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题名牦牛IFN-β基因在毕赤酵母中的分泌表达
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作者
王生富
孙晓林
段风云
何延华
闫鸿斌
景志忠
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机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
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出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期6-10,共5页
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基金
国家高新技术“863”项目(2006AA10A203)
国家支撑计划项目(2006BAD31B03)
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文摘
用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经SalⅠ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,利用甲醇诱导表达,分泌表达产物用MTT法检测其生物学活性.经SDS-PAGE电泳分析表明:表达出约22ku大小分泌于胞外的牦牛IFN-β蛋白分子量,比理论值稍大;MTT结果表明:纯化的重组yak-IFN-β蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性.
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关键词
牦牛
ifn-β基因
巴斯德毕赤酵母
分泌表达
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Keywords
yak
ifn-β gene
Pichia pastoris
secretion expression
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分类号
S823.85
[农业科学—畜牧学]
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题名牦牛α-干扰素基因的克隆及其原核表达的研究
被引量：2
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作者
景志忠
李玉萍
窦永喜
陈国华
房永祥
才学鹏
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机构
中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省动物寄生虫病重点实验室/家畜疾病病原生物学国家重点实验室
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出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期194-199,共6页
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基金
甘肃省自然基金项目(3ZS061-A25-081)
国家“863”计划(2006AA10A203)
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文摘
植物血凝素(PHA)诱导培养牦牛外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ基因,分别经PCR、酶切鉴定及测序分析后,再分别构建原核表达重组质粒,用SDS-PAGE和Western blot分析IPTG诱导表达的重组蛋白。序列分析表明,牦牛IFN-α-A基因ORF为570 bp,与NCBI上发表的奶牛IFN-α-A参考序列同源性为94.4%,与黄牛IFN-α-B基因(M10953)的同源性最高,为97.0%;牦牛IFN-α-Ⅱ基因ORF为588 bp,与NCBI上发表的奶牛IFN-α-Ⅱ参考序列同源性为94.2%,与黄牛IFN-δ-1基因(XM-871297)的同源性最高,为96.1%。分子遗传进化树分析表明牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ与黄牛、奶牛和水牛亲缘关系最近,与猪、马、人的次之,与其它动物都较远,说明这两基因均具有种属差异性。诱导表达重组蛋白分析表明,pGEX4T/IFN-α-A和pGEX4T/IFN-α-Ⅱ在大肠杆菌中得到了正确表达,均可表达约44 ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,且具有与抗血清发生反应的生物活性。
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关键词
牦牛ifn-α-a基因
牦牛ifn-α-Ⅱ基因
分子克隆
遗传演化关系
表达分析
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Keywords
yak interferon-α-a
yak interferon-α-Ⅱ gene
molecular cloning
phylogenetic analysis
expression analysis
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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