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水獭源犬圆环病毒的全基因组序列分析
1
作者 匡尹之 徐凤培 周沛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1989-1994,共6页
犬圆环病毒(canine circovirus, CanineCV)是一种与犬消化道疾病相关的病毒,该病毒于2012年在美国首次从犬中鉴定。随后,研究人员相继在狼、獾、北极狐、赤狐、豺中检测到了CanineCV。2016年,我国首次报道从犬中检测到CanineCV,然而,关... 犬圆环病毒(canine circovirus, CanineCV)是一种与犬消化道疾病相关的病毒,该病毒于2012年在美国首次从犬中鉴定。随后,研究人员相继在狼、獾、北极狐、赤狐、豺中检测到了CanineCV。2016年,我国首次报道从犬中检测到CanineCV,然而,关于CanineCV在我国野生动物中的感染情况尚不清楚。采集一病死水獭的组织病料,利用PCR进行CanineCV的检测;设计CanineCV全基因组引物,对CanineCV阳性样本进行全基因组扩增、测序和基因序列分析。结果显示:通过PCR检测,发现1份水獭组织样本CanineCV阳性;通过全基因组扩增、测序、拼接,成功获得一条长度为2 063 nt的CanineCV全基因组序列;核苷酸同源性分析显示,该毒株与GenBank中其他毒株的基因序列同源性为84.6%~98.2%;遗传进化树分析发现,该毒株属于CanineCV-3型。首次在水獭中鉴定出CanineCV的感染,并成功获得了我国首条野生动物源CanineCV全基因组序列及其遗传进化信息。以上结果表明CanineCV感染水獭的潜在危害及其感染更多其他动物的可能性,从而提示人们应加强CanineCV感染不同动物的监测。 展开更多
关键词 犬圆环病毒 水獭 流行病学 遗传进化分析
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犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：11
2
作者 孙文超 解长占 +12 位作者 赵冠宇 曹亮 郑敏 曹慧慧 张红云 韦显凯 韩继成 温树波 肖朋朋 靖杰 张萍 鲁会军 金宁一 《动物医学进展》 北大核心 2017年第5期6-10,共5页
犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体... 犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化。结果表明,所建立的方法 Ct值与标准品在4.67×10~9 copies/μL^4.67×10~3 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.445。该方法检测灵敏度为4.67×10~1copies/μL。该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应;所有稀释度标准品模板均在83.35℃出现窄的特异性熔解峰。临床样品检测表明,所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12.50%(4/32)。 展开更多
关键词 犬圆环病毒 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR
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犬圆环病毒Cap蛋白的生物信息学分析及原核表达 被引量：2
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作者 汪伟 辛佳亮 +10 位作者 杜倩 韩知晓 易驰喆 闭璟珊 曹亮 庄忻雨 张赫 郑敏 孙文超 鲁会军 金宁一 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第2期86-91,共6页
犬圆环病毒(CanineCV)是近年被发现的圆环病毒属新成员,获取CaineCV Cap蛋白,为研究Cap蛋白的功能以及抗原表位奠定了基础。本研究以CaineCV GX2017株基因组作为模板,使用PCR方法扩增出Cap蛋白的基因序列,对其进行生物信息学分析,并克隆... 犬圆环病毒(CanineCV)是近年被发现的圆环病毒属新成员,获取CaineCV Cap蛋白,为研究Cap蛋白的功能以及抗原表位奠定了基础。本研究以CaineCV GX2017株基因组作为模板,使用PCR方法扩增出Cap蛋白的基因序列,对其进行生物信息学分析,并克隆至pET-28a原,进行原核表达。结果表明:GX2017的N端2~26位氨基酸存在一个核定位信号,同时含有3个B细胞表位(aa7~aa14;aa150~aa174;aa233~aa253);第134位氨基酸为N-糖基化位点,第169和第238位氨基酸为O-型糖基化位点;进化分析表明,本研究的CanineCV Cap蛋白基因序列与欧美株同源性较低,且处在不同的分支;SDS-PAGE结果显示,重组Cap蛋白在E.coli BL21(DE3)中不能正确表达,切除了NLS的d(1-26)Cap蛋白能在E.coli BL21(DE3)中大量表达;Western blot 分析表明,该重组蛋白能与Anti-His 标签抗体发生特异性反应。本研究成功构建了pET-d(1-26)Cap重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中获得高水平表达,为进一步制备Cap蛋白的抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 犬圆环病毒 CAP蛋白 生物信息学 原核表达
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犬圆环病毒病研究进展 被引量：2
4
作者 孙文超 汪伟 +6 位作者 曹亮 易驰喆 郑敏 刘立明 赵翠青 鲁会军 金宁一 《动物医学进展》 北大核心 2018年第4期97-100,共4页
自2012年美国首次报道犬圆环病毒(CanineCV)以来,随后欧洲、北美洲及亚洲等地区陆续从腹泻犬中发现该病毒。犬圆环病毒可感染不同年龄段犬,尤其以幼龄犬感染率较高。该病毒可以感染狼和獾等食肉动物,经常与犬细小病毒发生混合感染,造成... 自2012年美国首次报道犬圆环病毒(CanineCV)以来,随后欧洲、北美洲及亚洲等地区陆续从腹泻犬中发现该病毒。犬圆环病毒可感染不同年龄段犬,尤其以幼龄犬感染率较高。该病毒可以感染狼和獾等食肉动物,经常与犬细小病毒发生混合感染,造成犬的出血性腹泻。犬圆环病毒(CanineCV)与其他肠道病毒协同作用,加重胃肠道疾病。然而对于犬圆环病毒病的研究还没有完全深入,论文就目前已知犬圆环病毒病的病原特征与致病性、流行病学、诊断等方面的研究进展进行概述,为犬圆环病毒的研究提供参考。 展开更多
关键词 犬圆环病毒 病原学 流行病学 诊断
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犬圆环病毒荧光RAA检测方法的建立及初步应用 被引量：8
5
作者 吕荞 刘宇梦 +4 位作者 于子萍 汪伟 胡传活 郑敏 孙文超 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期958-962,共5页
为建立一种高效、简便的犬圆环病毒(CCV)的检测方法,本研究针对CCV Rep基因设计了特异性引物和探针,同时构建了基于该病毒Rep基因的重组质粒标准品pCCV-Rep,经过优化后确定了CCV重组酶介导核酸等温扩增(RAA)检测方法引物、探针的最适浓... 为建立一种高效、简便的犬圆环病毒(CCV)的检测方法,本研究针对CCV Rep基因设计了特异性引物和探针,同时构建了基于该病毒Rep基因的重组质粒标准品pCCV-Rep,经过优化后确定了CCV重组酶介导核酸等温扩增(RAA)检测方法引物、探针的最适浓度均为10μmol/L,在39℃恒温条件下20 min即可完成检测。利用该方法检测犬圆环病毒、狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒等其他常见的犬源病毒,结果显示除CCV外,该方法对其他病毒均无交叉反应,特异性较强;将p CCV-Rep分别稀释为10~6拷贝/μL~10~0拷贝/μL后作为模板,进行敏感性试验,结果显示该方法最低检出限可达10~2拷贝/μL,敏感性较高;批内批间重复性试验结果均表明该方法具有良好的重复性。采用该方法与常规PCR方法同时检测82份犬粪便拭子,结果显示,该RAA方法检出阳性样品5份,检测结果与常规PCR一致。本实验首次建立的CCV荧光RAA检测方法简便、高效、特异、灵敏,为CCV的临床筛查与流行病学研究提供了可行技术。 展开更多
关键词 犬圆环病毒 重组酶介导核酸等温扩增技术 检测方法
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四川部分地区犬圆环病毒的病原检测及基因组特征 被引量：4
6
作者 严楠 冯帆 +2 位作者 李明翔 汤承 岳华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期313-316,共4页
为调查犬圆环病毒(CanineCV)在四川部分地区的流行情况及基因组特征,本研究采用荧光定量PCR方法检测了2015年～2017年采集自四川6家宠物医院的208份腹泻犬粪便样品。结果显示CanineCV的平均阳性率为15.4%(32/208),3年间的检出率无明显变... 为调查犬圆环病毒(CanineCV)在四川部分地区的流行情况及基因组特征,本研究采用荧光定量PCR方法检测了2015年～2017年采集自四川6家宠物医院的208份腹泻犬粪便样品。结果显示CanineCV的平均阳性率为15.4%(32/208),3年间的检出率无明显变化;并且阳性样品均与一种或多种病原共感染。获得了6条完整的CanineCV Rep基因序列及1株CanineCV (CD17/2016)全基因组序列,进化分析显示CanineCV四川株(CD17/2016)与GenBank中的国内另外2株CanineCV遗传距离较远。本研究首次对国内腹泻犬进行了CanineCV感染的调查,证明CanineCV在四川部分地区宠物犬中已流行,建议把CanineCV作为犬腹泻病原诊断的一个检测内容,同时对其分子特征的研究结果将有助于进一步了解国内CanineCV的遗传多样性。 展开更多
关键词 犬圆环病毒 宠物犬 流行 基因组
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重庆地区犬圆环病毒检测及序列分析 被引量：2
7
作者 闫修魁 韩知晓 +7 位作者 杜倩 汪伟 朱远致 辛佳亮 易驰喆 闭璟珊 孙文超 郑敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第10期3069-3077,共9页
本试验旨在调查近年来新发的犬圆环病毒(canine circovirus,CCV)在重庆地区的流行情况,探索重庆流行毒株的特性。本研究利用PCR方法对2017年采集于重庆地区的100份犬血清样品进行CCV核酸检测,对所得CCV阳性样品进行全基因组扩增与测序,... 本试验旨在调查近年来新发的犬圆环病毒(canine circovirus,CCV)在重庆地区的流行情况,探索重庆流行毒株的特性。本研究利用PCR方法对2017年采集于重庆地区的100份犬血清样品进行CCV核酸检测,对所得CCV阳性样品进行全基因组扩增与测序,并利用MegAlign、Mega 6.0和RDP4等软件对分离到的重庆CCV毒株进行分析。结果显示,重庆地区100份犬血清中共有4份为CCV阳性,阳性率为4%,从4份阳性样品中共获得3株不同的CCV基因组(CQ76、CQ79和CQ82),全长基因组序列均为2062 nt,与此前报道长度为2063 nt的CCV基因组相比缺少了一个碱基,该碱基位于5′-基因间隔区内茎环结构的下游。3个毒株的两个ORF之间5′末端间隔区和3′末端间隔区长度分别为134(1929-2062 nt)和203 nt(913-1115 nt)。CQ76、CQ79和CQ82的同源性在99.8%~100%之间,其中CQ76与CQ82仅在第2019位点存在同义突变;所获得的3个重庆毒株与国内外报道的其他CCV基因组序列同源性为82.7%~97.1%,其中,ORF2的变异程度大于ORF1。基于病毒ORF2序列和全基因组分别构建NJ进化树中,CQ76、CQ79和CQ82均属于同一亚群,与属于基因Ⅱ型的中国毒株204株遗传距离较近,同源性为96.5%~96.7%。RDP4重组分析发现,CQ76、CQ79和CQ82毒株基因组均为广西毒株204株和388株的重组序列,重组区域坐落于ORF2。本研究为丰富CCV流行病学和遗传进化信息,以及进一步防控研究提供基础数据。 展开更多
关键词 犬圆环病毒(CCV) 序列分析 同源性分析
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犬圆环病毒Rep蛋白的原核表达 被引量：1
8
作者 汪伟 孙文超 +4 位作者 曹亮 易驰喆 郑敏 鲁会军 金宁一 《动物医学进展》 北大核心 2018年第7期28-31,共4页
犬圆环病毒(CanineCV)是一种新发现的圆环病毒。制备针对CaineCV Rep的抗体,为建立CaineCV ELISA检测方法及研究Rep蛋白的功能奠定基础。以CaineCV基因组作为模板,扩增出Rep基因序列。PCR产物克隆至pET-28a原核表达载体上,获得了重组质... 犬圆环病毒(CanineCV)是一种新发现的圆环病毒。制备针对CaineCV Rep的抗体,为建立CaineCV ELISA检测方法及研究Rep蛋白的功能奠定基础。以CaineCV基因组作为模板,扩增出Rep基因序列。PCR产物克隆至pET-28a原核表达载体上,获得了重组质粒pET(28a)-Rep。将重组质粒转入大肠埃希菌BL21感受态细胞后进行诱导表达,SDS-PAGE分析表明重组Rep蛋白在大肠埃希菌BL21中获得表达。Western blot分析表明,重组蛋白能与Anti-His标签抗体发生特异性反应。该研究构建了pET(28a)-Rep重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中获得表达,为进一步制备Rep的抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 犬圆环病毒 REP蛋白 原核表达
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犬源牛犬细小病毒和犬圆环病毒二联PCR检测方法的建立及应用 被引量：1
9
作者 于永乐 姚延珠 +6 位作者 韩先杰 张传美 秦志华 杨瑞梅 张洪亮 刘维全 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期978-982,共5页
本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软... 本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为170 bp(CBoV)和239 bp(CCV)。分别提取CBoV和CCV重组质粒作为模板,进行二联PCR扩增试验。结果表明,本研究成功建立了可同时检测CBoV和CCV的二联PCR检测方法。并对其重复性、特异性和灵敏度进行验证,二联PCR最低检测限度为3.0 pg总DNA,而对犬细小病毒2型、犬瘟热病毒和犬副流感病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的30份病料进行检测,其中,4份为CBoV阳性,3份为CCV阳性,未检测到混合感染。综上所述,本研究所建立的CBoV和CCV二联PCR诊断方法特异性高,敏感性好,可用于临床犬腹泻病的流行病学调查。 展开更多
关键词 犬源牛犬细小病毒 犬圆环病毒 二联PCR
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一例犬细小病毒与圆环病毒混合感染的诊断报告
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作者 冯帆 卢建远 +1 位作者 黄坚 汤承 《四川畜牧兽医》 2020年第1期37-39,共3页
本试验的目的是对1例以呕吐和血便为突出症状的6月龄博美犬进行病原检测。采用PCR方法检测了犬细小病毒、犬冠状病毒、犬瘟热病毒、犬圆环病毒和犬星状病毒五种致犬腹泻的病毒,结果显示为犬细小病毒和犬圆环病毒的混合感染。本试验为犬... 本试验的目的是对1例以呕吐和血便为突出症状的6月龄博美犬进行病原检测。采用PCR方法检测了犬细小病毒、犬冠状病毒、犬瘟热病毒、犬圆环病毒和犬星状病毒五种致犬腹泻的病毒,结果显示为犬细小病毒和犬圆环病毒的混合感染。本试验为犬病毒性腹泻的病原诊断提供了参考。 展开更多
关键词 犬腹泻 犬细小病毒 犬圆环病毒 混合感染 PCR
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