中国特有小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆及进化分析 被引量：3

1

作者 吴健敏 吕茂民 +5 位作者 陈凤莲 谢放 潘汉世 阳玉彪 马玲 章金刚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期925-928,共4页

目的 克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒（PERV）囊膜基因（env）。比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法 应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV env基因，克隆... 目的 克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒（PERV）囊膜基因（env）。比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法 应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV env基因，克隆入T载体后测序；随后以PCR方法对克隆PERV env基因进行分型检测；最后采用DNAsis及DNAstar软件对克隆的env基因和国外毒株env基因进行同源性及系统进化进行分析比较。结果 本试验所克隆的3株PERV env基因长度分别为1983bp、1986bp及1968bp，分别编码661、662和656个氨基酸，分型检测均为PERV-A亚型。同源性分析表明：国内这3个分离株env基因与国外来源于不同宿主的PERV-A、B、C亚型env基因的同源性分别在92．8～96．5％、69．4～73．4％及77．5％～80．8％之间。结论 PERV中国株的进化与A、B、C亚型分类有关，与宿主、分布地域关系不大，且PERV—A亚型与C亚型的亲源关系更近于B亚型。 展开更多

关键词 猪内源性反转录病毒 囊膜基因 序列分析

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中国小型猪内源性反转录病毒研究进展与对策 被引量：3

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作者 冯书堂 马玉媛 夏颖 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期1244-1248,共5页

作者介绍了国内外猪内源性反转录病毒(PERV)研究进展,简述了中国不同品种小型猪PERV存在情况、PERV前病毒全基因克隆与序列分析、细胞水平鉴定方法、感染HEK293细胞研究平台的创建、猪A3F对PERV的抑制作用研究,以及从分子遗传学上揭示... 作者介绍了国内外猪内源性反转录病毒(PERV)研究进展,简述了中国不同品种小型猪PERV存在情况、PERV前病毒全基因克隆与序列分析、细胞水平鉴定方法、感染HEK293细胞研究平台的创建、猪A3F对PERV的抑制作用研究,以及从分子遗传学上揭示不同品系PERV特异性等创新性研究成果,分析了五指山小型猪近交系具有PERV基因拷贝少且没有PERV-C等特异性,以及展望培育中国PERV阴性猪新品系方法等研究,以期为人类异种器官移植和生物医用材料产品安全性研发,解决小型猪PERV疾病传播危险性提供科学对策和新的方向。 展开更多

关键词 中国小型猪 猪内源性反转录病毒 感染性克隆 异种移植

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巴马小型猪内源性反转录病毒感染HEK293细胞模型的建立 被引量：1

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作者 黄红梅 吕茂民 +5 位作者 陈忠伟 王娜 赵武 陈凤莲 吴健敏 章金刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期312-315,365,共5页

首先将巴马小型猪(BM)、巴马香猪(BMXZ)外周血淋巴细胞分别与G418抗性HEK293细胞(G418R293)共培养,通过G418加压筛选,除去共培养体系中巴马小型猪、巴马香猪外周血淋巴细胞,然后应用PCR及RT-PCR的方法对所制备的感染细胞模型进行系统鉴... 首先将巴马小型猪(BM)、巴马香猪(BMXZ)外周血淋巴细胞分别与G418抗性HEK293细胞(G418R293)共培养,通过G418加压筛选,除去共培养体系中巴马小型猪、巴马香猪外周血淋巴细胞,然后应用PCR及RT-PCR的方法对所制备的感染细胞模型进行系统鉴定。结果经6周共培养及3周加压筛选后,细胞的形态、生长速度及折光性均未见明显变化;PCR及RT-PCR鉴定表明,筛选后的共培养体系中已没有巴马小型猪、巴马香猪外周血淋巴细胞的存在;PERV特异性检测方法检测显示,该细胞模型的DNA中已有PERV的整合且有PERV特异性mRNA的表达。从而证实了猪外周血淋巴细胞来源的PERV在体外也能够感染人源细胞系,为研究PERV的生物学特性及病原安全性的评价搭建了技术平台。 展开更多

关键词 G418抗性 HEK293细胞 猪内源性反转录病毒

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猪内源性反转录病毒的某些分子生物学特性 被引量：4

4

作者 章金刚 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期116-118,共3页

关键词 猪内源性反转录病毒 分子生物学 基因组结构

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猪内源性反转录病毒的研究进展

5

作者 金红 李媛 《预防兽医学进展》 2000年第3期9-11,共3页

关键词 猪内源性反转录病毒 生物学特性 存在状况

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五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因变异特征研究 被引量：2

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作者 张念 马玉媛 +3 位作者 向思龙 贾俊婷 吴健敏 章金刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期248-250,共3页

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98... 为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98.3%～99.3%,具有明显G→A突变,并且偏好发生于GA、GG。进一步分析表明,在PERV-env序列190 bp和1 875 bp位置均有G→A突变发生。PERV-env基因遗传进化树分析表明,五指山来源的PERV与国外小型猪PERV-A亲缘关系较近,但仍存在差异。本实验将有助于PERV分子特性的研究,为进一步开展异种移植中PERV的安全性评价奠定基础。 展开更多

关键词 近交系 五指山小型猪 猪内源性反转录病毒 囊膜基因 G→A突变

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中国巴马小型猪封闭群内源性反转录病毒存在状况分析 被引量：4

7

作者 吴健敏 阳玉彪 +3 位作者 郭艳茹 吕茂民 郭亚芬 章金刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期391-393,共3页

检测分析猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus;PERV)在中国巴马小型猪封闭群中的携带情况。根据本实验室已建立的PCR、RT_PCR检测方法,对来自于巴马小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行PERV核心蛋白基因(gag)、多聚... 检测分析猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus;PERV)在中国巴马小型猪封闭群中的携带情况。根据本实验室已建立的PCR、RT_PCR检测方法,对来自于巴马小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行PERV核心蛋白基因(gag)、多聚酶基因(pol)及囊膜基因(env)的存在与表达进行检测;同时根据目前通用的env基因分型方法检测PERVenv_Ae、nv_Be、nv_C的存在与表达情况。所有被检样品不仅存在PERV gag、pol、env特异性DNA,而且都能够转录为RNA;所有样品同时存在PERV A、B亚型的前病毒,且有70%个体还同时存在PERV_C亚型前病毒,但仅有90%样品检测到PERV_A亚型的表达,50%检测到PERV_B亚型的表达,而所有的样品均未检测到PERV_C型的表达。巴马小型猪封闭群外周血淋巴细胞基因组中存在PERV_A、B、C 3种亚型,但仅有A、B两种亚型能够表达。PERV_A、B、C 3种亚型的同时存在,预示着巴马小型猪封闭群中存在不同亚型病毒重组的可能性。 展开更多

关键词 巴马小型猪 猪内源性反转录病毒 病毒亚型 分析

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广西巴马小型猪内源性反转录B亚型病毒5′非编码区的序列扩增及分析 被引量：1

8

作者 欧阳康 吴健敏 +4 位作者 陈凤莲 马玲 刘文娟 白安斌 郭亚芬 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第1期24-28,共5页

应用SMART RACE方法快速扩增广西巴马小型猪内源性反转录病毒（PERV）5′非编码区,获得了一条长度为1 423 bp的PERV-5′UTR序列（GenBank登录号GU390231）,该序列与GenBank已发表的PERV-A、B、C各亚型同源性分别为92.4%~95.2%、91.8%~99... 应用SMART RACE方法快速扩增广西巴马小型猪内源性反转录病毒（PERV）5′非编码区,获得了一条长度为1 423 bp的PERV-5′UTR序列（GenBank登录号GU390231）,该序列与GenBank已发表的PERV-A、B、C各亚型同源性分别为92.4%~95.2%、91.8%~99.5%和86.5%~92.6%,遗传进化树分析,扩增序列为B亚型PERV-5′UTR。一级结构分析表明,该序列由U3、R、U5、PBS和LEADER 5个区域构成,与GenBank已发表的其他序列相比缺少344 bp。通过plantCARE数据库鉴定,GU390231序列得到28个有效的顺式作用元件,推测这些元件对PERV的转录起着或正或负的调控作用。本试验获得的PERV-B亚型5′UTR序列对进一步研究广西巴马小型猪PERV-B亚型病毒的转录调控机制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪内源性反转录病毒 广西巴马小型猪 RACE 5′UTR

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一种检测猪基因组中内源性反转录病毒C方法的建立

9

作者 Danny K 张锦秀 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期186-186,共1页

猪内源性反转录病毒使异种移植猪细胞、组织和器官存在风险,猪内源性反转录病毒A和猪内源性反转录病毒B都出现在猪基因组中,并能在体外感染人。猪内源性反转录病毒C只感染猪细胞,并可整合到大多数猪基因组中,但不是全部。猪内源性反转... 猪内源性反转录病毒使异种移植猪细胞、组织和器官存在风险,猪内源性反转录病毒A和猪内源性反转录病毒B都出现在猪基因组中,并能在体外感染人。猪内源性反转录病毒C只感染猪细胞,并可整合到大多数猪基因组中,但不是全部。猪内源性反转录病毒A和C的重组能感染人细胞,并大量复制。为了避免这种重组,猪内源性反转录病毒C阳性动物不能用于异种移植。为检测猪内源性反转录病毒C阳性猪,建立了多种不同的方法,如用不同引物建立的特异性PCR技术、异种高灵敏度的巢氏PCR技术和可定量前病毒拷贝数的实时定量PCR技术。实时定量PCR技术可用于区分污染和真正的前病毒分子。这些PCR方法经过优化,具有稳定的检测灵敏性。首先进行PCR1,如果检测结果为阴性,则进行PCR2或PCR5或巢氏PCR;如果检测结果是阳性,则进行实时定量PCR来排除污染。使用这些方法可评估猪内源性反转录病毒C的流行程度和识别未感染猪内源性反转录病毒C的动物。由于可能从其它动物细胞带来污染,不是使用耳活体检测,而是采用血细胞检测。 展开更多

关键词 异种移植 猪内源性反转录病毒 巢式PCR 实时定量PCR

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无PERV传染性“中畜”五指山小型猪近交系全基因组重测序分析

10

作者 章冰艳 范瑞 +3 位作者 冯书堂 贾俊婷 张建斌 马玉媛 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2459-2467,共9页

【目的】自前期选育获得的无猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)传染性“中畜”五指山小型猪近交系(Zhong Xu Wuzhishan Mini-pig Inbred line,ZXWIPIG)新品系中,选取1头雌性猪(ZXWIPIG505)进行全基因组重测序分析... 【目的】自前期选育获得的无猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)传染性“中畜”五指山小型猪近交系(Zhong Xu Wuzhishan Mini-pig Inbred line,ZXWIPIG)新品系中,选取1头雌性猪(ZXWIPIG505)进行全基因组重测序分析,以进一步从分子水平上阐释无PERV传染性猪新品系的序列特征。【方法】分离ZXWIPIG505外周血单个核细胞并提取其基因组DNA,利用Illumina HiSeq-4000测序平台进行全基因组重测序。分别使用BLAST和SAMtools 0.1.19软件,提取ZXWIPIG505基因组中整合的PERV长片段和PERV-pol基因序列片段,并使用DNAStar软件对整合的PERV结构基因序列进行分析。将ZXWIPIG505中整合的PERV-pol基因序列特征与前期鉴定的PERV-pol缺陷型ZXWIPIG452中PERV-pol基因序列进行比较研究。【结果】ZXWIPIG505全基因组重测序平均测序深度为14.32×,测序数据有效率为97.21%,Q20为94.37%,Q30为87.03%,GC含量为43.38%,表明本次测序数据质量较高。ZXWIPIG505基因组中共整合5条PERV长片段,其中仅scaffold5028含有PERV全部结构基因,但均为缺陷型。ZXWIPIG505基因组中共整合85条PERV-pol基因片段序列,比对发现所有PERV-pol基因片段均不完整,为缺陷型。ZXWIPIG505和ZXWIPIG452基因组中整合的PERV-pol基因序列存在高度相似性,60条序列长度相同,75条序列在猪基因组中的整合位点相同,42条序列的PERV-pol基因提前终止位点相同。【结论】前期选育的ZXWIPIG505为PERV-pol基因缺陷型猪,并且ZXWIPIG505和ZXWIPIG452中整合的PERV-pol基因序列具有高度相似性。 展开更多

关键词 猪内源性反转录病毒 “中畜”五指山小型猪近交系 基因缺陷型 全基因组重测序

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异种移植的病毒安全性研究进展 被引量：3

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作者 马玉媛 杨勇贤 章金刚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第6期463-469,共7页

猪-人异种移植有望解决人源器官短缺的严重问题。然而,以前病毒(provirus)形式整合入猪基因组中的猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)难以去除,PERV有可能通过异种移植传播给人类,甚至产生新的病毒性疾病。本文回... 猪-人异种移植有望解决人源器官短缺的严重问题。然而,以前病毒(provirus)形式整合入猪基因组中的猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)难以去除,PERV有可能通过异种移植传播给人类,甚至产生新的病毒性疾病。本文回顾了PERV与异种移植病毒安全性及我国特有小型猪中PERV的相关研究。 展开更多

关键词 异种移植 猪内源性反转录病毒 中国特有小型猪

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PERV基因对姜曲海猪产仔数的影响 被引量：1

12

作者 陶勇 周俊 +3 位作者 任善茂 张绍祥 董晓君 高勤学 《浙江农业科学》 2011年第4期935-936,共2页

实验分析PERV-env基因在姜曲海猪群体中存在情况,及其对姜曲海猪产仔数的影响。结果表明,被测群体中存在非常丰富的env 3种亚型,少数缺失型个体的产仔数较高。这预示PERV对猪繁殖过程起作用。

关键词 姜曲海猪 猪内源性反转录病毒基因 产仔数

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G418抗性HEK293细胞的培育 被引量：6

13

作者 吕茂民 贾莉玮 +3 位作者 王建国 杨姝 熊景峰 章金刚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第1期5-6,共2页

目的　培育具有G418抗性的HEK2 93细胞 ,用于建立猪内源性反转录病毒感染人HEK2 93细胞的模型。方法　通过脂质体转染的方法 ,将含有neo基因的质粒pIRESneo导入HEK2 93细胞中 ,利用G418的选择特性 ,对转染细胞进行压力筛选 ,并对其进行... 目的　培育具有G418抗性的HEK2 93细胞 ,用于建立猪内源性反转录病毒感染人HEK2 93细胞的模型。方法　通过脂质体转染的方法 ,将含有neo基因的质粒pIRESneo导入HEK2 93细胞中 ,利用G418的选择特性 ,对转染细胞进行压力筛选 ,并对其进行了PCR鉴定。结果　经 6 0 0 μg ml的G418压力筛选后 ,获得了抗性细胞克隆。抗性细胞的形态和生长速度与筛选前细胞没有差异 ,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA ,可以扩增出对应的核苷酸片段。结论　成功地培育了G418抗性HEK2 93细胞 ,为建立猪内源性反转录病毒感染人HEK2 93细胞的模型奠定了基础。 展开更多

关键词 G418抗性 HEK293细胞 培育 猪内源性反转录病毒 细胞模型 抗性细胞

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异种器官移植及其伦理问题 被引量：3

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作者 方毅 任守双 尹梅 《医学与哲学（A）》 北大核心 2011年第5期18-20,共3页

目前,开展的异种移植研究主要以猪为供体源,面临的主要障碍是宿主抗移植物的免疫排斥反应(超急性排斥、急性排斥和慢性排斥)和猪内源性反转录病毒感染,并已取得一定进展。但异种移植引发的伦理问题也不容忽视,主要有跨物种感染、卫生资... 目前,开展的异种移植研究主要以猪为供体源,面临的主要障碍是宿主抗移植物的免疫排斥反应(超急性排斥、急性排斥和慢性排斥)和猪内源性反转录病毒感染,并已取得一定进展。但异种移植引发的伦理问题也不容忽视,主要有跨物种感染、卫生资源分配、动物的权利和人格同一性等问题。 展开更多

关键词 异种移植 排斥反应 猪内源性反转录病毒 伦理问题

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