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牦牛血胰蛋白酶水解液中抗菌肽的筛选研究 被引量:5
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作者 郝刚 唐善虎 李思宁 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期121-125,131,共6页
以牦牛血的胰蛋白酶水解液为原料,用Sephadex G-15凝胶柱,在以10 mmol/L磷酸盐缓冲液(p H7.0)为洗脱液,流速为0.4 m L/min的洗脱条件下,利用抗菌肽与细菌细胞膜的吸附结合特性,分离出两个含抗菌肽组分的洗脱峰。研究显示抑菌活性大的洗... 以牦牛血的胰蛋白酶水解液为原料,用Sephadex G-15凝胶柱,在以10 mmol/L磷酸盐缓冲液(p H7.0)为洗脱液,流速为0.4 m L/min的洗脱条件下,利用抗菌肽与细菌细胞膜的吸附结合特性,分离出两个含抗菌肽组分的洗脱峰。研究显示抑菌活性大的洗脱峰再经过RP-HPLC反复纯化,收集组分并检测抑菌活性,得到两个色谱纯的抗菌肽Yak B-1和Yak B-2。抑菌实验表明,抗菌肽Yak B-1/2对细菌和真菌都具有广谱抗菌活性;抗菌肽Yak B-2无论对G-菌还是G+菌的抗菌活性都比Yak B-1强,但Yak B-1对真菌的抑菌活性更强。研究结果可为牦牛血资源开发与利用提供参考依据。 展开更多
关键词 牦牛 膜结合 凝胶色谱 活性
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β-防御素yTAP对小鼠肠道形态及菌群多样性的影响
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作者 黎小银 刘萌 +2 位作者 武新学 罗璠 高彦华 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2379-2391,共13页
【目的】探究β-防御素牦牛气管抗菌肽(yak tracheal antimicrobial peptide,yTAP)对小鼠肠道形态和微生物菌群多样性的影响,为揭示yTAP对肠道健康的作用及将其开发为新型抗菌制剂提供参考。【方法】选取24只4周龄无特定病原菌(SPF)ICR... 【目的】探究β-防御素牦牛气管抗菌肽(yak tracheal antimicrobial peptide,yTAP)对小鼠肠道形态和微生物菌群多样性的影响,为揭示yTAP对肠道健康的作用及将其开发为新型抗菌制剂提供参考。【方法】选取24只4周龄无特定病原菌(SPF)ICR小鼠,随机分为3组:对照组(CON)、5 mg/kg yTAP组(LOW)和10 mg/kg yTAP组(HIGH)(n=8)。试验组小鼠尾静脉注射相应浓度yTAP,对照组小鼠注射等体积无菌生理盐水,0.5 mL/只。给药后正常饲养7 d,称重后处死小鼠迅速收集各脏器组织并称重,计算脏器系数。采集回肠组织,通过苏木精-伊红(HE)染色观察肠道形态变化。收集小鼠结肠内容物,提取基因组DNA并基于NovaSeq 6000测序平台进行16S rRNA扩增并测序分析。【结果】5和10 mg/kg yTAP对小鼠体重及脏器系数均无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,10 mg/kg yTAP组小鼠回肠隐窝深度显著降低(P<0.05),绒毛高度/隐窝深度比值显著升高(P<0.05);5 mg/kg yTAP组小鼠结肠菌群的Shannon指数显著降低(P<0.05),10 mg/kg yTAP组小鼠结肠菌群的Shannon指数和Simpson指数均显著降低(P<0.05)。在门水平上,与对照组相比,10 mg/kg yTAP组小鼠结肠中厚壁菌门相对丰度及厚壁菌门/拟杆菌门比值(F/B)显著降低(P<0.05)。在属水平上,与对照组相比,5 mg/kg yTAP组小鼠结肠的乳杆菌属相对丰度增加(P>0.05),10 mg/kg yTAP组小鼠结肠的臭气杆菌属相对丰度显著降低(P<0.05)。与5 mg/kg yTAP组相比,10 mg/kg yTAP组小鼠结肠的乳杆菌属和拟杆菌属相对丰度显著降低(P<0.05)。LEfSe分析结果显示,5 mg/kg yTAP组小鼠结肠的优势菌为乳杆菌属和拟杆菌属,10 mg/kg yTAP组小鼠结肠中的优势菌为葡萄球菌目。【结论】本试验条件下,yTAP对小鼠无急性毒性,其中10 mg/kg yTAP可改善小鼠回肠黏膜形态,显著降低结肠菌群的Alpha多样性;5 mg/kg yTAP能提高小鼠结肠乳杆菌属、拟杆菌属等优势菌属的相对丰度。 展开更多
关键词 Β-防御素 牦牛气管(ytap) 肠道形态 肠道
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人气管粘膜上皮细胞抗菌多肽探讨 被引量:1
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作者 黄宁 程德云 +3 位作者 潘小玲 吴琦 唐彬 王伯瑶 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期558-561,共4页
目的 :探讨人支气管肺泡灌洗液和体外气液界面无血清培养的人气管上皮细胞分泌液对绿脓杆菌的抗菌作用。方法 :采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳 (AU PAGE)分析人支气管肺泡灌洗液阳离子蛋白成分 ;气液界面无血清培养人气管上皮细胞 ;电... 目的 :探讨人支气管肺泡灌洗液和体外气液界面无血清培养的人气管上皮细胞分泌液对绿脓杆菌的抗菌作用。方法 :采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳 (AU PAGE)分析人支气管肺泡灌洗液阳离子蛋白成分 ;气液界面无血清培养人气管上皮细胞 ;电泳凝胶琼脂糖弥散法和琼脂糖弥散法检测支气管肺泡灌洗液及培养细胞分泌液的抗菌活性。结果 :人支气管肺泡灌洗液和培养气管上皮细胞分泌液对绿脓杆菌有很强的抗菌作用 ;随着盐浓度增加 ,抗菌作用减弱。AU PAGE发现一电泳迁徙率明显高于α 防御素和溶菌酶的阳离子抗菌多肽。结论 :提示人气管粘膜上皮细胞能合成和分泌与α 防御素或溶菌酶不同的抗菌多肽 ,可能是呼吸道抗感染的重要分子。 展开更多
关键词 气管上皮细胞 AU-PAGE 呼吸道感染
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奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体的构建与鉴定
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作者 曹随忠 姚学萍 +4 位作者 崔亚飞 杨德英 雍康 余树民 刘宗平 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第6期1-7,18,共8页
【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP... 【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP经EcoRⅠ+KpnⅠ双酶切回收目的基因片段,亚克隆到携带增强型绿色荧光蛋白的通用型乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP中,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(bMEC)、COS-7细胞,并注射泌乳家兔乳腺组织,荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,半定量RT-PCR检测家兔乳腺组织中TAP mRNA的表达。【结果】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,该载体可在bMEC中特异性地表达绿色荧光蛋白;半定量RT-PCR检测发现,转染pBLG-EGFP-TAP可显著提高家兔乳腺组织中TAPmRNA的表达水平。【结论】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,为进一步研究奶牛TAP基因的表达特性及利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供了重要材料。 展开更多
关键词 奶牛 乳房炎 Β-防御素 气管基因 乳腺特异性表达载体
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发酵牦牛乳蛋白肽的分离纯化及抗氧化活性研究 被引量:4
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作者 魏光强 李华瑞 +1 位作者 赵存朝 黄艾祥 《中国奶牛》 2020年第4期32-38,共7页
以牦牛乳为原料,从6株乳酸菌中筛选出对发酵牦牛乳具有较高水解度及肽得率的罗伊氏乳杆菌和约氏乳杆菌,并与保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和发酵乳杆菌按1:1:1:1:1复配发酵剂制备牦牛乳蛋白肽。通过离心提取发酵牦牛乳蛋白肽,经超滤和Seph... 以牦牛乳为原料,从6株乳酸菌中筛选出对发酵牦牛乳具有较高水解度及肽得率的罗伊氏乳杆菌和约氏乳杆菌,并与保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和发酵乳杆菌按1:1:1:1:1复配发酵剂制备牦牛乳蛋白肽。通过离心提取发酵牦牛乳蛋白肽,经超滤和Sephadex-25柱层分离纯化蛋白肽,并测定各分离组分的体外抗氧化活性。结果表明,发酵牦牛乳蛋白肽的Sephadex-25分离纯化的最优工艺条件为:洗脱液浓度0.2mol/L,上样质量浓度50mg/mL,洗脱流速2mL/min,在此条件下一共分离出峰1、峰2两个组分。随着蛋白肽各分离组分浓度的增加,其抗氧化活性显著增强,分离组分峰1、峰2对ABTS自由基清除率的IC50为1.778mg/mL、3.844mg/mL,对DPPH自由基清除率的IC50为1.801mg/mL、3.286mg/mL,还原能力IC50为0.571mg/mL、1.365mg/mL,对羟自由基清除率的IC50为0.913mg/mL、2.466mg/mL。 展开更多
关键词 发酵牦牛乳蛋白 分离纯化 氧化活性
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奶牛乳房炎抗性基因TAP cDNA克隆及序列分析 被引量:3
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作者 姚学萍 栾红雨 +4 位作者 袁曦 曹随忠 余树民 刘长松 刘宗平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期71-75,共5页
采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T Simple载体中,并进行序列分析。序列分析结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF)195 bp,与牛TAP基因同源性达93.8%;该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防... 采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T Simple载体中,并进行序列分析。序列分析结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF)195 bp,与牛TAP基因同源性达93.8%;该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。TAP基因cDNA完整开放阅读框的克隆,为进一步开发应用重组牛β-防御素奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-防御素 气管 乳腺 基因克隆 奶牛
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奶牛bTAP蛋白表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
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作者 张小灵 葛俊伟 李玉龙 《畜牧兽医科技信息》 2015年第5期34-35,共2页
奶牛气管抗菌肽是一种具有较强抗菌活性的抗菌小肽。实验从奶牛气管组织中提取总RNA,反转录成c DNA,以此为模板,用奶牛气管抗菌肽特异性PCR引物扩增奶牛气管抗菌肽基因,然后将其连入载体p CMV-C-e GFP中构建奶牛气管抗菌肽的真核表达载... 奶牛气管抗菌肽是一种具有较强抗菌活性的抗菌小肽。实验从奶牛气管组织中提取总RNA,反转录成c DNA,以此为模板,用奶牛气管抗菌肽特异性PCR引物扩增奶牛气管抗菌肽基因,然后将其连入载体p CMV-C-e GFP中构建奶牛气管抗菌肽的真核表达载体b TAP-GFP,并将此载体转染进奶牛乳腺上皮细胞中,分别运用荧光蛋白观察和细菌记数等方法检测b TAP-GFP蛋白在细胞中的表达及其对大肠杆菌的抗菌活性。试验结果表明,试验成功的建立了奶牛气管抗菌肽的真核表达载体b TAP-GFP,并且此重组载体能在奶牛乳腺上皮细胞中正常表达具有抗大肠杆菌活性的b TAP-GFP蛋白。 展开更多
关键词 奶牛气管 真核表达载体 奶牛乳腺上皮细胞 基因表达
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昆虫类药物与食品前景广阔
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作者 王文军 《中华中医药学刊》 CAS 1997年第1期22-22,共1页
关键词 虫类药物 风湿性关节炎 营养保健品 气管 昆虫蛋白 血管疾病 昆虫产业 类风湿 动脉硬化
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