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基于结核分枝杆菌牛变种C68001随机突变体库筛选和鉴定成膜相关基因
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作者 时文健 徐磊 +5 位作者 张泽 杨蕊 辛凌翔 王楠 陈祥 鑫婷 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3992-4006,共15页
旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,用苏通培养基进行培养,筛选生物膜表型差异明显的突变株,通过抗性标记挽救法及测序... 旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,用苏通培养基进行培养,筛选生物膜表型差异明显的突变株,通过抗性标记挽救法及测序,确定突变基因位置;检测突变基因对菌株抗氧化性及抗SDS性能的影响;进一步以噬菌体系统构建靶标基因缺失、回补及过表达菌株,利用扫描电子显微镜检测靶基因对细菌菌丝影响,通过测定细菌的抗酸、抗氧化、抗SDS以及在小鼠巨噬细胞系J774A.1中的存活性能,检测靶标基因对细菌抗逆性和胞内存活的影响。利用突变体文库,筛选到8个生物膜形成缺陷的菌株,鉴定其中4个为单基因突变菌株,突变基因分别为Rv1096、Rv3425、Rv 3136和Rv 3671c;构建Rv 3671c基因敲除、回补和过表达菌株,通过PCR及Western blot验证构建成功,测试其生物膜形成能力、抗逆性和胞内存活性能,发现Rv 3671c基因可提高结核分枝杆菌牛变种抗SDS、生物膜形成及胞内存活等方面的能力。Rv 3671c基因在结核分枝杆菌牛变种C68001的生物膜形成和抗逆性能力中发挥重要作用。构建的结核分枝杆菌牛变种C68001菌株突变体文库可高效用于靶标基因的筛选和鉴定,为探索结核分枝杆菌牛变种的基因功能提供了可靠的工具。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌变种 Himar 1转座子 随机插入突变库 生物膜 Rv 3671c
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结核分枝杆菌RpfB及RpfE蛋白的生物信息学分析
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作者 杨雨婷 杨国平 +1 位作者 王艳 龚丽坤 《微生物学杂志》 北大核心 2025年第1期106-116,共11页
运用生物信息学方法预测RpfB和RpfE蛋白的生物学特性及抗原表位,并分析其作为新型结核疫苗候选抗原的潜力。从NCBI数据库中获取Rv1009、Rv2450c基因的碱基序列,从Uniprot数据库中获取Rv1009基因编码蛋白RpfB及Rv2450c基因编码蛋白RpfE... 运用生物信息学方法预测RpfB和RpfE蛋白的生物学特性及抗原表位,并分析其作为新型结核疫苗候选抗原的潜力。从NCBI数据库中获取Rv1009、Rv2450c基因的碱基序列,从Uniprot数据库中获取Rv1009基因编码蛋白RpfB及Rv2450c基因编码蛋白RpfE的氨基酸序列,运用生物信息学分析软件ORFfinder、ProtParam、ProtScale、TMPRED、TMHMM、SignalP 5.0、NetNGlyc 1.0、YinOYang 1.2、NetPhos 3.1、STRING、SOPMA、SWISS-MODEL、DNAStar、SYFPEITHI、NetCTL 1.2及Net MHCII pan 4.0对RpfB及RpfE蛋白的理化性质、亲疏水性、结构、信号肽、糖基化/磷酸化位点、跨膜结构、互作蛋白及抗原表位进行分析。结果表明,Rv1009基因全长1089 bp,有5个开放阅读框,其编码蛋白RpfB由362个氨基酸组成,为含有信号肽的疏水性跨膜蛋白,其二级结构以无规则卷曲为主,该蛋白含有1个N-糖基化位点、29个磷酸化位点、8个优势CTL细胞抗原表位、14个优势Th细胞抗原表位及10个优势B细胞抗原表位;Rv2450c基因全长519 bp,有1个开放阅读框,其编码蛋白RpfE由172个氨基酸组成,为含有信号肽的亲水性蛋白,无跨膜结构,其二级结构以无规则卷曲为主,该蛋白含有2个N-糖基化位点、9个磷酸化位点、4个优势CTL细胞抗原表位、6个优势Th细胞抗原表位及7个优势B细胞抗原表位。RpfB及RpfE蛋白具有较好的免疫原性及多个优势T、B细胞抗原表位,可作为Mtb多肽疫苗研制的候选优势蛋白。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis Mtb) RpfB RpfE 生信分析 抗原表位 多肽疫苗
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一起牛病毒性腹泻病毒、副结核分枝杆菌和弯曲杆菌共感染的诊治 被引量:1
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作者 陈亮 沈思思 +8 位作者 冯万宇 张蕾 兰世捷 苗艳 李丹 刘雪松 江波涛 钟鹏 于辰龙 《福建畜牧兽医》 2024年第1期62-63,共2页
牛病毒性腹泻病毒能引起牛腹泻,而副结核分枝杆菌和弯曲杆菌同样能引起各个年龄段的牛腹泻,甚至流产,当3种病原共感染时,则会加重牛场的经济损失。该文通过一起牛病毒性腹泻病毒、副结核分枝杆菌和弯曲杆菌共感染病例,从发病情况、实验... 牛病毒性腹泻病毒能引起牛腹泻,而副结核分枝杆菌和弯曲杆菌同样能引起各个年龄段的牛腹泻,甚至流产,当3种病原共感染时,则会加重牛场的经济损失。该文通过一起牛病毒性腹泻病毒、副结核分枝杆菌和弯曲杆菌共感染病例,从发病情况、实验室检查、药敏试验、防治等方面进行阐述,旨在为防控这3种疫病提供参考。 展开更多
关键词 病毒性腹泻病毒 结核分枝杆菌 弯曲杆菌 共感染 诊治
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一起牛病毒性腹泻病毒、副结核分枝杆菌和弯曲杆菌混合感染的诊治报告
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作者 陈亮 沈思思 +8 位作者 冯万宇 张蕾 兰世捷 苗艳 李丹 刘雪松 江波涛 钟鹏 于辰龙 《中国动物保健》 2024年第8期122-123,共2页
牛病毒性腹泻病毒能够引起牛腹泻,而副结核分枝杆菌和弯曲杆菌同样能引起各个年龄段的牛腹泻,甚至流产,当三种病原混合感染时,则会加重牛场的经济损失。本文通过一起牛病毒性腹泻病毒、副结核分枝杆菌和弯曲杆菌混合感染的案例,从发病... 牛病毒性腹泻病毒能够引起牛腹泻,而副结核分枝杆菌和弯曲杆菌同样能引起各个年龄段的牛腹泻,甚至流产,当三种病原混合感染时,则会加重牛场的经济损失。本文通过一起牛病毒性腹泻病毒、副结核分枝杆菌和弯曲杆菌混合感染的案例,从发病情况、实验室诊断、药敏试验、防治等方面进行论述,旨在为防控这三种疾病提供参考。 展开更多
关键词 病毒性腹泻病毒 结核分枝杆菌 弯曲杆菌 混合感染 诊治
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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测 被引量:15
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作者 谢芝勋 谢志勤 +5 位作者 雷剑明 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 温娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1141-1144,共4页
目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分... 目的建立一种鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测方法。方法根据已发表的结核分枝杆菌23SrRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了两对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,测定其特异性和敏感性,并对238份牛临床样品的DNA分别进行了检测。结果该方法对牛分枝杆菌能扩增出838bp和631bp的特异性基因片段,结核分枝杆菌只扩增出838bp基因片段而扩增不出631bp的特异性基因片段,对参试的其它牛菌株的DNA扩增结果均为阴性。敏感度检测可达到50pg的DNA含量。临床样品检测结核分枝杆菌阳性有21份,牛分枝杆菌阳性有1份,其它临床样品扩增结果全部为阴性。结论本方法可作为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。 展开更多
关键词 检测 结核分枝杆菌 分枝杆菌 二重PCR
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结核变态反应阳性牛的非典型性分枝杆菌的分离与鉴定 被引量:24
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作者 何昭阳 胡希荣 +6 位作者 王振国 李卯年 胡桂学 李忠全 张允茂 李德生 高竞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期247-251,共5页
本试验从69头结核变态反应阳性牛中采取病料202份进行分枝杆菌、特别是非典型分枝杆菌的分离与鉴定,共获26株分枝杆菌,除5株分伎杆菌外,其它全是非典型分枝杆菌。在这些非典型分枝杆菌中,5株偶发分枝杆菌、6株疾病分枝杆... 本试验从69头结核变态反应阳性牛中采取病料202份进行分枝杆菌、特别是非典型分枝杆菌的分离与鉴定,共获26株分枝杆菌,除5株分伎杆菌外,其它全是非典型分枝杆菌。在这些非典型分枝杆菌中,5株偶发分枝杆菌、6株疾病分枝杆菌、5株鸟-胞内分枝杆菌、2株副结核分枝杆菌和1株RunyonⅡ群。从病料看,有病变的分离率为41.2%,无病变的为7.1%。在三种淋巴结病料中,以肠系膜淋巴结的分离率为最高(46%),颌下淋巴结次之(30%),肺门淋巴结为最低(24%)。 展开更多
关键词 结核 变态反应 分枝杆菌
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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌TaqMan~荧光PCR检测的建立 被引量:4
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作者 陈茹 刘中勇 +5 位作者 杨国海 曾碧健 朱道中 林志雄 高小博 刘宁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期154-158,共5页
目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应,牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应,... 目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应,牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应,对其它分枝杆菌菌株以及常见微生物样品为阴性反应。两种荧光PCR对对应阳性重组质粒模板的检测灵敏度可达单个基因拷贝,对结核分枝杆菌或BCG标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞。对临床样品的检测结果显示,荧光PCR对模拟感染奶样、血样的检测灵敏度可达单个菌细胞。所建立的方法,全过程包括血样、奶样、痰液等临床样品的前处理、核酸提取和荧光PCR检测,可在5~6h内完成。采用上述荧光PCR方法从临床采集的疑似病人痰液中检出多份结核分枝杆菌阳性样品。 展开更多
关键词 结核 荧光PCR 结核分枝杆菌 分枝杆菌
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10株牛源非结核分枝杆菌16S rRNA基因序列分析 被引量:7
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作者 葛淑敏 钱爱东 王铁风 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期895-897,共3页
本研究应用结核分枝杆菌的16S rDNA序列分析方法,鉴定非结核分枝杆菌菌株。应用PCR方法从10株牛源非结核分枝杆菌中扩增16S rDNA基因5'端片段并测序。用DNA分析软件将所获得的序列与GenBank中分枝杆菌序列相比较,计算种间相似性,构... 本研究应用结核分枝杆菌的16S rDNA序列分析方法,鉴定非结核分枝杆菌菌株。应用PCR方法从10株牛源非结核分枝杆菌中扩增16S rDNA基因5'端片段并测序。用DNA分析软件将所获得的序列与GenBank中分枝杆菌序列相比较,计算种间相似性,构建系统发育树,对菌株进行分类与鉴定。结果显示,10株牛源非结核分枝杆菌中浅黄分枝杆菌1株;偶发分枝杆菌1株;母牛分枝杆菌2株;新金色分枝杆菌4株;另有2株N8和N9分别与新金色分枝杆菌和偶发分枝杆菌有较好的亲缘关系。检测结果提示,非结核分枝杆菌在牛群中存在应引起重视,而且它们对人畜的致病性需要进一步研究,以便采取有效的防制措施确保人类及畜群的健康。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 菌株鉴定 PCR 16SrRNA
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牛结核分枝杆菌特异性核酸探针的克隆与分析 被引量:8
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作者 蔡宏 陈东 +3 位作者 李君莲 周文来 谷登峰 陈永福 《中国畜禽传染病》 CSCD 1996年第6期13-16,共4页
牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源,其染色体DNA中含有插入序列IS1081,属于结核杆菌类特异性基因片段,在牛结核杆菌染色体中含有6个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分... 牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源,其染色体DNA中含有插入序列IS1081,属于结核杆菌类特异性基因片段,在牛结核杆菌染色体中含有6个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分枝杆菌染色体D避的特民插入片段即IS1081为模闰于IS1081中438-459和664-685碱基 的两个片段为引物。利用PCR技术扩增出一段248bp的特异性片段。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 结核 核酸探针 克隆
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牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:4
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作者 程振涛 岳筠 +6 位作者 张华 周碧君 文明 王开功 欧德渊 覃岚 徐春志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1979-1985,共7页
为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究... 为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究所建立的实时荧光定量PCR方法能有效检测牛结核分枝杆菌目的基因,其最佳引物浓度为400nmol/L,最佳退火温度为52℃。所构建的标准曲线相关性好,可用于样本的定量检测。该方法的性能评价显示,其最小检出模板浓度为80.24ng/L,且该方法具有较好的特异性、可重复性,可对鲜乳样本进行检测。试验结果表明,本研究所建方法可用于牛结核分枝杆菌的定性和定量检测,这为奶牛结核病的诊断与净化及鲜乳食品安全评估提供重要技术。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 实时荧光定量PCR 建立 应用
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应用噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌的方法研究 被引量:5
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作者 刘子芝 赵勇 +5 位作者 刘纪艳 杨建华 尹望中 王颖 赵晶 周永燚 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第10期20-21,共2页
建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在... 建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在1×106条/ml时,形成噬菌斑清晰,便于计数。结论:在选择最佳测定条件下,噬菌体生物扩增法检测牛结核分枝杆菌,快速、简便、灵敏。 展开更多
关键词 噬菌体 结核分枝杆菌 检测方法
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采用限制性酶切片段长度多态性和PCR指印技术对牛结核分枝杆菌分型研究 被引量:7
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作者 蔡宏 李淑霞 +3 位作者 呼西旦 李君莲 许苗 朱玉贤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期175-179,共5页
5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌... 5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌分离株的RFLP分型法结果与直接反向PCR分型法对上述分离株分型结果比较发现 :5株牛结核分枝杆菌分离株中有 2株具有相同的PCR指印带型 ,剩余 3株牛结核分枝杆菌分离株则PCR指印带型各不相同 ,上述结果显示出 ,直接反向PCR分型法较标准的RFLP分型法分型能力强。直接PCR法对新疆牛结核分枝杆菌分离株的分型结果显示出 ,PCR指印带型中带数较少 ,且与北京牛结核分枝杆菌分离株的PCR指印带型截然不同。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 插入序列 限制性酶切片段长度多态性 直接反向PCR 分型
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牛结核分枝杆菌基因文库的构建 被引量:2
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作者 蔡宏 陈东 +3 位作者 李淑霞 呼西旦 李君莲 陈永福 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期114-116,共3页
以国际标准牛型结核分枝杆菌(M.bovis)TMC410为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶Sau3A部分消化后,纯化回收9~25Kb片段,并将其用T4DNA连接酶与经BamHI酶切为粘性末端的LambdaEMB... 以国际标准牛型结核分枝杆菌(M.bovis)TMC410为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶Sau3A部分消化后,纯化回收9~25Kb片段,并将其用T4DNA连接酶与经BamHI酶切为粘性末端的LambdaEMBL3左右臂连接。用噬菌体包装蛋白包装,再进行连续稀释,然后将不同稀释度的噬菌体转移到宿主菌LE392。所获重组子为6×104,因为牛结核杆菌基因组大小约为4×106Kb则以99%概率筛到任一基因,要求的重组子数为1.08×103。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 基因文库
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牛非结核分枝杆菌分离与鉴定 被引量:6
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作者 王铁峰 张宇 钱爱东 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第6期15-17,共3页
本试验对从吉林省不同区域的7个城市采集的503份牛颌下淋巴结样品和497份牛肠系膜淋巴结样品进行非结核分枝杆菌的流行情况的调查,样品均采自结核(副结核)变态反应阴性牛只,调查中得到阳性样品25份,阳性率2.5%,其中颌下淋巴结阳性率1.5... 本试验对从吉林省不同区域的7个城市采集的503份牛颌下淋巴结样品和497份牛肠系膜淋巴结样品进行非结核分枝杆菌的流行情况的调查,样品均采自结核(副结核)变态反应阴性牛只,调查中得到阳性样品25份,阳性率2.5%,其中颌下淋巴结阳性率1.59%,肠系膜淋巴结阳性率3.42%,成功分离扩增培养出14株非结核分枝杆菌,并进行了分类鉴别,得到母牛分枝杆菌1株,龟分枝杆菌脓肿亚种2株,苏加分枝杆菌2株,偶发分枝杆菌1株,蟾蜍分枝杆菌6株,胞内分枝杆菌2株。调查结果表明:非结核分枝杆菌单独感染的情况不容乐观,应加强对非结核分枝杆菌的检验检疫工作。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 流行病学
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荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用 被引量:3
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作者 孙明军 王萍 +3 位作者 张喜悦 孙翔翔 孙世雄 魏荣 《中国动物检疫》 CAS 2019年第9期69-73,共5页
荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测... 荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测方法,快速诊断动物布鲁氏菌病和牛结核病,利用布鲁氏菌探针Bru-996和结核分枝杆菌探针MTB770,通过优化杂交温度、杂交时间和样品处理等关键条件,确定最佳检测程序;根据已知背景的菌株和临床样品,对Bru-996和MTB770探针的特异性和敏感性进行评价,最终建立了荧光复位杂交诊断方法。结果显示:反应条件优化后,该方法可在4h内完成布鲁氏菌检测;荧光标记Bru-996探针与布鲁氏菌待检菌株的杂交结果均为阳性,而与结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌和大肠杆菌杂交结果均为阴性,并从5个已知背景的组织病料中成功检出布鲁氏菌。牛结核分枝杆菌检测则需要6~8h,杂交前必须对样品用二甲苯和溶菌酶进行处理;MTB770探针可特异性识别并能从牛肺部结节中检出牛结核分枝杆菌。结果表明,荧光原位杂交方法快速、简便,而且Bru-996和MTB770探针分别在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测上具有较高的特异性,可替代传统的病原分离鉴定,作为动物布鲁氏菌病和牛结核病的实验室确诊方法。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 布鲁氏菌 结核分枝杆菌 人兽共患病
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牛结核分枝杆菌抗原蛋白Ag85B的表达及纳米疫苗的制备 被引量:1
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作者 杜军 邓光存 《湖北农业科学》 2015年第6期1421-1424,1429,共5页
以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因Ag85B,构建重组表达质粒p ET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。以... 以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因Ag85B,构建重组表达质粒p ET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。以明胶为佐剂,Ag85B为目的抗原制备纳米疫苗,并对其进行了相关的工艺检测。以BCA法建立测定蛋白质含量的标准曲线,在此基础上检测纳米疫苗的载药率和包封率。结果显示,明胶佐剂疫苗的载药率为71.83%,包封率为41.03%,符合纳米疫苗的工艺要求。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(mycobacterium bovis MTB) Ag85B抗原 原核表达 纳米疫苗
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鸟分枝杆菌感染引起牛结核检疫阳性 被引量:1
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作者 何昭阳 胡桂学 +2 位作者 钱爱东 高晶 刘永梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1993年第7期7-8,共2页
一、基本情况某国营奶牛场地处郊外远离居民点,奶牛场周围有水沟围绕。该场共饲养奶牛500多头,全部舍饲。该牛群每年进行春秋两季结核检疫,结核变态反应阳性检出率每年在0.5%以下,基本上控制了结核病。1990年秋季采用牛结核PPD检疫。
关键词 结核 分枝杆菌 感染
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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重PCR快速检测试剂盒的研究 被引量:4
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作者 谢志勤 谢芝勋 +7 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 温娟 蓝如束 张振荣 黄海强 《湖南农业科学》 2010年第10期26-29,共4页
根据已发表的结核分枝杆菌23S rRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了2对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,并研制出检测试剂盒。结果表明,该检测试剂盒对... 根据已发表的结核分枝杆菌23S rRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了2对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,并研制出检测试剂盒。结果表明,该检测试剂盒对结核分枝杆菌能特异性地扩增出838 bp条带而扩增不出631 bp条带,牛分枝杆菌能特异地扩增出838 bp和631 bp条带,而对其他牛菌株的DNA扩增结果均为阴性;敏感性试验表明最低能检测出50 pg的结核分枝杆菌和牛分枝杆菌DNA模板;保存期测定结果表明,在-20℃条件下保存至1、3、6、9个月时,试剂盒的敏感性无明显变化,仍能检测到50 pg的DNA模板,保存至12个月时其敏感度仍能100%检出阳性样品。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 分枝杆菌 二重PCR 试剂盒
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应用ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素 被引量:1
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作者 黄世品 吴志鹏 梁勇 《畜牧兽医科技信息》 2016年第10期30-31,共2页
为了验证ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素的可行性,应用建立的ELISA方法检测30份牛全血,结果为阴性和阳性对照均成立,30份全血的牛结核分枝杆菌γ-干扰素均为阴性,结果表明应用ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素诊断牛结核分... 为了验证ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素的可行性,应用建立的ELISA方法检测30份牛全血,结果为阴性和阳性对照均成立,30份全血的牛结核分枝杆菌γ-干扰素均为阴性,结果表明应用ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素诊断牛结核分枝杆菌可行,可以适用于牛结核分枝杆菌的大规模监测。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ELISA Γ-干扰素 血清学
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牛分枝杆菌基因分型方法及其在牛结核病流行病学中的应用
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作者 王博 李卫民 +2 位作者 范伟兴 杨承谕 黄保续 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第5期44-46,共3页
关键词 结核分枝杆菌 结核 流行病学 分型方法 世界动物卫生组织 诺贝尔奖获得者 人类健康 应用 基因 农业生产
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