采用限制性酶切片段长度多态性和PCR指印技术对牛结核分枝杆菌分型研究 被引量：7

1

作者 蔡宏 李淑霞 +3 位作者 呼西旦 李君莲 许苗 朱玉贤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期175-179,共5页

5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌... 5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌分离株的RFLP分型法结果与直接反向PCR分型法对上述分离株分型结果比较发现 :5株牛结核分枝杆菌分离株中有 2株具有相同的PCR指印带型 ,剩余 3株牛结核分枝杆菌分离株则PCR指印带型各不相同 ,上述结果显示出 ,直接反向PCR分型法较标准的RFLP分型法分型能力强。直接PCR法对新疆牛结核分枝杆菌分离株的分型结果显示出 ,PCR指印带型中带数较少 ,且与北京牛结核分枝杆菌分离株的PCR指印带型截然不同。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 插入序列 限制性酶切片段长度多态性 直接反向PCR 分型

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牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：4

2

作者 程振涛 岳筠 +6 位作者 张华 周碧君 文明 王开功 欧德渊 覃岚 徐春志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1979-1985,共7页

为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究... 为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究所建立的实时荧光定量PCR方法能有效检测牛结核分枝杆菌目的基因,其最佳引物浓度为400nmol/L,最佳退火温度为52℃。所构建的标准曲线相关性好,可用于样本的定量检测。该方法的性能评价显示,其最小检出模板浓度为80.24ng/L,且该方法具有较好的特异性、可重复性,可对鲜乳样本进行检测。试验结果表明,本研究所建方法可用于牛结核分枝杆菌的定性和定量检测,这为奶牛结核病的诊断与净化及鲜乳食品安全评估提供重要技术。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 实时荧光定量PCR 建立 应用

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应用噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌的方法研究 被引量：5

3

作者 刘子芝 赵勇 +5 位作者 刘纪艳 杨建华 尹望中 王颖 赵晶 周永燚 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第10期20-21,共2页

建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在... 建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在1×106条/ml时,形成噬菌斑清晰,便于计数。结论:在选择最佳测定条件下,噬菌体生物扩增法检测牛结核分枝杆菌,快速、简便、灵敏。 展开更多

关键词 噬菌体 牛结核分枝杆菌 检测方法

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荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用 被引量：3

4

作者 孙明军 王萍 +3 位作者 张喜悦 孙翔翔 孙世雄 魏荣 《中国动物检疫》 CAS 2019年第9期69-73,共5页

荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测... 荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测方法,快速诊断动物布鲁氏菌病和牛结核病,利用布鲁氏菌探针Bru-996和结核分枝杆菌探针MTB770,通过优化杂交温度、杂交时间和样品处理等关键条件,确定最佳检测程序;根据已知背景的菌株和临床样品,对Bru-996和MTB770探针的特异性和敏感性进行评价,最终建立了荧光复位杂交诊断方法。结果显示:反应条件优化后,该方法可在4h内完成布鲁氏菌检测;荧光标记Bru-996探针与布鲁氏菌待检菌株的杂交结果均为阳性,而与结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌和大肠杆菌杂交结果均为阴性,并从5个已知背景的组织病料中成功检出布鲁氏菌。牛结核分枝杆菌检测则需要6~8h,杂交前必须对样品用二甲苯和溶菌酶进行处理;MTB770探针可特异性识别并能从牛肺部结节中检出牛结核分枝杆菌。结果表明,荧光原位杂交方法快速、简便,而且Bru-996和MTB770探针分别在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测上具有较高的特异性,可替代传统的病原分离鉴定,作为动物布鲁氏菌病和牛结核病的实验室确诊方法。 展开更多

关键词 荧光原位杂交 布鲁氏菌 牛结核分枝杆菌 人兽共患病

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牛结核分枝杆菌抗原蛋白Ag85B的表达及纳米疫苗的制备 被引量：1

5

作者 杜军 邓光存 《湖北农业科学》 2015年第6期1421-1424,1429,共5页

以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因Ag85B,构建重组表达质粒p ET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。以... 以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因Ag85B,构建重组表达质粒p ET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。以明胶为佐剂,Ag85B为目的抗原制备纳米疫苗,并对其进行了相关的工艺检测。以BCA法建立测定蛋白质含量的标准曲线,在此基础上检测纳米疫苗的载药率和包封率。结果显示,明胶佐剂疫苗的载药率为71.83%,包封率为41.03%,符合纳米疫苗的工艺要求。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis MTB) Ag85B抗原 原核表达 纳米疫苗

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天津市牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测与皮内变态反应比对试验 被引量：2

6

作者 孙涛 《畜牧兽医科技信息》 2017年第12期26-27,共2页

皮内变态反应是我国标准规定的牛结核病检测方法，而γ-干扰素检检测试验是O1E规定的国际贸易指定使用的检测方法，为了验证此方法在实际工作中的检测效果，我市分别对静海区、武清区皮内变态反应试验阳性牛和宝坻区待检牛进行了检测比... 皮内变态反应是我国标准规定的牛结核病检测方法，而γ-干扰素检检测试验是O1E规定的国际贸易指定使用的检测方法，为了验证此方法在实际工作中的检测效果，我市分别对静海区、武清区皮内变态反应试验阳性牛和宝坻区待检牛进行了检测比对试验。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 皮内变态反应 Γ-干扰素 比对试验 天津市 检测试验 牛结核病 国际贸易

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牛结核分枝杆菌γ-干扰素在牛结核病检测中的优势 被引量：2

7

作者 孙涛 《现代畜牧科技》 2015年第1期52-53,共2页

牛结核病是由牛结核枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。近年来，人结核病阳性检出率逐年上升，世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”，1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”，并将每年3月24日定为“世界防治结... 牛结核病是由牛结核枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。近年来，人结核病阳性检出率逐年上升，世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”，1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”，并将每年3月24日定为“世界防治结核病日”。根报道，约有10.6％的人结核是由牛分枝杆菌引起的，牛结核病中的7％是由人结核杆菌引起。WHO同时指出，在那些还存在牛结核病的国家中，人类始终受到牛结核病的威胁，除非着手将其消灭，否则人类结核病的防治是不会成功的。因此，控制牛结核病的是关系到控制人类结核病能否成功的重要因素。1.流行特点 牛结核分枝杆菌可以感染不同种属的温血动物，甚至包括一些禽类，其中牛是家畜中最易感的，特别是奶牛。该病主要通过呼吸道和消化道传播，也可通过交配传播。结核病牛可通过痰液、奶、粪便等向外排出结核杆菌污染环境，吸入被污染的飞沫是牛结核病传染的最主要方式，且少量牛分枝杆菌即可引起感染。采食有传染的粘液、粪便、尿液甚至牛奶都可引起感染。人类多因牛结核分枝杆菌或结核分枝杆菌感染而致病，其感染途径主要是食入未经检疫的畜产品，尤其是饮用未经巴氏消毒或煮沸的患有结核牛的奶而经消化道感染，犊牛感染牛结核分枝杆菌者最多。另外，经常与患结核病牛接触的人员，可由于病畜的咳嗽而经呼吸道感染结核病。牛结核病不仅古老，而且分布很广，世界各地都有发生。美国是世界上第1个消灭牛结核病的国家，美国早在1957年就宣布为无结核病牛群，但由于其他动物感染结核杆菌，特别是野生动物和观赏动物的结核病以及人类结核病的存在，有感染牛的可能性，所以美国的牛群仍在不断地接受检疫并被处于高度戒备之中。在广大的第三世界国家仍严重地流行，感染率在5％-10％不等，高者可达20％，严重影响着人类的健康和养牛业的发展。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 牛结核病 Γ-干扰素 世界卫生组织 慢性传染病 感染途径 牛分枝杆菌 消化道感染

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牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌和牛结核分枝杆菌三重PCR快速检测方法的建立 被引量：15

8

作者 杨莉 余波 +10 位作者 张涛 姜玲玲 刘镜 杨丽娟 孙启跃 徐景峨 龙玲 唐远江 余国富 邹茂华 吴位珩 《贵州农业科学》 CAS 2020年第5期92-96,共5页

为建立快速、准确的检测牛呼吸道主要病原菌牛支原体(Mycoplasma bovis)、牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)及牛结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的方法,对牛支原体oppD基因序列、牛多杀性巴氏杆菌Pm-kmt基因序列、牛结核分枝杆菌I... 为建立快速、准确的检测牛呼吸道主要病原菌牛支原体(Mycoplasma bovis)、牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)及牛结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的方法,对牛支原体oppD基因序列、牛多杀性巴氏杆菌Pm-kmt基因序列、牛结核分枝杆菌IS6110基因序列分别设计特异性引物,对单一PCR检测方法进行优化后建立三重PCR检测方法。结果表明:三重PCR的最佳扩增条件为94℃预变性10min;94℃1min,60℃50s,72℃1min,循环30次;72℃延伸10min。建立的三重PCR方法能对同一样本中的3种病原菌进行扩增,特异性强。牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌和牛结核分枝杆菌的最低检测DNA浓度分别为5.306×10^-3ng/μL、3.075×10^-2ng/μL和1.605×10^-4ng/μL。建立的三重PCR方法临床检测牛支原体肺炎鼻拭子、牛结核分枝杆菌、结核菌素与单一PCR检测方法的阳性符合率为100%。三重PCR检测方法可用于牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌、牛结核分枝杆菌的单一和混合感染鉴别诊断,具有快速、准确、简便的特点。 展开更多

关键词 牛支原体 牛多杀性巴氏杆菌 牛结核分枝杆菌 三重PCR

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用酶免疫法检测牛结核分枝杆菌的IgG抗体 被引量：8

9

作者 简敏华 徐肇华 +6 位作者 邵维杰 邱留娣 胡畅中 陈慧英 王永康 叶元亨 孙泉云 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期81-82,共2页

目的　建立一种酶免疫法检测牛血清中牛结核分枝杆菌的IgG抗体。方法　从牛结核分枝杆菌中分离牛结核菌糖脂抗原 ,并固相在聚苯乙烯微量反应板上 ,将抗牛IgG单克隆抗体标记在辣根过氧化物酶。 结果　皮肤试验阳性 46头牛中 ,酶标阳性 3... 目的　建立一种酶免疫法检测牛血清中牛结核分枝杆菌的IgG抗体。方法　从牛结核分枝杆菌中分离牛结核菌糖脂抗原 ,并固相在聚苯乙烯微量反应板上 ,将抗牛IgG单克隆抗体标记在辣根过氧化物酶。 结果　皮肤试验阳性 46头牛中 ,酶标阳性 30头牛。皮肤试验阴性 750头牛中 ,酶标阴性为 70 7头牛。 展开更多

关键词 酶免疫法 检测 牛结核分枝杆菌 IGG抗体

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牛结核分枝杆菌株快速培养方法的对比

10

作者 古努尔.吐尔逊 努尔拜合提 +2 位作者 沙依兰.卡依扎 王俊伟 呼西旦.阿巴拜克力 《中国动物检疫》 CAS 2015年第12期56-58,共3页

[目的 ]应用引进的Va间接培养方法、传统的丙酮酸钠、L-J培养基直接培养方法对牛结核分枝杆菌生长时间进行对比试验。[方法 ]将牛型结核分枝杆菌接种于含0.1%琼脂Va培养基中预培养24 h,转接到含0.3%琼脂Va培养基中培养6 d后分别转接到... [目的 ]应用引进的Va间接培养方法、传统的丙酮酸钠、L-J培养基直接培养方法对牛结核分枝杆菌生长时间进行对比试验。[方法 ]将牛型结核分枝杆菌接种于含0.1%琼脂Va培养基中预培养24 h,转接到含0.3%琼脂Va培养基中培养6 d后分别转接到丙酮酸钠培养基和L-J培养基上(间接法);同时牛型结核分枝杆菌接菌于丙酮酸钠培养基和L-J培养基培养,在37℃培养箱内孵育(直接方法),每天观察,并记录出现菌落时间。[结果]接种Va培养基的菌株分别转接丙酮酸钠培养基和L-J培养基后第3 d可见菌落,第12 d培养基斜面可见典型的牛型结核分枝杆菌菌落;而直接接种于丙酮酸钠培养基与L-J培养基后分别于第26 d和第31 d可见典型的牛型结核分枝杆菌菌落。[结论 ]引进的Va牛型结核分枝杆菌间接培养方法可以缩短菌落培养时间,为牛型结核杆菌病提供早期诊断依据。 展开更多

关键词 丙酮酸钠培养基 L-J培养基 牛结核分枝杆菌株 Va培养基 早期诊断

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牛结核分枝杆菌临床分离株rpoB、KatG基因突变分析

11

作者 郭邦成 周学章 王玉炯 《中国奶牛》 2009年第6期7-10,共4页

为了解牛结核分枝杆菌临床分离菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)的分子耐药机制,本研究采用噬菌体生物扩增法对分离并鉴定的25株牛结核分枝杆菌进行药敏分析,筛选出9株耐利福平、异烟肼菌株,PCR扩增耐药株的rpoB基因片段(213bp)和KatG基... 为了解牛结核分枝杆菌临床分离菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)的分子耐药机制,本研究采用噬菌体生物扩增法对分离并鉴定的25株牛结核分枝杆菌进行药敏分析,筛选出9株耐利福平、异烟肼菌株,PCR扩增耐药株的rpoB基因片段(213bp)和KatG基因片段(458bp)并测序。通过对耐药基因的测序分析,5株利福平耐药株的rpoB基因在531位点(RNA聚合酶β-亚基编码基因起始密码子起,下同)、526位点、511位点发生突变,其中有3株rpoB基因531位点发生突变,1株rpoB基因526位点突变;1株rpoB基因在531位点和511位点发生了较为少见的联合突变;4株异烟肼耐药菌株,其中2株在315位点(KatG蛋白编码基因起始密码子起,下同)发生碱基突变,2株在463位点发生碱基突变。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 RPOB基因 KATG基因 耐药性

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牛结核分枝杆菌PCR检测方法的建立

12

作者 刘忠发 张华 +5 位作者 李涛 沙祖敏 杜春林 姜德荣 周碧君 程振涛 《贵州畜牧兽医》 2014年第2期1-4,共4页

随着牛结核病疫情日趋严重,快速、高效的分子生物学检测方法建立显得十分必要。试验设计合成了牛结核分枝杆菌特异性引物,优化反应条件,建立了牛分枝杆菌PCR检测方法。结果显示,所建立的牛结核分枝杆菌PCR检测方法可有效检测牛结核分枝... 随着牛结核病疫情日趋严重,快速、高效的分子生物学检测方法建立显得十分必要。试验设计合成了牛结核分枝杆菌特异性引物,优化反应条件,建立了牛分枝杆菌PCR检测方法。结果显示,所建立的牛结核分枝杆菌PCR检测方法可有效检测牛结核分枝杆菌,在模板浓度、引物浓度和退火温度分别为1.32μg/mL、0.5μm/L、54℃时最佳;性能评估显示,该方法具有较好的特异性、敏感性和临床应用性,为我省牛结核病的综合防控提供关键技术。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 PCR检测 方法建立

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牛结核分枝杆菌的生物学性状

13

作者 卜文甲 《养殖技术顾问》 2012年第11期137-137,共1页

1形态与染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，牛分枝杆菌则比较粗短，细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60％，特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法，以5％石炭酸复红加温... 1形态与染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，牛分枝杆菌则比较粗短，细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60％，特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法，以5％石炭酸复红加温染色，但用3％盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 生物学性状 牛分枝杆菌 染色法 脂质含量 细胞壁 肽聚糖 石炭酸

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深圳某养殖场奶牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测与皮内变态反应比对试验 被引量：1

14

作者 黄沁 《畜牧兽医科技信息》 2018年第4期27-28,共2页

牛结核病是一种人畜共患传染病,被我国列为二类动物疫病,给牛业生产特别是奶牛养殖业造成巨大危害,并对人类的健康也造成了严重的威胁。为加强奶牛养殖场结核病的高效监测,我实验室人员严格按照农业部发布的动物疫病监测计划,每年定期... 牛结核病是一种人畜共患传染病,被我国列为二类动物疫病,给牛业生产特别是奶牛养殖业造成巨大危害,并对人类的健康也造成了严重的威胁。为加强奶牛养殖场结核病的高效监测,我实验室人员严格按照农业部发布的动物疫病监测计划,每年定期对辖区内的奶牛进行结核病检疫监控。近年来,随着全球科技的高速发展,牛结核病的检测方法也逐步完善,现行的检测方法包括结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素检测试验。其中皮内变态反应是我国标准(GB/T 18645-2002)规定的牛结核病检测方法,而γ-干扰素检测试验是OIE规定的国际贸易指定使用的检测方法,为了验证此两种方法在实际工作中的检测效果,我实验室运用两种检测方法对辖区内A,B奶牛养殖场的12月龄以上奶牛进行了检测比对试验。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 皮内变态反应 奶牛养殖业 Γ-干扰素 奶牛养殖场 检测试验 比对试验 动物疫病监测

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基于结核分枝杆菌牛变种C68001随机突变体库筛选和鉴定成膜相关基因

15

作者 时文健 徐磊 +5 位作者 张泽 杨蕊 辛凌翔 王楠 陈祥 鑫婷 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3992-4006,共15页

旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,用苏通培养基进行培养,筛选生物膜表型差异明显的突变株,通过抗性标记挽救法及测序... 旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,用苏通培养基进行培养,筛选生物膜表型差异明显的突变株,通过抗性标记挽救法及测序,确定突变基因位置;检测突变基因对菌株抗氧化性及抗SDS性能的影响;进一步以噬菌体系统构建靶标基因缺失、回补及过表达菌株,利用扫描电子显微镜检测靶基因对细菌菌丝影响,通过测定细菌的抗酸、抗氧化、抗SDS以及在小鼠巨噬细胞系J774A.1中的存活性能,检测靶标基因对细菌抗逆性和胞内存活的影响。利用突变体文库,筛选到8个生物膜形成缺陷的菌株,鉴定其中4个为单基因突变菌株,突变基因分别为Rv1096、Rv3425、Rv 3136和Rv 3671c;构建Rv 3671c基因敲除、回补和过表达菌株,通过PCR及Western blot验证构建成功,测试其生物膜形成能力、抗逆性和胞内存活性能,发现Rv 3671c基因可提高结核分枝杆菌牛变种抗SDS、生物膜形成及胞内存活等方面的能力。Rv 3671c基因在结核分枝杆菌牛变种C68001的生物膜形成和抗逆性能力中发挥重要作用。构建的结核分枝杆菌牛变种C68001菌株突变体文库可高效用于靶标基因的筛选和鉴定,为探索结核分枝杆菌牛变种的基因功能提供了可靠的工具。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌牛变种 Himar 1转座子 随机插入突变库 生物膜 Rv 3671c

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非结核分枝杆菌快速检测方法的研究进展 被引量：2

16

作者 师清博 赵明明 +2 位作者 单晓枫 王春凤 钱爱东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期163-166,共4页

非结核分枝杆菌（NontuberculousMycobacterium，NTM）是指人、牛结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌以外的一大类分枝杆菌的总称。NTM是机会性致病菌，并且大部分的NTM是腐物寄生菌，广泛存在于自然环境中，

关键词 牛结核分枝杆菌 快速检测方法 自然环境 NTM 致病菌 寄生菌 麻风

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一株牛分枝杆菌的分离与鉴定 被引量：1

17

作者 许礼义 呼西旦 +3 位作者 徐志光 宋振忠 杨启元 黄炯 《草食家畜》 2010年第3期10-14,共5页

采集一头检疫阳性的结核牛病变的淋巴组织进行细菌分离。分离物(Z-N)染色为阳性。提取细菌DNA,用PCR检测结核分枝杆菌特异性插入片段IS1081,确定该细菌为结核分枝杆菌。将PCR扩增出的特异性片段克隆到PMD-18T载体上。重组质粒经酶切和PC... 采集一头检疫阳性的结核牛病变的淋巴组织进行细菌分离。分离物(Z-N)染色为阳性。提取细菌DNA,用PCR检测结核分枝杆菌特异性插入片段IS1081,确定该细菌为结核分枝杆菌。将PCR扩增出的特异性片段克隆到PMD-18T载体上。重组质粒经酶切和PCR鉴定均为阳性,测序结果与牛分枝杆菌标准菌株的同源性为100%。对其用Richard C.Huard等公布的PCR分型方法设计引物进行基因分型,确定该菌株为牛分枝杆菌BCG(M.bovis BCG)。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌BCG 分离培养 PCR鉴定 基因分析

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变性高效液相色谱在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

18

作者 杨华 胡忠义 《中国防痨杂志》 CAS 2006年第S1期22-22,共1页

目的应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测结核分枝杆菌(MTB)对乙胺丁醇(EMB)、吡嗪酰胺(PZA)耐药相关基因embB,pncA的突变情况,探讨DHPLC在MTB耐药性检测中的应用价值。

关键词 耐药性检测 牛结核分枝杆菌 耐药相关基因 变性高效液相色谱技术 突变检测 分离株 测序 药敏检测 基因片段 应用研究

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牛分枝杆菌蛋白基因相互作用研究工具及其进展

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作者 张喜悦 史扬 范伟兴 《中国动物检疫》 CAS 2015年第9期64-68,共5页

目前有多种技术应用于结核分枝杆菌蛋白相互作用的研究:一是酵母双杂交技术,可以在生物体内验证2个蛋白的相互作用。二是构建分枝杆菌基因突变株,研究蛋白作用的机理,其基本策略为,基因敲除双链DNA的扩增;牛结核分枝杆菌/p JV53感受态... 目前有多种技术应用于结核分枝杆菌蛋白相互作用的研究:一是酵母双杂交技术,可以在生物体内验证2个蛋白的相互作用。二是构建分枝杆菌基因突变株,研究蛋白作用的机理,其基本策略为,基因敲除双链DNA的扩增;牛结核分枝杆菌/p JV53感受态细胞的制备;将基因敲除双链DNA片段转化至牛结核分枝杆菌细胞中;筛选、鉴定阳性菌落。三是通过GST pull-down试验检测已知蛋白和靶蛋白的相互作用。目前,研究牛分枝杆菌蛋白基因相互作用较多是RD1区基因。研究表明,阐明分枝杆菌蛋白的作用机理有助于进一步研发高效的牛结核病诊断试剂和疫苗。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 蛋白 相互作用

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牛分枝杆菌与鸟型分枝杆菌2型重组蛋白Ag85b的血清学交叉反应研究

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作者 朱婷 王华南 +6 位作者 刘慧芳 于申业 王秀梅 陈莉苹 司微 赵海玲 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期223-226,共4页

牛分枝杆菌(M.bovis)是引起牛结核病的常见病原,而鸟分枝杆菌(M.avium)2型则通常交叉感染牛,但不会导致严重的病变。为鉴定M.bovis和M.avium的免疫交叉反应情况,本研究分别以M.bovis和M.avium2型的基因组为模板,扩增ag85b基因,分别构建... 牛分枝杆菌(M.bovis)是引起牛结核病的常见病原,而鸟分枝杆菌(M.avium)2型则通常交叉感染牛,但不会导致严重的病变。为鉴定M.bovis和M.avium的免疫交叉反应情况,本研究分别以M.bovis和M.avium2型的基因组为模板,扩增ag85b基因,分别构建了M.bovis和M.avium的原核和真核表达重组质粒进行表达。以原核表达纯化的两种重组蛋白Ag85b(rAg85b)分别作为包被抗原,交叉检测两种真核重组质粒免疫豚鼠制备的抗血清。结果表明,原核表达的M.bovis和M.avium rAg85b与真核重组质粒免疫豚鼠制备的两种抗血清之间存在较强的免疫交叉反应。研究结果揭示M.bovis和M.avium的Ag85b蛋白存在很强的血清学交叉反应,这将严重干扰M.bovis Ag85b作为候选疫苗的免疫监测。 展开更多

关键词 牛结核分枝杆菌 鸟型分枝杆菌 ag85b基因 交叉反应

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