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片段长度差异等位基因特异性PCR—一种改良的SNP分型新方法 被引量:18
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作者 黄代新 杨庆恩 赵贵森 《法医学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期11-14,共4页
目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末... 目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末端分别与SNP两个等位基因碱基配对的上游引物,同时在两个等位基因特异性引物3'端第3或第4位碱基引入错配以增加特异性,下游为公用引物。PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带后确定样本的基因型。结果不同SNP纯合子为长度不同的单一谱带,杂合子则为两条带,其结果与直接测序完全一致。两条特异性上游引物3'端第3或第4位碱基引入错配后非特异性延伸显著减少,且对PCR反应条件的严格性要求明显降低。结论片段长度差异等位基因特异性PCR是一种简单快速而有效的SNP分型新方法;两条特异性引物3'端第3。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 片段长度差异等位基因异性PCR 碱基错配 法医物证检验学
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簇毛麦基因组特异DNA序列标记的建立和应用 被引量:3
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作者 迟世华 杨足君 +3 位作者 冯娟 周建平 刘成 任正隆 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期1-5,共5页
为建立簇毛麦基因组特异DNA序列的分子标记,以普通小麦中国春、绵阳11、川农17和R111以及多年生簇毛麦、硬粒小麦-多年生簇毛麦双二倍体TDB-3为材料,用120条随机引物进行RAPD分析,筛选出一个多年生簇毛麦的特异性RAPD片段,克隆测序表明... 为建立簇毛麦基因组特异DNA序列的分子标记,以普通小麦中国春、绵阳11、川农17和R111以及多年生簇毛麦、硬粒小麦-多年生簇毛麦双二倍体TDB-3为材料,用120条随机引物进行RAPD分析,筛选出一个多年生簇毛麦的特异性RAPD片段,克隆测序表明该片段全长为937 bp(记为OPM2937)。以OPM2937的DNA序列为基础设计了一对特异引物,并用该特异引物对多年生簇毛麦、二倍体簇毛麦以及中国春-二倍体簇毛麦附加系CSDA1V^CSDA7V与小麦-多年生簇毛麦衍生后代进行了扩增,结果表明,凡具有簇毛麦染色体的材料均可扩增出目标DNA片段,而不具簇毛麦染色体的材料均未能得到扩增。将OPM2937在NCBI中进行序列比对,发现它是一个新的序列,说明OPM2937为簇毛麦基因组的一个特异序列,该DNA序列标记可用于快速跟踪检测小麦背景中的簇毛麦染色体。 展开更多
关键词 簇毛麦属 RAPD 基因异性DNA片段
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基于竞争性杂交方法的猪-肠道微生物特异性互作靶点发掘 被引量:1
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作者 樊丽华 莫虹斐 +2 位作者 张晓峰 帅江冰 陈青 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期163-172,共10页
动物肠道中存在着一些参与猪肠道微生物互作的基因,这些基因具有一定的宿主特异性,利用其设计分子标记能准确识别粪便污染来源。该文共采集6个物种(猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅)的145个粪便样品,提取其DNA后利用竞争性杂交的基因片段富集方... 动物肠道中存在着一些参与猪肠道微生物互作的基因,这些基因具有一定的宿主特异性,利用其设计分子标记能准确识别粪便污染来源。该文共采集6个物种(猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅)的145个粪便样品,提取其DNA后利用竞争性杂交的基因片段富集方法(genome fragment enrichment,GFE),靶向筛选参与猪肠道微生物互作的特异性基因。经BLASTX分析发现,82%的猪特异性非冗余DNA片段存在相似序列,以拟杆菌纲(Bacteroidetes)(43.2%)、梭菌纲(Clostridia)(19.5%)、芽孢杆菌纲(Bacilli)(8.6%)相似序列为主。从蛋白质功能方面分析,61.5%的非冗余序列功能明确,有7.6%的序列与信息贮存及加工有关,12.8%的序列与细胞加工及信息传导有关,22%的序列与代谢有关,其中,碳水化合物和氨基酸的转移代谢相关序列含量最为丰富,均占总特异性序列的6.3%。研究发现,能够编码拟杆菌纲(Bacteroidetes)和梭菌纲(Clostridials)等表面蛋白、膜分泌蛋白及碳水化合物代谢蛋白的相关基因可作为猪特异性分子标记筛选的靶点。 展开更多
关键词 非点源污染 竞争性杂交 异性基因片段富集 功能注释 异性分子标记
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一种大豆SNP分型新方法 被引量:8
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作者 袁翠平 李英慧 +3 位作者 刘章雄 关荣霞 常汝镇 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期447-453,459,共8页
单核苷酸多态性(SNP)在大豆基因组中分布广泛,SNP分型是大豆SNP遗传作图,关联分析、分子标记辅助选择等研究的重要技术。本文以Rhg4基因开发的5个SNP为例,介绍了一种大豆SNP分型的新方法-片段长度差异等位基因特异性PCR(FLDAS-PCR)。采... 单核苷酸多态性(SNP)在大豆基因组中分布广泛,SNP分型是大豆SNP遗传作图,关联分析、分子标记辅助选择等研究的重要技术。本文以Rhg4基因开发的5个SNP为例,介绍了一种大豆SNP分型的新方法-片段长度差异等位基因特异性PCR(FLDAS-PCR)。采用AS-PCR原理,针对某个SNP位点设计2条相差4-5bp的特异引物和1个公用引物,PCR产物约100bp或150bp,2种等位基因型PCR产物相差4-5bp,在2个特异引物3′端第3和4碱基位置分别人为引入错配碱基来提高PCR特异性,通过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可将纯合和杂合基因型检测出来。探讨了特异引物浓度和退火温度对Rhg4-1592扩增效果的影响,研究表明,可通过调整特异引物浓度和退火温度优化扩增效果。FLDAS-PCR对18份种质分型结果与PCR产物克隆测序法一致,表明本研究建立的FLDAS-PCR法是一种简便、快捷、新型的大豆SNP分型方法。 展开更多
关键词 大豆 SNP 分型 片段长度差异等位基因异性PCR
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应用PCR检测鸡胚和环境样本中沙门氏菌
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作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1997年第11期8-8,共1页
日本Tuchili等(1996)应用沙门氏菌phoE基因365bp特异性基因片段作为引物,经PCR扩增无精蛋和死胚的卵黄样本及环境样本以检测沙门氏菌。结果经PCR直接检测时,45份死胚此菌阳性20份(44.4%),21份无精蛋阳性为6份(28.6%),而细菌分离法则... 日本Tuchili等(1996)应用沙门氏菌phoE基因365bp特异性基因片段作为引物,经PCR扩增无精蛋和死胚的卵黄样本及环境样本以检测沙门氏菌。结果经PCR直接检测时,45份死胚此菌阳性20份(44.4%),21份无精蛋阳性为6份(28.6%),而细菌分离法则分别检出阳性6份(13. 展开更多
关键词 环境样本 PCR检测 细菌分离法 沙门氏菌 特异性基因片段 无精蛋 鸡胚 PCR扩增 直接检测 PCR法
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长牡蛎(Crassostrea gigas)17个EST-SNP标记的开发 被引量:7
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作者 王绍宗 李莉 +1 位作者 亓海刚 张国范 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期274-281,共8页
利用长牡蛎已有的EST序列数据库,筛选得到候选SNP位点共计1140个。根据候选SNP位点共设计引物82组,通过片段长度差异等位基因特异性PCR(fragment length discrepant allele specific PCR,FLDAS-PCR)的分型方法,在一野生群体中进行检测... 利用长牡蛎已有的EST序列数据库,筛选得到候选SNP位点共计1140个。根据候选SNP位点共设计引物82组,通过片段长度差异等位基因特异性PCR(fragment length discrepant allele specific PCR,FLDAS-PCR)的分型方法,在一野生群体中进行检测和验证,结果共有17个SNP候选位点显示多态性。研究结果表明,通过基于EST数据库的SNP开发,可以有效弥补某些海洋生物因基因组学滞后影响SNP标记开发的现状。 展开更多
关键词 长牡蛎 单核苷酸多态性 表达序列标签 片段长度差异等位基因异性PCR
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