牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：4

1

作者 程振涛 岳筠 +6 位作者 张华 周碧君 文明 王开功 欧德渊 覃岚 徐春志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1979-1985,共7页

为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究... 为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究所建立的实时荧光定量PCR方法能有效检测牛结核分枝杆菌目的基因,其最佳引物浓度为400nmol/L,最佳退火温度为52℃。所构建的标准曲线相关性好,可用于样本的定量检测。该方法的性能评价显示,其最小检出模板浓度为80.24ng/L,且该方法具有较好的特异性、可重复性,可对鲜乳样本进行检测。试验结果表明,本研究所建方法可用于牛结核分枝杆菌的定性和定量检测,这为奶牛结核病的诊断与净化及鲜乳食品安全评估提供重要技术。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 实时荧光定量PCR 建立 应用

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应用噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌的方法研究 被引量：5

2

作者 刘子芝 赵勇 +5 位作者 刘纪艳 杨建华 尹望中 王颖 赵晶 周永燚 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第10期20-21,共2页

建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在... 建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在1×106条/ml时,形成噬菌斑清晰,便于计数。结论:在选择最佳测定条件下,噬菌体生物扩增法检测牛结核分枝杆菌,快速、简便、灵敏。 展开更多

关键词 噬菌体 牛结核分枝杆菌 检测方法

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荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用 被引量：3

3

作者 孙明军 王萍 +3 位作者 张喜悦 孙翔翔 孙世雄 魏荣 《中国动物检疫》 CAS 2019年第9期69-73,共5页

荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测... 荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测方法,快速诊断动物布鲁氏菌病和牛结核病,利用布鲁氏菌探针Bru-996和结核分枝杆菌探针MTB770,通过优化杂交温度、杂交时间和样品处理等关键条件,确定最佳检测程序;根据已知背景的菌株和临床样品,对Bru-996和MTB770探针的特异性和敏感性进行评价,最终建立了荧光复位杂交诊断方法。结果显示:反应条件优化后,该方法可在4h内完成布鲁氏菌检测;荧光标记Bru-996探针与布鲁氏菌待检菌株的杂交结果均为阳性,而与结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌和大肠杆菌杂交结果均为阴性,并从5个已知背景的组织病料中成功检出布鲁氏菌。牛结核分枝杆菌检测则需要6~8h,杂交前必须对样品用二甲苯和溶菌酶进行处理;MTB770探针可特异性识别并能从牛肺部结节中检出牛结核分枝杆菌。结果表明,荧光原位杂交方法快速、简便,而且Bru-996和MTB770探针分别在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测上具有较高的特异性,可替代传统的病原分离鉴定,作为动物布鲁氏菌病和牛结核病的实验室确诊方法。 展开更多

关键词 荧光原位杂交 布鲁氏菌 牛结核分枝杆菌 人兽共患病

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牛结核分枝杆菌γ-干扰素在牛结核病检测中的优势 被引量：2

4

作者 孙涛 《现代畜牧科技》 2015年第1期52-53,共2页

牛结核病是由牛结核枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。近年来，人结核病阳性检出率逐年上升，世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”，1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”，并将每年3月24日定为“世界防治结... 牛结核病是由牛结核枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。近年来，人结核病阳性检出率逐年上升，世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”，1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”，并将每年3月24日定为“世界防治结核病日”。根报道，约有10.6％的人结核是由牛分枝杆菌引起的，牛结核病中的7％是由人结核杆菌引起。WHO同时指出，在那些还存在牛结核病的国家中，人类始终受到牛结核病的威胁，除非着手将其消灭，否则人类结核病的防治是不会成功的。因此，控制牛结核病的是关系到控制人类结核病能否成功的重要因素。1.流行特点 牛结核分枝杆菌可以感染不同种属的温血动物，甚至包括一些禽类，其中牛是家畜中最易感的，特别是奶牛。该病主要通过呼吸道和消化道传播，也可通过交配传播。结核病牛可通过痰液、奶、粪便等向外排出结核杆菌污染环境，吸入被污染的飞沫是牛结核病传染的最主要方式，且少量牛分枝杆菌即可引起感染。采食有传染的粘液、粪便、尿液甚至牛奶都可引起感染。人类多因牛结核分枝杆菌或结核分枝杆菌感染而致病，其感染途径主要是食入未经检疫的畜产品，尤其是饮用未经巴氏消毒或煮沸的患有结核牛的奶而经消化道感染，犊牛感染牛结核分枝杆菌者最多。另外，经常与患结核病牛接触的人员，可由于病畜的咳嗽而经呼吸道感染结核病。牛结核病不仅古老，而且分布很广，世界各地都有发生。美国是世界上第1个消灭牛结核病的国家，美国早在1957年就宣布为无结核病牛群，但由于其他动物感染结核杆菌，特别是野生动物和观赏动物的结核病以及人类结核病的存在，有感染牛的可能性，所以美国的牛群仍在不断地接受检疫并被处于高度戒备之中。在广大的第三世界国家仍严重地流行，感染率在5％-10％不等，高者可达20％，严重影响着人类的健康和养牛业的发展。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 牛结核病 Γ-干扰素 世界卫生组织 慢性传染病 感染途径 牛分枝杆菌 消化道感染

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牛结核分枝杆菌株快速培养方法的对比

5

作者 古努尔.吐尔逊 努尔拜合提 +2 位作者 沙依兰.卡依扎 王俊伟 呼西旦.阿巴拜克力 《中国动物检疫》 CAS 2015年第12期56-58,共3页

[目的 ]应用引进的Va间接培养方法、传统的丙酮酸钠、L-J培养基直接培养方法对牛结核分枝杆菌生长时间进行对比试验。[方法 ]将牛型结核分枝杆菌接种于含0.1%琼脂Va培养基中预培养24 h,转接到含0.3%琼脂Va培养基中培养6 d后分别转接到... [目的 ]应用引进的Va间接培养方法、传统的丙酮酸钠、L-J培养基直接培养方法对牛结核分枝杆菌生长时间进行对比试验。[方法 ]将牛型结核分枝杆菌接种于含0.1%琼脂Va培养基中预培养24 h,转接到含0.3%琼脂Va培养基中培养6 d后分别转接到丙酮酸钠培养基和L-J培养基上(间接法);同时牛型结核分枝杆菌接菌于丙酮酸钠培养基和L-J培养基培养,在37℃培养箱内孵育(直接方法),每天观察,并记录出现菌落时间。[结果]接种Va培养基的菌株分别转接丙酮酸钠培养基和L-J培养基后第3 d可见菌落,第12 d培养基斜面可见典型的牛型结核分枝杆菌菌落;而直接接种于丙酮酸钠培养基与L-J培养基后分别于第26 d和第31 d可见典型的牛型结核分枝杆菌菌落。[结论 ]引进的Va牛型结核分枝杆菌间接培养方法可以缩短菌落培养时间,为牛型结核杆菌病提供早期诊断依据。 展开更多

关键词 丙酮酸钠培养基 L-J培养基 牛结核分枝杆菌株 Va培养基 早期诊断

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牛结核分枝杆菌的生物学性状

6

作者 卜文甲 《养殖技术顾问》 2012年第11期137-137,共1页

1形态与染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，牛分枝杆菌则比较粗短，细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60％，特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法，以5％石炭酸复红加温... 1形态与染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，牛分枝杆菌则比较粗短，细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60％，特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法，以5％石炭酸复红加温染色，但用3％盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 生物学性状 牛分枝杆菌 染色法 脂质含量 细胞壁 肽聚糖 石炭酸

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一株牛分枝杆菌的分离与鉴定 被引量：1

7

作者 许礼义 呼西旦 +3 位作者 徐志光 宋振忠 杨启元 黄炯 《草食家畜》 2010年第3期10-14,共5页

采集一头检疫阳性的结核牛病变的淋巴组织进行细菌分离。分离物(Z-N)染色为阳性。提取细菌DNA,用PCR检测结核分枝杆菌特异性插入片段IS1081,确定该细菌为结核分枝杆菌。将PCR扩增出的特异性片段克隆到PMD-18T载体上。重组质粒经酶切和PC... 采集一头检疫阳性的结核牛病变的淋巴组织进行细菌分离。分离物(Z-N)染色为阳性。提取细菌DNA,用PCR检测结核分枝杆菌特异性插入片段IS1081,确定该细菌为结核分枝杆菌。将PCR扩增出的特异性片段克隆到PMD-18T载体上。重组质粒经酶切和PCR鉴定均为阳性,测序结果与牛分枝杆菌标准菌株的同源性为100%。对其用Richard C.Huard等公布的PCR分型方法设计引物进行基因分型,确定该菌株为牛分枝杆菌BCG(M.bovis BCG)。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌BCG 分离培养 PCR鉴定 基因分析

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牛分枝杆菌蛋白基因相互作用研究工具及其进展

8

作者 张喜悦 史扬 范伟兴 《中国动物检疫》 CAS 2015年第9期64-68,共5页

目前有多种技术应用于结核分枝杆菌蛋白相互作用的研究:一是酵母双杂交技术,可以在生物体内验证2个蛋白的相互作用。二是构建分枝杆菌基因突变株,研究蛋白作用的机理,其基本策略为,基因敲除双链DNA的扩增;牛结核分枝杆菌/p JV53感受态... 目前有多种技术应用于结核分枝杆菌蛋白相互作用的研究:一是酵母双杂交技术,可以在生物体内验证2个蛋白的相互作用。二是构建分枝杆菌基因突变株,研究蛋白作用的机理,其基本策略为,基因敲除双链DNA的扩增;牛结核分枝杆菌/p JV53感受态细胞的制备;将基因敲除双链DNA片段转化至牛结核分枝杆菌细胞中;筛选、鉴定阳性菌落。三是通过GST pull-down试验检测已知蛋白和靶蛋白的相互作用。目前,研究牛分枝杆菌蛋白基因相互作用较多是RD1区基因。研究表明,阐明分枝杆菌蛋白的作用机理有助于进一步研发高效的牛结核病诊断试剂和疫苗。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 蛋白 相互作用

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牛结核病PCR检测试剂盒的研制 被引量：3

9

作者 吴位珩 徐景峨 +3 位作者 孙启跃 杨莉 文才智 杨茂生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期237-240,共4页

根据GenBank中的牛结核分枝杆菌IS6110的基因片段,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,研制了用于检测牛结核病的PCR试剂盒,该试剂盒扩增的阳性条带为317 bp;敏感性结果显示,该PCR检测试剂盒的最低核酸检测量为1.025 pg/μL;特异... 根据GenBank中的牛结核分枝杆菌IS6110的基因片段,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,研制了用于检测牛结核病的PCR试剂盒,该试剂盒扩增的阳性条带为317 bp;敏感性结果显示,该PCR检测试剂盒的最低核酸检测量为1.025 pg/μL;特异性试验表明,仅结核分枝杆菌扩增结果为阳性,副结核分枝杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、金葡萄球菌、链球菌的扩增结果均为阴性。-20℃至少可保存12个月,且重复性良好。应用该PCR试剂盒对24份临床样本进行了检测,其PCR检测结果与结核菌素试验检测结果相一致。结果表明,牛结核病PCR检测试剂盒能够对牛结核临床样本进行快捷、灵敏、准确的检测。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 PCR试剂盒 IS6110基因

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应用PCR试剂盒对奶牛结核病的检测

10

作者 吴位珩 孙启跃 +4 位作者 徐景峨 杨莉 文才智 乐琼 杨茂生 《中国畜禽种业》 2012年第6期68-70,共3页

应用聚合酶链式反应技术制备的PCR式剂盒,对贵州省某奶牛场140份血样和奶样标本中的结核分枝杆菌进行检测,结果显示:在111份奶样中有8份为阳性,阳性检出率7.2%。在39份血样中12头牛为阳性,阳性检出率为30.76%。本试验对PPD检测与PCR检... 应用聚合酶链式反应技术制备的PCR式剂盒,对贵州省某奶牛场140份血样和奶样标本中的结核分枝杆菌进行检测,结果显示:在111份奶样中有8份为阳性,阳性检出率7.2%。在39份血样中12头牛为阳性,阳性检出率为30.76%。本试验对PPD检测与PCR检测法进行验证,将1200头牛中PPD检测阳性牛和可疑牛,再用PCR法进行检测,PCR法阳性牛共计20头份,阳性检出率为1.67%,PPD法阳性牛24头份,阳性检出率为3.67%。结果表明:PCR试剂盒在检测牛结核病不同标本中显示出快速、特异等优点。 展开更多

关键词 奶牛 牛结核病 血液 奶 样品 牛结核分枝杆菌 PCR试剂盒 检测:试验

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牛结核PCR诊断试剂盒检测某奶牛场结核病的报告

11

作者 吴位珩 杨茂生 +1 位作者 徐景峨 杨莉 《农技服务》 2014年第5期152-152,165,共2页

本文采用自发研究的牛结核病PCR诊断试剂盒,对某奶牛场856头份奶牛血液和奶样进行检测,共检测阳性牛16头份,阳性检出率为1.87%,检出时间为6小时,同时,采用PPD的检测方法进行了检测,检测阳性牛17头份,阳性检出率为1.98%,两种方法的检测... 本文采用自发研究的牛结核病PCR诊断试剂盒,对某奶牛场856头份奶牛血液和奶样进行检测,共检测阳性牛16头份,阳性检出率为1.87%,检出时间为6小时,同时,采用PPD的检测方法进行了检测,检测阳性牛17头份,阳性检出率为1.98%,两种方法的检测符合率为94.12%。试验表明:PCR试剂盒在检测牛结核病标本中显示出快速、特异等优点。为今后牛结核病的检测工作提供了一条新途径。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 PCR试剂盒

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奶牛结核病,人类健康潜在的威胁 被引量：3

12

作者 刘琴 《乳业科学与技术》 2007年第1期53-54,48,共3页

关键词 奶牛结核病 人类健康 牛结核分枝杆菌 世界动物卫生组织 结核杆菌 威胁 动物疫病 慢性传染病

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牛结核病的诊断及防制措施 被引量：2

13

作者 王素坤 《养殖技术顾问》 2013年第6期89-89,共1页

结核病是由结核分枝杆菌引起的人畜共患的慢性传染病,也是牛群中最常见的慢性传染病。其特点是在多种组织器官形成结核结节和干酪样坏死或者钙化结节病理变化。在临床上以病牛贫血、消瘦、体虚乏力,精神萎靡不振和生产力下降等为特征。... 结核病是由结核分枝杆菌引起的人畜共患的慢性传染病,也是牛群中最常见的慢性传染病。其特点是在多种组织器官形成结核结节和干酪样坏死或者钙化结节病理变化。在临床上以病牛贫血、消瘦、体虚乏力,精神萎靡不振和生产力下降等为特征。本病分布很广,世界各地都有发生,奶牛流行较严重,影响畜牧业发展,危害人类健康。1流行病学本病无季节流行性,各季均可发生,多为散发或地方流行。人结核有10%以上由牛结核分枝杆菌引起,牛结核病主要通过呼吸道和消化道传染。 展开更多

关键词 牛结核病 防制措施 牛结核分枝杆菌 慢性传染病 诊断 人畜共患 结核结节 病理变化

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青海贵南地区奶牛结核病感染调查 被引量：1

14

作者 常明华 《中国畜禽种业》 2008年第23期69-69,共1页

奶牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病,人主要通过饮用患病的牛奶感染。为了保证人体健康,提供合格的鲜奶及奶产品,促进奶牛养殖业的健康发展。2008年6月,对贵南县境内的300头奶牛进行了结核病调查,结果,... 奶牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病,人主要通过饮用患病的牛奶感染。为了保证人体健康,提供合格的鲜奶及奶产品,促进奶牛养殖业的健康发展。2008年6月,对贵南县境内的300头奶牛进行了结核病调查,结果,检测出阳性奶牛1头,阳性率为0.33%。 展开更多

关键词 奶牛结核病 感染调查 贵南地区 牛结核分枝杆菌 青海 人体健康 奶牛养殖业 人畜共患

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牛结核病γ-干扰素检测技术

15

《云南农业》 2023年第2期55-56,共2页

1技术概述1.1技术基本情况牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的人畜共患慢性传染病。近年来,人结核病阳性检出率逐年上升,世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”,1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”,并将每年3月24日... 1技术概述1.1技术基本情况牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的人畜共患慢性传染病。近年来,人结核病阳性检出率逐年上升,世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”,1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”,并将每年3月24日定为“世界防治结核病日”。据报道,约有10.6%的人结核病是由牛分枝杆菌引起的,牛结核病中的7%是由人结核杆菌引起。 展开更多

关键词 牛结核病 牛分枝杆菌 结核杆菌 人畜共患 慢性传染病 牛结核分枝杆菌 紧急状态 阳性检出率

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