狂犬病病毒糖蛋白膜外区表达及中和抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

1

作者 高志强 谷强 +7 位作者 张鹤晓 赖平安 柏亚铎 蒲静 张伟 乔彩霞 汪琳 吴丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1514-1520,共7页

采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol.L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blo... 采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol.L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板,用已知中和抗体效价的OIE参考血清对该方法进行了标准化,建立了检测狂犬病病毒中和抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被量为3.74μg,血清的最佳稀释度为1:100,待检血清阳性临界值为0.50。用此方法检测了418份血清样品,并与荧光抗体病毒中和试验(FAVN)方法进行了比较,符合率为98.61%。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 膜外区表达 中和抗体 ELISA

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狂犬病病毒糖蛋白膜外区密码子优化、原核表达及纯化

2

作者 鞠美芳 殷相平 柳纪省 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期932-937,共6页

目的有效检测狂犬病毒抗原。方法本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子。将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+)分别双酶切、胶回... 目的有效检测狂犬病毒抗原。方法本研究利用生物信息学软件对狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区进行分析,采用密码子优化策略将该序列的大肠杆菌稀有密码子优化成大肠杆菌常用密码子。将优化的序列合成与表达载体pET-28a(+)分别双酶切、胶回收后连接并转化至Rosetta(DE3)菌株。挑选阳性重组表达菌经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。同时对最佳表达条件进行了研究,重组菌在30℃、IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值。结果狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区通过密码子优化后能够在大肠杆菌中成功表达,表达产物具有良好的反应原性。结论该项研究为后续检测狂犬病毒抗原的ELISA试剂盒的研发建立基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 糖蛋白膜外区 密码子优化 原核表达

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狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区真核表达载体的构建及其在DK细胞中的表达 被引量：1

3

作者 袁子国 王晓虎 +3 位作者 徐慧娟 张守峰 扈荣良 张秀香 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期60-63,共4页

为了研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(rgp)膜外区在以糖蛋白为免疫原的免疫应答中的作用,提取RV的RNA,通过RT-PCR扩增RV糖蛋白膜外区1375 bp的序列,将其克隆入pMD18-T载体中,经测序比对正确后,通过酶切将其亚克隆入pVAX1表达载... 为了研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(rgp)膜外区在以糖蛋白为免疫原的免疫应答中的作用,提取RV的RNA,通过RT-PCR扩增RV糖蛋白膜外区1375 bp的序列,将其克隆入pMD18-T载体中,经测序比对正确后,通过酶切将其亚克隆入pVAX1表达载体的多克隆酶切位点处,将酶切鉴定正确的阳性重组子命名为pVAX-rgp,构建表达狂犬病病毒糖蛋白膜外区的真核表达载体,在质脂体介导下转染DK细胞观察其表达情况。研究结果表明,经免疫荧光和Western blotting鉴定,有特异性荧光和60 ku条带产生,证明pVAX-rgp载体中的rgp可在DK细胞中表达。本研究通过成功构建狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区的真核表达载体,为下一步有关功能基因组的研究和基因疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒糖蛋白膜外区 真核表达 转染 DK细胞

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狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区的原核表达及纯化

4

作者 鞠美芳 殷相平 柳纪省 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期114-119,共6页

旨在有效检测狂犬病毒抗原及抗体。以狂犬病病毒aG株为模板,反转录扩增糖蛋白膜外区基因,并进行序列测定。将目的片段与表达载体pET-32a(+)分别双酶切、胶回收后相连并转化至Rosseta(DE3)菌株。选取阳性克隆经IPTG诱导表达后,进行SDS-P... 旨在有效检测狂犬病毒抗原及抗体。以狂犬病病毒aG株为模板,反转录扩增糖蛋白膜外区基因,并进行序列测定。将目的片段与表达载体pET-32a(+)分别双酶切、胶回收后相连并转化至Rosseta(DE3)菌株。选取阳性克隆经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blotting及质谱鉴定。结果显示,在大肠杆菌中成功表达了糖蛋白膜外区。本研究为建立检测狂犬病毒抗原及抗体的ELISA诊断方法奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 糖蛋白膜外区 原核表达

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狂犬病病毒糖蛋白胞外区基因的原核表达、纯化及鉴定 被引量：2

5

作者 杨艳艳 王丽 +5 位作者 杨继飞 郅玉宝 滕蔓 邓瑞广 肖治军 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期28-31,共4页

利用RT-PCR技术,将狂犬病病毒株ERA株糖蛋白胞外区基因分两段进行扩增,经克隆与序列分析,两片段大小分别为523,381 bp,各编码174,127个氨基酸,分子量分别为19.7,14.5 kDa。在原核表达载体pET-43a中分别克隆了这两段糖蛋白基因,将重组质... 利用RT-PCR技术,将狂犬病病毒株ERA株糖蛋白胞外区基因分两段进行扩增,经克隆与序列分析,两片段大小分别为523,381 bp,各编码174,127个氨基酸,分子量分别为19.7,14.5 kDa。在原核表达载体pET-43a中分别克隆了这两段糖蛋白基因,将重组质粒转化到表达菌BL21(DE3)中,经SDS-PAGE电泳分析,在分子量约为94,89kDa处分别出现新蛋白带,和预期的目的蛋白的分子量相符。两重组蛋白主要以可溶形式表达,利用Ni2+亲和层析柱纯化了蛋白,纯度大于95%。Western-Blot分析结果显示,两种重组融合蛋白均可与兔抗RBV多抗血清反应,具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 胞外区 纯化

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伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白的研究进展 被引量：4

6

作者 张志 范伟兴 赵宏坤 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2001年第1期85-89,共5页

伪狂犬病病毒是多种家畜和野生动物均可感染的疱疹病毒。近年来 ,对伪狂犬病病毒分子生物学的研究取得了很显著的进展 ,尤以PRV糖蛋白研究最深。本文对目前已发现的 11种糖蛋白的基因定位。

关键词 伪狂犬病 伪狂犬病病毒 囊膜糖蛋白 基因定位 结构 功能 疱疹病毒

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伪狂犬病病毒的囊膜糖蛋白gE的研究进展 被引量：5

7

作者 姜焱 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2002年第12期31-33,共3页

关键词 基因组 结构 功能 gE基因缺失疫苗 伪狂犬病病毒 囊膜糖蛋白gE

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猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位区基因的克隆及原核表达 被引量：2

8

作者 罗飞 陈义平 +5 位作者 陆明哲 彭大新 周洁 李宇琴 徐宝娟 南文龙 《中国动物检疫》 CAS 2009年第12期27-28,36,共3页

参照GenBank发表的猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位的编码区基因序列,设计一对引物,通过PCR扩增后,将约为600bp的目的片段克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-gB经IPTG诱导,在... 参照GenBank发表的猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位的编码区基因序列,设计一对引物,通过PCR扩增后,将约为600bp的目的片段克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-gB经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量约为42.4KDa,主要以包涵体形式存在。BandScan分析表明,表达量约占菌体蛋白的60.5%。利用His亲和层析方法得到了纯化的表达产物。Western blotting结果显示,重组蛋白能与阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原反应原性,可以作为检测用抗原。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 囊膜糖蛋白gB 主要抗原表位 原核表达

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科学家揭示伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gD识别受体nectin-1的分子机制

9

《猪业科学》 2017年第6期19-19,共1页

6月12日讯，病毒表面糖蛋白D（gD）与宿主细胞受体的识别是α-疱疹病毒感染初期的必不可少的步骤。在迄今已鉴定的gD受体中，

关键词 囊膜糖蛋白 伪狂犬病毒 细胞受体 分子机制 识别 gD 科学家 疱疹病毒感染

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小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

10

作者 武福星 董阳超 +6 位作者 张剑 薛潘 袁若栋 陈洋 元航 李宝莉 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期62-68,共7页

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通... 目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。 展开更多

关键词 西方马脑炎病毒(WEEV) E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto) 原核表达 单克隆抗体(mAb)

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伪狂犬病病毒基因工程苗研究现状

11

作者 周复春 章金钢 《畜牧兽医科技信息》 1994年第5期1-2,共2页

用疫苗免疫接种是防制伪狂犬病病毒(PRV)感染的重要途径。以往使用的疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗,这些疫苗用于初发地区的猪场效果较好,但免疫接种猪虽能减轻临床症状,却不能控制病毒的传染和排毒,也无法用血清学方法区别免疫接种猪... 用疫苗免疫接种是防制伪狂犬病病毒(PRV)感染的重要途径。以往使用的疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗,这些疫苗用于初发地区的猪场效果较好,但免疫接种猪虽能减轻临床症状,却不能控制病毒的传染和排毒,也无法用血清学方法区别免疫接种猪和野毒感染猪,给该病的净化带来了困难。为此,各国在发展和改进现有疫苗的同时,探索研究并推广了基因工程苗,这种疫苗不仅安全有效。 展开更多

关键词 病毒基因工程 疫苗免疫接种 伪狂犬病 野毒感染 临床症状 减毒活疫苗 血清学方法 灭活疫苗 重组痘苗病毒 囊膜糖蛋白

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Neuropilin-1与Furin:决定伪狂犬病毒毒力的关键宿主基因 被引量：1

12

作者 CHEN MENG WANG MENG-HANG SHEN XUE-GANG 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1132-1132,共1页

猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是危害养猪业的重要动物传染病之一。猪是伪狂犬病毒的天然宿主。近年来,越来越多的证据表明PRV可实现跨种间传播感染人,对人类健康构成潜在的威胁,尤其是在2011年以后猪伪狂犬病毒变异毒株的爆... 猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是危害养猪业的重要动物传染病之一。猪是伪狂犬病毒的天然宿主。近年来,越来越多的证据表明PRV可实现跨种间传播感染人,对人类健康构成潜在的威胁,尤其是在2011年以后猪伪狂犬病毒变异毒株的爆发。PRV完成生命周期的复制不仅依赖于病毒自身编码的关键蛋白,也依赖于重要的宿主蛋白来完成。因此,寻找与PRV编码蛋白相互作用的重要宿主蛋白对阐明PRV的发病机制以及抗病毒治疗至关重要。PRV gB是最保守的囊膜糖蛋白,与人单纯疱疹病毒1(HSV-1)的gB蛋白有50%的氨基酸序列同源性。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 动物传染病 囊膜糖蛋白 猪伪狂犬病病毒 变异毒株 养猪业 PRV 种间传播

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狂犬病病毒侵入神经细胞的关键受体:代谢性谷氨酸受体2

13

作者 Wang Jin-liang Wang Zi-long Liu Ren-qiang 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期870-870,共1页

狂犬病是由狂犬病病毒（RABV）引起的一种重要人兽共患病,全球每年因狂犬病致死人数高达6万人,其中40%左右是儿童。近年来,我国每年狂犬病报告病死人数在法定传染病中始终居前3、4位。RABV感染后专门侵染神经系统,人感染后一旦出现神经... 狂犬病是由狂犬病病毒（RABV）引起的一种重要人兽共患病,全球每年因狂犬病致死人数高达6万人,其中40%左右是儿童。近年来,我国每年狂犬病报告病死人数在法定传染病中始终居前3、4位。RABV感染后专门侵染神经系统,人感染后一旦出现神经症状,致死率几乎100%,目前尚无有效的治疗药物。囊膜糖蛋白（G）是介导RABV侵入宿主细胞的主要功能蛋白。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 谷氨酸受体 神经细胞 侵入 代谢性 人兽共患病 法定传染病 囊膜糖蛋白

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重组伪狂犬病诊断用抗原的制造获得认可

14

作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第4期25-25,共1页

日生研7月31日得到农林水产省认可,即重组猪伪狂犬病诊断用抗原的制造适合“农林水产领域等重组体的利用方针”。 日生研1985年开始销售使用ELISA的伪狂犬病诊断药。但是,目前趋向使用更简便的凝集反应的诊断药。日生研今后打算开发使... 日生研7月31日得到农林水产省认可,即重组猪伪狂犬病诊断用抗原的制造适合“农林水产领域等重组体的利用方针”。 日生研1985年开始销售使用ELISA的伪狂犬病诊断药。但是,目前趋向使用更简便的凝集反应的诊断药。日生研今后打算开发使用重组gⅡ蛋白的简易诊断法。还会有新伪狂犬病诊断药上市。 日生研申请的是猪伪狂犬病病毒gⅡ蛋白。gⅡ蛋白是构成病毒粒子的膜糖蛋白。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 抗原 简易诊断法 表达载体 膜糖蛋白 水产省 ELISA 核多角体病毒 凝集反应 病毒粒子

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