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犬冠状病毒与犬细小病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立
1
作者 傅宇飞 李传峰 +8 位作者 田传龙 李泽贤 麦嘉迅 程松 刘禹含 孟春春 朱杰 程国锋 刘光清 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期75-83,共9页
根据GenBank中犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)已有基因序列设计其对应引物,通过对反应体系和扩增程序的优化,建立了CCoV和CPV双重荧光定量PCR检测方法,评估了其敏感性、特异性和重复性。结果显示,该方法最佳退火温度为60℃,引物浓... 根据GenBank中犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)已有基因序列设计其对应引物,通过对反应体系和扩增程序的优化,建立了CCoV和CPV双重荧光定量PCR检测方法,评估了其敏感性、特异性和重复性。结果显示,该方法最佳退火温度为60℃,引物浓度分别为CCoV 1.0μmol/L和CPV 0.1μmol/L,检测下限均为10~2 copies/μL。批内与批间的变异系数均小于2%。该方法用于检测犬腺病毒(CAV)、犬圆环病毒(CaCV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬流感病毒(CIV)、犬副流感病毒(CPIV)均无特异性扩增。对68份临床样品的检测,结果表明CCoV阳性率为22.0%,CPV阳性率为61.8%,与普通PCR检测结果相比,本研究建立的方法更加灵敏。本研究建立的CCoV和CPV检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,可用于对CCoV和CPV的鉴别诊断。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 犬细小病毒 双重荧光定量PCR 鉴别诊断
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一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的诊治
2
作者 陈金瑞 周华波 +2 位作者 黄添俊 唐凤姣 陈樱 《今日畜牧兽医》 2024年第6期83-85,共3页
犬冠状病毒病是能引起犬发生不同程度的胃肠道炎症的常见传染病,2~4月的幼犬感染后发病率和死亡率最高。犬的贾第虫病是一类容易被幼龄犬感染的人畜共患肠道寄生虫病。本文介绍了一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的病例,对临床检查、诊断... 犬冠状病毒病是能引起犬发生不同程度的胃肠道炎症的常见传染病,2~4月的幼犬感染后发病率和死亡率最高。犬的贾第虫病是一类容易被幼龄犬感染的人畜共患肠道寄生虫病。本文介绍了一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的病例,对临床检查、诊断以及治疗进行详细阐述,为临床兽医师提供参考。 展开更多
关键词 幼犬 犬冠状病毒病 贾第虫病 人畜共患病
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犬冠状病毒病的诊断与防治
3
作者 杨丽 《中国工作犬业》 2024年第11期60-61,共2页
犬冠状病毒临床症状与细小病毒肠炎相似,导致犬出现呕吐、腹泻等症状,且症状反复出现,容易使犬脱水死亡,是一种胃肠道传染性疾病。全年龄段犬均可感染犬冠状病毒病,尤其是幼犬更易感染该疾病。幼犬先发病后传染其他年龄段犬。犬冠状病... 犬冠状病毒临床症状与细小病毒肠炎相似,导致犬出现呕吐、腹泻等症状,且症状反复出现,容易使犬脱水死亡,是一种胃肠道传染性疾病。全年龄段犬均可感染犬冠状病毒病,尤其是幼犬更易感染该疾病。幼犬先发病后传染其他年龄段犬。犬冠状病毒病的感染率居高不下,直接影响了犬的健康成长与繁殖,因此要加强犬冠状病毒病的诊断与防治研究,提升犬的成活率。 展开更多
关键词 犬冠状病毒病 脱水死亡 诊断与防治 幼犬 细小病毒肠炎 临床症状 感染率 成活率
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幼龄犬冠状病毒感染的治疗方法
4
作者 黄磊 《中兽医学杂志》 2024年第4期46-48,共3页
犬冠状病毒感染是威胁幼犬健康的重要疾病之一,随着我国家庭养犬量的逐年上升,这一病毒感染的发生概率大幅度增长,主要介绍了犬冠状病毒的病原学特征与诊断方法,以5例感染犬冠状病毒的幼犬为例,探讨该病的发病表现、治疗方法,为有效防... 犬冠状病毒感染是威胁幼犬健康的重要疾病之一,随着我国家庭养犬量的逐年上升,这一病毒感染的发生概率大幅度增长,主要介绍了犬冠状病毒的病原学特征与诊断方法,以5例感染犬冠状病毒的幼犬为例,探讨该病的发病表现、治疗方法,为有效防控与治疗犬冠状病毒感染提供参考。 展开更多
关键词 幼龄犬 犬冠状病毒 诊断技术 治疗方法
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犬瘟热、犬冠状病毒联合RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：24
5
作者 乔军 孟庆龄 +2 位作者 夏咸柱 何宏彬 范泉水 《西南农业学报》 CSCD 2002年第1期93-95,共3页
用CDV、CCV特异性引物对同一样品中CDV和CCVRNA模板进行联合RT PCR扩增 ,并对扩增条件进行了优化。结果同时得到了两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带 ,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。敏感性试... 用CDV、CCV特异性引物对同一样品中CDV和CCVRNA模板进行联合RT PCR扩增 ,并对扩增条件进行了优化。结果同时得到了两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带 ,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。敏感性试验表明 ,该联合PCR能检测出 10 - 4倍稀释的CDV模板 (10 6 6 TCID50 / 0 1mL)和 10 - 3倍稀释的CCV模板 (10 5 9TCID50 /0 1mL)。通过对 7份临床发病犬病料的检测 ,其阳性检出率高于电镜负染检查。初步应用表明 ,此法具有高度敏感、特异、准确、快速等特点 ,适用于兽医临床对CDV。 展开更多
关键词 犬瘟热 犬冠状病毒 RT-PCR检测 应用 特异性引物 核酸 敏感性 CCV模板 电镜负染 兽医临床
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大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定 被引量：9
6
作者 胡桂学 高凤山 +3 位作者 高玉伟 夏咸柱 柏亚铎 余春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期202-207,共6页
以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物,发现冠状病毒样粒子,超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明,DXMV核酸类型为RNA,对氯仿、乙醚敏感... 以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物,发现冠状病毒样粒子,超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明,DXMV核酸类型为RNA,对氯仿、乙醚敏感,可耐受1%胰蛋白酶的作用,具有一定的耐酸性和耐热性,可在MDCK、FCWF、F81细胞中增殖,无血凝性和血吸附特性。血清中和试验结果表明,DXMV可被犬冠状病毒阳性血清中和。采用犬冠状病毒间接荧光抗体法染色DXMV细胞飞片,可在细胞浆内见到特异性荧光。以冠状病毒通用引物和犬冠状病毒特异性引物,可从大熊猫肝脏和不同代次的病毒细胞培养物中扩增出与预期值251bp和515bp大小相同的核苷酸片段。由此说明,该病毒为犬冠状病毒,大熊猫可被犬冠状病毒感染。 展开更多
关键词 大熊猫 犬冠状病毒 病毒分离 病毒鉴定
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犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒多重PCR方法的建立及应用 被引量：2
7
作者 李少晗 陈鑫 +2 位作者 张广智 刘维全 秦彤 《动物医学进展》 北大核心 2022年第12期31-36,共6页
为建立一种特异、高通量同时检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、Ⅰ型及Ⅱ型犬冠状病毒(CCoV)的多重PCR方法,根据GenBank相关病毒基因序列,选取CPV VP2基因、CDV H基因和CCoV M基因高度保守序列区域,设计引物分别用于扩增长度为573 ... 为建立一种特异、高通量同时检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、Ⅰ型及Ⅱ型犬冠状病毒(CCoV)的多重PCR方法,根据GenBank相关病毒基因序列,选取CPV VP2基因、CDV H基因和CCoV M基因高度保守序列区域,设计引物分别用于扩增长度为573 bp(CPV)、410 bp(CDV)、289 bp(CCoV-Ⅰ)、105 bp(CCoV-Ⅱ)的4条特异性目的片段。经反应条件优化,利用建立的多重PCR进行特异性、敏感性及重复性试验。结果表明,在同一PCR反应体系中可以同时检测到以上4种病毒,而大肠埃希氏菌、沙门氏菌、多形拟杆菌、犬副流感病毒(CPIV)及犬腺病毒(CAV)均未检测到,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的最低检测限分别为1×10^(7)copies/μL、1×10^(3)copies/μL、1×10^(6)copies/μL和1×10^(4)copies/μL,与单项PCR敏感性差异较小;3个不同浓度模板于不同时间、不同PCR仪器扩增,结果重复稳定性良好;使用该方法对50份临床病例进行检测,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的感染阳性率分别为32%(16/50)、24%(12/50)、18%(9/50)、10%(5/50),发现有CPV+CCoV-Ⅰ、CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ及CDV+CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ混合感染病例。证明建立的多重PCR具有高效、敏感、特异性强、重复性好的特点,并能够实际应用于临床样品检测中,为今后犬重要疫病的流行病学调查及病原学研究提供帮助。 展开更多
关键词 多重PCR 犬细小病毒 犬瘟热病毒 犬冠状病毒Ⅰ型 犬冠状病毒Ⅱ型
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犬冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：8
8
作者 熊炜 张强 +5 位作者 王艳 陈政晓 蒋静 王巧全 陈沁 李健 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第8期86-88,92,共4页
以犬冠状病毒(CCV)TN449株为对象,对CCV核衣壳蛋白(N蛋白)编码基因进行克隆和原核表达,通过使用纯化的重组N蛋白,建立了CCV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组N蛋白具有良好的CCV抗原反应性;经优化ELISA反应条件,确定重组N蛋白最佳... 以犬冠状病毒(CCV)TN449株为对象,对CCV核衣壳蛋白(N蛋白)编码基因进行克隆和原核表达,通过使用纯化的重组N蛋白,建立了CCV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组N蛋白具有良好的CCV抗原反应性;经优化ELISA反应条件,确定重组N蛋白最佳包被浓度为1.0μg/m L、待检血清的最佳浓度为1∶100、阴阳性判定临界值为0.418;通过对比检测犬瘟热等多种犬病阳性血清,未发生交叉反应,证实该间接ELISA方法特异性好;用建立的间接ELISA方法对本室保存的50份CCV阳性血清和阴性血清进行复检,证实其符合率为100%。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 原核表达 间接ELISA
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犬细小病毒和犬冠状病毒双重PCR方法的建立及应用 被引量：8
9
作者 林颖 耿庆华 +4 位作者 付海滨 李俊环 闫明媚 李成镛 林书铭 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第10期71-74,共4页
根据GenBank中犬细小病毒(CPV)和犬冠状病毒(CCV)基因序列各设计了一对引物,经试验条件的优化,建立了检测CPV的PCR方法和CCV的RT-PCR方法,扩增目的片段大小分别为337bp和852bp。在此基础上建立了检测CPV和CCV双重PCR方法。该双重PCR方... 根据GenBank中犬细小病毒(CPV)和犬冠状病毒(CCV)基因序列各设计了一对引物,经试验条件的优化,建立了检测CPV的PCR方法和CCV的RT-PCR方法,扩增目的片段大小分别为337bp和852bp。在此基础上建立了检测CPV和CCV双重PCR方法。该双重PCR方法能特异的扩增CPV和CCV,且分别扩增出1.08ng和3.2ng总核酸量。通过检测96份临床样品,对双重PCR方法和胶体金试纸条方法进行了对比试验。结果表明,建立的双重PCR方法快速、敏感、特异性高,可以用于CPV和CCV鉴别检测。 展开更多
关键词 犬细小病毒 犬冠状病毒 双重PCR
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一例泰迪犬冠状病毒感染伴发急性肺水肿的病理诊断报告 被引量：8
10
作者 胡凤姣 常玲玲 +3 位作者 佘锐萍 吴桥兴 杜芳 杨依菲 《动物医学进展》 北大核心 2017年第3期133-136,共4页
某宠物主人送检1只4月龄泰迪犬,初步确诊为冠状病毒感染,于输液过程中突然死亡。剖检可见整个肺脏呈深红色,肺叶边缘呈粉红色,切面深红色,支气管断端有大量红色液体渗出;剖开气管可见其浆膜面呈暗红色,腔内充满红色清亮液体;心脏左右心... 某宠物主人送检1只4月龄泰迪犬,初步确诊为冠状病毒感染,于输液过程中突然死亡。剖检可见整个肺脏呈深红色,肺叶边缘呈粉红色,切面深红色,支气管断端有大量红色液体渗出;剖开气管可见其浆膜面呈暗红色,腔内充满红色清亮液体;心脏左右心室扩张,质地柔软,心尖钝圆,呈心力衰竭心。对各个脏器取材进行病理组织学观察,主要病变表现为肺脏弥漫性淤血、水肿,心肌纤维局部溶解坏死。诊断该犬因感染冠状病毒后初次洗澡应激加重病情,并且随着大量静脉输液导致或加剧急性肺水肿发生,最终造成该犬急性死亡。对该病例进行了系统地病理剖检和组织病理学观察,为犬科动物和其他动物发生类似病症提供一定的参考。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 应激 急性肺水肿 病理学
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犬冠状病毒分子生物学研究进展 被引量：6
11
作者 张建武 陈燕军 +1 位作者 吉荣 王权 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期54-57,共4页
犬冠状病毒 ( CCV )基因组为一 2 8～3 2 kb大小的单股正链 RNA,基因在病毒自身RNA聚合酶的存在下、以先导引物转录机制进行转录 ,不同的病毒基因组和亚基因组翻译产生除病毒依赖 RNA的 RNA聚合酶以外 ,还产生其它病毒的结构蛋白和非结... 犬冠状病毒 ( CCV )基因组为一 2 8～3 2 kb大小的单股正链 RNA,基因在病毒自身RNA聚合酶的存在下、以先导引物转录机制进行转录 ,不同的病毒基因组和亚基因组翻译产生除病毒依赖 RNA的 RNA聚合酶以外 ,还产生其它病毒的结构蛋白和非结构蛋白 ,其中有相对比较保守、参与病毒核衣壳形成、介导宿主细胞免疫的核衣壳蛋白 ( N ) ;在病毒出芽、组装和成熟中起重要作用的膜蛋白 ( M) ;能刺激机体产生中和抗体 ,且易变异的纤突蛋白 ( S) ,另外 S蛋白还决定着病毒血清型、感染力 ,同时通过识别 ,并与病毒宿主细胞受体相互作用决定病毒感染的宿主范围 ;参与病毒组装的小膜蛋白 ( E)和其它病毒蛋白。 CCV还可识别猫氨肽酶 N( f APN) 展开更多
关键词 犬冠状病毒 分子生物学 基因组 病毒蛋白 受体 结构蛋白基因
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大熊猫犬冠状病毒部分S基因的克隆与全S基因序列分析 被引量：2
12
作者 关振宏 胡桂学 +3 位作者 夏咸柱 高凤山 逄博 乔军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期33-37,共5页
从重庆某动物园死亡的大熊猫肝脏中分离到一株病毒,经鉴定为犬冠状病毒(命名为CCVDXMV)。本实验根据CCV K378和CCV Insavc-1株基因序列设计合成了普通PCR引物SF1-SR1和SF2-SR2,以及半套式引物SF3-SR3、SRI3、SFI3、SF4-SR4和SFI4,分段... 从重庆某动物园死亡的大熊猫肝脏中分离到一株病毒,经鉴定为犬冠状病毒(命名为CCVDXMV)。本实验根据CCV K378和CCV Insavc-1株基因序列设计合成了普通PCR引物SF1-SR1和SF2-SR2,以及半套式引物SF3-SR3、SRI3、SFI3、SF4-SR4和SFI4,分段扩增了CCV DXMV株部分S基因,得到了368 bp、792 bp、737 bp、1 178 bp和985 bp 5个基因片段。将纯化的RCR产物分别克隆到pGEM-T载体中,通过筛选和鉴定,获得了5个阳性重组质粒。将重组质粒送生物公司测序,将测得的基因序列与先前测定的该株病毒部分S基因序列,拼接成全S基因序列,并与其它株CCV及TGEV HN2002和FIPV 79-1 146株的S基因序列进行分析比较,绘制进化树。结果表明,该株病毒与CCV K378株的同源性最高,达到99.4%;而与CCV 23/03株的同源性最低,为56.9%;与FIPV和TGEV分别有90.4%和82.1%的同源性。 展开更多
关键词 大熊猫 犬冠状病毒 S基因 克隆 序列分析
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犬冠状病毒基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究 被引量：2
13
作者 乔军 夏咸柱 +4 位作者 杨松涛 郝峰 高玉伟 郑晓一 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期412-416,共5页
以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株(CCV DXMV)纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切,回收目的基因片段并将其定向... 以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株(CCV DXMV)纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切,回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pVAX1中得到重组质粒pVAXS、pVAXM和pVAXN。将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染MDCK细胞,通过RT-PCR法进行转录水平的检测,并用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况。结果在pVAXS、pVAXM、pVAXN转染MDCK细胞36 h后就可检测到目的基因的转录;在转染72 h后可检测到3种目的蛋白的表达。动物免疫试验表明,3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答,这为CCV基因疫苗的研究奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 基因疫苗表达载体 构建 免疫原性
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犬冠状病毒V1株膜蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：2
14
作者 乔军 夏咸柱 +4 位作者 胡桂学 谢之景 闫芳 杨松涛 黄耕 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第12期75-78,共4页
　根据GenBank中报道的CCVInsavc 1株核蛋白基因(M)序列,用特异性引物对分离的CCVV1野毒株进行了RT PCR扩增,将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T连接得到重组质粒pTM,并进行了核苷酸序列测定。结果表明,该基因全长为789bp,编码263个氨基... 　根据GenBank中报道的CCVInsavc 1株核蛋白基因(M)序列,用特异性引物对分离的CCVV1野毒株进行了RT PCR扩增,将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T连接得到重组质粒pTM,并进行了核苷酸序列测定。结果表明,该基因全长为789bp,编码263个氨基酸,其中前17个氨基酸为信号肽。与CCV标准毒株Insavc 1M基因相比,两者核苷酸的同源性为92.1%;推导的氨基酸序列同源性为90.9%,差异主要发生在该蛋白的N端前1/3区域内。在推导的M蛋白氨基酸序列中,发现了3个明显的疏水区,提示该蛋白可能是一个反复跨膜的蛋白;在N端15～17,38～40,234～236位氨基酸存在3个潜在的N 联糖基化位点,可能是形成该蛋白表面抗原决定基的位点。另外,推导蛋白氨基酸序列的疏水性和抗原表位与Insavc 1株M蛋白存在一定差异,提示两者免疫原性可能有差别。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 膜蛋白基因 基因克隆 序列分析
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核酸探针检测犬冠状病毒方法的建立和初步应用 被引量：2
15
作者 胡桂学 王龙涛 +1 位作者 于守平 夏咸柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期171-174,共4页
以3 2 P标记犬冠状病毒特异性RT_PCR产物制成核酸探针 ,与CCVNL_18株、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、狂犬病病毒反转录产物、正常CRFK细胞以及做 10～ 10 0 0 0倍稀释的CCVNL_18株反转录产物杂交 ,进行核酸探针的... 以3 2 P标记犬冠状病毒特异性RT_PCR产物制成核酸探针 ,与CCVNL_18株、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、狂犬病病毒反转录产物、正常CRFK细胞以及做 10～ 10 0 0 0倍稀释的CCVNL_18株反转录产物杂交 ,进行核酸探针的敏感性和特异性试验。结果表明 ,该探针仅与CCVNL_18株反转录产物呈阳性杂交 ,与对照病毒和正常细胞反转录产物均呈阴性反应。初步应用试验结果 ,该探针可与国内CCV分离病毒YS1、CI1株杂交 ,且可从 8份腹泻犬粪便中检出 5份CCV阳性病料。本研究为在我国开展犬冠状病毒感染的分子流行病学调查和临床诊断提供了一种敏感。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 核酸探针 初步应用
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犬冠状病毒纤突蛋白基因的序列测定与比较分析 被引量：1
16
作者 胡桂学 夏咸柱 +1 位作者 邹啸环 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期12-15,共4页
将两株犬冠状病毒国内分离毒CCVYS1、CCVCI1接种于CCV中和抗体效价低于 1∶4的 2月龄幼犬 ,观察接种犬临床表现、体温和剖检变化。结果表明 ,CCVYS1株毒力较强 ,CCVCI1株毒力较弱。采用RT_PCR方法扩增出两株病毒部分S基因序列 ,克隆于pU... 将两株犬冠状病毒国内分离毒CCVYS1、CCVCI1接种于CCV中和抗体效价低于 1∶4的 2月龄幼犬 ,观察接种犬临床表现、体温和剖检变化。结果表明 ,CCVYS1株毒力较强 ,CCVCI1株毒力较弱。采用RT_PCR方法扩增出两株病毒部分S基因序列 ,克隆于pUC1 9SmaI位点或pGEM_T载体中 ,以双脱氧末端终止法测定插入质粒的cDNA核苷酸序列。用PROSIS计算机软件推导氨基酸序列 ,并与从Genbank上查到的CCV、TGEV和FIPV相应氨基酸序列进行多重比较。分别推测 ,CCVS蛋白上Ac抗原位点的氨基酸残基可能是影响病毒毒力的因素之一。 展开更多
关键词 比较分析 犬冠状病毒 纤突蛋白基因 序列分析
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基于重组酶聚合酶扩增技术的犬冠状病毒快速检测方法的建立 被引量：2
17
作者 陈坚 张丹琳 +1 位作者 马磊 伍妙梨 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期88-90,94,共4页
为建立一种快速、简便检测犬冠状病毒(CCoV)的方法,本试验基于犬冠状病毒M基因的保守区域设计特异性引物,通过优化反应条件,建立了CCoV的重组酶聚合酶扩增检测方法(RT-RPA)。试验结果表明,所建立的RT-RPA方法在35℃恒温反应15 min即可... 为建立一种快速、简便检测犬冠状病毒(CCoV)的方法,本试验基于犬冠状病毒M基因的保守区域设计特异性引物,通过优化反应条件,建立了CCoV的重组酶聚合酶扩增检测方法(RT-RPA)。试验结果表明,所建立的RT-RPA方法在35℃恒温反应15 min即可检测出100个拷贝的体外转录RNA,且与犬的其他常见病毒,如犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒等,无非交叉反应,表明所建立的CCoV RT-RPA具有良好的特异性及较高的敏感性。使用RT-RPA对25份临床样品的检测结果显示,CCoV的检出率为48%(12/25),该结果与荧光定量PCR的检测结果完全一致。表明本试验所建立的CCoV RT-RPA检测方法操作简单、反应快速灵敏,适用于CCoV的快速检测。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 RT-RPA 快速检测
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犬瘟热—犬冠状病毒双重PCR诊断方法的建立及初步应用 被引量：1
18
作者 孙园园 赵鹏 +2 位作者 刘骏 王云 钱科 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期99-103,共5页
为更好的开展犬腹泻病的诊断与疫情监控,根据犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)的基因特征,建立了可快速鉴别诊断CDV和CCV的双重PCR方法。对GenBank中登录的21株CDV和17株CCV的野毒株、疫苗... 为更好的开展犬腹泻病的诊断与疫情监控,根据犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)的基因特征,建立了可快速鉴别诊断CDV和CCV的双重PCR方法。对GenBank中登录的21株CDV和17株CCV的野毒株、疫苗株基因组全序列进行比对分析,分别针对H蛋白和S蛋白编码区各设计了1对特异引物,分别扩增出大小为550和225bp的目的片段。回收目的片段插入到pMD18-T载体中进行测序鉴定,分别提取阳性质粒制备阳性标准DNA。通过优化试验条件,建立了检测CDV和CCV的双重PCR方法并对其进行灵敏度、特异性和临床验证。该双重PCR方法能特异的扩增CDV和CCV,且敏感性均达到0.1ng/μL总核酸量。与胶体金试纸条方法对比检测67份临床样品,符合率较高,CDV达到92.5%,CCV达到94%。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 犬冠状病毒 双重PCR
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成都市区犬冠状病毒病发病情况调查 被引量：3
19
作者 汪恒 彭广能 +1 位作者 邱贤猛 刘沙 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第7期59-60,共2页
关键词 犬冠状病毒病 发病情况调查 成都市区 细小病毒肠炎 成都地区 肠道传染病 水样腹泻 临床特征
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用套式PCR法检测犬冠状病毒的研究 被引量：1
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作者 乔军 孟庆玲 +2 位作者 贾桂珍 何宏彬 夏咸柱 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2000年第2期64-67,共4页
根据 Gen Bank中 Wesseling发表的犬冠状病毒 K378株纤突蛋白基因序列 ,设计合成了能扩增 372 bp基因片段的套式引物。用异硫氰酸胍—酚—仿一步抽取法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物进行套式 PCR扩增 ,并筛选出最佳套式 PCR扩... 根据 Gen Bank中 Wesseling发表的犬冠状病毒 K378株纤突蛋白基因序列 ,设计合成了能扩增 372 bp基因片段的套式引物。用异硫氰酸胍—酚—仿一步抽取法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物进行套式 PCR扩增 ,并筛选出最佳套式 PCR扩增条件。结果经套式 PCR扩增能得到与设计大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬 型腺病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验表明 ,此法能扩增出犬冠状病毒强毒细胞培养物 (毒价为 1 0 -4.2 TCID5 0 / 0 .1 ml) 1 0 -6稀释的反转录产物 ,远高于常规 RT PCR。经初步应用表明 。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 套式PCR法 临床诊断
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