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表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸菌口服免疫小鼠特异性免疫应答分析 被引量：7
1
作者 唐丽杰 魏颖 +4 位作者 葛俊伟 任晓峰 汪淼 徐义刚 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期523-527,共5页
将表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸乳球菌pNZ8112-Sa/NZ9000经口服免疫BALB/c小鼠,在免疫后的不同时间收集免疫鼠粪便样品,断尾采血收集血液样品并分离血清,用间接ELISA技术检测血清中的IgG抗体及血清和粪便中的IgA抗体的动态产... 将表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸乳球菌pNZ8112-Sa/NZ9000经口服免疫BALB/c小鼠,在免疫后的不同时间收集免疫鼠粪便样品,断尾采血收集血液样品并分离血清,用间接ELISA技术检测血清中的IgG抗体及血清和粪便中的IgA抗体的动态产生规律;在加强免疫后流式细胞仪检测分析外周血T细胞的变化情况及无菌收集免疫鼠的肠黏液,经中和试验检测其抗体的中和能力。结果表明重组菌株口服免疫小鼠后血清中的IgG和IgA抗体产生能力由于非特异性干扰不能确定,外周血中T细胞百分数在实验组和对照组间变化不显著;粪便中的IgA抗体水平产生效果明显;黏液的抗体具有一定的中和能力,其效价检测结果为1:36。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒s蛋白 重组乳酸菌 小鼠口服免疫 特异性免疫应答
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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原位点分子特征分析 被引量：14
2
作者 于天飞 朱红标 +4 位作者 孙天国 张健 蔡雅璐 庞后琴 史小飞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期135-138,共4页
为了进一步研究猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原位点的分子特征,选取GenBank中22株TGEV分离株,采用生物信息学方法对抗原位点氨基酸序列进行同源性比对分析。结果表明,不同分离株的A和C位点高度保守,B和D位点则有一些变化。
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 纤突蛋白 抗原表位分子特征分析
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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原表位C的串联表达研究 被引量：5
3
作者 于天飞 董慧莹 +3 位作者 张喜文 谢鹏宇 王有祺 孙婉姝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期936-939,共4页
为比较含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗原表位C不同表位密度的重组蛋白的抗原性,本研究将抗原表位C的编码核酸序列进行串联,构建了重组表达质粒pET-(C_1C_2)_2~p ET-(C_1C_2)_6,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。Western blot分... 为比较含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗原表位C不同表位密度的重组蛋白的抗原性,本研究将抗原表位C的编码核酸序列进行串联,构建了重组表达质粒pET-(C_1C_2)_2~p ET-(C_1C_2)_6,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。Western blot分析表明,表达的6种重组蛋白r-C_1C_2~r-(C_1C_2)_6均具有良好的抗原性。采用Dot-ELISA方法对各重组蛋白进行了抗原性比较分析。结果表明,含有12个表位肽的重组蛋白r-(C_1C_2)_6的抗原性强于其它重组蛋白。本研究制备的串联重组蛋白为建立TGE血清学诊断方法奠定了物质基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 纤突蛋白 抗原表位C 表位串联
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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的C和D线性抗原表位的抗原性比较 被引量：3
4
作者 于天飞 张喜文 +4 位作者 朱可佳 陈刚 李赫 陆泽 谢鹏宇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期911-913,共3页
为比较猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白含有的两个线性抗原表位(C和D)的抗原性,本研究采用Dot-ELISA方法对原核表达的S蛋白抗原C和D的两种线性表位重组蛋白进行了抗原性比较分析。结果表明,在等质量或等摩尔的条件下,含有抗原线性表位C... 为比较猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白含有的两个线性抗原表位(C和D)的抗原性,本研究采用Dot-ELISA方法对原核表达的S蛋白抗原C和D的两种线性表位重组蛋白进行了抗原性比较分析。结果表明,在等质量或等摩尔的条件下,含有抗原线性表位C的重组蛋白的抗原性弱于含有抗原线性表位D的重组蛋白。本研究为建立TGEV感染的血清学诊断方法,以及进一步研究抗原线性表位C和D的结构及功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 纤突蛋白 抗原表位C 抗原表位D 抗原性
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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白C和D抗原位点在大肠杆菌中的串联表达
5
作者 于天飞 陈刚 +3 位作者 张双 史俊龙 朱可佳 张喜文 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第3期31-33,共3页
使用大肠杆菌偏好性密码子人工合成了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白C和D抗原位点多肽基因序列。依次将C和D抗原位点多肽基因序列克隆至表达载体p ET-32a中。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-... 使用大肠杆菌偏好性密码子人工合成了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白C和D抗原位点多肽基因序列。依次将C和D抗原位点多肽基因序列克隆至表达载体p ET-32a中。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western Blot分析。结果显示,在分子量25 k Da处有1条明显的蛋白表达条带,且能被TGEV阳性血清识别。本研究为TGEV的血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 纤突蛋白 抗原位点 串联表达
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DNA免疫制备猪传染性胃肠炎病毒S蛋白单克隆抗体
6
作者 张赟硕 李一经 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第6期93-97,共5页
利用含有猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点的重组质粒PCI-Sa免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得1株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为E6D9A12,其染色体平均计数... 利用含有猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点的重组质粒PCI-Sa免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得1株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为E6D9A12,其染色体平均计数为88±10对,间接ELISA检测制备腹水抗体效价为1:6×105,分泌抗体亚类为IgG2a型。杂交瘤细胞上清与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)均不发生交叉反应;与TGEV感染细胞经间接免疫荧光检测均呈黄绿色荧光;与TGEV经Dot-ELISA检测呈特异性反应。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 DNA免疫 单克隆抗体 杂交瘤
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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白主要抗原位点在昆虫细胞中的表达 被引量：1
7
作者 李菁 何孔旺 杨倩 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期171-174,共4页
用RT-PCR方法扩增出猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点A、D,将其亚克隆至供体质粒pFastBac1,得到重组转移质粒pFastBac1-TS1,转化到Escherichia coliDH5α中,提取阳性克隆质粒再转化到含穿梭载体bacmid的E.coliDH10Bac中,发生转座作... 用RT-PCR方法扩增出猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点A、D,将其亚克隆至供体质粒pFastBac1,得到重组转移质粒pFastBac1-TS1,转化到Escherichia coliDH5α中,提取阳性克隆质粒再转化到含穿梭载体bacmid的E.coliDH10Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选得到重组穿梭载体Bacmid-TS1,经PCR鉴定后再转染Sf9昆虫细胞,经空斑筛选得到纯化的重组病毒rAcV-Bac-TS1,经IFA、SDS-PAGE和Western-blot鉴定,重组杆状病毒TS1蛋白(相对分子质量约43 000)在Sf9昆虫细胞中得到表达。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s蛋白 重组杆状病毒 表达
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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的二级结构和B细胞抗原表位的预测
8
作者 高传庆 王可 +1 位作者 黄庆华 韩虹 《山东农业科学》 2010年第12期6-10,共5页
以TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)基因组序列为基础,运用Garnier-Robson、Chou-Fasman和Karplus-Schulz方法预测其S蛋白的二级结构,运用Kyte-Doolittle方法对S蛋白的亲水性进行分析,并分别运用Jameson-Wolf方法和Emini方法预测了其抗原指数... 以TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)基因组序列为基础,运用Garnier-Robson、Chou-Fasman和Karplus-Schulz方法预测其S蛋白的二级结构,运用Kyte-Doolittle方法对S蛋白的亲水性进行分析,并分别运用Jameson-Wolf方法和Emini方法预测了其抗原指数和表面可及`性,最后结合吴玉章的方法综合分析预测了其B细胞抗原表位。结果显示,α螺旋数量少且分散,β折叠占据面积较大,柔性区域主要集中在N端第22～30、45～76、100～172、239～301、348～419、451～519、541～633、645～720、746～796、822～887、921～986、1052～1201、1239～1384、1434～1445区段。S蛋白可能的B细胞抗原位点是N端第20～32、44～54、69～78、97～106、635～655、781～803、949～994、1307～1328、1346～1362、1432～1448区段,这些区段内部或附近都有柔性区域存在,可作为S蛋白的抗原优势表位。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s蛋白 二级结构 B细胞抗原表位
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猪传染性胃肠炎病毒S、N基因DNA疫苗载体构建及其免疫原性 被引量：1
9
作者 成伟伟 容维中 +5 位作者 杨明 李元新 赵子惠 陈伯祥 王佳 周瑶 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1035-1043,共9页
【目的】构建猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S、N基因的DNA疫苗载体,并进行免疫原性试验,为猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)的防控和DNA疫苗研究提供技术支撑和基础数据。【方法】扩... 【目的】构建猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S、N基因的DNA疫苗载体,并进行免疫原性试验,为猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)的防控和DNA疫苗研究提供技术支撑和基础数据。【方法】扩增S基因的A位点、D位点和N基因,并将N基因(单独)、A位点和D位点(融合)克隆至pCDNA3.1-His-C构建重组疫苗载体,运用生物信息学软件预测分析S(A-D)蛋白、N蛋白二级结构组成、三级构像、亚细胞定位和优势B细胞抗原表位。将构建成功的重组载体分别转染至PK-15细胞进行间接免疫荧光试验,运用共聚焦检测重组蛋白的表达分布情况。将重组疫苗载体单独或联合免疫小鼠,运用间接ELISA检测IgG抗体水平。【结果】扩增出S基因的A位点、D位点和N基因,大小分别为498、606、1149 bp。构建了A位点与D位点(融合)、N基因(单独)的DNA疫苗重组载体p-S(A-D)-His和p-N-His。生物信息学软件预测分析发现TGEV感染宿主细胞时N蛋白主要定位于细胞核和线粒体,S(A-D)蛋白主要定位于细胞质和线粒体,S(A-D)蛋白具有7个优势B细胞抗原表位,N蛋白具有8个优势B细胞抗原表位。重组载体p-S(A-D)-His和p-N-His均在PK-15细胞内成功表达,且S(A-D)-His和N-His在PK-15细胞核和细胞质中均有分布。重组疫苗载体免疫小鼠后,免疫效果由高至低依次为p-N-His>p-S(A-D)-His+p-N-His>p-S(A-D)-His。【结论】本研究构建了TGEV的S、N基因的DNA疫苗载体,免疫小鼠后均产生了较强的特异性抗体,为TGEV的核酸疫苗的研制提供了基础材料和依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 N基因 载体构建 免疫原性
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猪传染性胃肠炎病毒RT-CPA检测方法构建及初步应用 被引量：1
10
作者 赵子惠 陈伯祥 +3 位作者 王佳 成伟伟 杨明 李元新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期65-71,共7页
为开发一种猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列,设计了3对引物,使用构建的重组质粒作为标准阳性对照,通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条,成... 为开发一种猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列,设计了3对引物,使用构建的重组质粒作为标准阳性对照,通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条,成功建立了一种一步法TGEV RT-CPA检测方法。本实验筛选最优条件为:Mg^(2+)浓度1.0 mmol/L,dNTP浓度0.8 mmol/L,Betaine浓度1.0 mol/L,BstDNA聚合酶浓度8.0 U,反应温度63℃,反应时间60 min,AMV逆转录酶5 U。本研究的扩增产物通过凝胶电泳显示出梯形条带,证明了其对TGEV的特异性检测和重复性良好,灵敏度高达10拷贝/μL。初步应用显示,该方法与TGEV抗原快速检测试剂盒的符合率超过90%,显示了高灵敏度。TGEV RT-CPA方法免去了RNA提取和cDNA合成的步骤,能够完成一步检测,且该方法不需要特殊仪器,适用于现场快速检测TGEV,为快速诊断和防控猪传染性胃肠炎提供了新的技术选择。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 RT-CPA s基因 检测方法
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猪传染性胃肠炎病毒S基因RAA检测方法的建立与初步应用
11
作者 吕林丹 牟豪 +5 位作者 胡霞 刘明妮 李绍梅 李星 宋振辉 杨柳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3590-3599,共10页
本研究旨在建立一种基于猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S基因便捷、高效和特异的由重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)检测方法。通过基因组序列比对,选择TGEV S基... 本研究旨在建立一种基于猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S基因便捷、高效和特异的由重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)检测方法。通过基因组序列比对,选择TGEV S基因中特定片段为检测靶标,构建重组质粒pUC57-S,设计并筛选RAA引物和探针;建立RAA检测方法;评价该方法灵敏度、特异性和重复性;运用该方法检测腹泻临床样品,与荧光定量PCR方法比较检测结果的符合率。结果确定最佳引物对F2/R1和探针PF2;该方法在40℃恒温条件下,30 min即可完成反应;荧光型RAA法最低检出限可达1.34×10^(1)copies·μL^(-1);与猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪呼吸道冠状病毒等常见猪源病毒核酸无交叉反应;采用该方法检测107份临床样本,阳性率为5.61%(6/107),与荧光定量PCR法相比较,检测结果一致。本研究成功建立了一种灵敏、特异、可视化的RAA检测方法,可摆脱对昂贵设备、专业人员和检测技术的依赖,为临床检测TGEV提供良好的技术基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 基础型RAA 荧光型RAA 可视化检测
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复方中药制剂对猪传染性胃肠炎病毒的体外作用研究 被引量：1
12
作者 李元新 容维中 +4 位作者 成伟伟 杨明 赵子惠 周瑶 王佳 《畜牧兽医杂志》 2024年第6期58-62,共5页
为了探讨中药复方制剂对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在PK-15细胞上增殖的体外抑制作用。试验选择由白头翁、黄柏、青皮、炒白术、焦三仙、仙鹤草、木香7味中药提取物组成4个配方的复方中药制剂,采用同时给药、预防给药、治疗给药三种作用... 为了探讨中药复方制剂对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在PK-15细胞上增殖的体外抑制作用。试验选择由白头翁、黄柏、青皮、炒白术、焦三仙、仙鹤草、木香7味中药提取物组成4个配方的复方中药制剂,采用同时给药、预防给药、治疗给药三种作用方式,观察药物对病毒的抑制吸附穿入、直接杀灭和抑制复制作用。结果显示:以1mg/mL剂量的复方中药制剂在体外对TGEV在PK-15细胞上增殖影响,配方2优于其他3个配方,对TGEV有较好抑制作用,且直接杀灭作用对细胞的保护效果最好,细胞存活率达75%(P<0.01),并筛选出了同时具有3种方式抗病毒的有效复方中药制剂。该研究结果可为后续抗TGEV药物的筛选提供科学依据。 展开更多
关键词 复方中药制剂 猪传染性胃肠炎病毒 体外作用
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猪传染性胃肠炎病毒ORF7蛋白在ST细胞中定位及其对病毒复制影响的研究 被引量：5
13
作者 何雷 董玲娟 +6 位作者 张彦明 宋嘉兴 郁川 余祖华 张春杰 丁轲 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期543-548,共6页
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP... 为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP融合在ORF7的-COOH端)。分别将这两个质粒转染至ST细胞,western blot检测融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP的表达。通过生物信息学分析和激光共聚焦确定TGEV ORF7蛋白的亚细胞定位。在此基础上,通过细胞病变观察和荧光定量PCR检测TGEV ORF7蛋白对TGEV复制的影响。结果显示,本研究正确构建了真核表达载体pGFP-ORF7和pORF7-GFP,western blot检测结果表明融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP均正确表达,TGEV ORF7蛋白大小约为9 ku;结合生物信息学分析和激光共聚焦共定位结果显示TGEV ORF7特异性的定位于ST细胞的内质网中,其定位和其N端的信号肽序列有关;荧光定量PCR检测结果显示,过表达ORF7蛋白后TGEV mRNA转录水平降低99%,表明ORF7蛋白参与调控TGEV的复制。本研究为TGEV ORF7蛋白功能的研究提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 ORF7蛋白 亚细胞定位 过表达 病毒复制
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猪传染性胃肠炎病毒N蛋白原核表达和间接ELISA检测方法的建立 被引量：5
14
作者 郭宏伟 郑鸣 +3 位作者 乔宏兴 马辉 赵绪永 王永芬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2296-2301,共6页
试验构建了pET28a-TGEV-N重组表达质粒,完成TGEV N蛋白的表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,表明表达产物N蛋白可被猪TGEV阳性血清识别。用TGEV N蛋白作为诊断抗原,建立了检测TGEV血清抗体的间接ELISA检测方法,该方法批内... 试验构建了pET28a-TGEV-N重组表达质粒,完成TGEV N蛋白的表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,表明表达产物N蛋白可被猪TGEV阳性血清识别。用TGEV N蛋白作为诊断抗原,建立了检测TGEV血清抗体的间接ELISA检测方法,该方法批内、批间重复试验变异系数均小于5%;检测血清的特异性为100%,假阳性率为0,假阴性率为5%,与7种常见猪病血清无交叉反应。针对临床血清,用该方法检测结果与中和试验结果相比,符合率为100%。该方法能够快速、有效地检出TGEV抗体,重复性和特异性好,为标准化诊断试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白 原核表达 间接ELIsA
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猪传染性胃肠炎病毒陕西分离株S蛋白抗原位点的真核表达 被引量：6
15
作者 宋林林 王晓红 +3 位作者 姜博 赵毅 王祥 穆杨 《动物医学进展》 北大核心 2016年第8期6-10,共5页
猪传染性胃肠炎(TGE)是严重危害全世界养猪业健康发展的一种高度传染性病毒病,其病原猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的S蛋白携带有主要的B淋巴细胞识别的抗原决定簇,是诱导机体产生保护性中和抗体的主要抗原。本研究以提取的TGEV陕西分离株... 猪传染性胃肠炎(TGE)是严重危害全世界养猪业健康发展的一种高度传染性病毒病,其病原猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的S蛋白携带有主要的B淋巴细胞识别的抗原决定簇,是诱导机体产生保护性中和抗体的主要抗原。本研究以提取的TGEV陕西分离株感染的ST细胞的RNA为模板,采用RTPCR方法扩增编码S蛋白上包含C、B、D、A 4个抗原位点的基因片段,将目的片段连接到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB上,构建重组表达载体,转染293T细胞后,通过Western blot检测目的基因的表达。结果成功克隆到编码S蛋白C、B、D、A 4个抗原位点的基因片段,以TGEV阳性猪血清和抗His标签单抗的Western blot结果均显示,目的基因在293T细胞中获得表达。本研究为TEG核酸疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 s基因 抗原位点 真核表达
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稳定表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的ST细胞株的构建及其亚细胞定位 被引量：1
16
作者 何雷 贾艳艳 +7 位作者 郁川 余祖华 丁轲 李静 程相朝 李银聚 张春杰 金修哲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期101-104,共4页
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的表达对宿主细胞功能的影响,本研究通过构建TGEV N基因的重组表达质粒p EGFP-N,将其转染于猪睾丸(ST)细胞中,并在活细胞状态下直接观察GFP-N蛋白在ST细胞中的表达与定位。结果显示,转染后4 h^5 h... 为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的表达对宿主细胞功能的影响,本研究通过构建TGEV N基因的重组表达质粒p EGFP-N,将其转染于猪睾丸(ST)细胞中,并在活细胞状态下直接观察GFP-N蛋白在ST细胞中的表达与定位。结果显示,转染后4 h^5 h出现荧光蛋白表达,24 h达到高峰,TGEV的N蛋白主要定位于细胞质中,进一步的激光共聚焦共定位显示TGEV N蛋白主要定位于ST细胞的内质网上面。以G418筛选4周后,转染细胞形成稳定的细胞株,RT-PCR和western blot验证TGEV N蛋白的m RNA及其蛋白在ST细胞中稳定表达,提示本研究建立了稳定表达的TGEV N蛋白的ST细胞株,为进一步研究TGEV N蛋白对ST细胞的生理功能的影响及其在TGEV致病过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白 亚细胞定位 细胞株
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猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达 被引量：1
17
作者 于天飞 董慧莹 +4 位作者 谢鹏宇 孙婉姝 尹海畅 黎明 于志丹 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2020年第1期49-56,共8页
【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)spike蛋白亲和肽(SQHT),检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该... 【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)spike蛋白亲和肽(SQHT),检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该基因分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1中,构建重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,对重组质粒进行BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。将重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG进行诱导表达,对其表达产物的生物学活性进行检测。【结果】亚克隆获得了150 bp的TGEV spike蛋白亲和肽基因。成功构建了重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,并诱导表达出重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT,其分子质量分别为25和31 ku。Western blot分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子具有良好的亲和性;Dot-ELISA分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子的最低结合滴度TCID50为5×102 mL-1。特异性试验表明,重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT均可与TGEV产生特异性结合,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)结合。【结论】使用原核细胞成功表达了TGEV spike蛋白亲和肽,表达的重组蛋白具有很好的TGEV特异亲和性。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 sPIKE蛋白 亲和肽 原核表达
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猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株非编码区及结构蛋白的生物信息学分析 被引量：5
18
作者 宋振辉 张鹦俊 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第22期9536-9539,共4页
利用生物软件对猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株非编码区及结构蛋白所含的生物学信息进行了分析。结果显示,SC-Y株与TGEV其他参考毒株（Miller M60、Miller M6、Purdue、Purdue P115、PUR46-MAD、TS）5＇UTR的二级结构差异显著,预测结构蛋白... 利用生物软件对猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株非编码区及结构蛋白所含的生物学信息进行了分析。结果显示,SC-Y株与TGEV其他参考毒株（Miller M60、Miller M6、Purdue、Purdue P115、PUR46-MAD、TS）5＇UTR的二级结构差异显著,预测结构蛋白特性显示,N蛋白没有跨膜区域、糖基化位点及信号肽序列,属于非分泌性蛋白。在4种结构蛋白中,N蛋白的氨基酸变异率最低,为2.14‰。与Miller M60株、Miller M6株和TS株相比,SC-Y株S基因第1123～1128位核苷酸缺失6个碱基（AATGAT）,在sM基因核苷酸第163～165位,SC-Y株比TFI株和FS772/70株多出3个碱基（ATT）。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 sC—Y 非编码区 结构蛋白 生物信息学分析
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抗猪传染性胃肠炎病毒重组S蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2
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作者 张赟硕 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第8期8-10,共3页
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组S蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得2株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为C7C8B2和B5G8G7,其染色体平均计数均为88±... 以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组S蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得2株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为C7C8B2和B5G8G7,其染色体平均计数均为88±10对,制备腹水抗体效价分别为1∶2×105和1∶104,分泌抗体亚类均为IgM型。2株杂交瘤细胞上清与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)均无交叉反应,与TGEV感染细胞经间接免疫荧光检测均呈黄绿色荧光。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 单克隆抗体 杂交瘤 重组s蛋白
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猪传染性胃肠炎病毒S基因A位点蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
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作者 聂晓华 李建东 +2 位作者 李焕荣 崔德凤 张莉 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第8期43-44,97,共2页
猪传染性胃肠炎（TGE）是由传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的高度接触传染性疾病,以仔猪呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为临床特征。该病毒主要编码纤突蛋白（S）、膜结合蛋白（M）、核蛋白（N）和小膜蛋白（s M）4种结构蛋白[1-2]。其... 猪传染性胃肠炎（TGE）是由传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的高度接触传染性疾病,以仔猪呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为临床特征。该病毒主要编码纤突蛋白（S）、膜结合蛋白（M）、核蛋白（N）和小膜蛋白（s M）4种结构蛋白[1-2]。其中S蛋白是惟一能诱导机体产生中和抗体的结构蛋白[3]。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 纤突蛋白 单克隆抗体 s基因 鉴定 制备 结构蛋白 传染性疾病
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