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猪传染性胃肠炎病毒S、N基因DNA疫苗载体构建及其免疫原性 被引量：1
1
作者 成伟伟 容维中 +5 位作者 杨明 李元新 赵子惠 陈伯祥 王佳 周瑶 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1035-1043,共9页
【目的】构建猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S、N基因的DNA疫苗载体,并进行免疫原性试验,为猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)的防控和DNA疫苗研究提供技术支撑和基础数据。【方法】扩... 【目的】构建猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S、N基因的DNA疫苗载体,并进行免疫原性试验,为猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)的防控和DNA疫苗研究提供技术支撑和基础数据。【方法】扩增S基因的A位点、D位点和N基因,并将N基因(单独)、A位点和D位点(融合)克隆至pCDNA3.1-His-C构建重组疫苗载体,运用生物信息学软件预测分析S(A-D)蛋白、N蛋白二级结构组成、三级构像、亚细胞定位和优势B细胞抗原表位。将构建成功的重组载体分别转染至PK-15细胞进行间接免疫荧光试验,运用共聚焦检测重组蛋白的表达分布情况。将重组疫苗载体单独或联合免疫小鼠,运用间接ELISA检测IgG抗体水平。【结果】扩增出S基因的A位点、D位点和N基因,大小分别为498、606、1149 bp。构建了A位点与D位点(融合)、N基因(单独)的DNA疫苗重组载体p-S(A-D)-His和p-N-His。生物信息学软件预测分析发现TGEV感染宿主细胞时N蛋白主要定位于细胞核和线粒体,S(A-D)蛋白主要定位于细胞质和线粒体,S(A-D)蛋白具有7个优势B细胞抗原表位,N蛋白具有8个优势B细胞抗原表位。重组载体p-S(A-D)-His和p-N-His均在PK-15细胞内成功表达,且S(A-D)-His和N-His在PK-15细胞核和细胞质中均有分布。重组疫苗载体免疫小鼠后,免疫效果由高至低依次为p-N-His>p-S(A-D)-His+p-N-His>p-S(A-D)-His。【结论】本研究构建了TGEV的S、N基因的DNA疫苗载体,免疫小鼠后均产生了较强的特异性抗体,为TGEV的核酸疫苗的研制提供了基础材料和依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 N基因 载体构建 免疫原性
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猪传染性胃肠炎病毒分离株JS2012全基因组序列分析 被引量：4
2
作者 郭容利 李彬 +4 位作者 范宝超 温立斌 茅爱华 周萍 何孔旺 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1351-1358,共8页
设计32对PCR引物分片段扩增猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）江苏分离株JS2012全基因组,扩增产物克隆到p MD19-T载体并测序。用DNAstar软件将JS2012全基因组序列与Gen Bank中其他13株TGEV株和猪呼吸道冠状病毒（PRCV-ISU-1）序列进行比对以... 设计32对PCR引物分片段扩增猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）江苏分离株JS2012全基因组,扩增产物克隆到p MD19-T载体并测序。用DNAstar软件将JS2012全基因组序列与Gen Bank中其他13株TGEV株和猪呼吸道冠状病毒（PRCV-ISU-1）序列进行比对以及同源性分析,并绘制基因进化树。JS2012基因组序列全长28 542 bp,不包括poly A。基因组的排列为TGEV典型的基因排列序：5＇-ORF1a-ORF1b-S-3a-3b-E-M-N-7-3＇。TGEV JS2012株的ORF3基因和Miller组病毒一样有2个大片段的缺失。JS2012的S基因和Miller M6以及Virulent Purdue 2个强毒株有同样的序列特征。除Virulent Purdue外,其余Purdue株在1 123~1 128 bp处均有6 bp的缺失,JS2012与所有Miller株及Virulent Purdue一样,此处没有缺失。JS2012与其他TGEV毒株之间的碱基序列同源性为98.6%-99.9%,与Miller M6的碱基序列同源性最高,亲缘关系最近,同属于Miller组,与Purdue组相对较远。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 全基因组 序列分析
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猪传染性胃肠炎病毒RT-CPA检测方法构建及初步应用 被引量：1
3
作者 赵子惠 陈伯祥 +3 位作者 王佳 成伟伟 杨明 李元新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期65-71,共7页
为开发一种猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列,设计了3对引物,使用构建的重组质粒作为标准阳性对照,通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条,成... 为开发一种猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列,设计了3对引物,使用构建的重组质粒作为标准阳性对照,通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条,成功建立了一种一步法TGEV RT-CPA检测方法。本实验筛选最优条件为:Mg^(2+)浓度1.0 mmol/L,dNTP浓度0.8 mmol/L,Betaine浓度1.0 mol/L,BstDNA聚合酶浓度8.0 U,反应温度63℃,反应时间60 min,AMV逆转录酶5 U。本研究的扩增产物通过凝胶电泳显示出梯形条带,证明了其对TGEV的特异性检测和重复性良好,灵敏度高达10拷贝/μL。初步应用显示,该方法与TGEV抗原快速检测试剂盒的符合率超过90%,显示了高灵敏度。TGEV RT-CPA方法免去了RNA提取和cDNA合成的步骤,能够完成一步检测,且该方法不需要特殊仪器,适用于现场快速检测TGEV,为快速诊断和防控猪传染性胃肠炎提供了新的技术选择。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 RT-CPA s基因 检测方法
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猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段在巴斯德毕赤酵母KM71中的表达
4
作者 于天飞 黎明 +4 位作者 闫冰 张建 孙天国 朱红标 吕建伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第12期27-28,共2页
猪传染性胃肠炎（TGE）是猪的一种急性、高度接触性传染病，各种年龄及品种的猪对本病均易感，其中2周龄以下仔猪的死亡率可达100％。该病病原为猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）。
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 巴斯德毕赤酵母 抗原位点 s基因 接触性传染病 死亡率 仔猪 周龄
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猪传染性胃肠炎病毒S基因杆状病毒/昆虫细胞表达系统重组质粒的构建 被引量：8
5
作者 任晓峰 李一经 +1 位作者 李广兴 刘宝全 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第4期359-363,共5页
用限制性内切酶从克隆质粒pUC—s中回收猪传染性胃肠炎病毒中国分离株,TH-98株完整的病毒保护性抗原基因,即S基因。按照预定的阅读框架,将S基因克隆于供体质粒pFASTBACHTb的EcoRI、PstI多克隆位点上,并进行酶切鉴定,得到阳性重组质粒BAC... 用限制性内切酶从克隆质粒pUC—s中回收猪传染性胃肠炎病毒中国分离株,TH-98株完整的病毒保护性抗原基因,即S基因。按照预定的阅读框架,将S基因克隆于供体质粒pFASTBACHTb的EcoRI、PstI多克隆位点上,并进行酶切鉴定,得到阳性重组质粒BAC—S。用DH10BAC对BAC—S进行转位,获得重组质粒pBAC—S。根据S基因酶切位点分析结果及杆状病毒(Bac-ulovirus)转位区结构特点,用相应的限制性内切酶进行酶切鉴定,并用特异性和通用引物进行PCR分析,证明该重组质粒为含有TH-98株完整S基因的可直接在昆虫细胞进行表达的感染性重组质粒。 展开更多
关键词 猪 传染性胃肠炎病毒 s基因 杆状病毒 昆虫细胞 表达系统 重组质粒
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猪传染性胃肠炎病毒M、sM基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装 被引量：8
6
作者 冷勇 宋振辉 +2 位作者 卿家超 翟少华 买买提.艾孜子 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1432-1437,共6页
利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）M和sM结构蛋白基因，将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual，获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM，将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞，经抗性与蓝白斑筛选，获得杆... 利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）M和sM结构蛋白基因，将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual，获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM，将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞，经抗性与蓝白斑筛选，获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM，在Cellfection作用下，将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9，获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM。通过WesternBlot、间接免疫荧光试验（IFA）进行检测，结果显示：重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达。将重组杆状病毒rBac-M和rBae-M-sM分别感染sf9昆虫细胞，进行TGEV病毒样颗粒（VLPs）的体外组装试验。结果表明，M蛋白在sf9细胞内单独表达，M蛋白和sM在sf9细胞内共同表达，都可形成TGEV病毒样颗粒，而且病毒粒子大小不等，直径在61～101nm。试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒（TGEV） M基因 sM基因 sF9细胞 病毒样颗粒
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猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段在毕赤酵母中的表达 被引量：4
7
作者 于天飞 王君伟 +1 位作者 胡森 靳淼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期154-157,共4页
采用基因重组的方法构建了含有猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段的巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris分泌型表达载体pPIC9K-ts,经线性化后采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,大量筛选后获得高效表达外源蛋白的毕赤酵母工程菌株GS... 采用基因重组的方法构建了含有猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段的巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris分泌型表达载体pPIC9K-ts,经线性化后采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,大量筛选后获得高效表达外源蛋白的毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-ts。表达蛋白经Dot-ELISA检测具有良好的抗原性。本研究为TGE的血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 抗原位点 表达 毕赤酵母
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猪传染性胃肠炎病毒S1融合蛋白的构建及其免疫原性研究 被引量：1
8
作者 王芳 徐进平 《安徽农业科学》 CAS 2018年第13期104-107,169,共5页
[目的]研究猪传染性胃肠炎病毒S1融合蛋白的免疫原性。[方法]表达和纯化了猪传染性胃肠炎病毒S1与TAT转导肽序列的融合蛋白S1-TAT,将融合蛋白S1-TAT经腹腔注射和灌胃方式免疫昆明小鼠,采集免疫小鼠血液和粪便样品,检测血清Ig G抗体和黏... [目的]研究猪传染性胃肠炎病毒S1融合蛋白的免疫原性。[方法]表达和纯化了猪传染性胃肠炎病毒S1与TAT转导肽序列的融合蛋白S1-TAT,将融合蛋白S1-TAT经腹腔注射和灌胃方式免疫昆明小鼠,采集免疫小鼠血液和粪便样品,检测血清Ig G抗体和黏膜Ig A抗体水平,期间观察小鼠体重变化。[结果]腹腔注射组诱导产生的血清Ig G抗体水平明显高于其他试验组(P<0.01),但其黏膜Ig A抗体水平较低;而灌胃组能够诱导中等水平的血清Ig G抗体和较高水平的黏膜Ig A抗体(P<0.01);在试验周期中,各组小鼠体重均正常。融合蛋白S1-TAT的穿肠活性较好,与对照组之间差异极显著(P<0.01)。[结论]融合蛋白S1-TAT经口服或注射小鼠后,能够有效诱导小鼠机体产生体液免疫应答,并且融合蛋白S1-TAT经口服可诱导小鼠机体产生黏膜免疫应答;融合蛋白S1-TAT具有穿肠功能;融合蛋白S1-TAT经口服或注射小鼠,均安全。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒s1基因 转导肽 免疫原性
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猪传染性胃肠炎病毒S基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测 被引量：3
9
作者 张云 王亚宾 +4 位作者 陈丽颖 张红英 侯贝贝 崔保安 胡慧 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期521-525,共5页
为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank收录的TGEV-Miller毒株的S基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEV S基因的部分保守片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重... 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank收录的TGEV-Miller毒株的S基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEV S基因的部分保守片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量RT-PCR检测的标准模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR扩增,并制作标准曲线,建立TGEV的荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明:该方法检测灵敏度可达30拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有重复性好、特异性强、灵敏度高等优点,可用于临床TGEV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 实时荧光定量RT—PCR技术
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猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因的克隆与同源性比较 被引量：3
10
作者 任晓峰 李一经 +1 位作者 李广兴 刘宝全 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2002年第7期3-6,共4页
用猪睾丸 (Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒国内分离株 TH- 98,根据 Gen Bank中已发表的TGEV S基因 c DNA序列 ,利用 Oligo4.1程序软件设计并合成两对引物 ,进行逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) ,扩增出2 .3kb和 2 ... 用猪睾丸 (Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒国内分离株 TH- 98,根据 Gen Bank中已发表的TGEV S基因 c DNA序列 ,利用 Oligo4.1程序软件设计并合成两对引物 ,进行逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) ,扩增出2 .3kb和 2 .1kb两个片段 ,分别命名为 Sa与 Sb,先后插入到 p UC18质粒载体上的 Eco RI和 Pst I多克隆位点上 ,构建了重组质粒 p UC- S。根据 TGEV S基因位点和 p UC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式 PCR方法进行鉴定、分析 ,证明克隆的 p UC- S为 TGEV S基因。同时对 p U C- S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的五个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 ,证明了 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 TH-98株 s基因 克隆 同源性比较
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猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株N基因的克隆及原核表达 被引量：3
11
作者 宋振辉 郭万柱 +1 位作者 韩国全 骆爱芳 《四川农业大学学报》 CSCD 2006年第2期210-213,共4页
通过PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株核衣壳蛋白(N)基因,然后将重组到pMD18-T载体中的约1174 bp的基因片段亚克隆到PET-32a(+)表达载体上,通过酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒命名为PET-N,核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与... 通过PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株核衣壳蛋白(N)基因,然后将重组到pMD18-T载体中的约1174 bp的基因片段亚克隆到PET-32a(+)表达载体上,通过酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒命名为PET-N,核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,将阳性重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导可表达分子量约66 kD的融合蛋白,N基因的表达可为传染性胃肠炎病毒的诊断提供良好的物质材料。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 sC-Y株 N基因 克隆 原核表达
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猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因5′端部分片段克隆及序列分析 被引量：2
12
作者 胡森 王君伟 +1 位作者 姜骞 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第4期3-7,共5页
本研究扩增出猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV) TH- 98株 S基因 5′端 6 72 bp片段 (TS1) ,包括 B、C两个主要抗原位点。将该片段克隆到 p MD 18- T载体上 ,经鉴定 TS1片段正确插入 p MD 18- T载体上。序列测定和分析表明 ,该片段的核酸序列... 本研究扩增出猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV) TH- 98株 S基因 5′端 6 72 bp片段 (TS1) ,包括 B、C两个主要抗原位点。将该片段克隆到 p MD 18- T载体上 ,经鉴定 TS1片段正确插入 p MD 18- T载体上。序列测定和分析表明 ,该片段的核酸序列与国外 TGEV毒株 Miller,Purdue15 ,FS772 /70等有很高的同源性 ,达 96 .88%以上 ,氨基酸同源性为 95 .0 9%以上 ,抗原位点 C(S蛋白第 4 8位氨基酸 )的丝氨酸变为脯氨酸。本研究首次克隆国内分离株 TH- 98株 S基因含有抗原位点 B、C且在 PRCV中缺失的片段。为进一步揭示 TGEV强弱毒株差别的分子机制和分子诊断的研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 克隆 序列分析
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猪传染性胃肠炎病毒S基因不同编码区的表达和反应原性鉴定 被引量：1
13
作者 周宏专 覃湘婕 +7 位作者 杨兵 徐福洲 满坤 苏霞 张晓东 刘爵 罗绪刚 王金洛 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期63-67,共5页
通过原核表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因不同编码区,以鉴定不同编码区表达产物与TGEV抗体的结合能力。在对TGEV S蛋白抗原位点分析的基础上,针对S蛋白N端的4个抗原位点C、B、D和A,设计引物分别扩增含C、B位点的TCB片段(411 ... 通过原核表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因不同编码区,以鉴定不同编码区表达产物与TGEV抗体的结合能力。在对TGEV S蛋白抗原位点分析的基础上,针对S蛋白N端的4个抗原位点C、B、D和A,设计引物分别扩增含C、B位点的TCB片段(411 bp)、含D位点的TD片段(441 bp)和含A位点的TA片段(456 bp),经克隆测序后分别插入原核表达载体p ET-32a中进行表达,SDS-PAGE电泳显示各片段均高效表达,表达的TCB片段、TD片段和TA片段融合蛋白大小分别为34.6,35.1,36.1 k Da。Western Blot结果表明,表达蛋白与TGEV感染猪阳性血清和His标签抗体均产生阳性反应。结果显示,3个S基因编码片段均具有与TGEV抗体结合的能力,为进一步鉴定不同编码区的免疫原性及抗原保护能力奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 原核表达 反应原性
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猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段克隆序列分析及原核表达 被引量：1
14
作者 胡森 姜骞 +3 位作者 师东方 李勐 于天飞 王君伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第2期3-6,共4页
猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV) S蛋白可诱导中和抗体 ,是主要保护性抗原 ,N端抗原位点 B和 C在猪呼吸道冠状病毒(PRCV)中缺失[1 ,2 ,5] 。体外扩增 TGEV S基因 B、C抗原位点 35 7bp片段 (TS)。核苷酸序列与氨基酸同源性分析表明该片段较为... 猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV) S蛋白可诱导中和抗体 ,是主要保护性抗原 ,N端抗原位点 B和 C在猪呼吸道冠状病毒(PRCV)中缺失[1 ,2 ,5] 。体外扩增 TGEV S基因 B、C抗原位点 35 7bp片段 (TS)。核苷酸序列与氨基酸同源性分析表明该片段较为保守。将 TS克隆到原核表达载体 p GEX- 6 P- 1中 ,转化大肠杆菌中。经 IPTG诱导后 ,SDS- PAGE分析目的蛋白与谷胱苷肽硫转移酶 (GST,大小约为 2 6 ku)融合后大小约为 4 0 ku,目的蛋白分子量约为 13.2 ku,优化表达条件后表达量达 37.9% 展开更多
关键词 C抗原 点片 s基因 诱导 克隆 s蛋白 Ts 猪传染性胃肠炎病毒 位点 TGEV
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猪传染性胃肠炎S基因A D抗原位点在昆虫杆状病毒系统中的表达 被引量：1
15
作者 张炳丽 唐丽杰 +4 位作者 范京慧 王玉玲 边亚娟 钟涛 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第8期22-24,共3页
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 杆状病毒系统 抗原位点 s基因 接触性传染病 昆虫 AD 养猪业发展
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猪传染性胃肠炎病毒S基因重组乳酸菌免疫小鼠的研究 被引量：5
16
作者 刘义 陈中秋 +1 位作者 董丽娜 胡桂学 《中国兽药杂志》 2011年第4期1-4,共4页
将含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸菌PNZ8149/NZ3900口服(灌胃)免疫BALB/C小鼠,第3次加强免疫后10 d捕杀小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后采用T淋巴细胞增殖试验及间接ELISA方法,检查免疫小鼠对外源基因表达产物的应答情况。结... 将含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸菌PNZ8149/NZ3900口服(灌胃)免疫BALB/C小鼠,第3次加强免疫后10 d捕杀小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后采用T淋巴细胞增殖试验及间接ELISA方法,检查免疫小鼠对外源基因表达产物的应答情况。结果表明,含有S基因的重组乳酸菌经口服免疫小鼠后,血清中的IgG、粪便中的sIgA与对照组有明显的差异(P<0.05)。结果说明,含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸菌,可以诱导小鼠产生良好的针对猪传染性胃肠炎病毒的全身体液和黏膜免疫应答。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒s基因 重组乳酸菌 小鼠
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猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点片段的真核表达 被引量：1
17
作者 吕宁 彭树英 张涌 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第4期26-28,共3页
为探讨利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因疫苗的可行性,构建了以奶牛β-酪蛋白启动子为调控序列,增强型绿色荧光蛋白为报告基因的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因抗原位点区乳腺表达载体pEGBS。通过脂质体介导方法将其转染小鼠乳腺... 为探讨利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因疫苗的可行性,构建了以奶牛β-酪蛋白启动子为调控序列,增强型绿色荧光蛋白为报告基因的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因抗原位点区乳腺表达载体pEGBS。通过脂质体介导方法将其转染小鼠乳腺癌细胞EMT6,在倒置荧光显微镜下可观察到明亮的绿色荧光分布于阳性细胞,并且RT-PCR检测结果显示,RT-PCR扩增产物与目的基因片段大小相符,证明其确实源于重组质粒转录后的mRNA。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 乳腺表达载体 小鼠乳腺癌细胞
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猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆及原核表达载体的构建 被引量：1
18
作者 张春叶 沈红 +1 位作者 李焕荣 路苹 《动物医学进展》 CSCD 2008年第9期1-5,共5页
参考GenBank上公布的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点序列,应用Prim-er6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增B、C抗原位点目的片段,将扩增产物连接于peasy-T克隆载体上,构建克隆载体,用EcoRⅠ和XhoⅠ对表达载体PET-32... 参考GenBank上公布的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点序列,应用Prim-er6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增B、C抗原位点目的片段,将扩增产物连接于peasy-T克隆载体上,构建克隆载体,用EcoRⅠ和XhoⅠ对表达载体PET-32a(+)和重组质粒进行酶切,将酶切产物亚克隆至PET-32a(+)多克隆位点上,连接、转化至BL21(DE3),构建B、C位点的原核表达载体,并对阳性重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。所扩增的目的片段的大小为357 bp,与原核表达载体连接后,经核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,说明成功地构建了TGEV S基因B、C抗原位点的原核表达载体。TGEV S基因B、C抗原位点原核表达载体的成功构建,为TGEV诊断方法的建立提供良好的技术基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因B C抗原位点 克隆 原核表达载体
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猪传染性胃肠炎病毒S基因核酸疫苗免疫小鼠体液免疫功能变化的研究 被引量：5
19
作者 任玲 李广兴 张宏伟 《畜牧兽医杂志》 2007年第5期16-18,共3页
本实验对TGEV S基因核酸疫苗免疫后体液免疫功能变化进行了研究,同时比较了两种核酸疫苗单独免疫小鼠后体液免疫应答的变化,证明重组核酸疫苗诱导小鼠产生体液免疫应答。
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 核酸疫苗 体液免疫
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猪传染性胃肠炎病毒S基因转基因玉米植株的构建及鉴定
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作者 王龙涛 葛晨霞 +4 位作者 高雯雯 付永平 徐凤宇 王丕武 胡桂学 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期752-756,共5页
为构建猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因转玉米植株,本研究以玉米自交系"丹598"和"H99"的胚性愈伤组织为材料,通过愈伤组织对卡那霉素的敏感性试验,确定了卡那霉素40mg/L～56mg/L为愈伤组织适宜选择压。利用农杆菌介... 为构建猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因转玉米植株,本研究以玉米自交系"丹598"和"H99"的胚性愈伤组织为材料,通过愈伤组织对卡那霉素的敏感性试验,确定了卡那霉素40mg/L～56mg/L为愈伤组织适宜选择压。利用农杆菌介导法将TGEV S基因导入玉米自交系中,并对农杆菌转化系统的条件进行了优化。结果表明,根癌农杆菌EHA105的菌液OD600nm值为0.5～0.6时,侵染20min为农杆菌转化的最适条件。并对转化的愈伤组织进行分化诱导出苗后进行PCR和Southern blot检测,证明外源目的基因已整合到玉米基因组中。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 玉米 农杆菌
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