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牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究
1
作者
于永生
罗晓彤
+2 位作者
曹阳
张立春
王晓阳
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期87-90,98,共5页
为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导...
为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染细胞,通过G418筛选9 d获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2~3次后,利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明：细胞贴壁后9 d可获取原代皮肤成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9 d即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶基因整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶基因在转基因传代细胞中得到有效转录。本研究为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了条件。
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关键词
牛耳皮肤成纤维细胞
线虫ω-3脂肪酸去饱和酶
基因转染
脂质体
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职称材料
IGF-1、bFGF、ITS、2-ME2对牛耳皮肤成纤维细胞细胞周期的影响
2
作者
孟晓俣
刘欣
+2 位作者
孙羽
张广辉
张涌
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期552-558,共7页
为探讨2-甲氧雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME2)、胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1)、碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)、胰岛素-转铁蛋白-硒(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS)对体...
为探讨2-甲氧雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME2)、胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1)、碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)、胰岛素-转铁蛋白-硒(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS)对体细胞细胞周期的影响,以牛(Bos taurus)耳皮肤成纤维细胞为研究对象,进行流式细胞分析和细胞计数。结果显示,1μmol/L 2-ME2可显著提高细胞周期中G0/G1期细胞及G1早期(early G1,eG1)细胞所占比例,20 ng/mL IGF-1、10 ng/mL bFGF、ITS及4种细胞因子联合处理对细胞周期中G0/G1期细胞和G1早期细胞所占比例无显著影响,表明2-ME2能够显著影响牛耳皮肤成纤维细胞的细胞周期,研究结果对体细胞核移植技术在短时间内获得更多G0/G1期和eG1期的供体细胞具有重要意义。
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关键词
G1早期
细胞
周期
体
细胞
核移植
牛耳皮肤成纤维细胞
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职称材料
题名
牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究
1
作者
于永生
罗晓彤
曹阳
张立春
王晓阳
机构
吉林省农科院畜牧分院
出处
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期87-90,98,共5页
基金
农业部转基因生物新品种培育重大专项<优质高效转基因肉牛新品种培育>(2009ZX08007-005B)
文摘
为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染细胞,通过G418筛选9 d获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2~3次后,利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明：细胞贴壁后9 d可获取原代皮肤成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9 d即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶基因整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶基因在转基因传代细胞中得到有效转录。本研究为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了条件。
关键词
牛耳皮肤成纤维细胞
线虫ω-3脂肪酸去饱和酶
基因转染
脂质体
Keywords
bovine ear skin fibroblast
Caenorhabditis elegans ω-3 fatty acid desaturase
gene transfection
lipofectmine
分类号
Q813.1 [生物学—生物工程]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
IGF-1、bFGF、ITS、2-ME2对牛耳皮肤成纤维细胞细胞周期的影响
2
作者
孟晓俣
刘欣
孙羽
张广辉
张涌
机构
西北农林科技大学动物医学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期552-558,共7页
基金
陕西省胚胎工程中心项目(20190926000003)。
文摘
为探讨2-甲氧雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME2)、胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1)、碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)、胰岛素-转铁蛋白-硒(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS)对体细胞细胞周期的影响,以牛(Bos taurus)耳皮肤成纤维细胞为研究对象,进行流式细胞分析和细胞计数。结果显示,1μmol/L 2-ME2可显著提高细胞周期中G0/G1期细胞及G1早期(early G1,eG1)细胞所占比例,20 ng/mL IGF-1、10 ng/mL bFGF、ITS及4种细胞因子联合处理对细胞周期中G0/G1期细胞和G1早期细胞所占比例无显著影响,表明2-ME2能够显著影响牛耳皮肤成纤维细胞的细胞周期,研究结果对体细胞核移植技术在短时间内获得更多G0/G1期和eG1期的供体细胞具有重要意义。
关键词
G1早期
细胞
周期
体
细胞
核移植
牛耳皮肤成纤维细胞
Keywords
Early G1 phase
Cell cycle
Somatic cell nuclear transfer
Bovine ear fibroblast cells
分类号
S823 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究
于永生
罗晓彤
曹阳
张立春
王晓阳
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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职称材料
2
IGF-1、bFGF、ITS、2-ME2对牛耳皮肤成纤维细胞细胞周期的影响
孟晓俣
刘欣
孙羽
张广辉
张涌
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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职称材料
已选择
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