞(peripheral b lood mononuc learcell,PBMC)的基因组DNA进行了实时定量/半定量PCR检测及普通PCR检测。结果:所有版纳猪基因组中可特异扩增出pol,envA,envB片段,其平均拷贝数分别为(24.2±9.4),(13.1±8.4)和(16.4±9.8)个,但近交系不同亚系之间各片段扩增产物量比较差异具有统计学意义(P<0.01)。所有样品中无法扩增出envC片段以及envA/C重组体。结论:版纳微型猪近交系基因组内,PERV的envA、envB和pol序列拷贝数在近交系不同亚系间比较差异有统计学意义,不存在envC和envA/C重组体序列。 展开更多

关键词 猪 内源性逆转录病毒 动物 近交系 聚合酶链反应 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪内源性逆转录病毒在3种不同品系猪中的分布及序列特征研究 被引量：1

11

作者 冯天悦 Kamal Shah +4 位作者 张文立 付利芝 李昌文 王玉娥 陈洪岩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1141-1148,1168,共9页

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PE... 为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PERV-C)的分布情况。结果显示,PERV在3种猪种中均有分布,其中PERV-A分布最广泛。进一步分段扩增3种猪的PERV-A全基因组序列并测序分析。全基因组序列进化树与囊膜(env)基因进化树分析均显示,东北地区的大白猪与荣昌猪PERV-A归为同一分支,亲缘关系较近;对测序结果进行生物信息学分析和蛋白二级结构预测,结果显示,PERV-A Gag蛋白和Pol蛋白的变异程度较大,有多种结构,但Env蛋白保守性较高,结构较为单一。采用荧光定量PCR法检测SPF大白猪不同组织中的PERV-A,结果显示从SPF大白猪心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等7种组织中均检测出PERV-A,且在扁桃体等免疫器官组织中的转录水平最高。本研究共获得了5条不同猪种的PERV-A全基因组序列,首次鉴定了荣昌猪PERV全基因组序列,提示东北地区大白猪的引种来源可能与韩国猪种存在一定同源性,且五指山小型猪与荣昌猪、大白猪亲缘关系较远,有助于PERV分子特性的研究,并为评估不同猪种PERV在异种移植中的安全性并筛选合适猪种提供参考。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒 序列分析 囊膜基因 遗传进化分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

异种移植中猪内源性逆转录病毒的传播 被引量：3

12

作者 余一凡 宋佳华 +4 位作者 宋相钦 李涛 江建 白云昊 王毅 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期754-759,共6页

器官移植是治疗各类终末期疾病最有效的手段,为了解决器官移植中供体短缺的问题,人们开始探究异种移植的可能。猪是异种器官移植常见的供体来源之一,猪器官作为连接两个物种间的桥梁,其携带的病毒有可能在物种间传播并存在引起人畜共患... 器官移植是治疗各类终末期疾病最有效的手段,为了解决器官移植中供体短缺的问题,人们开始探究异种移植的可能。猪是异种器官移植常见的供体来源之一,猪器官作为连接两个物种间的桥梁,其携带的病毒有可能在物种间传播并存在引起人畜共患病的风险。猪内源性逆转录病毒(PERV)整合在基因组中,是一种跨物种传播的逆转录病毒。本文介绍了PERV传播特性的影响因素、PERV及其重组病毒的传播风险以及异种移植试验中PERV的检测与传播风险评估,以期为缓解器官移植供体严重短缺的现状,推动异种移植技术的发展提供参考。 展开更多

关键词 异种移植 猪内源性逆转录病毒 器官短缺 转基因 传播特性 人畜共患病 免疫缺陷 感染

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪内源性逆转录病毒对异种组织器官移植影响的研究进展 被引量：1

13

作者 邱玉涛 龚海燕 袁静 《动物医学进展》 CSCD 2006年第2期41-45,共5页

猪内源性逆转录病毒(Porcine en-dogenous retrovirus,PERV)是新发现的对人细胞具有感染性的且存在于正常猪体内的病毒,在异种组织器官移植过程中可能向人传播,直接威胁到接受移植者的健康甚至生命,这是异种组织器官移植首要克服的难题... 猪内源性逆转录病毒(Porcine en-dogenous retrovirus,PERV)是新发现的对人细胞具有感染性的且存在于正常猪体内的病毒,在异种组织器官移植过程中可能向人传播,直接威胁到接受移植者的健康甚至生命,这是异种组织器官移植首要克服的难题。由于PERV近年来才受到广泛关注,所以人们对PERV的分类,对人类和其他动物的危害性及病原的检测均不能完全确定。文章旨在提供上述几方面的研究现状,以期为PERV的深入研究奠定基础。PERV能影响移植受体的生殖,抑制受体免疫体系;对其他物种的细胞或活体都可能产生体外和体内感染性;目前有多种PERV检测方法,为受体和供体的病毒监控提供了依据。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒 异种移植 生物安全性 检测方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

人源细胞对猪内源性逆转录病毒易感性的初步研究

14

作者 张立 步宏 +3 位作者 李幼平 程惊秋 李胜富 于萍 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期22-24,103,共4页

目的　对 6种人源细胞对猪内源性逆转录病毒 (PERV)的易感性进行研究。方法　用PERV病毒上清感染培养中的 6种人源细胞后 ,用PCR和RT -PCR法研究PERV是否感染这 6种人源细胞。结果　张氏肝细胞和人胚软骨细胞对PERV不易感 ,其余 4种人... 目的　对 6种人源细胞对猪内源性逆转录病毒 (PERV)的易感性进行研究。方法　用PERV病毒上清感染培养中的 6种人源细胞后 ,用PCR和RT -PCR法研究PERV是否感染这 6种人源细胞。结果　张氏肝细胞和人胚软骨细胞对PERV不易感 ,其余 4种人源细胞对PERV易感。 展开更多

关键词 人源细胞 猪内源性逆转录病毒 易感性 研究 器官移植 异种移植

在线阅读 下载PDF 职称材料

疑似A型猪内源性逆转录病毒致肿瘤病例

15

作者 孙伟峰 王贞 +4 位作者 梁静泊 刘海坤 马誉芸 盖新娜 郭鑫 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第9期47-48,I0006,共3页

2018年1月,河北某猪场57日龄左右仔猪群出现批量死亡,个别表现神经症状。猪场曾进行过猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒及沙门菌的常规疫苗免疫。在病死仔猪剖检过程中,发现1头仔猪的胸、... 2018年1月,河北某猪场57日龄左右仔猪群出现批量死亡,个别表现神经症状。猪场曾进行过猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒及沙门菌的常规疫苗免疫。在病死仔猪剖检过程中,发现1头仔猪的胸、腹腔内,尤其是。肾脏、脊柱两侧,布满了大量、大小不等的白色肿瘤结节。该仔猪肺脏、肾脏、腹股沟淋巴结中PRRSV、CSFV、PRV等病原的核酸检测结果均为阴性。我们对该病例进行了进一步的病原检测,现报告如下。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 病例 肿瘤 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 A型 腹股沟淋巴结

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪内源性反转录病毒在中国实验小型猪中的存在与表达 被引量：2

16

作者 吕茂民 贾莉玮 +6 位作者 杨文斌 杨姝 熊景峰 丁壮 陈华 谢忠忱 章金刚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第4期211-215,共5页

目的　对中国实验小型猪中内源性反转录病毒的存在与mRNA的表达进行检测 ,摸清中国实验小型猪中内源性反转录病毒的携带情况。方法　根据已发表的PERV的序列设计并合成了三对引物 ,分别用于检测PERV核心蛋白基因 (gag)、多聚酶基因 (pol... 目的　对中国实验小型猪中内源性反转录病毒的存在与mRNA的表达进行检测 ,摸清中国实验小型猪中内源性反转录病毒的携带情况。方法　根据已发表的PERV的序列设计并合成了三对引物 ,分别用于检测PERV核心蛋白基因 (gag)、多聚酶基因 (pol)及囊膜基因 (env)的存在与表达 ;同时 ,根据目前通用的env基因分型方法合成了三对用于分型检测的引物env A、env B、env C。应用PCR、RT PCR扩增的方法 ,对来自于中国实验小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行了检测。结果　在 6个被检DNA样品中均检出了PERV特异性DNA的存在 ;同样 ,在被检RNA样品中均有PERV特异性RNA的表达 ,且所表达的PERV均为A型和B型 ,在所有样品中均未检出C型PERV的表达。结论　初步表明中国实验小型猪中存在内源性反转录病毒序列 ,且能以mRNA的形式表达 ,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 内源性逆转录病毒 中国实验小型猪 聚合酶链反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

异种移植微囊化新生猪胰岛细胞受体感染PERV潜在风险分析 被引量：3

17

作者 叶征 邢晓为 +2 位作者 童琼娟 容鹏飞 王维 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期747-752,共6页

目的:研究新生猪胰岛细胞(neonatal pig islets,NPIs)经微囊化后异种移植到狗体内,受体感染猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的风险。方法:将10只狗随机分成实验组和对照组,分别移植微囊化猪胰岛细胞和未被微囊... 目的:研究新生猪胰岛细胞(neonatal pig islets,NPIs)经微囊化后异种移植到狗体内,受体感染猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的风险。方法:将10只狗随机分成实验组和对照组,分别移植微囊化猪胰岛细胞和未被微囊化猪胰岛细胞。应用放射免疫的方法检测狗体内血清特异性猪C-肽以判断胰岛移植物活性;采用免疫组织化学技术检测28d后肝移植部位是否有微囊化猪胰岛细胞;PCR和RT-PCR技术分别检测不同时间点狗外周血中PERV及猪mt DNA。结果:移植微囊化猪胰岛细胞2周后,给受体注射葡萄糖,15～30min狗的外周血中猪C-肽表达明显升高,而对照组检测不到猪C-肽;免疫组化结果表明,狗肝脏移植部位周围可检测到少量微囊化猪胰岛细胞,肝组织无明显异常;PCR和RT-PCR结果表明,移植微囊化猪胰岛细胞在不同时间点狗外周血内均未检测到猪mt DNA及PERV表达,而对照组于移植后4d内检测到猪mt DNA及PERV呈微弱表达,10d后均未见表达。结论:微囊化猪胰岛细胞能够在受体肝脏内存活并发挥作用,受体内不存在PERV的感染,提示海藻酸钠微囊可以有效地防止猪mt DNA及PERV的穿越,可能在异种移植中具有较好的应用前景。 展开更多

关键词 移植 异种 猪内源性逆转录病毒 微囊化 胰岛 猪 狗

在线阅读 下载PDF 职称材料

长白与青海八眉“二元杂交”猪种群PERV亚型分析 被引量：1

18

作者 邢晓为 许生成 +3 位作者 莫朝晖 宁鹏 王勇 王维 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期878-882,共5页

目的研究长白与青海八眉"二元杂交"猪种群携带的内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)亚型,为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据。方法从长白与青海八眉"二元杂交"猪种群中随机采集33头... 目的研究长白与青海八眉"二元杂交"猪种群携带的内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)亚型,为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据。方法从长白与青海八眉"二元杂交"猪种群中随机采集33头个体外周血,应用PCR和RT-PCR技术分别检测PERV前病毒DNA和mRNA,研究该种群携带PERV的亚型,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。克隆测序该猪种PERVenv基因,结果用NCBI中的BLAST软件进行分析。结果所检测的33头个体均带有PERV前病毒DNA,外周血中均有PERV mRNA表达,其中,69.7%(23/33)个体携带env-A,env-B和env-C三种囊膜蛋白基因,而其余的30.3%(10/33)个体只带有env-A和env-B两种囊膜蛋白基因,env-C基因缺失。灵敏性分析实验结果表明,PCR扩增PERV时,DNA模板不能少于15ng。克隆env-A,env-B和env-C基因,结果提交GenBank(GenBank登录号分别为DQ856326、DQ856327、DQ856328)。生物信息分析结果表明,该猪种env基因与GenBank登录其他猪种序列相比存在差异,其中env-A、env-B基因发生移码突变,蛋白合成提前终止。结论长白与青海八眉"二元杂交"猪种群携带PERV,69.7%个体为PERV-ABC亚型;缺失突变使PERVenv-A,env-B基因阅读框发生改变,有可能影响其感染特性,从生物安全性方面综合考虑,该猪种不宜作为异种移植供体。 展开更多

关键词 猪内源性逆转录病毒 亚型 异种移植 克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪皮肤成纤维细胞的培养与鉴定 被引量：11

19

作者 丁生财 陈意生 +1 位作者 魏泓 刘萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第13期1171-1174,共4页

目的　研究猪内源性逆转录病毒在体内和体外的感染性 ,建立理想的细胞模型 ,为猪一人间跨种移植的生物安全性评价奠定良好的基础。方法　运用组织块培养法、冷胰蛋白酶方法及热胰蛋白酶方法培养猪皮肤成纤维细胞 ,比较 3种方法的优点和... 目的　研究猪内源性逆转录病毒在体内和体外的感染性 ,建立理想的细胞模型 ,为猪一人间跨种移植的生物安全性评价奠定良好的基础。方法　运用组织块培养法、冷胰蛋白酶方法及热胰蛋白酶方法培养猪皮肤成纤维细胞 ,比较 3种方法的优点和缺点。结果　建立了猪皮肤成纤维细胞系组织块培养法优于胰酶法。结论　应用组织块培养法培养猪皮肤成纤维细胞优于胰酶法 ,经济实惠、操作简便、易于掌握 ;并为研究PERV在体内和体外的感染性提供了理想的细胞模型 ,为评估猪一人间跨种移植的生物安全性提供一种新的方法 ;对建立动物克隆生产的皮肤体外培养模式具有重要的参考价值。 展开更多

关键词 成纤维细胞 猪内源性逆转录病毒 异种移植 生物安全性 感染 培养 皮肤 猪

在线阅读 下载PDF 职称材料

多基因编辑猪-猴心脏、肝脏、肾脏移植临床前研究初步报道 被引量：23

20

作者 张玄 王琳 +18 位作者 张洪涛 杨诏旭 岳树强 杨雁灵 董海龙 陈敏 路志红 程亮 刘金成 俞世强 张更 秦卫军 李纪鹏 魏红江 杨璐菡 周亮 龙恩武 陶开山 窦科峰 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期51-56,共6页

目的探讨目前国际上基因改造程度最大的基因编辑猪在临床前异种器官移植中的应用前景。方法将1只猪内源性逆转录病毒(PERV)敲除联合3种主要异种抗原基因敲除以及抑制补体活化、调节凝血紊乱、抗炎抗吞噬的9种人源化基因转入猪(PERV-KO/3... 目的探讨目前国际上基因改造程度最大的基因编辑猪在临床前异种器官移植中的应用前景。方法将1只猪内源性逆转录病毒(PERV)敲除联合3种主要异种抗原基因敲除以及抑制补体活化、调节凝血紊乱、抗炎抗吞噬的9种人源化基因转入猪(PERV-KO/3-KO/9-TG)作为供体,获取其心脏、肝脏和肾脏,分别移植给3只恒河猴受体,建立猪-猴异种器官移植临床前研究模型。观察血流重建后各移植物的功能状态并总结受体存活情况;监测移植物的血流动力学情况;比较各器官移植受体的血液学指标变化;观察移植物组织病理学表现。结果血流重建后各移植器官颜色红润、质地柔软、血流灌注状态良好。术后1 d,移植心脏、肝脏和肾脏均表现为动、静脉血流状态充盈,灌注情况良好。心脏、肝脏和肾脏移植受体的术后存活时间分别为7 d、26 d和1 d。心脏移植受体术后1 d肌酸激酶、肌酸激酶同工酶以及乳酸脱氢酶水平均升高,至术后6 d逐渐恢复至接近正常水平。术后7 d各项指标均急剧升高。肝脏移植受体术后2 d天冬氨酸转氨酶水平升高,术后10 d转氨酶基本恢复正常,但总胆红素持续升高。术后12 d天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶水平均出现升高,至术后15 d达到高峰。肾脏移植受体术后1 d出现轻微蛋白尿,后因突发严重心律失常死亡。组织病理学显示心脏和肾脏移植物组织结构接近正常,移植肝脏表现为片状坏死,肝组织结构出现紊乱,并伴有炎症损伤、间质出血和血栓性微血管病形成。结论PERV-KO/3-KO/9-TG猪在克服超急性排斥反应、缓解体液性排斥反应及凝血紊乱方面具有一定优势,但其能否作为临床异种器官移植潜在供体需进一步评估。 展开更多

关键词 基因编辑猪 恒河猴 异种器官移植 心脏移植 肝脏移植 肾脏移植 猪内源性逆转录病毒(perv) 排斥反应

在线阅读 下载PDF 职称材料