小麦牻牛儿牻牛儿基脱氢酶基因的克隆及电子定位与表达分析 被引量：1

1

作者 胡英考 朱敬 +1 位作者 李雅轩 蔡民华 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期783-788,共6页

为更好地了解小麦维生素E的生物合成并将其应用于营养品质改良,以电子和实验克隆相结合的方法克隆分离了小麦牻牛儿牻牛儿基脱氢酶(GGH)基因的cDNA序列,序列号为DQ139268。序列分析结果表明,该cDNA序列含有一个完整的开放读码框,编码46... 为更好地了解小麦维生素E的生物合成并将其应用于营养品质改良,以电子和实验克隆相结合的方法克隆分离了小麦牻牛儿牻牛儿基脱氢酶(GGH)基因的cDNA序列,序列号为DQ139268。序列分析结果表明,该cDNA序列含有一个完整的开放读码框,编码462个氨基酸,含有保守的ChlP结构域,氮端有信号肽序列,定位于叶绿体中。氨基酸序列比对和系统发育分析结果显示,不同物种之间GGH基因编码的氨基酸序列同源性都较高。用生物信息学工具将该基因定位于小麦第六部分同源群的长臂上。RT-PCR和电子组织表达分析结果显示该基因在光合器官中表达量丰富,这可能与其亚细胞定位有关。 展开更多

关键词 小麦 牻牛儿牻牛儿基脱氢酶 基因克隆 电子表达分析

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日本百脉根■牛儿基■牛儿基氢化酶的电子克隆及进化分析

2

作者 李晓晓 李蕊 +2 位作者 李雅轩 蔡民华 胡英考 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第23期6145-6147,6150,共4页

根据物种间同源基因相对保守的特点,利用生物信息学的方法,以拟南芥牛儿基牛儿基氢化酶(GGH)基因cDNA序列为信息探针,搜索GenBank中的HTGs数据库,找到一个与之高度匹配的日本百脉根基因组DNA序列LJT46M09,用GENSCAN软件分析该序列得到... 根据物种间同源基因相对保守的特点,利用生物信息学的方法,以拟南芥牛儿基牛儿基氢化酶(GGH)基因cDNA序列为信息探针,搜索GenBank中的HTGs数据库,找到一个与之高度匹配的日本百脉根基因组DNA序列LJT46M09,用GENSCAN软件分析该序列得到一个包含2个外显子和1个内含子的基因。以此基因序列BLAST检索GenBank中的est-others数据库获得了同源的EST片段。进行EST拼接后得到该基因的cDNA序列,GenBank登录号为DQ013361,由1 389 bp核苷酸组成,具有完整的开放阅读框架(ORF),推测编码蛋白为462个氨基酸。推导的氨基酸序列与大豆、截形苜蓿、烟草、拟南芥、小麦、水稻的牛儿基牛儿基氢化酶基因氨基酸序列的一致率分别为91%、89%、84%、81%7、3%、74%。该基因与叶绿素等的生物合成有关。 展开更多

关键词 日本百脉根 牻牛儿基牻牛儿基氢化酶(GGH) 电子克隆 EST

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短链酰基辅酶A脱氢酶在心肌细胞凋亡中的作用 被引量：4

3

作者 曾振华 黄秋菊 +5 位作者 黄金贤 舒朝辉 刘培庆 陈少锐 刘冰 周四桂 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1589-1594,共6页

目的:研究短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-Co A dehydrogenase,SCAD)在心肌细胞凋亡中的变化,探讨其与心肌细胞凋亡之间的关系。方法:以叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t BHP)刺激心肌细胞建立凋亡模型。检测细胞存活... 目的:研究短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-Co A dehydrogenase,SCAD)在心肌细胞凋亡中的变化,探讨其与心肌细胞凋亡之间的关系。方法:以叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t BHP)刺激心肌细胞建立凋亡模型。检测细胞存活率、SCAD mRNA和蛋白表达、SCAD活性以及游离脂肪酸含量变化;并采用SCAD的最优干扰序列siRNA-1186进行干扰,观察其对心肌细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,在t BHP诱导的心肌细胞凋亡模型中,SCAD的mRNA和蛋白表达均显著下调。与阴性对照序列组相比,siRNA-1186干扰后心肌细胞的SCAD表达和活性明显下降,心肌细胞游离脂肪酸含量明显增加,同时,心肌细胞出现了明显凋亡,与t BHP诱导的心肌细胞凋亡趋势一致。结论:SCAD表达失调可能参与心肌细胞凋亡的过程,上调SCAD可能成为干预心肌细胞凋亡的重要环节之一。 展开更多

关键词 短链酰基辅酶A脱氢酶 心肌细胞 细胞凋亡 心力衰竭 能量代谢 叔丁基过氧化氢

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纤维二糖脱氢酶生成羟自由基和还原各种自由基的研究 被引量：2

4

作者 方靖 曲音波 高培基 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期448-452,共5页

利用电子顺磁共振（ＥＳＲ）技术和硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）反应研究了纤维二糖脱氢酶（ＣＤＨ）生成·ＯＨ和还原各种自由基的能力．以纤维二糖为电子供体时，ＣＤＨ可以生成·ＯＨ．·ＯＨ生成量与ＣＤＨ、Ｆｅ３＋和Ｏ２... 利用电子顺磁共振（ＥＳＲ）技术和硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）反应研究了纤维二糖脱氢酶（ＣＤＨ）生成·ＯＨ和还原各种自由基的能力．以纤维二糖为电子供体时，ＣＤＨ可以生成·ＯＨ．·ＯＨ生成量与ＣＤＨ、Ｆｅ３＋和Ｏ２的浓度有关．加入过氧化氢酶可使·ＯＨ的生成明显减少．ＣＤＨ可以还原自旋加合物［ＰＢＮ－ＯＨ］·、氮氧自由基和天然木素分子中的自由基．结果表明，ＣＤＨ具有生成·ＯＨ和还原各种自由基的能力． 展开更多

关键词 纤维二糖脱氢酶 自由基 木质纤维素降解

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篦子三尖杉牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆与序列分析 被引量：1

5

作者 齐小琼 胡晨熙 李大卫 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第4期79-82,共4页

三尖杉是我国特有植物,主要含有生物碱、黄酮及萜类等生物活性物质。以篦子三尖杉为试验材料,根据同源克隆的方法扩增三尖杉牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(GGPPS)基因,并通过生物信息的方法对该基因进行鉴定和分析。结果表明,篦子三尖杉GG... 三尖杉是我国特有植物,主要含有生物碱、黄酮及萜类等生物活性物质。以篦子三尖杉为试验材料,根据同源克隆的方法扩增三尖杉牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(GGPPS)基因,并通过生物信息的方法对该基因进行鉴定和分析。结果表明,篦子三尖杉GGPPS基因全长1 217 bp,含有1个完整的1 182 bp开放阅读框(ORF),编码393个氨基酸的蛋白序列,GGPPS蛋白相对分子量为43.042 ku,理论等电点(p I)为6.57,其二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成;蛋白质同源分析表明,三尖杉GGPPS含有多聚异戊二烯基合成酶家族中保守的5个特征性结构和2个富含天冬氨酸的区域;同源模建分析显示,三尖杉GGPPS具有GGPPS蛋白典型的三维结构,特别与薄荷GGPPS蛋白的三维结构及活性位点极其相似;系统进化分析表明,三尖杉GGPPS蛋白归属植物进化支,且与加拿大红豆杉、曼地亚红豆杉、海南粗榧的GGPPS蛋白归为同一分支。 展开更多

关键词 篦子三尖杉 萜类化合物 牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(GGPPS) 克隆 序列分析 同源模建 系统进化

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SBR法处理还原段DSD酸废水脱氢酶活性的研究 被引量：6

6

作者 严媛媛 孙力平 冯雷雨 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期87-89,共3页

对SBR法处理还原段DSD酸生产废水处理中污泥活性进行了分析。脱氢酶活性能及时准确地反映污泥活性变化,预知水质波动。在整个代谢过程中,总脱氢酶活性(Dt)和基质脱氢酶活性(Ds)变化规律相似;当了解体系大体情况时,Dt可代替Ds反映污泥活... 对SBR法处理还原段DSD酸生产废水处理中污泥活性进行了分析。脱氢酶活性能及时准确地反映污泥活性变化,预知水质波动。在整个代谢过程中,总脱氢酶活性(Dt)和基质脱氢酶活性(Ds)变化规律相似;当了解体系大体情况时,Dt可代替Ds反映污泥活性变化。Dt与可降解COD浓度之间较好的服从莫诺关系式,Dt具有生化反应速率的意义。研究表明,在温度为30℃,葡萄糖投加量为250mg/L,有机负荷为0.6kg(/kg·d),pH值为7的条件下,脱氢酶活性最高。 展开更多

关键词 SBR法 共基质代谢 还原段DSD酸生产废水 脱氢酶活性

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肝移植患者谷氨酸脱氢酶水平变化及临床意义 被引量：2

7

作者 吴志兰 张协丰 李月珍 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2004年第2期113-113,共1页

关键词 肝移植患者 谷氨酸脱氢酶 临床分析 线粒体基质

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兔肝缺血-再灌注损伤时乳酸脱氢酶活性的变化和左旋精氨酸的保护作用

8

作者 王万铁 王卫 +2 位作者 徐正祄 林丽娜 李东 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2003年第5期548-550,共3页

目的 :探讨兔肝缺血 再灌注损伤 (HIRI)时乳酸脱氢酶 (LDH)活性的变化和左旋精氨酸 (L Arg)的保护作用及其机制。方法 :实验兔 2 1只 ,随机分为对照组、盐水组和L Arg组 ,每组 7只。制作肝缺血 再灌注损伤模型 ,观察血清及肝组织LDH活... 目的 :探讨兔肝缺血 再灌注损伤 (HIRI)时乳酸脱氢酶 (LDH)活性的变化和左旋精氨酸 (L Arg)的保护作用及其机制。方法 :实验兔 2 1只 ,随机分为对照组、盐水组和L Arg组 ,每组 7只。制作肝缺血 再灌注损伤模型 ,观察血清及肝组织LDH活性、丙二醛 (MDA)浓度、超氧化物歧化酶 (SOD)活性、一氧化氮代谢产物 (NO-2 NO-3)水平的变化及L Arg对它们的影响。结果 :盐水组血清LDH活性进行性升高 (P <0 .0 1 ) ,肝组织内LDH、SOD活性和NO-2 NO-3水平明显下降 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ,而MDA含量显著增高 (P <0 .0 1 ) ;L Arg组变化不明显 ,与盐水组比较 ,血清及肝组织内LDH、SOD活性、MDA含量及NO-2 NO-3浓度 ,均有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。结论 :L Arg可通过降低体内氧自由基水平、提高一氧化氮水平 。 展开更多

关键词 药理学 缺血-再灌注损伤 肝脏 乳酸脱氢酶 左旋精氨酸 氧自由基 一氧化氮 兔

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免疫球蛋白G-葡萄糖脱氢酶结合物的研究

9

作者 杨曜中 金新根 《华东化工学院学报》 CSCD 1992年第3期296-300,共5页

介绍一种新的酶结合物的制备方法,研究了该结合物在酶联免疫吸附测定中的初步应用。通过2-亚氨硫杂戊烷的修饰反应,在葡萄糖脱氢酶、抗体(IgG)分子上分别引入新的游离巯基。巯基化的葡萄糖脱氢酶和免疫球蛋白G之间,通过双功能试剂二马... 介绍一种新的酶结合物的制备方法,研究了该结合物在酶联免疫吸附测定中的初步应用。通过2-亚氨硫杂戊烷的修饰反应,在葡萄糖脱氢酶、抗体(IgG)分子上分别引入新的游离巯基。巯基化的葡萄糖脱氢酶和免疫球蛋白G之间,通过双功能试剂二马来酰亚胺甲醚(进行)偶联,偶联产物由Sephacryl S-300柱层析纯化。按非竞争性固相双抗体夹心法,将精制的IgG-葡萄糖脱氢酶(A)结合物用于人白蛋白(Ⅰ),人甲胎蛋白(Ⅱ)和牛胰岛素(Ⅲ)的定量检测。在0～10 ng/mL范围内,Ⅰ和Ⅱ与A活性均呈良好的线性相关;但Ⅲ与A活性之间没有任何相应关系。 展开更多

关键词 脱氢酶 巯基 葡萄糖 免疫球蛋白G

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粘质沙雷氏菌膜结合葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及其酶学特性 被引量：1

10

作者 王贝贝 李昊聪 +4 位作者 孙文敬 崔凤杰 王大明 钱静亚 齐向辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第24期101-109,共9页

经超声破碎细胞、TritonX-114相分离、盐析、DEAE-sepharose离子交换层析和Hydroxyapatite吸附层析等步骤,从2-酮基葡萄糖酸(2-keogluconic acid,2KGA)生产菌株粘质沙雷氏菌JUIM03中获得比活力91.43 U/mg、纯化倍数160.4 倍的膜结合葡... 经超声破碎细胞、TritonX-114相分离、盐析、DEAE-sepharose离子交换层析和Hydroxyapatite吸附层析等步骤,从2-酮基葡萄糖酸(2-keogluconic acid,2KGA)生产菌株粘质沙雷氏菌JUIM03中获得比活力91.43 U/mg、纯化倍数160.4 倍的膜结合葡萄糖酸脱氢酶(gluconate dehydrogenase,GADH)。研究结果表明,粘质沙雷氏菌膜结合GADH由3 个亚基组成,其分子质量分别为65.0、45.0 kDa和23.0 kDa左右,是一种含有细胞色素C的黄素蛋白,能够催化氧化葡萄糖酸为2KGA。粘质沙雷氏菌膜结合GADH的最适反应温度为40 ℃,最适反应pH 5.0,在30 ℃以下、pH 5.0~6.0的条件下较为稳定;该酶具有严格的底物特异性,只有在D-葡萄糖酸作为底物时才具有催化活性,其Km值为1.33 mmol/L;一些金属离子(如Fe3+、Cu2+ 和Zn2+ )、有机溶剂(乙醇、异丙醇、甲醇和丙酮)、变性剂(十二烷基硫酸钠和巯基乙醇)以及有机酸(草氨酸和草酸)对膜结合GADH的催化活性具有明显的抑制作用。研究为粘质沙雷氏菌2KGA生物合成的过程优化与控制提供了一定的理论依据。 展开更多

关键词 粘质沙雷氏菌 2-酮基葡萄糖酸 膜结合葡萄糖酸脱氢酶 分离纯化 酶学特性

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依赖PQQ甲醇脱氢酶对底物催化专一性差的原因分析 被引量：1

11

作者 王冠芳 王银善 +1 位作者 徐宁 赵永芳 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第1期4-6,共3页

采用甲基营养杆菌NO .2为实验菌株 ,经超声波破细胞 ,酸处理 ,DEAE 纤维素和CM 纤维素柱层析等改进的纯化程序 ,可得到比活力为 12 .5u/mg的甲醇脱氢酶 (MDH)样品。该酶在测活系统中除能氧化甲醇等醇类化合物外 ,还能以较大速率氧化氯... 采用甲基营养杆菌NO .2为实验菌株 ,经超声波破细胞 ,酸处理 ,DEAE 纤维素和CM 纤维素柱层析等改进的纯化程序 ,可得到比活力为 12 .5u/mg的甲醇脱氢酶 (MDH)样品。该酶在测活系统中除能氧化甲醇等醇类化合物外 ,还能以较大速率氧化氯化铵、甲胺、脲等物质 ,MDH对不同底物亲和力的差异性主要取决于其辅基吡咯喹啉醌 (PQQ)与底物的结合力。 展开更多

关键词 甲醇脱氢酶 底物专一性 光谱差异 催化 PQQ 辅基

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阿尔泰金莲花提取物抑制变异链球菌乳酸脱氢酶活性及抗氧化活性研究 被引量：9

12

作者 姜敏 田树革 +1 位作者 李柯翱 季志红 《化学与生物工程》 CAS 2020年第9期44-49,共6页

采用微量稀释法测定了阿尔泰金莲花提取物对变异链球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),研究了阿尔泰金莲花提取物对变异链球菌的抑制作用,考察了阿尔泰金莲花提取物对变异链球菌产酸及乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,并通过测定阿... 采用微量稀释法测定了阿尔泰金莲花提取物对变异链球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),研究了阿尔泰金莲花提取物对变异链球菌的抑制作用,考察了阿尔泰金莲花提取物对变异链球菌产酸及乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,并通过测定阿尔泰金莲花提取物、牡荆素、荭草苷、抗坏血酸(VC)对DPPH自由基、ABTS自由基和·O^-2的清除率来评价阿尔泰金莲花提取物的抗氧化活性。结果表明,阿尔泰金莲花提取物的MIC为12.5 mg·mL^-1,MBC为25 mg·mL^-1;阿尔泰金莲花提取物浓度越大,对变异链球菌的抑制作用就越强;当阿尔泰金莲花提取物浓度在1/8MIC^MIC范围内时,随着阿尔泰金莲花提取物浓度的增大,培养18 h后菌悬液的ΔpH值越小,LDH活性也越低,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05);阿尔泰金莲花提取物对DPPH自由基、ABTS自由基和·O^-2均具有一定的清除作用,且在一定浓度范围内存在量效关系。初步探讨其抑菌作用机制可能是,通过抑制LDH活性从而抑制变异链球菌产酸,影响其代谢及生长。 展开更多

关键词 阿尔泰金莲花 变异链球菌 乳酸脱氢酶 抗氧化活性 自由基

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激动线粒体乙醛脱氢酶2对高糖诱导的大鼠心肌细胞MMP-14及TIMP-4的影响 被引量：2

13

作者 方婷婷 曹瑞平 +4 位作者 王文连 叶红伟 吴金欣 谷小雨 高琴 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期999-1004,共6页

目的探讨基质金属蛋白酶14(MMP-14)、基质金属蛋白酶组织抑制因子4(TIMP-4)是否参与线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)抗高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤。方法不同浓度葡萄糖干预原代大鼠心肌细胞,MTT法检测不同时间点细胞活力,确定高糖诱导的... 目的探讨基质金属蛋白酶14(MMP-14)、基质金属蛋白酶组织抑制因子4(TIMP-4)是否参与线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)抗高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤。方法不同浓度葡萄糖干预原代大鼠心肌细胞,MTT法检测不同时间点细胞活力,确定高糖诱导的心肌细胞损伤模型。实验分为正常对照组(NG,5.5 mmol·L^(-1))、NG+ALDH2激动剂Alda-1组、高糖组(HG,30 mmol·L^(-1)),HG+Alda-1组。MTT法和DHE染色分别检测细胞活力及氧化应激水平,Western blot检测ALDH2、MMP-14、TIMP-4蛋白表达。结果根据细胞活力检测确定30 mmol·L^(-1)葡萄糖干预48 h为损伤模型。与NG组比较,HG组细胞活力、ALDH2、MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值均降低,氧化应激、TIMP-4蛋白水平升高;与HG组比较,Alda-1干预后细胞活力、ALDH2及MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值升高,氧化应激及TIMP-4蛋白表达降低。结论激动ALDH2可改善高糖引起的心肌细胞损伤,可能与抑制氧化应激、促进MMP-14蛋白表达、抑制TIMP-4蛋白表达有关。 展开更多

关键词 原代心肌细胞 高糖 氧化应激 线粒体乙醛脱氢酶2 基质金属蛋白酶14 基质金属蛋白酶组织抑制因子4

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羟自由基诱导心肌细胞损伤时ATP酶等变化 被引量：3

14

作者 楼兰花 骆红梅 《中国心血管杂志》 2003年第6期393-394,397,共3页

目的　探讨外源性羟自由基诱导乳鼠心肌细胞损伤的作用机理。方法　采用 Fe SO4 / H2 O2 产生系统 ,羟自由基诱导心肌细胞损伤 ,观察乳鼠心肌细胞内 Na+、K+ - ATP酶 ,Ca2 +、Mg2 + - ATP酶和丙二醛 (MDA)含量及其上清液中乳酸脱氢酶 (L... 目的　探讨外源性羟自由基诱导乳鼠心肌细胞损伤的作用机理。方法　采用 Fe SO4 / H2 O2 产生系统 ,羟自由基诱导心肌细胞损伤 ,观察乳鼠心肌细胞内 Na+、K+ - ATP酶 ,Ca2 +、Mg2 + - ATP酶和丙二醛 (MDA)含量及其上清液中乳酸脱氢酶 (L DH)与一氧化氮 (NO)含量变化。结果　心肌细胞中 Na+、K+ - ATP酶 ,Ca2 +、Mg2 + - ATP酶减少 ,MDA含量增加 ,与对照组相比较 ,具有显著性差异 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ;上清液中 L DH和 NO漏出增加 ,与对照组相比较 ,均具有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　羟自由基诱导心肌细胞中 Na+ 、K+ - ATP酶 ,Ca2 + 、Mg2 + - ATP酶减少 ,MDA及其上清液中 L DH和 NO漏出增加。从而揭示外源性羟自由基可能通过增加膜脂质过氧化 ,引起 ATP酶失活及膜结构破坏等 。 展开更多

关键词 心肌细胞 羟自由基 ATP酶 丙二醛 乳酸脱氢酶

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新型基质对生物膜微生物数量和酶活性的影响 被引量：1

15

作者 马恒轶 葛利云 +1 位作者 吴灵萍 邓欢欢 《浙江农业科学》 2018年第2期200-202,205,共4页

为了探究新型人工基质能否对水体微环境起到改善作用,对同一河段中种植植物的新型人工基质、新型人工基质和石头基质上生物膜磷酸酶、脲酶和脱氢酶活性及微生物总数进行测定。结果表明,微生物数量在秋季最高,磷酸酶和脲酶活性在秋季最高... 为了探究新型人工基质能否对水体微环境起到改善作用,对同一河段中种植植物的新型人工基质、新型人工基质和石头基质上生物膜磷酸酶、脲酶和脱氢酶活性及微生物总数进行测定。结果表明,微生物数量在秋季最高,磷酸酶和脲酶活性在秋季最高,而脱氢酶活性夏季最高、秋季最低。在同一季节,3种酶活性都表现出种植植物的新型人工基质>新型人工基质>石头基质的趋势,微生物数量的变化趋势也与此一致。新型人工基质相对石头基质显著提高了生物膜上的微生物总数和磷酸酶、脲酶和脱氢酶活性。 展开更多

关键词 为了探究新型人工基质能否对水体微环境起到改善作用 对同一河段中种植植物的新型人工基质、新型人工基质和石头基质上生物膜磷酸酶、脲酶和脱氢酶活性及微生物总数进行测定.结果表明 微生物数量在秋季最高 磷酸酶和脲酶活性在秋季最高 而脱氢酶活性夏季最高、秋季最低.在同一季节 3种酶活性都表现出种植植物的新型人工基质>新型人工基质>石头基质的趋势 微生物数量的变化趋势也与此一致.新型人工基质相对石头基质显著提高了生物膜上的微生物总数和磷酸酶、脲酶和脱氢酶活性.

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茉莉花JsGGPPS基因的克隆及生物信息学与表达分析 被引量：8

16

作者 孙君 林浥 +4 位作者 俞滢 陈静 姚雪倩 陈桂信 叶乃兴 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第4期350-355,共6页

牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(Geranylgerany pyrophosphate synthase,GGPPS)是萜烯类香气物质合成途径中的关键酶。采用RT-PCR和RACE相结合的方法,克隆了茉莉花牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶基因的全长cDNA(命名为JsGGPPS,GenBank登录号AI... 牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(Geranylgerany pyrophosphate synthase,GGPPS)是萜烯类香气物质合成途径中的关键酶。采用RT-PCR和RACE相结合的方法,克隆了茉莉花牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶基因的全长cDNA(命名为JsGGPPS,GenBank登录号AIY24421.1),采用实时荧光定量PCR技术分析JsGGPPS基因在茉莉花开放过程中的表达模式。结果表明,JsGGPPS全长cDNA为1 410bp,含1 083bp完整的开放阅读框(ORF),其推导的氨基酸序列包含360个氨基酸,属于trans-isoprenyl diphosphate synthases(IPPS)和class I terpene cyclases家族,含链长控制区(CLDR)、2个天冬氨酸富集区以及其他保守区。JsGGPPS基因与独行菜Lepidium apetalum、橡胶草Taraxacum kok-saghyz的同源性分别为91%、86%。实时荧光定量PCR结果表明,茉莉花开放过程中JsGGPPS基因在晚上18:00时表达量较低,呈上调趋势,在22:00时达到最高,呈下调趋势,在翌日2:00时表达量最低,与茉莉花释香趋势相似,为深入研究茉莉花萜烯类香气物质代谢途径奠定基础。 展开更多

关键词 茉莉花 萜烯类 香气 牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶 克隆 表达分析

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绿脓杆菌外毒素A对兔角膜基质细胞的毒性作用 被引量：3

17

作者 郝继龙 王菲 +2 位作者 周鸿雁 赵文霞 谷树严 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期488-490,共3页

目的:探讨绿脓杆菌外毒素A兔对角膜基质细胞的毒性作用。方法:含兔角膜基质细胞(1×105.mL-1)三维胶原凝胶表面添加提纯的不同浓度绿脓杆菌外毒素A(0.1、1.0和10 mg.L-1)后,放入无血清MEM培养液中37℃培养24 h,采用光学显微镜观察... 目的:探讨绿脓杆菌外毒素A兔对角膜基质细胞的毒性作用。方法:含兔角膜基质细胞(1×105.mL-1)三维胶原凝胶表面添加提纯的不同浓度绿脓杆菌外毒素A(0.1、1.0和10 mg.L-1)后,放入无血清MEM培养液中37℃培养24 h,采用光学显微镜观察培养的兔角膜基质细胞形态学变化,采用酶联免疫吸附法检测损伤的兔角膜基质细胞释放的乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:添加不同浓度绿脓杆菌外毒素A(0.1、1.0和10 mg.L-1)各组兔角膜基质细胞释放的LDH,与不添加绿脓杆菌外毒素A组比较,差异均有显著性(P<0.01)。添加不同浓度绿脓杆菌外毒素A各组较不添加绿脓杆菌外毒素A组,角膜基质细胞形态发生变化,细胞由长纺锤形变为圆形,细胞伪足减少。结论:绿脓杆菌外毒素A,破坏角膜基质细胞,对兔角膜基质细胞毒性作用有剂量依赖性。 展开更多

关键词 假单胞菌 铜绿 角膜基质细胞 外毒素类 乳酸脱氢酶

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基于杨木发酵产异丁醇大肠杆菌工程菌构建 被引量：3

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作者 王启业 王义强 +3 位作者 田宇 彭牡丹 陈章靖 陆利 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期157-164,共8页

【目的】克隆异丁醇生物合成途径中的2个关键酶基因——乙醇脱氢酶基因(adh2)和2-酮酸脱羧酶基因(kivd),构建产异丁醇的工程大肠杆菌;进一步以杨木水解液为底物进行发酵,以期能利用木质纤维原料发酵生产异丁醇,为异丁醇的可再生生产提... 【目的】克隆异丁醇生物合成途径中的2个关键酶基因——乙醇脱氢酶基因(adh2)和2-酮酸脱羧酶基因(kivd),构建产异丁醇的工程大肠杆菌;进一步以杨木水解液为底物进行发酵,以期能利用木质纤维原料发酵生产异丁醇,为异丁醇的可再生生产提供研究基础。【方法】分别以酿酒酵母总DNA和乳酸乳球菌总DNA为模板,通过PCR扩增异丁醇生物合成途径关键酶基因adh2和kivd。同时构建重组质粒pSTV-29-adh2和pSTV-29-kivd,分别转化大肠杆菌DH5α,构建重组菌株E.coli DH5α-pSTV-29-adh2和E.coli DH5α-pSTV-29-kivd。进一步构建串联表达质粒pSTV-29-adh2-kivd,导入大肠杆菌DH5α中,构建重组工程菌E.coli DH5α-pSTV-29-adh2-kivd。各重组菌株经IPTG诱导表达后,采用BCA蛋白定量试剂盒测定其粗酶提取液中目的蛋白含量,并通过SDS-PAGE电泳检测重组菌株E.coli DH5α-pSTV-29-adh2,E.coli DH5α-pSTV-29-kivd和E.coli DH5α-pSTV-29-adh2-kivd中目的基因adh2和kivd的蛋白表达量。利用各重组菌E.coli DH5α分别以葡萄糖和杨木水解液为原料发酵生产异丁醇,采用气相色谱检测发酵液中异丁醇含量。【结果】重组质粒pSTV-29-adh2,pSTV-29-kivd和pSTV-29-adh2-kivd经菌液PCR、酶切及测序验证,得到的片段大小与目的基因adh2(1 067 bp)和kivd(1 667 bp)大小和质粒载体pSTV-29(2 999 bp)大小相符,adh2和kivd基因测序结果与NCBI中对应基因序列完全一致,表明表达载体pSTV-29-adh2,pSTV-29-kivd和pSTV-29-adh2-kivd构建成功。蛋白含量测定结果和SDS-PAGE电泳检测结果显示,目的基因adh2,kivd的蛋白在各重组菌中均得到表达,在电泳图谱中的对应位置40 k D(Adh2蛋白分子质量40 k D)和70 k D(Kivd蛋白分子质量70 k D)处均有明显的蛋白特征条带,且adh2基因编码的乙醇脱氢酶蛋白比kivd基因编码的2-酮酸脱羧酶蛋白表达量高,而空白对照菌株未出现任何蛋白特征条带,表明各重组菌E.coli DH5α-pSTV-29-adh2,E.coli DH5α-pSTV-29-kivd和E.coli DH5α-pSTV-29-adh2-kivd构建成功。在发酵试验中,只有重组菌E.coli DH5α-pSTV-29-adh2-kivd能产异丁醇,以葡萄糖为底物的发酵液中异丁醇产量为4.1 g·L-1,以杨木水解液为底物的发酵液中异丁醇产量为0.14 g·L-1,而重组菌E.coli DH5α-pSTV-29-adh2和E.coli DH5α-pSTV-29-kivd的发酵液中均未检测到异丁醇。结果表明,只有adh2和kivd在重组菌E.coli DH5α体内同时表达时才能利用缬氨酸途径生物合成异丁醇。【结论】成功构建了产异丁醇大肠杆菌工程菌E.coli DH5α-pSTV-29-adh2-kivd,实现了异丁醇关键酶基因在大肠杆菌中的表达及木质纤维发酵产异丁醇,为发酵法生产异丁醇提供了一条新的途径。 展开更多

关键词 异丁醇 重组大肠杆菌 乙醇脱氢酶基因 2-酮基异戊酸脱羧酶 木质纤维水解液

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缩醛基毛冬青提取化合物R4对缺氧/复氧大鼠心肌细胞的保护作用 被引量：6

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作者 付晓春 徐哲 陈建军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2082-2085,共4页

目的:探讨缩醛基毛冬青提取化合物R4对缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用及其机制。方法:采用原代培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常细胞培养组和缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤+缩醛基毛冬青提取化合物R4(... 目的:探讨缩醛基毛冬青提取化合物R4对缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用及其机制。方法:采用原代培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常细胞培养组和缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤+缩醛基毛冬青提取化合物R4(5、10、20μmol/L)组和缺氧/复氧损伤+verapamil(5μmol/L)组。用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性,硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量,MTT染色法测定线粒体脱氢酶活性改变,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性变化,Griess法测定一氧化氮(NO)的含量。结果:缩醛基毛冬青提取化合物R4可显著提高缺氧/复氧损伤心肌细胞内SOD的活性及细胞内线粒体脱氢酶活性,能显著抑制LDH的活性、MDA的生成以及提高NO的含量,并能明显抑制心肌细胞凋亡。结论:缩醛基毛冬青提取化合物R4具有明显抗缺氧/复氧损伤、保护心肌细胞的作用。 展开更多

关键词 缩醛基毛冬青提取化合物R4 心肌细胞 超氧化物歧化酶 丙二醛 乳酸脱氢酶 缺氧/复氧

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马尾松GGPPS基因cDNA序列克隆及正义、反义植物表达载体的构建 被引量：1

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作者 陈博雯 覃子海 +3 位作者 王鹏良 贾婕 陈虎 刘海龙 《山西农业科学》 2015年第9期1102-1105,共4页

以马尾松幼苗针叶组织为材料,依据Genbank中已报道的GGPPS基因CDS区序列设计特异引物,经RT-PCR技术克隆得到GGPPS基因cDNA序列。克隆片段经酶解后分别正向、反向插入植物表达载体p-GFP,构建成GGPPS基因正义、反义植物表达载体。采用冻... 以马尾松幼苗针叶组织为材料,依据Genbank中已报道的GGPPS基因CDS区序列设计特异引物,经RT-PCR技术克隆得到GGPPS基因cDNA序列。克隆片段经酶解后分别正向、反向插入植物表达载体p-GFP,构建成GGPPS基因正义、反义植物表达载体。采用冻融法将重组质粒导入农杆菌菌株LBA4404,建立植物表达载体系统,为下一步植物转化研究过表达、抑制表达GGPPS基因对萜烯类物质合成的影响建立研究基础。 展开更多

关键词 马尾松 牻牛儿牻牛儿基焦磷酸合酶 正义表达载体 反义表达载体

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