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狂犬病毒N基因的原核表达及间接ELISA方法的建立
被引量：
12
1
作者
高明华
夏咸柱
薛琳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期31-34,共4页
目的用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法。方法根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)...
目的用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法。方法根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达载体pET-N。阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间。通过凝胶薄层扫描分析和Western-blot分析确定表达蛋白的表达量和特异性。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对各反应条件的优化,初步建立检测RV抗体的间接ELISA方法。结果扩增了RV N基因,构建了原核表达载体pET-N和原核表达菌,表达了N基因且目的蛋白以包涵体形式存在表达菌中,最佳诱导时间为4 h。重组蛋白表达量占菌体总蛋白的56.8%,并能与RV阳性血清发生特异性反应。用表达的狂犬病重组N蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法。结论成功表达了狂犬病核蛋白,用表达的狂犬病核蛋白建立的间接ELISA方法可以用于RV抗体的检测。
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关键词
狂犬病毒era株
核蛋白基因
原核表达
间接ELISA
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题名
狂犬病毒N基因的原核表达及间接ELISA方法的建立
被引量：
12
1
作者
高明华
夏咸柱
薛琳
机构
吉林大学畜牧兽医学院
军事医学科学院军事兽医研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期31-34,共4页
基金
农业部重要人兽共患病防制技术平台(2004BA519A32-加强)
文摘
目的用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法。方法根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达载体pET-N。阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间。通过凝胶薄层扫描分析和Western-blot分析确定表达蛋白的表达量和特异性。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对各反应条件的优化,初步建立检测RV抗体的间接ELISA方法。结果扩增了RV N基因,构建了原核表达载体pET-N和原核表达菌,表达了N基因且目的蛋白以包涵体形式存在表达菌中,最佳诱导时间为4 h。重组蛋白表达量占菌体总蛋白的56.8%,并能与RV阳性血清发生特异性反应。用表达的狂犬病重组N蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法。结论成功表达了狂犬病核蛋白,用表达的狂犬病核蛋白建立的间接ELISA方法可以用于RV抗体的检测。
关键词
狂犬病毒era株
核蛋白基因
原核表达
间接ELISA
Keywords
Rabies Virus
era
strain
Nueleoprotein gene
Prokaryotie expression
Indireet ELISA
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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作者
出处
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被引量
操作
1
狂犬病毒N基因的原核表达及间接ELISA方法的建立
高明华
夏咸柱
薛琳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
12
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