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四川省猕猴桃病毒A外壳蛋白基因的序列分析、原核表达及抗血清制备
被引量：
2
1
作者
吕蕊
彭期定
+3 位作者
杨婷
林宏辉
董家红
席德慧
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期1121-1129,共9页
【目的】研究猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)的发生及其多样性,为我国猕猴桃产业中AcVA病毒的快速检测、科学防控以及猕猴桃品种选育提供科学依据。【方法】通过巢式PCR从四川省猕猴桃感病叶片中扩增AcVA CP基因序列,进行序列分...
【目的】研究猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)的发生及其多样性,为我国猕猴桃产业中AcVA病毒的快速检测、科学防控以及猕猴桃品种选育提供科学依据。【方法】通过巢式PCR从四川省猕猴桃感病叶片中扩增AcVA CP基因序列,进行序列分析和同源性比对;构建AcVA CP基因的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后制备抗血清,用Western blot检测效价。【结果】克隆到3个AcVA四川分离株的完整CP基因序列,成功构建了pET28a-AcVA-DJY4-CP重组质粒,原核表达目的蛋白并制备出特异性抗血清,效价达到1∶5 000。【结论】首次获得了3个AcVA四川分离株,丰富了AcVA的序列多样性,并探索了原核表达的最佳条件,制备了高效价抗血清,为今后AcVA病毒的快速检测和防控提供了技术支撑。
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关键词
猕猴桃病毒a
外壳蛋白
序列分析
原核表达
抗血清制备
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职称材料
猕猴桃种传潜隐病毒外壳蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
2
2
作者
杨馥韩
余兆耀
+3 位作者
尹世欣
龙友华
王勇
陈相儒
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期187-192,共6页
猕猴桃种传潜隐病毒(actinidia seed borne latent virus, ASbLV),属于乙型线状病毒科Betaflexiviridae李属病毒属Prunevirus,是一种在我国猕猴桃上广泛发生的病毒。本研究通过RT-PCR方法克隆ASbLV的外壳蛋白基因,并连接到原核表达载体p...
猕猴桃种传潜隐病毒(actinidia seed borne latent virus, ASbLV),属于乙型线状病毒科Betaflexiviridae李属病毒属Prunevirus,是一种在我国猕猴桃上广泛发生的病毒。本研究通过RT-PCR方法克隆ASbLV的外壳蛋白基因,并连接到原核表达载体pET28a(+)上,转化大肠杆菌Rosetta (DE3),经IPTG诱导后可表达分子量约为28 kD的融合蛋白。经过Ni^(2+)-NTA树脂纯化融合蛋白,然后以其为抗原制备多克隆抗体。Western blot结果表明,多克隆抗体的效价为1∶4 000。该多克隆抗体只与ASbLV发生特异性反应,而不与猕猴桃病毒1、猕猴桃病毒A、苹果茎沟病毒、柑橘叶斑驳病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒发生反应,说明该多克隆抗体特异性良好。利用间接ELISA对36份猕猴桃田间样品进行了ASbLV检测,检测结果表明其中20份样品被ASbLV侵染,且间接ELISA检测结果与RT-PCR检测结果一致。本研究建立的间接ELISA方法能够有效地应用于猕猴桃田间样品中的ASbLV检测。
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关键词
猕猴桃
种传潜隐
病毒
外壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
利用小RNA测序鉴定江西奉新猕猴桃病毒种类
3
作者
王赛博
张凯东
+4 位作者
刘冰
熊桂红
李庚花
涂贵庆
蒋军喜
《中国南方果树》
北大核心
2023年第6期183-186,共4页
为探明江西省奉新县猕猴桃感染病毒的情况,2020年5月从该县山口、农合和新西蓝3个主要猕猴桃种植区共采集23份疑似病毒病叶片样品,利用小RNA深度测序技术对混合样品进行病毒检测,并通过RT-PCR和测序验证。结果共检测出4种病毒,分别是猕...
为探明江西省奉新县猕猴桃感染病毒的情况,2020年5月从该县山口、农合和新西蓝3个主要猕猴桃种植区共采集23份疑似病毒病叶片样品,利用小RNA深度测序技术对混合样品进行病毒检测,并通过RT-PCR和测序验证。结果共检测出4种病毒,分别是猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)、猕猴桃病毒B(Actinidia virus B,AcVB)、猕猴桃褪绿环斑相关病毒(Actinidia chlorotic ringspots associated virus,AcCRaV)和柑桔叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV),在23份样品中的检出率依次为87.0%、56.5%、65.2%和60.9%,多数样品存在病毒复合侵染,复合侵染率81.8%。表明引起奉新县猕猴桃病毒病的毒原主要有AcVA、AcVB、AcCRaV和CLBV 4种,优势毒原为AcVA,病毒复合侵染发生普遍。
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关键词
猕猴桃
病毒
病
小RNA深度测序
RT-PCR检测
病毒
鉴定
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职称材料
题名
四川省猕猴桃病毒A外壳蛋白基因的序列分析、原核表达及抗血清制备
被引量：
2
1
作者
吕蕊
彭期定
杨婷
林宏辉
董家红
席德慧
机构
四川大学生命科学学院·生物资源与生态环境教育部重点实验室
云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所·云南省农业生物技术重点实验室·农业部西南作物基因资源与种质创制重点实验室
出处
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期1121-1129,共9页
基金
国家自然科学基金(31772131)
四川省应用基础研究项目(2019YJ0135)
文摘
【目的】研究猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)的发生及其多样性,为我国猕猴桃产业中AcVA病毒的快速检测、科学防控以及猕猴桃品种选育提供科学依据。【方法】通过巢式PCR从四川省猕猴桃感病叶片中扩增AcVA CP基因序列,进行序列分析和同源性比对;构建AcVA CP基因的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后制备抗血清,用Western blot检测效价。【结果】克隆到3个AcVA四川分离株的完整CP基因序列,成功构建了pET28a-AcVA-DJY4-CP重组质粒,原核表达目的蛋白并制备出特异性抗血清,效价达到1∶5 000。【结论】首次获得了3个AcVA四川分离株,丰富了AcVA的序列多样性,并探索了原核表达的最佳条件,制备了高效价抗血清,为今后AcVA病毒的快速检测和防控提供了技术支撑。
关键词
猕猴桃病毒a
外壳蛋白
序列分析
原核表达
抗血清制备
Keywords
Actinidia virus A
Coat protein
Sequence analysis
Prokaryotic expression
Preparation of antiserum
分类号
S663.4 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
猕猴桃种传潜隐病毒外壳蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
2
2
作者
杨馥韩
余兆耀
尹世欣
龙友华
王勇
陈相儒
机构
贵州大学农学院
出处
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期187-192,共6页
基金
贵州省科技计划(黔科合基础-ZK[2021]一般136)
现代农业产业技术体系建设专项
贵州大学引进人才科研项目(贵大人基合字[2019]23号)。
文摘
猕猴桃种传潜隐病毒(actinidia seed borne latent virus, ASbLV),属于乙型线状病毒科Betaflexiviridae李属病毒属Prunevirus,是一种在我国猕猴桃上广泛发生的病毒。本研究通过RT-PCR方法克隆ASbLV的外壳蛋白基因,并连接到原核表达载体pET28a(+)上,转化大肠杆菌Rosetta (DE3),经IPTG诱导后可表达分子量约为28 kD的融合蛋白。经过Ni^(2+)-NTA树脂纯化融合蛋白,然后以其为抗原制备多克隆抗体。Western blot结果表明,多克隆抗体的效价为1∶4 000。该多克隆抗体只与ASbLV发生特异性反应,而不与猕猴桃病毒1、猕猴桃病毒A、苹果茎沟病毒、柑橘叶斑驳病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒发生反应,说明该多克隆抗体特异性良好。利用间接ELISA对36份猕猴桃田间样品进行了ASbLV检测,检测结果表明其中20份样品被ASbLV侵染,且间接ELISA检测结果与RT-PCR检测结果一致。本研究建立的间接ELISA方法能够有效地应用于猕猴桃田间样品中的ASbLV检测。
关键词
猕猴桃
种传潜隐
病毒
外壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
Keywords
actinidia seed borne latent virus(ASbLV)
coat protein(CP)
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S436.634.1 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
在线阅读
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职称材料
题名
利用小RNA测序鉴定江西奉新猕猴桃病毒种类
3
作者
王赛博
张凯东
刘冰
熊桂红
李庚花
涂贵庆
蒋军喜
机构
江西农业大学农学院
江西省奉新县农业局
出处
《中国南方果树》
北大核心
2023年第6期183-186,共4页
基金
江西省科技计划项目(20181ACF60017)
国家自然科学基金(31460452)资助。
文摘
为探明江西省奉新县猕猴桃感染病毒的情况,2020年5月从该县山口、农合和新西蓝3个主要猕猴桃种植区共采集23份疑似病毒病叶片样品,利用小RNA深度测序技术对混合样品进行病毒检测,并通过RT-PCR和测序验证。结果共检测出4种病毒,分别是猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)、猕猴桃病毒B(Actinidia virus B,AcVB)、猕猴桃褪绿环斑相关病毒(Actinidia chlorotic ringspots associated virus,AcCRaV)和柑桔叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV),在23份样品中的检出率依次为87.0%、56.5%、65.2%和60.9%,多数样品存在病毒复合侵染,复合侵染率81.8%。表明引起奉新县猕猴桃病毒病的毒原主要有AcVA、AcVB、AcCRaV和CLBV 4种,优势毒原为AcVA,病毒复合侵染发生普遍。
关键词
猕猴桃
病毒
病
小RNA深度测序
RT-PCR检测
病毒
鉴定
分类号
S436.634.1 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
四川省猕猴桃病毒A外壳蛋白基因的序列分析、原核表达及抗血清制备
吕蕊
彭期定
杨婷
林宏辉
董家红
席德慧
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猕猴桃种传潜隐病毒外壳蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
杨馥韩
余兆耀
尹世欣
龙友华
王勇
陈相儒
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
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下载PDF
职称材料
3
利用小RNA测序鉴定江西奉新猕猴桃病毒种类
王赛博
张凯东
刘冰
熊桂红
李庚花
涂贵庆
蒋军喜
《中国南方果树》
北大核心
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