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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒的研制 被引量:9
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作者 徐景峨 蔡一鸣 +1 位作者 王璇 任荣清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期209-211,共3页
根据GenBank中猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅣA基因序列,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,研制了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR试剂盒。该试剂盒扩增的阳性条带为600 bp,特异性与敏感性结果显示,该PCR检测试剂盒的最低核... 根据GenBank中猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅣA基因序列,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,研制了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR试剂盒。该试剂盒扩增的阳性条带为600 bp,特异性与敏感性结果显示,该PCR检测试剂盒的最低核酸检测量为50 CFU/mL,而对金黄色葡萄球菌、链球菌、多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。-20℃至少可保存12个月,且重复性良好。应用该PCR试剂盒对41份临床样本进行了检测,其PCR检测结果与细菌学检测结果相一致。结果表明,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒能够对APP临床样品进行快捷、灵敏、准确的检测。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 PCR试剂盒 apxⅣA基因
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APX Ⅱ基因特异片段的克隆和表达 被引量:3
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作者 袁秀芳 王一成 +2 位作者 徐丽华 张存 叶伟成 《浙江农业学报》 CSCD 2007年第1期6-10,共5页
将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APXⅡ的一段毒素基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-APXⅡ,并将其转化到受体菌BL21中,诱导剂IPTG进行诱导表达,4 h后达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融... 将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APXⅡ的一段毒素基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-APXⅡ,并将其转化到受体菌BL21中,诱导剂IPTG进行诱导表达,4 h后达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白大小约为31 kD。经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应,说明该表达蛋白具有免疫原性,这为下一步用此表达蛋白作为抗原,对APP进行诊断试剂的研制和基因工程疫苗的研究提供科学依据。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 克隆 表达 Westemblotting
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌江西株的分离鉴定及PCR诊断 被引量:4
3
作者 陆杏华 何后军 +1 位作者 王萍 邬向东 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第6期2231-2232,2336,共3页
从江西南昌地区一些猪场的疑似猪传染性胸膜肺炎放线杆菌典型病例中,采集病猪的病变组织,经细菌分离得到3个分离菌株JXAV-AIII0611、JXAV-AVII0611、JXAV-AX0611,经涂片染色镜检、培养性状观察、生化鉴定以及药敏试验证实该致病菌为猪... 从江西南昌地区一些猪场的疑似猪传染性胸膜肺炎放线杆菌典型病例中,采集病猪的病变组织,经细菌分离得到3个分离菌株JXAV-AIII0611、JXAV-AVII0611、JXAV-AX0611,经涂片染色镜检、培养性状观察、生化鉴定以及药敏试验证实该致病菌为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)。同时利用APP的oml基因设计引物,通过PCR成功扩增出预期的基因片段,为快速诊断该病打下了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 分离鉴定 oml基因 聚合酶链式反应
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一株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离与药敏试验 被引量:1
4
作者 李任峰 支大伟 +1 位作者 王三虎 陈金山 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第11期38-39,共2页
从新乡地区某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎病猪体内分离到一株致病菌。通过对分离菌株的形态学检查、生化实验、卫星生长现象、溶血试验及动物实验,证明该分离菌为胸膜肺炎放线杆菌,药敏试验结果表明,所分离菌株对氟苯尼考和头孢噻呋最敏感... 从新乡地区某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎病猪体内分离到一株致病菌。通过对分离菌株的形态学检查、生化实验、卫星生长现象、溶血试验及动物实验,证明该分离菌为胸膜肺炎放线杆菌,药敏试验结果表明,所分离菌株对氟苯尼考和头孢噻呋最敏感,可作为新乡地区猪传染性胸膜肺炎病的首选药物。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 菌株 分离
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素、外膜脂蛋白的表达及重组蛋白的纯化
5
作者 贺英 逯忠新 +3 位作者 石琴 赵萍 储岳峰 高鹏程 《动物医学进展》 CSCD 2007年第12期24-27,共4页
将构建保存的重组表达质粒pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA和pPRoAppOML-1用IPTG诱导表达,选择最佳的表达条件为IPTG 1.0 mmol/L,温度为37℃,表达时间为8 h,表达产物用SDS-PAGE鉴定,分别表达41、414、5 ku的蛋白,与预期蛋白大小一致。将表达产... 将构建保存的重组表达质粒pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA和pPRoAppOML-1用IPTG诱导表达,选择最佳的表达条件为IPTG 1.0 mmol/L,温度为37℃,表达时间为8 h,表达产物用SDS-PAGE鉴定,分别表达41、414、5 ku的蛋白,与预期蛋白大小一致。将表达产物用试剂盒进行纯化,得到较好的目的条带,并对其进行Western blot检测,经过分析,pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA表达产物具有较好的免疫反应性。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 表达 纯化 免疫反应性
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的鉴定和耐药性研究 被引量:6
6
作者 杨方 崔明全 +3 位作者 张纯萍 赵琪 宋立 徐士新 《中国兽药杂志》 2018年第11期6-13,共8页
猪传染性胸膜肺炎是由猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuralpneumoniae,APP)引起的一种高度传染性呼吸道疾病,临床上准确鉴定该病原菌并合理选择抗生素施药十分重要。研究比较了应用传统方法、PCR方法和MALDI TOF方法鉴定4... 猪传染性胸膜肺炎是由猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuralpneumoniae,APP)引起的一种高度传染性呼吸道疾病,临床上准确鉴定该病原菌并合理选择抗生素施药十分重要。研究比较了应用传统方法、PCR方法和MALDI TOF方法鉴定45株临床APP,并比较了三种优势血清型的毒力表型,最后测定了其对临床34种常见抗生素的MIC。结果发现MALDI TOF微生物学鉴定方法具有快速、准确的优势;临床菌株血清型主要包括3型(20株)、1型(13株)、7型(7株),其他血清型菌株5株,其中1型毒力最强; APP对罗红霉素、头孢噻呋、恩诺沙星、氨苄西林等高度敏感,对四环素、土霉素等耐药率较高。研究为临床快速鉴定APP和合理选择用药提供了参考依据,为APP临床耐药折点的制定奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 鉴定 血清型 耐药性
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:25
7
作者 张东超 杨宁宁 +4 位作者 林静 弓建芳 高珂珂 李小慧 金天明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第6期1604-1609,共6页
为了给天津某规模猪场提供猪传染性胸膜肺炎(PCP)的科学防控和合理的用药方案,本试验对该猪场疑似患PCP的病猪进行临床综合诊断和病理组织学观察,无菌采集病料,通过细菌的分离与培养、镜检、生化试验、卫星试验、PCR检测、动物致病性试... 为了给天津某规模猪场提供猪传染性胸膜肺炎(PCP)的科学防控和合理的用药方案,本试验对该猪场疑似患PCP的病猪进行临床综合诊断和病理组织学观察,无菌采集病料,通过细菌的分离与培养、镜检、生化试验、卫星试验、PCR检测、动物致病性试验及药敏试验等实验室方法对分离菌进行系统分析。结果发现,病猪呼吸困难,病理剖检和病理组织学观察可见有典型的纤维素性肺炎变化;显微镜下分离菌呈多形性的革兰氏阴性杆菌,且其生化试验、卫星试验结果与传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)特性一致;用APP APXⅣA毒素基因特异性引物扩增结果为阳性;该APP分离菌对小鼠具有致病性,且对头孢噻肟、氟苯尼考等药物高度敏感。根据实验室检测结果并结合临床综合诊断,最终判定该细菌分离株为猪传染性APP。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎 胸膜肺炎放线杆菌 分离 PCR检测 药敏试验
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一例猪链球菌与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌混合感染的诊治报告 被引量:2
8
作者 陆阔 程家园 +2 位作者 张垚垚 王嘉珍 李郁 《养猪》 2022年第3期102-106,共5页
2021年10月,某集团公司猪场保育猪出现皮肤发绀、突然瘫痪和急性死亡等症状。为确定致病原,遂对送检的心脏、肺脏、脾脏、肝脏、下颌淋巴结、腹股沟浅淋巴结等病料组织进行实验室检测。结果显示,猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type ... 2021年10月,某集团公司猪场保育猪出现皮肤发绀、突然瘫痪和急性死亡等症状。为确定致病原,遂对送检的心脏、肺脏、脾脏、肝脏、下颌淋巴结、腹股沟浅淋巴结等病料组织进行实验室检测。结果显示,猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)5种病毒核酸和猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae,ER)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、沙门氏菌(Salmonella)4种细菌核酸检测均为阴性,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)、猪链球菌(Streptococcus suis,SS)核酸检测阳性,并分离鉴定出3株猪链球菌9型(Streptococcus suis type 9,SS9)及1株猪链球菌10型(Streptococcus suis type 10,SS10);4株SS分离株对复方新诺明、青霉素、红霉素、甲氧苄胺嘧啶、头孢曲松、庆大霉素、四环素、链霉素、多黏菌素B、头孢噻肟的耐药率为100%,对氧氟沙星、氟苯尼考、林可霉素、环丙沙星、卡那霉素、多西环素的耐药率为75%,对阿莫西林和新霉素的耐药率为50%。综合猪群的发病情况、临床症状、病理变化以及实验室检测结果,诊断该猪场保育猪的发病主要为SS、APP混合感染所致。 展开更多
关键词 链球菌 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 混合感染 诊治
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ^-/Amp^r突变株的构建 被引量:4
9
作者 贝为成 何启盖 +5 位作者 陈焕春 徐晓娟 洪文洲 肖少波 宋云峰 刘建杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期186-191,共6页
根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescriptSK(+)载体连接,得到质粒pSK CA。另外,从质粒pIC neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化... 根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescriptSK(+)载体连接,得到质粒pSK CA。另外,从质粒pIC neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化后,克隆到pSK CA中的XbaⅠ位点,获得了重组转移质粒pSK CAmpr。pSK CAmprDNA通过电转化导入亲本菌,电转化后的产物涂布于TM平板,可获得突变株。提取突变株和亲本菌基因组DNA,用PCR检测含有apxⅡC基因的胸膜肺炎放线杆菌染色体区域。从突变株基因组DNA扩增得到的一条PCRDNA片段比从亲本菌基因组DNA扩增得到的一条DNA片段大1 3kb,增大的片段与所插入的Ampr基因大小相符合。用合成的Ampr基因引物从突变株基因组DNA中也能扩增到一条1 3kb的特异性DNA片段。同时South ernblot鉴定有特异性带。这表明我们所构建的突变株是成功的。测定了突变株的遗传稳定性及突变株对动物的安全性,为进一步研究用其它报告基因置换Ampr基因后,研制单基因工程疫苗及以APP毒力缺失突变菌株为载体,表达外源基因的APP基因工程菌的研究奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎 放线杆菌 apxⅡ^-/Amp^r突变株 基因构建 基因工程疫苗
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR诊断方法的建立与应用 被引量:5
10
作者 张建新 朱岩昆 +3 位作者 马金友 赵杰 余燕 韩科芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期69-72,共4页
根据GenBank登录的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1~14型的表面抗原蛋白D15和16SrRNA基因序列,设计2对特异性引物,分别扩增出637、431bp两条核苷酸片段,建立了APP的多重PCR检测方法。特异性结果表... 根据GenBank登录的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1~14型的表面抗原蛋白D15和16SrRNA基因序列,设计2对特异性引物,分别扩增出637、431bp两条核苷酸片段,建立了APP的多重PCR检测方法。特异性结果表明,血清1、3、5a、8、10型能扩增出两条与预期大小的片段,而扩增的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、链球菌、葡萄球菌均成阴性。敏感性试验结果表明,最低检出浓度为50/μL。对临床分离的5株疑似APP菌株进行PCR,结果表明,其中4株为阳性,1株为阴性。提示,该方法的特异性和敏感性均良好。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎 D15基因 16S RRNA 聚合酶链式反应(PCR)
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四川猪传染性胸膜肺炎放线杆菌耐药基因流行规律与表型相关性研究 被引量:9
11
作者 王佳凡 郑博文 +3 位作者 杨超 马晓平 曹三杰 黄小波 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期631-639,共9页
【目的】掌握四川省部分规模化养猪场猪传染性胸膜肺炎放线杆菌耐药基因流行规律与耐药表型相关性。【方法】对疑似患有猪传染性胸膜肺炎的病猪肺脏组织进行细菌分离鉴定和生化试验,并对分离株进行系统进化分析、耐药表型和耐药基因的... 【目的】掌握四川省部分规模化养猪场猪传染性胸膜肺炎放线杆菌耐药基因流行规律与耐药表型相关性。【方法】对疑似患有猪传染性胸膜肺炎的病猪肺脏组织进行细菌分离鉴定和生化试验,并对分离株进行系统进化分析、耐药表型和耐药基因的检测。【结果】从病变肺脏组织分离到11株疑似猪传染性胸膜肺炎放线杆菌菌株,呈革兰氏阴性短杆状,生化试验和DNA分子生物学鉴定11株分离株为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。11株分离株呈多重耐药现象,对四环素和多西环素耐药率为90.90%;对盐酸林可霉素、复方新诺明和链霉素耐药率为54.55%;对盐酸克林霉素、庆大霉素、氯霉素和氟苯尼考耐药率为27.27%;对卡那霉素和红霉素耐药率分别为18.18%和9.10%。检测到sul3、tetB、tetC、ermB、floR、ant(6')-Ia、aph(2'')-Id和aac(6')-Ie-aph(2'')-Ia 8种耐药基因,携带率分别为100%、40.0%、100%、100%、100%、85.7%、14.3%和14.3%,与耐药表型相符。【结论】该地区规模化养猪场发生呼吸道感染死亡育肥猪细菌性病原是猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,表现为多重耐药;分离株携带较多的耐药基因且与表型一致,为该病的防控和临床用药提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 分离鉴定 耐药表型 耐药基因
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副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重PCR检测方法的建立及应用 被引量:2
12
作者 余远迪 曾泽 +1 位作者 岳华 张斌 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期29-33,共5页
针对副猪嗜血杆菌(Hps)16SrRNA序列和猪传染性胸膜放线杆菌(App)ApxIVA基因序列各设计一对引物,分别能扩增大小为822bp和346bp的目的基因片段,建立快速鉴定Hps和App的双重PCR方法。特异性试验表明,该方法对波氏杆菌、巴氏杆菌、大肠埃... 针对副猪嗜血杆菌(Hps)16SrRNA序列和猪传染性胸膜放线杆菌(App)ApxIVA基因序列各设计一对引物,分别能扩增大小为822bp和346bp的目的基因片段,建立快速鉴定Hps和App的双重PCR方法。特异性试验表明,该方法对波氏杆菌、巴氏杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、猪圆环病毒2型、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明,该方法与单项PCR的敏感性一致,最低可检测核酸浓度Hps 38pg/mL,App 3.8pg/mL;最低检测细菌含量Hps 8.9cfu,App 26.9cfu。利用该方法检测Hps和App参考菌株、临床分离株、36份临床肺组织样本和人工感染的猪肺组织样本。结果显示,该方法对参考菌株和临床分离株全部检出,36份临床样本中检出Hps 18份,App为阴性,与单项PCR检测结果一致,人工感染组织样本也均能检出。表明该方法适用于Hps和App的临床快速检测。 展开更多
关键词 嗜血杆菌 传染性胸膜放线杆菌 双重PCR方法
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌分离株的分子生物学鉴定 被引量:1
13
作者 苗立中 王艳 +3 位作者 吴忆春 李峰 林初文 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第12期30-33,共4页
根据已有的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)dsbE基因序列,合成了一对特异性引物,从3株APP分离菌(BZ1株,BZ2株和BZ3株)均扩增出预期342bp的DNA片段。分别将扩增的目的基因连接到pMD18-T载体中,构建重组质粒,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞... 根据已有的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)dsbE基因序列,合成了一对特异性引物,从3株APP分离菌(BZ1株,BZ2株和BZ3株)均扩增出预期342bp的DNA片段。分别将扩增的目的基因连接到pMD18-T载体中,构建重组质粒,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,提取质粒并进行序列分析。结果表明BZ1株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因的同源性达98%~100%,BZ2株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因的同源性达98%~99%,BZ3株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因同源性达97%~98%,证明3株分离菌均为APP。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎放线杆菌 dsbE类基因 克隆 序列分析 鉴定
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌和猪圆环病毒2型二重实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:1
14
作者 庞耀珊 谢芝勋 +4 位作者 黄琦 谢丽基 邓显文 谢志勤 刘加波 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期11-14,共4页
以胸膜肺炎放线杆菌(App)apx ⅣA基因和猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因为靶基因,分别设计特异性引物和探针,建立App和PCV-2的二重荧光PCR方法。App引物扩增的目的片段大小为132bp,PCV-2为169bp。建立的方法可在同一反应体系中同时对App和... 以胸膜肺炎放线杆菌(App)apx ⅣA基因和猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因为靶基因,分别设计特异性引物和探针,建立App和PCV-2的二重荧光PCR方法。App引物扩增的目的片段大小为132bp,PCV-2为169bp。建立的方法可在同一反应体系中同时对App和PCV-2进行定量检测鉴别,其敏感性分别为1×101拷贝和1×100拷贝,对其他猪病病原核酸的检测为阴性。利用该方法对10份人工感染临床样品进行检测试验,其结果符合率达100%,说明该方法可用于对临床样品中App和PCV-2的检测。 展开更多
关键词 实时荧光PCR 胸膜肺炎放线杆菌 圆环病毒2型
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病小鼠模型的建立 被引量:3
15
作者 张建军 邢思毅 +4 位作者 常春龙 齐晓雪 常敬伟 毕莹 倪宏波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2015年第6期19-23,共5页
为了探究猪传染性胸膜肺炎的危害性,采用猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌株(APP-7)通过不同的途径感染常用实验动物,筛选出易感实验动物和最佳感染条件,构建感染动物模型。结果表明:感染小鼠的半数致死量(LD50)为6.7×10^7CFU,... 为了探究猪传染性胸膜肺炎的危害性,采用猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌株(APP-7)通过不同的途径感染常用实验动物,筛选出易感实验动物和最佳感染条件,构建感染动物模型。结果表明:感染小鼠的半数致死量(LD50)为6.7×10^7CFU,成功建立了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌小鼠动物模型;小鼠感染细菌后表现出一系列病理变化,如呼吸困难,食欲减退,精神沉郁等,与自然发病的典型病例相似。 展开更多
关键词 小鼠 胸膜肺炎放线杆菌 半数致死量 动物模型
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锦州地区猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定 被引量:3
16
作者 隋慧 《安徽农业科学》 CAS 2012年第6期3366-3367,共2页
[目的]调查锦州猪传染胸膜肺炎的流行情况。[方法]从锦州部分发病猪场采集病料5份,通过细菌的分离培养、生化试验、卫星现象观察,溶血试验、CAMP试验、药敏试验和动物接种试验对致病菌进行分离与鉴定。[结果]该病原菌为革兰氏阴性短小杆... [目的]调查锦州猪传染胸膜肺炎的流行情况。[方法]从锦州部分发病猪场采集病料5份,通过细菌的分离培养、生化试验、卫星现象观察,溶血试验、CAMP试验、药敏试验和动物接种试验对致病菌进行分离与鉴定。[结果]该病原菌为革兰氏阴性短小杆菌,无芽孢,具有多形性。分离到5株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,均有卫星现象和溶血现象。CAMP试验结果表明,金黄色葡萄球菌可增强其溶血圈。5株分离菌对头孢拉定、先锋V、氟哌酸高度敏感,而对阿莫西林、链霉素、青霉素、金霉素有耐药性。动物接种试验表明该致病菌对家兔具有较高的致病力。[结论]该研究可为猪传染性胸膜肺炎的临床治疗提供依据。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎 放线杆菌 分离 鉴定
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ抗原模拟表位的筛选与鉴定 被引量:2
17
作者 何玉龙 赵娜 +3 位作者 伍晓雄 王安华 龙良启 刘平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1073-1077,共5页
将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ(APP ApxⅠ)抗血清用饱和硫酸铵分级粗提后,再经DEAE-sepha-dex-A50低压层析系统纯化得到IgG,用此IgG作为配基对噬菌体随机十二肽库进行4轮不同条件的富集筛选。通过改变筛选条件,噬菌体的回收率从1.44... 将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ(APP ApxⅠ)抗血清用饱和硫酸铵分级粗提后,再经DEAE-sepha-dex-A50低压层析系统纯化得到IgG,用此IgG作为配基对噬菌体随机十二肽库进行4轮不同条件的富集筛选。通过改变筛选条件,噬菌体的回收率从1.44×10-6增加到了8.9×10-5,P/N值逐步提高,阳性噬菌体得到了富集。ELISA结果表明,随机挑取的10个噬菌体克隆中,有5个与纯化的IgG有较强的特异性结合能力。对筛选到的5个阳性克隆提取ssDNA进行测序,并对其递呈的氨基酸序列进行分析。结果有3个克隆的4个连续的氨基酸序列(RVDV)相同,并与APP ApxⅠ蛋白的原始序列具有较高的同源性。 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 模拟表位 胸膜肺炎放线杆菌 外毒素Ⅰ
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洛阳某猪场猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定 被引量:14
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作者 李凯明 董发明 +3 位作者 刘守川 刘杰 梁立钦 李凯强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第4期1241-1249,共9页
为确定洛阳某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎的病原种类及其血清型,为其临床科学防疫和合理用药提供参考方案,本试验无菌采集了病猪肺脏等病料,采用病菌培养后形态观察、革兰氏染色、生理生化特性试验、PCR诊断等技术对病原菌进行实验室分离... 为确定洛阳某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎的病原种类及其血清型,为其临床科学防疫和合理用药提供参考方案,本试验无菌采集了病猪肺脏等病料,采用病菌培养后形态观察、革兰氏染色、生理生化特性试验、PCR诊断等技术对病原菌进行实验室分离鉴定,通过基因测序和同源性分析方法对其进行确诊,通过动物攻毒试验和药敏试验分析分离菌株的致病性和耐药性,采用5对分型引物对分离菌进行基因分型以确定病原菌血清型。结果显示,分离菌2007菌落形态为光滑、透明、边缘整齐、圆形、隆起的小菌落,革兰氏染色特征为阴性杆菌且呈多型性,具有猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的典型培养特征,且生化结果符合猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的生化特性。同源性分析结果显示,分离菌株2007与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌菌株FJ848573.1同源性为99.4%,说明分离株2007是猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。动物攻毒试验结果显示,分离菌株2007对小鼠有强致病性。药敏试验结果显示,分离株2007对泰妙菌素、氨苄西林和头孢噻呋钠等高敏,对替米考星、红霉素、氟苯尼考等20种抗菌药完全耐药,对34种抗生素的耐药率高达76.5%,具有较强的多重耐药性。分离菌2007基因分型扩增到目的基因片段与血清型5型结果相符。本试验结果为发病猪场提出了解决该病的具体防治措施,并最终获得了良好的效果,为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌临床耐药折点的制定提供了一些参考。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎 药敏试验 基因分型 分离鉴定
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定与药敏试验 被引量:9
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作者 谭素媚 聂立欣 付强 《中国畜禽种业》 2015年第8期104-106,共3页
猪传染性胸膜肺炎是一种高度传染性呼吸道疾病,影响全球养猪业的发展。本研究采用多种培养基进行接种培养,从具有猪传染性胸膜肺炎临床症状病死猪的肺脏和胸腔渗出液分离到革兰氏阴性杆菌,通过细菌分离、涂片染色镜检、卫星现象试验、V... 猪传染性胸膜肺炎是一种高度传染性呼吸道疾病,影响全球养猪业的发展。本研究采用多种培养基进行接种培养,从具有猪传染性胸膜肺炎临床症状病死猪的肺脏和胸腔渗出液分离到革兰氏阴性杆菌,通过细菌分离、涂片染色镜检、卫星现象试验、V因子依赖性试验诊断,最终确定所分离的细菌为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。通过药敏实验发现该分离菌对氟苯尼考、强力霉素和先锋Ⅵ等药物高度敏感,研究结果为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病的诊断及治疗提供指导意义,同时也为进一步研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的致病机理奠定基础。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎放线杆菌 病原分离鉴定 药敏试验
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广东省猪传染性胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定及耐药表型和耐药基因检测与分析 被引量:11
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作者 徐民生 柯海意 +4 位作者 施科达 杨冬霞 翟少伦 臧莹安 李春玲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3212-3225,共14页
【目的】了解广东省部分规模化猪场引起猪传染性胸膜肺炎(PCP)的病原菌猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的耐药表型和耐药基因携带情况,并分析比较其相关性,为有效防控该病提供理论依据。【方法】将2019-2021年从广东省不同地区规模化猪... 【目的】了解广东省部分规模化猪场引起猪传染性胸膜肺炎(PCP)的病原菌猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的耐药表型和耐药基因携带情况,并分析比较其相关性,为有效防控该病提供理论依据。【方法】将2019-2021年从广东省不同地区规模化猪场采集的疑似猪传染性胸膜肺炎病死猪病料通过病原分离培养、革兰氏染色、生化试验、PCR扩增等方法进行病原菌分离鉴定和测序分析,随后对分离株进行药敏试验并通过PCR检测其耐药基因,确定其耐药表型和耐药基因的携带率,分析比较两者的一致性。【结果】分离菌需在含有血清和NAD的培养板中生长;革兰氏染色结果显示分离菌为红色,可判定为革兰氏阴性细菌,通过生化试验、PCR结果及测序分析确定分离到20株APP,且没有表现出明显的地域特性。所有菌株均呈现多重耐药且约50%菌株呈8重及以上耐药;其中对四环素类、磺胺类、氯霉素类和大环内酯类药物耐药率较高,分别为77.5%、65.0%、55.0%和48.8%;进一步分析发现,分离菌主要对四环素、磺胺异噁唑、氟苯尼考和林可霉素等抗菌药物耐药,而对头孢唑啉(先锋Ⅴ)和阿奇霉素敏感。23种主要耐药基因中共检测到bla、aph(2″)-Ⅰb、sul1、sul2、sul3、tetA、tetB、tetM、tetO、tetR和floR这11种耐药基因,携带率分别为85%、85%、50%、60%、75%、30%、100%、85%、100%、70%和80%;未检测到喹诺酮类、大环内酯类和林可胺类相关耐药基因。【结论】从广东省猪群中分离到的APP表现出广泛耐药性,且为多重耐药,耐药基因与耐药表型基本一致,表明耐药基因的携带是细菌对抗菌药物产生耐药的主要原因之一,但也可能存在其他未检测的耐药基因,或存在新的耐药机制。 展开更多
关键词 传染性胸膜肺炎 胸膜肺炎放线杆菌(APP) 分离鉴定 耐药表型 耐药基因
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