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犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒多重PCR方法的建立及应用
被引量：
2
1
作者
李少晗
陈鑫
+2 位作者
张广智
刘维全
秦彤
《动物医学进展》
北大核心
2022年第12期31-36,共6页
为建立一种特异、高通量同时检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、Ⅰ型及Ⅱ型犬冠状病毒(CCoV)的多重PCR方法,根据GenBank相关病毒基因序列,选取CPV VP2基因、CDV H基因和CCoV M基因高度保守序列区域,设计引物分别用于扩增长度为573 ...
为建立一种特异、高通量同时检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、Ⅰ型及Ⅱ型犬冠状病毒(CCoV)的多重PCR方法,根据GenBank相关病毒基因序列,选取CPV VP2基因、CDV H基因和CCoV M基因高度保守序列区域,设计引物分别用于扩增长度为573 bp(CPV)、410 bp(CDV)、289 bp(CCoV-Ⅰ)、105 bp(CCoV-Ⅱ)的4条特异性目的片段。经反应条件优化,利用建立的多重PCR进行特异性、敏感性及重复性试验。结果表明,在同一PCR反应体系中可以同时检测到以上4种病毒,而大肠埃希氏菌、沙门氏菌、多形拟杆菌、犬副流感病毒(CPIV)及犬腺病毒(CAV)均未检测到,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的最低检测限分别为1×10^(7)copies/μL、1×10^(3)copies/μL、1×10^(6)copies/μL和1×10^(4)copies/μL,与单项PCR敏感性差异较小;3个不同浓度模板于不同时间、不同PCR仪器扩增,结果重复稳定性良好;使用该方法对50份临床病例进行检测,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的感染阳性率分别为32%(16/50)、24%(12/50)、18%(9/50)、10%(5/50),发现有CPV+CCoV-Ⅰ、CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ及CDV+CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ混合感染病例。证明建立的多重PCR具有高效、敏感、特异性强、重复性好的特点,并能够实际应用于临床样品检测中,为今后犬重要疫病的流行病学调查及病原学研究提供帮助。
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关键词
多重PCR
犬
细小
病毒
犬
瘟热
病毒
犬
冠状
病毒
Ⅰ
型
犬冠状病毒ⅱ型
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职称材料
题名
犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒多重PCR方法的建立及应用
被引量：
2
1
作者
李少晗
陈鑫
张广智
刘维全
秦彤
机构
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
农业农村部兽用药物与诊断技术北京科学观测实验站
中国农业大学生物学院
出处
《动物医学进展》
北大核心
2022年第12期31-36,共6页
基金
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项项目(2021-YWF-ZX-11)
中国农业科学院科技创新工程项目(ASTIP-IAS15)。
文摘
为建立一种特异、高通量同时检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、Ⅰ型及Ⅱ型犬冠状病毒(CCoV)的多重PCR方法,根据GenBank相关病毒基因序列,选取CPV VP2基因、CDV H基因和CCoV M基因高度保守序列区域,设计引物分别用于扩增长度为573 bp(CPV)、410 bp(CDV)、289 bp(CCoV-Ⅰ)、105 bp(CCoV-Ⅱ)的4条特异性目的片段。经反应条件优化,利用建立的多重PCR进行特异性、敏感性及重复性试验。结果表明,在同一PCR反应体系中可以同时检测到以上4种病毒,而大肠埃希氏菌、沙门氏菌、多形拟杆菌、犬副流感病毒(CPIV)及犬腺病毒(CAV)均未检测到,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的最低检测限分别为1×10^(7)copies/μL、1×10^(3)copies/μL、1×10^(6)copies/μL和1×10^(4)copies/μL,与单项PCR敏感性差异较小;3个不同浓度模板于不同时间、不同PCR仪器扩增,结果重复稳定性良好;使用该方法对50份临床病例进行检测,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的感染阳性率分别为32%(16/50)、24%(12/50)、18%(9/50)、10%(5/50),发现有CPV+CCoV-Ⅰ、CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ及CDV+CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ混合感染病例。证明建立的多重PCR具有高效、敏感、特异性强、重复性好的特点,并能够实际应用于临床样品检测中,为今后犬重要疫病的流行病学调查及病原学研究提供帮助。
关键词
多重PCR
犬
细小
病毒
犬
瘟热
病毒
犬
冠状
病毒
Ⅰ
型
犬冠状病毒ⅱ型
Keywords
multiplex PCR
Canine parvovirus
Canine distemper virus
Canine coronavirus typeⅠ
Canine coronavirus type
ⅱ
分类号
S854.43 [农业科学—临床兽医学]
S858.292 [农业科学—临床兽医学]
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出处
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1
犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒多重PCR方法的建立及应用
李少晗
陈鑫
张广智
刘维全
秦彤
《动物医学进展》
北大核心
2022
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