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滇龙胆GrDXR基因特异性片段的克隆
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作者 桂子昌 李猛 张晓东 《天津农业科学》 CAS 2018年第3期5-8,共4页
GrDXR基因功能分析是揭示滇龙胆中MEP途径的基础,试验提取滇龙胆总RNA,通过RT-PCR技术进行进行扩增,所获得片段连接T载体后,进行测序,并进行序列分析。结果获得了279 bp的基因片段,将测序结果与原基因序列进行比对,确认序列为GrDXR基因... GrDXR基因功能分析是揭示滇龙胆中MEP途径的基础,试验提取滇龙胆总RNA,通过RT-PCR技术进行进行扩增,所获得片段连接T载体后,进行测序,并进行序列分析。结果获得了279 bp的基因片段,将测序结果与原基因序列进行比对,确认序列为GrDXR基因特异片段,为阐明其基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 滇龙胆 GrDXR基因 特异性片段 基因克隆
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调节破骨细胞分化的RANK特异性cDNA片段的研究 被引量:3
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作者 许多荣 罗绍凯 +3 位作者 苏畅 方荸荠 黄珊 李娟 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-5,共5页
【目的】在生理条件下寻找调节破骨细胞(OC)分化的核转录因子NF-κB受体激动剂(RANK)的特异性cDNA功能片段,为研究OC分化机制提供理论基础。【方法】先将RANK膜内部分的1.2kb大小的cDNA分成20个片段,用缺失突变的方法构建出20个由肿瘤... 【目的】在生理条件下寻找调节破骨细胞(OC)分化的核转录因子NF-κB受体激动剂(RANK)的特异性cDNA功能片段,为研究OC分化机制提供理论基础。【方法】先将RANK膜内部分的1.2kb大小的cDNA分成20个片段,用缺失突变的方法构建出20个由肿瘤坏死因子受体1和RANK跨膜和膜内部分组成的TNFR1/RANK嵌合体的突变体,每一个突变体在RANK膜内部分含60bp缺失。再将RANK-cDNA第1561~1680bp之间的120bp片段分为10个片段,构建10个新的TNFR1/RANK突变体,每一个突变体在其RANK膜内部分含12bp缺失。用包装细胞PlatE分别将各突变体包装成逆转录病毒,通过感染分别将这些逆转录病毒转染到肿瘤坏死因子受体1和2基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞(BMM)中。用TNFɑ刺激后、观察哪一个突变体不能诱导OC形成。【结果】首先发现表达TNFR1/RANK1561-1620或TNFR1/RANK1621-1680的逆转录病毒感染的BMM不能分化成OC,然后在RANK-cDNA第1561~1680bp这个大的片段中又发现表达TNFR1/RANK1597-1608、TNFR1/RANK1609-1620、TNFR1/RANK1621-1632或TNFR1/RANK1633-1644的逆转录病毒感染的BMM也不能分化成OC。【结论】RANK-cDNA第1597~1644bp之间的48bp片段(5′-gggcaggtgatgaacttcaagggtgacatcatcgtggtgtatgtcagc-3′)对OC形成起决定性作用。 展开更多
关键词 RANK异性cDNA片段 嵌合体 破骨细胞 分化
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片段长度差异等位基因特异性PCR—一种改良的SNP分型新方法 被引量:18
3
作者 黄代新 杨庆恩 赵贵森 《法医学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期11-14,共4页
目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末... 目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末端分别与SNP两个等位基因碱基配对的上游引物,同时在两个等位基因特异性引物3'端第3或第4位碱基引入错配以增加特异性,下游为公用引物。PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带后确定样本的基因型。结果不同SNP纯合子为长度不同的单一谱带,杂合子则为两条带,其结果与直接测序完全一致。两条特异性上游引物3'端第3或第4位碱基引入错配后非特异性延伸显著减少,且对PCR反应条件的严格性要求明显降低。结论片段长度差异等位基因特异性PCR是一种简单快速而有效的SNP分型新方法;两条特异性引物3'端第3。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 片段长度差异等位基因异性PCR 碱基错配 法医物证检验学
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基于竞争性杂交方法的猪-肠道微生物特异性互作靶点发掘 被引量:1
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作者 樊丽华 莫虹斐 +2 位作者 张晓峰 帅江冰 陈青 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期163-172,共10页
动物肠道中存在着一些参与猪肠道微生物互作的基因,这些基因具有一定的宿主特异性,利用其设计分子标记能准确识别粪便污染来源。该文共采集6个物种(猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅)的145个粪便样品,提取其DNA后利用竞争性杂交的基因片段富集方... 动物肠道中存在着一些参与猪肠道微生物互作的基因,这些基因具有一定的宿主特异性,利用其设计分子标记能准确识别粪便污染来源。该文共采集6个物种(猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅)的145个粪便样品,提取其DNA后利用竞争性杂交的基因片段富集方法(genome fragment enrichment,GFE),靶向筛选参与猪肠道微生物互作的特异性基因。经BLASTX分析发现,82%的猪特异性非冗余DNA片段存在相似序列,以拟杆菌纲(Bacteroidetes)(43.2%)、梭菌纲(Clostridia)(19.5%)、芽孢杆菌纲(Bacilli)(8.6%)相似序列为主。从蛋白质功能方面分析,61.5%的非冗余序列功能明确,有7.6%的序列与信息贮存及加工有关,12.8%的序列与细胞加工及信息传导有关,22%的序列与代谢有关,其中,碳水化合物和氨基酸的转移代谢相关序列含量最为丰富,均占总特异性序列的6.3%。研究发现,能够编码拟杆菌纲(Bacteroidetes)和梭菌纲(Clostridials)等表面蛋白、膜分泌蛋白及碳水化合物代谢蛋白的相关基因可作为猪特异性分子标记筛选的靶点。 展开更多
关键词 非点源污染 竞争性杂交 异性基因组片段富集 功能注释 异性分子标记
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簇毛麦基因组特异DNA序列标记的建立和应用 被引量:3
5
作者 迟世华 杨足君 +3 位作者 冯娟 周建平 刘成 任正隆 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期1-5,共5页
为建立簇毛麦基因组特异DNA序列的分子标记,以普通小麦中国春、绵阳11、川农17和R111以及多年生簇毛麦、硬粒小麦-多年生簇毛麦双二倍体TDB-3为材料,用120条随机引物进行RAPD分析,筛选出一个多年生簇毛麦的特异性RAPD片段,克隆测序表明... 为建立簇毛麦基因组特异DNA序列的分子标记,以普通小麦中国春、绵阳11、川农17和R111以及多年生簇毛麦、硬粒小麦-多年生簇毛麦双二倍体TDB-3为材料,用120条随机引物进行RAPD分析,筛选出一个多年生簇毛麦的特异性RAPD片段,克隆测序表明该片段全长为937 bp(记为OPM2937)。以OPM2937的DNA序列为基础设计了一对特异引物,并用该特异引物对多年生簇毛麦、二倍体簇毛麦以及中国春-二倍体簇毛麦附加系CSDA1V^CSDA7V与小麦-多年生簇毛麦衍生后代进行了扩增,结果表明,凡具有簇毛麦染色体的材料均可扩增出目标DNA片段,而不具簇毛麦染色体的材料均未能得到扩增。将OPM2937在NCBI中进行序列比对,发现它是一个新的序列,说明OPM2937为簇毛麦基因组的一个特异序列,该DNA序列标记可用于快速跟踪检测小麦背景中的簇毛麦染色体。 展开更多
关键词 簇毛麦属 RAPD 基因组异性DNA片段
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前体mRNA剪接蛋白Tra2α特异抗体的制备和鉴定
6
作者 陈献华 林万敏 +3 位作者 孙凯华 黄嘉 汪凌 徐平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期682-686,共5页
目的 :制备用于检测人胚胎组织Tra2α蛋白的特异抗体。方法 :选择Tra2α中特有的一段编码序列 (第 5 2~ 16 5位核苷酸 ) ,通过克隆至pGEX 3x表达载体形成GST融合基因 ,并以诱导表达和纯化的该融合蛋白为抗原免疫新西兰兔 ,获得了抗Tra... 目的 :制备用于检测人胚胎组织Tra2α蛋白的特异抗体。方法 :选择Tra2α中特有的一段编码序列 (第 5 2~ 16 5位核苷酸 ) ,通过克隆至pGEX 3x表达载体形成GST融合基因 ,并以诱导表达和纯化的该融合蛋白为抗原免疫新西兰兔 ,获得了抗Tra2α的血清。结果 :免疫印迹 (Westernblot)检测结果显示 ,该血清能特异地与人胎脑组织中的Tra2α蛋白结合。免疫组织化学结果显示 ,该血清能用于人胎脑组织中Tra2α蛋白分布的检测。结论 :所制备的抗血清具有很好的特异性 ,可用于人胚胎组织中Tra2α蛋白的检测。 展开更多
关键词 制备 鉴定 Tra2α 前体mRNA剪接蛋白 异性抗原片段 抗体
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J-亚群禽白血病JL-2株的分离鉴定 被引量:10
7
作者 宋素泉 付朝阳 +3 位作者 高宏雷 王笑梅 王英 魏萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期345-349,共5页
近年来 ,J_亚群禽白血病的暴发流行在国内时有报道 ,在本研究中 ,自吉林某患病鸡群分离出一株病毒 ,采用特异性引物 ,经RT_PCR扩增出长度为 5 4 5bp的J_亚群禽白血病病毒特异性核苷酸片段 ;将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖 ,获取其前病毒... 近年来 ,J_亚群禽白血病的暴发流行在国内时有报道 ,在本研究中 ,自吉林某患病鸡群分离出一株病毒 ,采用特异性引物 ,经RT_PCR扩增出长度为 5 4 5bp的J_亚群禽白血病病毒特异性核苷酸片段 ;将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖 ,获取其前病毒DNA ,依据原型毒株HPRS_10 3cDNA序列设计并合成一对引物 ,经PCR扩增得到包括gp85、gp37、E_element基因在内的近 1.8kb的DNA片段 ,将其连到pMD18_T载体上 ,转化大肠杆菌JM10 9,培养后提取质粒分别用HindIII,BamHI进行单酶切和双酶切鉴定 ,得到了阳性重组质粒pMD18_T_JL2 /env ,核苷酸序列测定结果表明 ,该片段为J_亚群禽白血病病毒囊膜基因 ,其中亚型特异性片段gp 85和标准对照毒株HPRS_10 3的同源率为 94 % ,所编码氨基酸的同源率为 87%。 展开更多
关键词 J-亚群禽自血病病毒 亚型特异性片段gp85 克隆及序列测定
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猪瘟强毒与弱毒鉴别检测方法的研究进展 被引量:1
8
作者 沈志强 谢金文 +2 位作者 王金良 曲光刚 祖立闯 《养猪》 2015年第1期97-101,共5页
猪瘟(Classical swine fever,CSF)以前又名烂肠瘟,是由黄病毒科黄病毒属的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病,临床上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征。猪瘟... 猪瘟(Classical swine fever,CSF)以前又名烂肠瘟,是由黄病毒科黄病毒属的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病,临床上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征。猪瘟具有高度传染性,主要通过呼吸道和消化道传播,传播速度快、发病率和死亡率高,给养猪业造成了巨大的经济损失; 展开更多
关键词 CSFV 野毒株 高度传染性 swine 弱毒疫苗 单克隆抗体 特异性片段 疫苗株 实时荧光定量 弱毒株
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小鹅瘟快速诊断技术的建立及其应用 被引量:2
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作者 虞德屏 韦平 +1 位作者 阳艳 蒙秋 《广西畜牧兽医》 2004年第2期69-71,共3页
关键词 小鹅瘟 快速诊断技术 肠炎疾病 种鹅 参考毒株 鹅副粘病毒病 特异性片段 灭菌三蒸水 方定一 鹅细小病毒
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云南黑山羊性别决定基因体外扩增研究
10
作者 兰蓉 杨红远 洪琼花 《云南畜牧兽医》 2004年第4期1-2,共2页
对云南黑山羊 (10♂ ,2♀ )的基因组DNA性别决定基因 (SRY)进行了体外PCR扩增的研究 ,结果表明适当引物可特异性扩增出雄性个体的性别决定基因片段 (大小约为 185bp) ,而对雌性个体则不能扩增出任何片段 ;研究还利用已筛选出的性别决定... 对云南黑山羊 (10♂ ,2♀ )的基因组DNA性别决定基因 (SRY)进行了体外PCR扩增的研究 ,结果表明适当引物可特异性扩增出雄性个体的性别决定基因片段 (大小约为 185bp) ,而对雌性个体则不能扩增出任何片段 ;研究还利用已筛选出的性别决定基因特异性引物对少量的胚胎细胞进行了特异性扩增 ,检测了 2 0枚云南黑山羊的胚胎 ,其中有 5枚胚胎可扩增出约为 185bp的特异性片段。以上结果为山羊胚胎早期性别鉴定奠定了技术基础。 展开更多
关键词 黑山羊 性别决定基因 胚胎 异性引物 性别鉴定 特异性片段 基因组DNA 体外扩增 早期 研究
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二联PCR检测PPV和JEV混合感染的方法研究
11
作者 曹洪志 李成贤 吴玉疆 《猪业科学》 2023年第5期60-64,共5页
本试验建立了一种同时检测猪细小病毒(PPV)和猪传染性乙型脑炎病毒(JEV)混合感染的二联PCR方法。采用Primer Premier5.0和Oligo6.0引物设计软件根据GenBank中已发表的PPV-VRI-1株(基因序列号AY390557)的NS1、JEV-WHe株(基因序列号为EF10... 本试验建立了一种同时检测猪细小病毒(PPV)和猪传染性乙型脑炎病毒(JEV)混合感染的二联PCR方法。采用Primer Premier5.0和Oligo6.0引物设计软件根据GenBank中已发表的PPV-VRI-1株(基因序列号AY390557)的NS1、JEV-WHe株(基因序列号为EF107523)的NS1基因序列设计了2对引物;分别扩增长度为750 bp、475 bp的特异性片段。 展开更多
关键词 混合感染 NS1基因 JEV 特异性片段 PPV 引物设计
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一种大豆SNP分型新方法 被引量:8
12
作者 袁翠平 李英慧 +3 位作者 刘章雄 关荣霞 常汝镇 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期447-453,459,共8页
单核苷酸多态性(SNP)在大豆基因组中分布广泛,SNP分型是大豆SNP遗传作图,关联分析、分子标记辅助选择等研究的重要技术。本文以Rhg4基因开发的5个SNP为例,介绍了一种大豆SNP分型的新方法-片段长度差异等位基因特异性PCR(FLDAS-PCR)。采... 单核苷酸多态性(SNP)在大豆基因组中分布广泛,SNP分型是大豆SNP遗传作图,关联分析、分子标记辅助选择等研究的重要技术。本文以Rhg4基因开发的5个SNP为例,介绍了一种大豆SNP分型的新方法-片段长度差异等位基因特异性PCR(FLDAS-PCR)。采用AS-PCR原理,针对某个SNP位点设计2条相差4-5bp的特异引物和1个公用引物,PCR产物约100bp或150bp,2种等位基因型PCR产物相差4-5bp,在2个特异引物3′端第3和4碱基位置分别人为引入错配碱基来提高PCR特异性,通过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可将纯合和杂合基因型检测出来。探讨了特异引物浓度和退火温度对Rhg4-1592扩增效果的影响,研究表明,可通过调整特异引物浓度和退火温度优化扩增效果。FLDAS-PCR对18份种质分型结果与PCR产物克隆测序法一致,表明本研究建立的FLDAS-PCR法是一种简便、快捷、新型的大豆SNP分型方法。 展开更多
关键词 大豆 SNP 分型 片段长度差异等位基因异性PCR
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基于SLAF测序分析3个塔形马蹄螺群体的遗传结构和多样性 被引量:1
13
作者 黄景 欧泽奎 +1 位作者 刘文广 何毛贤 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1-18,共18页
塔形马蹄螺(Tectus pyramis),海洋软体动物,广泛分布于中国深圳大鹏湾、海南岛、西沙和南沙群岛的珊瑚礁生态系统中。文章采用特异性位点扩增片段简化基因组测序技术(SLAF-seq)对来自深圳(SZ)、三亚(SY)和西沙(XS)的塔形马蹄螺群体的遗... 塔形马蹄螺(Tectus pyramis),海洋软体动物,广泛分布于中国深圳大鹏湾、海南岛、西沙和南沙群岛的珊瑚礁生态系统中。文章采用特异性位点扩增片段简化基因组测序技术(SLAF-seq)对来自深圳(SZ)、三亚(SY)和西沙(XS)的塔形马蹄螺群体的遗传多样性和结构进行分析。通过测序共获得115.74Mb读长数据,平均测序深度为337.87倍,测序质量值(Q30)平均为94.07%。研究获得118679个多态性SLAF标签,获得846502个高度一致的群体单核苷酸多态性位点(SNPs),其中有155个显著差异SNPs。3个群体的平均观察杂合度(Ho)和期望杂合度(He)值分别为0.1441~0.1611和0.2537~0.2695。平均多态性信息含量(PIC)为0.2048~0.2176。通过系统发育树分析、主成分分析和聚类分析,将45个个体大致分为3个类群,每个群体的所有个体都可以聚类成一个类群。SZ和SY群体的遗传结构相似,遗传距离最低(0.2510),遗传分化系数Fst值最低(0.0818)。但XS与其他两个群体间的遗传分化明显,尤其是XS和SZ群体(Fst=0.1868)。3个群体的遗传分化可能与海流和地理位置有关。 展开更多
关键词 异性位点扩增片段 塔形马蹄螺(Tectus pyramis) 遗传结构 种质资源
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长牡蛎(Crassostrea gigas)17个EST-SNP标记的开发 被引量:7
14
作者 王绍宗 李莉 +1 位作者 亓海刚 张国范 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期274-281,共8页
利用长牡蛎已有的EST序列数据库,筛选得到候选SNP位点共计1140个。根据候选SNP位点共设计引物82组,通过片段长度差异等位基因特异性PCR(fragment length discrepant allele specific PCR,FLDAS-PCR)的分型方法,在一野生群体中进行检测... 利用长牡蛎已有的EST序列数据库,筛选得到候选SNP位点共计1140个。根据候选SNP位点共设计引物82组,通过片段长度差异等位基因特异性PCR(fragment length discrepant allele specific PCR,FLDAS-PCR)的分型方法,在一野生群体中进行检测和验证,结果共有17个SNP候选位点显示多态性。研究结果表明,通过基于EST数据库的SNP开发,可以有效弥补某些海洋生物因基因组学滞后影响SNP标记开发的现状。 展开更多
关键词 长牡蛎 单核苷酸多态性 表达序列标签 片段长度差异等位基因异性PCR
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锦鲤昏睡病(KSD)的实验室诊断分析(下)
15
作者 刘群 王菁 +3 位作者 刘桐山 王钢 韩进刚 冯守明 《科学养鱼》 2021年第6期52-53,共2页
4.寄生虫检测和细菌分离结果经制片和显微观察,所检锦鲤病鱼组织均未观察到寄生虫。将病鱼脑、肝胰脏、脾、肾组织病料接种于LB平板上,28℃培养24小时,未见细菌生长。5.分子生物学检测结果采用相关检测方法对2018年7月末采集的患病锦鲤... 4.寄生虫检测和细菌分离结果经制片和显微观察,所检锦鲤病鱼组织均未观察到寄生虫。将病鱼脑、肝胰脏、脾、肾组织病料接种于LB平板上,28℃培养24小时,未见细菌生长。5.分子生物学检测结果采用相关检测方法对2018年7月末采集的患病锦鲤鳃组织样品进行SVCV、KHV、CyHV-II、CEV分子生物学检测,结果显示,发病锦鲤鳃组织样品均未扩增出SVCV、KHV、CyHV-II特异性片段(未列出);CEV TaqMan荧光定量检测方法结果如图4A,显示该样品Ct值小于35,CEV为阳性。 展开更多
关键词 分子生物学检测 实验室诊断 锦鲤 细菌分离 组织病料 昏睡病 特异性片段 肝胰脏
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江浙地区菱品种遗传多样性的SLAF-seq分析
16
作者 袁晔 刘睿 +5 位作者 王凌云 沈盟 叶雪莲 权新华 王瑞森 姚祥坦 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第8期1773-1781,共9页
利用SLAF-seq技术对江浙地区17个主要的栽培菱品种和1个野生菱种质进行高通量测序,获得445594个SLAF标签,鉴定到多态性SLAF标签95931个。通过序列分析,获得269338个SNP标记,并基于这些SNP构建18份菱样品的遗传发育树及进行群体结构分析... 利用SLAF-seq技术对江浙地区17个主要的栽培菱品种和1个野生菱种质进行高通量测序,获得445594个SLAF标签,鉴定到多态性SLAF标签95931个。通过序列分析,获得269338个SNP标记,并基于这些SNP构建18份菱样品的遗传发育树及进行群体结构分析。结果表明,SLAF-seq技术能高效地开发出大量可用于群体遗传分析的SNP标记,基于SNP标记构建的进化树能较好地区分不同类型的菱品种。该结果对开展菱种质资源鉴定和菱种质遗传演化研究具有重要参考价值。 展开更多
关键词 遗传多样性 异性位点扩增片段测序 单核苷酸多态性
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应用PCR检测鸡胚和环境样本中沙门氏菌
17
作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1997年第11期8-8,共1页
日本Tuchili等(1996)应用沙门氏菌phoE基因365bp特异性基因片段作为引物,经PCR扩增无精蛋和死胚的卵黄样本及环境样本以检测沙门氏菌。结果经PCR直接检测时,45份死胚此菌阳性20份(44.4%),21份无精蛋阳性为6份(28.6%),而细菌分离法则... 日本Tuchili等(1996)应用沙门氏菌phoE基因365bp特异性基因片段作为引物,经PCR扩增无精蛋和死胚的卵黄样本及环境样本以检测沙门氏菌。结果经PCR直接检测时,45份死胚此菌阳性20份(44.4%),21份无精蛋阳性为6份(28.6%),而细菌分离法则分别检出阳性6份(13. 展开更多
关键词 环境样本 PCR检测 细菌分离法 沙门氏菌 异性基因片段 无精蛋 鸡胚 PCR扩增 直接检测 PCR法
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