猪乙型脑炎病毒E基因的克隆与序列分析 被引量：7

1

作者 丛晓燕 吴家强 +4 位作者 王怀忠 徐文 张秀美 王金宝 陈溥言 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期71-73,共3页

根据GenBank中猪乙型脑炎病毒SA14-14-2基因序列设计2对引物,从分离的猪源乙型脑炎病毒SD-001株的细胞培养物中扩增出包括E基因全长的两段基因,将扩增的目的片段进行克隆与序列分析。结果表明,所克隆的E基因编码结构域(Domain)区段与SA1... 根据GenBank中猪乙型脑炎病毒SA14-14-2基因序列设计2对引物,从分离的猪源乙型脑炎病毒SD-001株的细胞培养物中扩增出包括E基因全长的两段基因,将扩增的目的片段进行克隆与序列分析。结果表明,所克隆的E基因编码结构域(Domain)区段与SA14-14-2、P3、Beijing-1等毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性分别达97.2%与96.8%以上,属于Ⅲ型乙型脑炎病毒,与疫苗株SA14-14-2的Domain区相比,共有8个氨基酸位点变异。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 E基因 序列分析

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近年广西部分猪场蚊子携带猪乙型脑炎病毒初步检测调查 被引量：3

2

作者 卢冰霞 秦毅斌 +10 位作者 段群棚 李斌 何颖 陈忠伟 周英宁 梁家幸 赵硕 蒋冬福 刘磊 卢敬专 赵武 《广西畜牧兽医》 2021年第5期198-200,共3页

为进一步了解近年广西猪场蚊媒携带乙型脑炎病毒(JEV)情况,采用套式RT-PCR(RT-nPCR)检测方法,于2016年—2019年间对猪乙型脑炎(JE)确诊阳性病例的部分猪场进行蚊子携带JEV情况初步检测调查。对抽选16个有JE阳性病例的猪场捕捉的蚊子进行... 为进一步了解近年广西猪场蚊媒携带乙型脑炎病毒(JEV)情况,采用套式RT-PCR(RT-nPCR)检测方法,于2016年—2019年间对猪乙型脑炎(JE)确诊阳性病例的部分猪场进行蚊子携带JEV情况初步检测调查。对抽选16个有JE阳性病例的猪场捕捉的蚊子进行JEV检测,结果均为阳性。表明广西猪JE确诊阳性病例猪场的蚊子携带JEV的几率很高。 展开更多

关键词 猪场 蚊媒 猪乙型脑炎病毒 检测

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多重荧光RT-PCR技术检测猪流感病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立 被引量：3

3

作者 梁晓艳 万东山 郭兰英 《中国动物检疫》 CAS 2015年第4期68-71,共4页

[目的 ]建立能同时鉴测猪流感病毒(SIV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重荧光RT-PCR方法。[方法 ]根据4种病原体的高度保守基因序列,设计相应引物和探针,并对引物和探针浓度进行优化,检测4... [目的 ]建立能同时鉴测猪流感病毒(SIV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重荧光RT-PCR方法。[方法 ]根据4种病原体的高度保守基因序列,设计相应引物和探针,并对引物和探针浓度进行优化,检测48例疑似样本。[结果 ]建立了多重荧光RT-PCR方法,检测48例临床样本中,4种病毒均未感染的1例,SIV与JEV混合感染占2.1%,CSFV与PRRSV混合感染为31.3%。[结论 ]多重荧光RT-PCR对四种病原体的检测准确性好,具有快速的特点。 展开更多

关键词 多重荧光RT-PCR 猪流感病毒 猪乙型脑炎病毒 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒

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猪乙型脑炎病毒间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒的研制及其应用 被引量：3

4

作者 祖立闯 沈志强 《养猪》 2011年第5期98-102,共5页

为研制一种快速猪乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒,本研究参照已发表的JEV(乙型脑炎病毒)基因组序列,RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E基因片段,连接pET30a表达载体后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白,以该蛋白作为诊断抗原,研制了检测乙型脑... 为研制一种快速猪乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒,本研究参照已发表的JEV(乙型脑炎病毒)基因组序列,RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E基因片段,连接pET30a表达载体后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白,以该蛋白作为诊断抗原,研制了检测乙型脑炎病毒抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附试验)诊断试剂盒。该试剂盒与其它7种常见猪病病毒(圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒、细小病毒、流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒)的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与HI(血凝抑制试验)相比,符合率、敏感性和特异性分别为83.1%、84.3%和80.0%。本研究制备的重组蛋白具有良好的反应活性,以其作为包被抗原研制的JEV E-ELISA诊断试剂盒具有良好的重复性、敏感性和特异性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断试剂盒。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 原核表达 间接ELISA 诊断 试剂盒

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基于E基因的猪乙型脑炎病毒一步法RT-PCR快速检测方法的建立和应用 被引量：1

5

作者 李天芝 于新友 +1 位作者 莫玲 沈志强 《猪业科学》 2015年第5期78-80,共3页

根据猪乙型脑炎病毒(JEV)E基因保守序列设计了1对引物,建立了检测猪乙型脑炎病毒一步法反转录-聚合酶链(RT-PCR)方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该一步法RT-PCR对JEV扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性,对JEV检测的灵敏性... 根据猪乙型脑炎病毒(JEV)E基因保守序列设计了1对引物,建立了检测猪乙型脑炎病毒一步法反转录-聚合酶链(RT-PCR)方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该一步法RT-PCR对JEV扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性,对JEV检测的灵敏性为10 pg总RNA量。以上结果表明该一步法RT-PCR特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于猪乙型脑炎的早期确诊和病毒鉴定。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 一步法RT-PCR 检测

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猪乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ原核表达和抗原性分析 被引量：3

6

作者 厚华艳 丁玲玲 +1 位作者 吕茂杰 杨保收 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期934-939,共6页

为分析猪乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白Ⅲ结构域的抗原性,本研究克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的E蛋白结构域Ⅲ,并通过pET-28a载体进行融合表达和纯化。用纯化后蛋白作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过SDS-PAGE、Western blotting、间接ELISA及... 为分析猪乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白Ⅲ结构域的抗原性,本研究克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的E蛋白结构域Ⅲ,并通过pET-28a载体进行融合表达和纯化。用纯化后蛋白作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过SDS-PAGE、Western blotting、间接ELISA及间接免疫荧光方法(IFA)检测小鼠及猪抗体滴度,验证E蛋白结构域Ⅲ的抗原性。SDS-PAGE结果表明融合蛋白以包涵体形式表达;Western blotting、间接ELISA检测结果表明表达产物具有良好的抗原性;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠ELISA方法检测特异性抗体滴度可达1×105;猪JEV阳性血清ELISA抗体滴度可达5.1×104;IFA结果表明JEV EⅢ蛋白产生的抗血清能很好的识别乙型脑炎病毒抗原。以上结果表明,表达、纯化的重组JEV EⅢ蛋白具有良好的抗原性。本试验结果为建立以E蛋白结构域为抗原的诊断方法提供了重要依据。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 E蛋白 结构域Ⅲ 诊断抗原

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猪乙型脑炎病毒SCYA201201株感染小鼠后突破血脑屏障能力研究 被引量：2

7

作者 柴春霞 王侨 +7 位作者 赖雅兰 徐伊璇 文心田 曹三杰 黄小波 文翼平 赵勤 伍锐 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期926-931,共6页

将猪乙型脑炎病毒SCYA201201株(F122代次,弱毒株)脑内接种小鼠,评估该病毒株对小鼠的致病性。通过腹腔接种小鼠,分别在接种后6、12、18、24 h观察小鼠脑部病理变化,同时利用荧光定量PCR方法检测其血液、脑组织E基因拷贝数,探究该毒株突... 将猪乙型脑炎病毒SCYA201201株(F122代次,弱毒株)脑内接种小鼠,评估该病毒株对小鼠的致病性。通过腹腔接种小鼠,分别在接种后6、12、18、24 h观察小鼠脑部病理变化,同时利用荧光定量PCR方法检测其血液、脑组织E基因拷贝数,探究该毒株突破小鼠血脑屏障的能力,从而评估SCYA201201株(F122代次)作为弱毒活疫苗的潜力。结果显示,SCYA201201株(F122代次)高度弱化,对乳鼠的脑内半数致死量(LD_(50))仅为4×10~5PFU·40μL^(-1)。该毒株腹腔接种24 h内,小鼠脑部未出现病理变化,且荧光定量PCR检测为阴性,表明该毒株不能突破小鼠的血脑屏障,具有很高的安全性。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 半数致死量 荧光定量PCR 血脑屏障

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猪乙型脑炎病毒E蛋白的原核表达与鉴定 被引量：1

8

作者 陈国强 刁富花 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期80-82,共3页

参照已发表的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增长约972bp的E基因片段。将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到了以... 参照已发表的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增长约972bp的E基因片段。将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,免疫印迹检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 E蛋白 原核表达 活性检测

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猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792 E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定

9

作者 卢冰霞 李斌 +10 位作者 秦毅斌 赵武 梁家幸 韦超文 何颖 苏乾莲 梁保忠 李莹莹 姜佳佳 杨盛斌 黄伟坚 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期1258-1263,共6页

对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础。结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质... 对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础。结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Rosetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58 KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性。 展开更多

关键词 猪流行性乙型脑炎病毒 Ea基因 原核表达 抗原性鉴定

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猪乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株基础种子的鉴定 被引量：1

10

作者 巢伟 张桂红 徐雷 《中国兽药杂志》 2014年第7期15-18,共4页

建立了猪乙型脑炎活疫苗基础种子库,对三批基础种子进行了鉴定。结果表明,三批猪乙型脑炎基础种子无外源病毒污染,对敏感实验动物小鼠、乳猪和怀孕母猪接种均安全、无异常反应,原代地鼠肾细胞传代至F12代,免疫原性保持稳定、毒力不返强... 建立了猪乙型脑炎活疫苗基础种子库,对三批基础种子进行了鉴定。结果表明,三批猪乙型脑炎基础种子无外源病毒污染,对敏感实验动物小鼠、乳猪和怀孕母猪接种均安全、无异常反应,原代地鼠肾细胞传代至F12代,免疫原性保持稳定、毒力不返强。由此可见,猪乙型脑炎SA14-14-2疫苗株基础种子无外源病毒污染,具有可靠安全性和良好、稳定的免疫原性,可用于疫苗生产,研究为研制猪乙型脑炎活疫苗打下基础。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 SA14-14-2株 基础种子 鉴定

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1株猪源基因Ⅰ型乙型脑炎病毒的分离鉴定及遗传进化分析 被引量：1

11

作者 侯力丹 王文涛 +1 位作者 曹胜波 黄少梅 《养殖与饲料》 2016年第9期4-9,共6页

乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的急性、自然疫源性蚊媒传播人兽共患传染病。猪是JEV最重要的宿主,监测和预防猪乙脑的发生对于人乙脑的防控具有重要意义。本研究通过RT-PCR、细胞接种、乳鼠脑内接种、电镜观察等方法,从广西某猪场... 乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的急性、自然疫源性蚊媒传播人兽共患传染病。猪是JEV最重要的宿主,监测和预防猪乙脑的发生对于人乙脑的防控具有重要意义。本研究通过RT-PCR、细胞接种、乳鼠脑内接种、电镜观察等方法,从广西某猪场的猪脑组织样品中分离了1株乙型脑炎病毒,命名为GX1209。全基因组测序结果表明,该毒株基因组为10 965 bp。系统进化分析表明该毒株属基因Ⅰ型,与基因Ⅰ型XJ69毒株核苷酸和氨基酸同源性最高,达到99%,而与SA14、SA14-14-2、P3等Ⅲ型毒株的氨基酸同源性分别为98%、97%、98%。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 基因型 分离鉴定 遗传进化

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日本乙型脑炎病毒对猪的外周血单核细胞抗病毒因子mRNA表达的影响 被引量：2

12

作者 罗线连 王瑞宁 +4 位作者 李金磊 韩志涛 耿静微 彭远义 魏战勇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期116-119,共4页

目的为了解猪乙型脑炎病毒(JEV)感染对4种抗病毒细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨病毒-宿主细胞之间的相互作用。方法运用荧光定量PCR技术,测定和分析JEV感染猪外周血单核细胞(PBMC)后病毒RNA含量及细胞的MHC-I,Mx1,2′,5′寡腺苷酸合成... 目的为了解猪乙型脑炎病毒(JEV)感染对4种抗病毒细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨病毒-宿主细胞之间的相互作用。方法运用荧光定量PCR技术,测定和分析JEV感染猪外周血单核细胞(PBMC)后病毒RNA含量及细胞的MHC-I,Mx1,2′,5′寡腺苷酸合成酶(2-5OAS),转录因子IRF-3等细胞因子mRNA相对表达量的变化。结果 JEV感染猪PBMC后引起MHC-I、Mx1、2-5OAS、IRF-3细胞因子mRNA相对表达量增加;MHC-I和MX1,IRF-3mRNA的相对含量在感染后3h显著增加,随后降低,到72h达到峰值;2-5OAS mRNA的相对含量在3h达到最大值,然后降到最低,随后其表达量有逐渐增高的趋势。结论 JEV感染猪PBMC后可以引起的PBMC抗病毒反应与其分泌的抗病毒细胞因子的改变有关。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 细胞因子 淋巴因子 转录时相

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猪流行性乙型脑炎的血清学调查 被引量：15

13

作者 余波 谭诗文 +3 位作者 冉懋韬 艾玉萍 魏赐开 刘兵 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期222-223,共2页

为调查贵州省猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的隐性感染率和使用疫苗后的血清抗体水平,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对贵州省规模化养猪场和农村散养户共764头份猪血清样本进行了JEV抗体水平检测。结果表明,未免... 为调查贵州省猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的隐性感染率和使用疫苗后的血清抗体水平,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对贵州省规模化养猪场和农村散养户共764头份猪血清样本进行了JEV抗体水平检测。结果表明,未免疫猪群JEV的血清抗体阳性率为13.25%;而免疫猪群中JEV的血清抗体阳性率为82.18%;表明JEV的免疫效果比较理想,但未免疫猪群存在JEV感染,应引起重视。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 间接酶联免疫吸附试验 抗体水平

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猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒的研制 被引量：4

14

作者 余波 谭诗文 +3 位作者 冉懋韬 徐景峨 史开志 杨丽娟 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期152-154,180,共4页

根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7 N基因、猪乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因序列,设计了2对引物,通过反应条件的优化,成功研制了检测PRRSV和JEV的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒,扩增产物分别为245、504 bp。敏感性、特异性结... 根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7 N基因、猪乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因序列,设计了2对引物,通过反应条件的优化,成功研制了检测PRRSV和JEV的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒,扩增产物分别为245、504 bp。敏感性、特异性结果显示,该RT-PCR诊断试剂盒对2种病毒的最低核酸检测量分别为PRRSV 0.2 ng/L、JEV 0.4 ng/L,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒的扩增结果均为阴性。对52份疑似病猪样品的检测结果表明,该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒具有很好的特异性和敏感性,可用于临床猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎的检测。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪乙型脑炎病毒 双重一步法RT—PCR

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猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗免疫抗体水平分析 被引量：1

15

作者 周丹娜 段正赢 +8 位作者 李文浩 郭锐 杨克礼 袁芳艳 刘泽文 刘威 陈文杰 孟丽 田永祥 《湖北畜牧兽医》 2017年第12期5-7,共3页

为评估猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性,用商品化的乙型脑炎鼠脑疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗(SA14-14-2株)以及自制乙型脑炎细胞灭活疫苗(HW1株)分别免疫仔猪,通过抗体水平监测试验、中和抗体试验、小鼠攻毒保护试验分别检测了其... 为评估猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性,用商品化的乙型脑炎鼠脑疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗(SA14-14-2株)以及自制乙型脑炎细胞灭活疫苗(HW1株)分别免疫仔猪,通过抗体水平监测试验、中和抗体试验、小鼠攻毒保护试验分别检测了其特异性抗体消长情况、中和抗体效价产生情况及疫苗对小鼠的攻毒保护率。结果显示,3种疫苗均能产生中和抗体,乙型脑炎细胞灭活疫苗免疫组中和抗体水平要高于鼠脑疫苗和弱毒疫苗免疫组,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组对小鼠的攻毒保护率高于鼠脑疫苗免疫组,但两者之间差异不显著。抗体消长情况显示,至8周观测期结束,鼠脑疫苗免疫组的抗体阳性率为80%,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组抗体阳性率为100%。结果表明猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性优于鼠脑灭活疫苗和弱毒疫苗。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 灭活疫苗 细胞 免疫

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猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法的建立与初步应用 被引量：3

16

作者 卢冰霞 刘磊 +10 位作者 秦毅斌 赵武 梁家幸 郭旋 黎木兰 李斌 何颖 苏乾莲 梁保忠 闭炳芬 黄伟坚 《安徽农业科学》 CAS 2013年第12期5359-5361,5365,共4页

[目的]建立1种快速、灵敏、特异的检测猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。[方法]根据JEV E基因序列的保守区6个位点设计了4条特异性LAMP引物,以JEV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,并对反应条件和反应... [目的]建立1种快速、灵敏、特异的检测猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。[方法]根据JEV E基因序列的保守区6个位点设计了4条特异性LAMP引物,以JEV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,并对反应条件和反应体系进行了优化。[结果]该方法具有较高的灵敏度,其检测极限为0.5 pg;特异性试验表明其具有较高的特异性,对其他病毒性病原体均无扩增反应。与RT-Nested-PCR相比,2种方法检出率的符合率为90.9%。反应结束后可以通过添加化学发光剂进行可视化观察,大大缩短了检测时间。该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的猪JE的检测方法。[结论]成功建立了猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法,并在临床上进行了初步应用。 展开更多

关键词 猪流行性乙型脑炎病毒 RT-LAMP 敏感性 特异性

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猪乙型脑炎病流行、症状及防治措施 被引量：5

17

作者 王存军 单存松 王昌玉 《中国畜禽种业》 2021年第4期140-141,共2页

由于我国经济快速发展,养殖业发展加快。目前饲养方针是预防大于治疗,而养殖者考虑最重要的一件事情是如何提高经济效益,如何使疾病不影响养猪业的发展,做好猪乙型脑炎病防治工作非常重要。猪乙型脑炎病属于人畜共患病,病猪在临床上主... 由于我国经济快速发展,养殖业发展加快。目前饲养方针是预防大于治疗,而养殖者考虑最重要的一件事情是如何提高经济效益,如何使疾病不影响养猪业的发展,做好猪乙型脑炎病防治工作非常重要。猪乙型脑炎病属于人畜共患病,病猪在临床上主要表现为妊娠母猪高温、流产、死胎等现象,而公猪最主要的特征是睾丸一侧或两侧发生肿胀,出现睾丸发炎等现象。本文介绍猪乙型脑炎病毒的临床症状,提出合理的综合防治措施,希望对养猪业工作人员提供帮助,促进我国养殖业的快速发展。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎病毒 流行病学 临床症状 预防措施

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乙型脑炎病毒EⅢ基因片段的表达与EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒的研制

18

作者 姚俊庸 毛晶丹 +2 位作者 郑仲华 赵明秋 陈金顶 《广东畜牧兽医科技》 2016年第5期12-16,39,共6页

为了研制乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒,将乙型脑炎病毒EⅢ基因克隆至原核表达载体p ET-32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。以纯化后的重组蛋白EⅢ包被酶标板,优化ELISA反应条件,组装试剂盒。SDS-PAGE和Western ... 为了研制乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒,将乙型脑炎病毒EⅢ基因克隆至原核表达载体p ET-32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。以纯化后的重组蛋白EⅢ包被酶标板,优化ELISA反应条件,组装试剂盒。SDS-PAGE和Western bloting分析表明,重组蛋白分子质量约为30ku,经IPTG诱导后高效表达,且具有来良好的免疫原性。优化试验确定重组抗原最佳包被浓度为4.7μg/m L,血清样本的阳性临界值为0.255。特异性试验结果表明,重组蛋白与猪瘟、猪伪狂犬、猪圆环病等多种病原体的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果表明,血清稀释至1∶6400时仍检测为阳性。该试剂盒的批内、批间变异系数均小于10%。用该试剂盒检测224份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为90.7%。研究结果表明,原核表达的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ蛋白具有良好的免疫原性,研制的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒敏感性、特异性和重复性较好,为猪流行性乙型脑炎的抗体水平检测、流行病学调查、类症鉴别等方面提供了重要方法。 展开更多

关键词 猪流行性乙型脑炎病毒 原核表达 间接ELISA

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基于QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统的7种猪病毒检测方法的建立与初步应用 被引量：6

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作者 邬旭龙 肖璐 +5 位作者 林华 杨泽晓 姚学萍 王印 张鹏飞 姜睿姣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期824-829,共6页

为建立同时检测7种常见猪病毒的毛细管凝胶电泳方法,本研究针对猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及非洲猪瘟病毒保守基因,设计7对特异引物,并在引物的5’端加入一段非同... 为建立同时检测7种常见猪病毒的毛细管凝胶电泳方法,本研究针对猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及非洲猪瘟病毒保守基因,设计7对特异引物,并在引物的5’端加入一段非同源性标签序列,再设计一对可识别标签序列的通用引物。经反应条件优化,建立了一种基于QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统的7种猪常见病毒多重PCR检测方法。该方法与O型猪口蹄疫病毒(FMDV-O)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等均无交叉反应,特异性强;所建立方法对7种病毒质粒标准品的检测下限分别为4.56×10^3拷贝/μL、6.35×10^3拷贝/μL、1.98×10^3拷贝/μL、1.32×10^4拷贝/μL、3.21×10^3拷贝/μL、4.51×10^3拷贝/μL、3.37×10^3拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示各靶条带数值间的变异系数均小于1%,该方法稳定,重复性高。该方法对65份临床样本检测结果与国标或行标单一PCR检测方法相比,二者对单一病原和混合病原检测的一致性分别为94.3%(33/35)、77.7%(14/18)。本研究建立的方法为毛细管凝胶电泳技术在动物疾病病原检测中的应用提供一定的参考。 展开更多

关键词 多重PCR QIAxcel毛细管凝胶电泳(QIAxcel CGE) 猪伪狂犬病病毒 猪乙型脑炎病毒 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪细小病毒 非洲猪瘟病毒

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