牛白血病病毒RAA荧光检测方法的建立与初步应用

1

作者 侯欣怡 王建发 +2 位作者 连帅 耿子健 武瑞 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第8期46-52,共7页

为了建立一种基于牛白血病病毒(BLV)env结构基因的高效、便捷和特异的重组酶介导等温扩增(RAA)快速检测方法,本试验利用DNAMAN进行序列比对,构建重组质粒pESI-env,设计并筛选RAA引物和探针,建立反应体系,进一步优化反应程序和引物探针用... 为了建立一种基于牛白血病病毒(BLV)env结构基因的高效、便捷和特异的重组酶介导等温扩增(RAA)快速检测方法,本试验利用DNAMAN进行序列比对,构建重组质粒pESI-env,设计并筛选RAA引物和探针,建立反应体系,进一步优化反应程序和引物探针用量,建立检测方法,并评价所建立方法的特异性、灵敏性和重复性,将该方法对临床样本的检测结果与酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(qPCR)进行比对。结果显示,最佳引物探针组合为F4/R1/P;该方法在20 min即可完成反应;与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛轮状病毒(BRV)无交叉反应,最低检出限可达1.62×10^(1) copies/μL,且重复性良好;建立方法的临床样本阳性检出率略高于ELISA和qPCR两种标准检测方法。本试验成功建立了一种高效、便捷且特异性强的BLV RAA荧光检测方法,摆脱了传统方法对昂贵设备、专业人员和检测技术的依赖,为BLV的临床检测提供了技术支持。 展开更多

关键词 牛白血病病毒(BLV) 重组酶介导等温扩增(RAA) 快速检测方法

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牛白血病病毒P24蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定

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作者 于长清 周玉龙 +1 位作者 徐青元 先元华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1080-1085,共6页

为制备牛白血病病毒(BLV)P24蛋白单克隆抗体(MAb),本研究分别将原核表达载体pcoldIII-P24-GST和p ET-32a-P24-6×His转染大肠杆菌感受态细胞后诱导表达并分别采用纯化磁珠和Ni-柱纯化带有His和GST标签的两种重组P24蛋白(rP24-His和r... 为制备牛白血病病毒(BLV)P24蛋白单克隆抗体(MAb),本研究分别将原核表达载体pcoldIII-P24-GST和p ET-32a-P24-6×His转染大肠杆菌感受态细胞后诱导表达并分别采用纯化磁珠和Ni-柱纯化带有His和GST标签的两种重组P24蛋白(rP24-His和r P24-GST)。将rP24-His作为免疫原免疫小鼠,制备针对P24蛋白的MAb,利用rP24-GST作为包被抗原,经ELISA方法筛选,结果显示获得并筛选到两株针对P24蛋白效价较高的MAb44-10和115-5。间接免疫荧光试验检测结果显示,两株MAb仅和P24蛋白反应,均不能与牛病毒性腹泻病毒反应,初步表明其特异性良好。将P24蛋白截短表达后进行抗原表位鉴定,结果显示,两株MAb 44-10和115-5分别识别P24蛋白氨基酸序列197GQKLQACAHW^(206)和108GDLRSQYQN^(116)。本研究获得的两株P24 MAb具有建立BLV血清学检测方法的潜力,为进一步研发针对P24蛋白的BLV检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 单克隆抗体 P24蛋白

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牛白血病病毒env(gp51)基因的克隆和原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：7

3

作者 周毅 吴玉石 +4 位作者 段宏安 张睿 周祖涛 毕丁仁 石德时 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期538-543,共6页

从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp。将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL... 从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp。将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法。结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg.mL-1,血清的最佳稀释倍数为1∶80,阳性判定标准确定为样品OD450 nm大于0.451。用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 gp51蛋白 原核表达 间接ELISA

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牛白血病病毒LUX^TM实时荧光聚合酶链式反应检测方法的建立 被引量：3

4

作者 刘志玲 陈茹 +3 位作者 马静云 吴晓薇 曾碧健 林志雄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期383-387,共5页

采用LUXTM新型荧光PCR技术原理,设计并合成1对单标记LUXTM荧光引物,建立了LUXTM荧光PCR和RT-PCR方法,可快速检测牛白血病病毒(BLV)前病毒DNA和病毒RNA。结果显示所建立的LUXTM荧光PCR/RT-PCR体系可特异检测牛白血病病毒核酸,而对蓝舌病... 采用LUXTM新型荧光PCR技术原理,设计并合成1对单标记LUXTM荧光引物,建立了LUXTM荧光PCR和RT-PCR方法,可快速检测牛白血病病毒(BLV)前病毒DNA和病毒RNA。结果显示所建立的LUXTM荧光PCR/RT-PCR体系可特异检测牛白血病病毒核酸,而对蓝舌病、牛病毒性腹泻-粘膜病、水泡性口炎、口蹄疫、牛流行热、牛传染性鼻气管炎等病毒核酸以及牛结核分支杆菌、大肠杆菌、健康动物组织核酸扩增均呈阴性反应。敏感性实验表明LUXTM荧光RT-PCR对RNA前病毒的检测敏感性达0.49 ng/μL,荧光PCR对pTblv-gp51重组质粒的检测敏感性可达0.138拷贝,比OIE规程的巢式PCR方法高104倍以上。采用该方法从血清学阳性临床牛血清中检出BLV阳性样品。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 荧光PCR LUXTM引物

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牛白血病病毒分子致病机理研究进展 被引量：6

5

作者 张志 赵宏坤 崔治中 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期154-156,共3页

牛白血病 (BovineLeucosis,BL)是牛的一种慢性肿瘤性疾病 ,其特征为淋巴样细胞恶性增生、进行性恶病质和高度病死率。其病原为牛白血病病毒 (BLV)。本病分布广泛 ,几乎遍布全世界养牛的国家。我国自 1977年以来 ,先后在江苏、安徽、上... 牛白血病 (BovineLeucosis,BL)是牛的一种慢性肿瘤性疾病 ,其特征为淋巴样细胞恶性增生、进行性恶病质和高度病死率。其病原为牛白血病病毒 (BLV)。本病分布广泛 ,几乎遍布全世界养牛的国家。我国自 1977年以来 ,先后在江苏、安徽、上海、陕西、新疆等地发现本病 ,并有扩大之势 ,对养牛业的发展构成严重威胁。近年来 ,随着分子生物学的飞速发展 ,牛白血病病毒的研究也取得了较大进展 。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 病原分子生物学 致病机理

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血液代用品样品中牛白血病病毒的检测 被引量：1

6

作者 史利军 邵长利 +1 位作者 吕茂民 章金刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第6期89-91,共3页

关键词 牛白血病病毒 血液代用品 安全性检测 样品 淋巴细胞 VIRUS 肿瘤性疾病 19世纪末

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牛白血病病毒对牛免疫系统功能影响的研究进展 被引量：4

7

作者 徐之勇 仲崇岳 余燕 《中国奶牛》 2008年第8期39-41,共3页

哺乳动物的免疫系统主要包括体液免疫和细胞免疫。但目前大多数学者认为B淋巴细胞是牛白血病病毒的靶细胞,BLV不但能引起B淋巴细胞持续性增生,同时也能引起B淋巴细胞持续性减少。本文主要对BLV感染对牛B淋巴细胞的影响进行了阐述,同时... 哺乳动物的免疫系统主要包括体液免疫和细胞免疫。但目前大多数学者认为B淋巴细胞是牛白血病病毒的靶细胞,BLV不但能引起B淋巴细胞持续性增生,同时也能引起B淋巴细胞持续性减少。本文主要对BLV感染对牛B淋巴细胞的影响进行了阐述,同时探讨了T淋巴细胞在BLV感染牛发生的变化。 展开更多

关键词 牛白血病 牛白血病病毒 B淋巴细胞 T淋巴细胞

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牛白血病病毒对家兔感染试验

8

作者 郑福荣 王蕴敏 于力 《中国畜禽传染病》 CSCD 1991年第3期5-7,共3页

牛白血病病毒(BLV)接种家兔可产生 BLV 抗体;FLK/BLV 细胞株以静脉接种为最好;感染家兔细胞数不应低于8×10~6个;不同品种的家兔在感染性上无明显差别:BLV阳性兔复归绵羊和家兔可使少数绵羊产生 BLV抗体,而对家兔则无反应.

关键词 家兔 牛白血病病毒 感染 试验 兔

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牛白血病病毒GP51蛋白在大肠杆菌中表达及胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立 被引量：8

9

作者 宋阳威 张鑫宇 +4 位作者 张常印 吴亚力 孙怀昌 唐泰山 张敬友 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期272-275,共4页

为了建立一种快速诊断牛白血病(BLV)的检测方法,本研究从BLV中扩增出其囊膜糖蛋白gp51基因,经测序后克隆于表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-gp51。将其转化受体菌BL21,用IPTG诱导后表达出约42ku的目的蛋白,经western blo... 为了建立一种快速诊断牛白血病(BLV)的检测方法,本研究从BLV中扩增出其囊膜糖蛋白gp51基因,经测序后克隆于表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-gp51。将其转化受体菌BL21,用IPTG诱导后表达出约42ku的目的蛋白,经western blot检测表明目的蛋白具良好的反应原性。以胶体金标记的羊抗牛IgG(Fc)抗体作为标记抗体,将纯化的His-gp51重组蛋白和羊抗牛IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,各部件按序装配形成快速诊断试纸条。对22份样本分别用试纸条和ELISA试验进行检测,2种方法的阳性符合率为88.9%(8/9),表明本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快捷,具有较好的特异性和一定的敏感性,适宜基层初筛诊断和现场应用。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 gp51蛋白 表达 胶体金 免疫层析法

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牛白血病病毒抑制奶牛免疫系统功能的研究进展 被引量：3

10

作者 李思妍 王雍 +2 位作者 连帅 王建发 武瑞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1302-1307,共6页

牛白血病(Bovine leucosis,BL)是由BL病毒(BLV)引起的一种牛的传染病,根据该病的流行特点和表现形式分为流行性牛白血病(Enzootic bovine leukosis,EBL)和散发性牛白血病(Sporadic bovine leukosis,SBL)。BLV感染几乎遍布世界各地且主... 牛白血病(Bovine leucosis,BL)是由BL病毒(BLV)引起的一种牛的传染病,根据该病的流行特点和表现形式分为流行性牛白血病(Enzootic bovine leukosis,EBL)和散发性牛白血病(Sporadic bovine leukosis,SBL)。BLV感染几乎遍布世界各地且主要在奶牛中广泛传播,其传播方式有水平传播、垂直传播和哺乳传播。1871年立陶宛Leisering等最早报道BLV后,EBL开始在世界各地的奶牛中广泛发生,最新的调查结果显示,中国各地区奶牛群中该病感染率为0~61.7%[1],呈现出感染率高和发病率低的特点[2]。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 免疫系统功能 水平传播 垂直传播 奶牛群 流行特点 中国各地区

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牛奶是牛白血病病毒在细胞间垂直传播的潜在危险因素 被引量：4

11

作者 唐阳国 何融泽 何宝祥 《广西畜牧兽医》 2020年第3期124-124,共1页

牛白血病病毒(Bovine leukemia virus,BLV)是地方流行性牛白血病(Enzootic bovine leukosis,EBL)的病原,该病是牛最常见的肿瘤疾病。它属于逆转录病毒科的Delta逆转录病毒属,该属成员还包括有人类T细胞白血病病毒Ⅰ型和Ⅱ型。大约70%的... 牛白血病病毒(Bovine leukemia virus,BLV)是地方流行性牛白血病(Enzootic bovine leukosis,EBL)的病原,该病是牛最常见的肿瘤疾病。它属于逆转录病毒科的Delta逆转录病毒属,该属成员还包括有人类T细胞白血病病毒Ⅰ型和Ⅱ型。大约70%的BLV感染牛不出现临床症状,而30%的感染牛出现持久淋巴球增多症,其特点是多克隆表达非肿瘤CD5+B淋巴细胞,其中2%~5%经过长时间的潜伏期形成B细胞性白血病或淋巴瘤。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 垂直传播 逆转录病毒科 肿瘤疾病 B淋巴细胞 潜在危险因素 临床症状

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牛白血病病毒的鉴定及防控 被引量：3

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作者 宫洪杰 《畜牧兽医杂志》 2022年第4期19-20,共2页

牛白血病病毒是牛最常见的肿瘤性疾病之一,在临床医疗中并不多见,由于缺乏对该病的认识,临床上诊断经常误诊,本文通过NBCI网站查找牛白血病病毒的基因序列,利用Primer 5.0软件设计一对特异性引物,对该引物进行反应条件的优化,并利用该... 牛白血病病毒是牛最常见的肿瘤性疾病之一,在临床医疗中并不多见,由于缺乏对该病的认识,临床上诊断经常误诊,本文通过NBCI网站查找牛白血病病毒的基因序列,利用Primer 5.0软件设计一对特异性引物,对该引物进行反应条件的优化,并利用该引物对牛白血病病毒基因进行扩增;结果显示该引物扩增的目的片段为194bp,能够作为PCR技术鉴定牛白血病病毒。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 诊断 PCR技术

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1株体内低水平复制的牛白血病病毒株的全基因组序列

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作者 Syamalima Dube 晋大鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第12期52-52,共1页

选取持续血清媒介物、低病毒载量牛白血病病毒(BLV)感染的阿根廷荷斯坦奶牛的外周血单核细胞,接种BLV株后,经体内感染获得羔羊淋巴细胞并提取基因组DNA。以包含完整BLV病毒的DNA序列设计一组重叠引物进行PCR扩增。扩增的BLV ARG 41 DNA... 选取持续血清媒介物、低病毒载量牛白血病病毒(BLV)感染的阿根廷荷斯坦奶牛的外周血单核细胞,接种BLV株后,经体内感染获得羔羊淋巴细胞并提取基因组DNA。以包含完整BLV病毒的DNA序列设计一组重叠引物进行PCR扩增。扩增的BLV ARG 41 DNA产物经克隆、测序,所获序列与其他的BLV序列(包括一株从阿根廷相同种群中获得的体内高复制病毒株BLV ARG 38)进行比对。本研究还对BLV ARG 41推导蛋白的特性及与逆转录病毒PTLV/BLV属其他种群间的关系进行了探讨。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 克隆 测序 阿根廷

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聚合酶链反应检测牛白血病病毒的研究

14

作者 徐耀基 丘勇胜 +1 位作者 林玲 唐清波 《中国畜禽传染病》 CSCD 1997年第6期45-47,共3页

试验针对牛白血病病毒（ＢＬＶ）前病毒基因的特点，设计一对引物，对ＢＬＶ前病毒的ＤＮＡ提取物和细胞毒直接煮沸产物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增３０个循环后，经电泳分离，紫外灯下可见到一条明显的ＤＮＡ带，其大小为４４０... 试验针对牛白血病病毒（ＢＬＶ）前病毒基因的特点，设计一对引物，对ＢＬＶ前病毒的ＤＮＡ提取物和细胞毒直接煮沸产物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增３０个循环后，经电泳分离，紫外灯下可见到一条明显的ＤＮＡ带，其大小为４４０ｐｂ。对连续３年琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）ＢＬＶ阳性的２０头牛血样ＤＮＡ提取物进行ＰＣＲ扩增，阳性率为７０％。本法具有敏感、特异、快速及良好的重复性等特点。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 聚合酶链反应

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琼脂凝胶免疫沉淀试验检测牛白血病病毒感染

15

作者 朱其太 《畜牧兽医科技信息》 1998年第23期7-7,共1页

巴西学者Moraes等应用糖蛋白gp51抗原的琼脂凝胶免疫沉淀试验对9个地区172个城市4200个乳牛场采集的39799份血样进行牛白血病病毒抗体检测。结果有3645份样本为阳性,阳性率为9.2％,其中感染率最低的乌鲁瓜亚纳为22％(17.8％农场),最高... 巴西学者Moraes等应用糖蛋白gp51抗原的琼脂凝胶免疫沉淀试验对9个地区172个城市4200个乳牛场采集的39799份血样进行牛白血病病毒抗体检测。结果有3645份样本为阳性,阳性率为9.2％,其中感染率最低的乌鲁瓜亚纳为22％(17.8％农场),最高的是圣加布里埃尔阳性率为19.6％ 展开更多

关键词 牛白血病病毒 琼脂凝胶 试验检测 免疫沉淀试验 阳性率 抗体检测 乳牛场 感染率 糖蛋白 病毒感染

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实验动物感染牛白血病病毒

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作者 谢慧胜 赵艳茹 《浙江畜牧兽医》 1989年第1期46-46,共1页

家兔在接种白血病病毒感染牛的淋巴细胞或FLK—BLV细胞林后1—4个月出现了抗牛白血病病毒抗体,持续时间至少6个月。仓鼠和豚鼠接种白血病感染牛的淋巴细胞或通过0.

关键词 牛白血病病毒 动物感染 病毒抗体 细胞培养液 持续时间 微孔过滤 血液学异常

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牛白血病病毒GP51蛋白在大肠杆菌中表达及胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立

17

《今日畜牧兽医》 2010年第7期68-68,共1页

为了建立一种快速诊断牛白血病（BLV）的检测方法，本研究从BLV中扩增出其囊膜糖蛋白gp51基因，经测序后克隆于表达载体pET32a（＋）中，构建了重组表达质粒pET32a—gp51。将其转化受体菌BL21，

关键词 牛白血病病毒 囊膜糖蛋白 胶体金免疫层析 大肠杆菌 检测 试纸条 重组表达质粒 快速诊断

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用ELISA检测牛白血病病毒

18

作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1999年第4期6-6,共1页

为了评价8种ELISA和PCR检测牛白血病病毒抗体或核酸的能力,作者用5种ELISA测试了82份已知血清和399份来源于新西兰牛的现地血清,并与琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验和电泳免疫印迹(EIB)试验结果进行了比较。结果表明,有2种市售ELISA对99％... 为了评价8种ELISA和PCR检测牛白血病病毒抗体或核酸的能力,作者用5种ELISA测试了82份已知血清和399份来源于新西兰牛的现地血清,并与琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验和电泳免疫印迹(EIB)试验结果进行了比较。结果表明,有2种市售ELISA对99％的已知血清进行了准确分类,另外3种对88—95％的已知血清准确分类。这些ELISA对399份现地血样的大部分分类一致(91.7％).而且AGID超过95％。用系列稀释的围际标准血清E4测试.阳性结果的最高稀释度为1: 展开更多

关键词 牛白血病 ELISA检测 免疫印迹 免疫扩散 PCR检测 琼脂凝胶 部分分类 国际标准血清 血清学试验 牛白血病病毒

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精心护理新生犊牛控制牛白血病病毒感染

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作者 M.C.Thurmond 顾有方 《国外畜牧科技》 1992年第6期47-48,共2页

牛白血病病毒(BLV)是一种致瘤性的反转录病毒,能引起牛持续性的淋巴细胞增多症和淋巴肉瘤。控制BLV的重要方法是对犊牛进行适当处理以预防感染,主要是将病毒的传播降至最小范围。

关键词 犊牛 牛白血病病毒 感染

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牛白血病前病毒Taqman荧光PCR检测方法的建立 被引量：1

20

作者 李凯航 鞠厚斌 +2 位作者 杨显超 宁昆 王建 《上海畜牧兽医通讯》 2014年第1期12-13,共2页

设计并合成荧光引物，建立了Taqman荧光PCR体系，可快速检测全血样品中的牛白血病前病毒DNA。所建立的荧光PCR体系可特异检测牛白血病病毒核酸，而对牛病毒性腹泻-粘膜病毒（BVDV ）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV ）以及羊胎肾细胞（FLK... 设计并合成荧光引物，建立了Taqman荧光PCR体系，可快速检测全血样品中的牛白血病前病毒DNA。所建立的荧光PCR体系可特异检测牛白血病病毒核酸，而对牛病毒性腹泻-粘膜病毒（BVDV ）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV ）以及羊胎肾细胞（FLK ）、牛布鲁氏菌扩增均呈阴性反应，对pBST-pol重组质粒的检测敏感性可达0．32拷贝。重复性实验的Ct值变异系数介于0．67％～1．16％之间，稳定性实验的Ct值变异系数为3．14％。采用建立的Taqman荧光PCR体系和OIE推荐的套式PCR对94份临床样品进行检测，两者定性符合率达到97．87％。 展开更多

关键词 牛白血病前病毒 引物

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