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牛病毒性腹泻—黏膜病病毒C_(24)V株E_0截短基因密码子优化及其在卡介苗中的表达 被引量：2
1
作者 张云 郝俊伟 +5 位作者 刘红娜 王文玉 杨宇航 时坤 李健明 杜锐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期71-76,共6页
E0基因编码的蛋白是牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(BVDV)的主要保护性抗原之一,其是研制BVDV基因工程疫苗的候选者。E0基因在卡介苗中难以表达,已有研究结果表明E0蛋白具有RNase活性。根据卡介苗密码子使用频率分析E0基因,发现其有多个稀有... E0基因编码的蛋白是牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(BVDV)的主要保护性抗原之一,其是研制BVDV基因工程疫苗的候选者。E0基因在卡介苗中难以表达,已有研究结果表明E0蛋白具有RNase活性。根据卡介苗密码子使用频率分析E0基因,发现其有多个稀有密码子。通过对该基因截短和密码子优化,在卡介苗中表达E0基因,检测到了E0蛋白的抗原活性,为构建可同时预防结核和牛病毒性腹泻—黏膜病的二价基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻 黏膜病病毒 E0基因 密码子 重组卡介苗
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牛病毒性腹泻/黏膜病病原学特征及其检测方法研究进展 被引量：1
2
作者 陈伯祥 王佳 +2 位作者 赵子惠 杨明 唐云娇 《畜牧兽医杂志》 2025年第2期97-102,共6页
近年来,牛病毒性腹泻病/黏膜病(BVD-MD)在国内外流行广泛、对养牛业危害严重,仅通过临床症状和病理变化很难与其它腹泻病作出鉴别诊断。为了确诊和净化BVD-MD,选择一种最佳的检测方法就显得十分重要。本文对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)病原... 近年来,牛病毒性腹泻病/黏膜病(BVD-MD)在国内外流行广泛、对养牛业危害严重,仅通过临床症状和病理变化很难与其它腹泻病作出鉴别诊断。为了确诊和净化BVD-MD,选择一种最佳的检测方法就显得十分重要。本文对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)病原基本信息及流行毒株、检测方法和近年来的研究进行了综述,以期对牛病毒性腹泻/黏膜病的流行病学调查、致病机制、检测及防治提供参考。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 病原学 检测方法
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牛病毒性腹泻病-黏膜病的流行病学、诊断与防治研究 被引量：2
3
作者 着格吉 《中国动物保健》 2025年第4期31-32,共2页
本文选取2024年1~2月某牛养殖场中感染牛病毒性腹泻病-黏膜病的16头病牛展开研究,基于治疗方式差异分为对照组与联合组,以常规西药方式治疗对照组,中西药联合方式治疗联合组,对比疗效。结果显示联合组病牛治愈率为87.50%显著高于对照组... 本文选取2024年1~2月某牛养殖场中感染牛病毒性腹泻病-黏膜病的16头病牛展开研究,基于治疗方式差异分为对照组与联合组,以常规西药方式治疗对照组,中西药联合方式治疗联合组,对比疗效。结果显示联合组病牛治愈率为87.50%显著高于对照组。在牛养殖过程中,相关人员需掌握牛病毒性腹泻病-黏膜病的流行病学及诊疗方式,以促进牛养殖业的健康发展。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病-黏膜病 流行病学 诊断 防治
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四川苍溪牛病毒性腹泻性黏膜病防控措施 被引量：1
4
作者 康伦元 《农业工程技术》 2025年第3期103-104,共2页
病毒性腹泻-黏膜病,是牛养殖时常见的一类传染病,临床上患病牛主要表现为持续腹泻、黏膜发炎和糜烂等症状,严重影响牛的健康生长发育,若救治不及时后期病牛极易因脱水衰竭死亡,进而造成惨重损失,阻碍养牛业健康发展。该文介绍了牛病毒... 病毒性腹泻-黏膜病,是牛养殖时常见的一类传染病,临床上患病牛主要表现为持续腹泻、黏膜发炎和糜烂等症状,严重影响牛的健康生长发育,若救治不及时后期病牛极易因脱水衰竭死亡,进而造成惨重损失,阻碍养牛业健康发展。该文介绍了牛病毒性腹泻黏膜病的流行病学、症状表现、病理变化、诊断要点以及综合防控措施,旨在为相关从业人员提供参考。 展开更多
关键词 牛 病毒性腹泻-黏膜病 症状 病变 综合防控
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基于RTCPA-CRISPR/Cas12a的牛病毒性腹泻病毒检测方法的建立及应用
5
作者 蒙琦 常亮 +2 位作者 杨明 曹映辉 贺泂杰 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期80-88,共9页
本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法。选取BVDV的E0蛋白基因序列为基础,设计CPA特异性引物。同时,依据CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物,并优化了RT-CPA-CRISPR/Cas12a反应体系,... 本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法。选取BVDV的E0蛋白基因序列为基础,设计CPA特异性引物。同时,依据CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物,并优化了RT-CPA-CRISPR/Cas12a反应体系,此外,借助建立的该方法,开展了临床样品的检测。结果显示:所建立的检测方法对BVDV的最低检出限为8.0 copies/μL,并具有高度特异性,对42份临床样品检测显示,该方法与传统PCR方法的一致性好,符合率能达到92.86%。该研究建立了牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a检测方法,为该病的诊断提供了技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 交叉引物恒温扩增技术 CRISPR/Cas12a 灵敏度 特异性
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牛病毒性腹泻-黏膜病的防控
6
作者 李雨珍 张锟 +3 位作者 常江 梁旭 徐霄妍 李永翰 《河南畜牧兽医》 2025年第8期39-40,共2页
牛病毒性腹泻-黏膜病在我国牛群中已普遍流行,主要引起消化道黏膜溃烂、腹泻及免疫抑制等症状,慢性感染易引发其他病原体的继发感染,对养牛业健康稳定发展构成严重威胁。该病毒非致细胞病变型感染孕初期母牛可导致产出持续感染牛,成为... 牛病毒性腹泻-黏膜病在我国牛群中已普遍流行,主要引起消化道黏膜溃烂、腹泻及免疫抑制等症状,慢性感染易引发其他病原体的继发感染,对养牛业健康稳定发展构成严重威胁。该病毒非致细胞病变型感染孕初期母牛可导致产出持续感染牛,成为主要传染源。该病防控需根据牛场情况采取综合防控措施,包括持续感染牛的筛淘、疫苗免疫、实施净化等。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻-黏膜病 筛查 治疗 防控
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中西医结合治疗牛病毒性腹泻-黏膜病
7
作者 龙丽诗 《畜禽业》 2025年第3期61-63,67,共4页
牛病毒性腹泻-黏膜病是一种严重影响牛群健康的病毒性传染病,对畜牧业造成了较大的经济损失。中西医结合治疗将中医的整体调理与西医的精准治疗相结合,充分发挥了两者的优势,提高了疾病的治愈率,降低了复发率,并减少了药物副作用。通过... 牛病毒性腹泻-黏膜病是一种严重影响牛群健康的病毒性传染病,对畜牧业造成了较大的经济损失。中西医结合治疗将中医的整体调理与西医的精准治疗相结合,充分发挥了两者的优势,提高了疾病的治愈率,降低了复发率,并减少了药物副作用。通过介绍牛病毒性腹泻-黏膜病的病原和流行特点,阐述了患牛的临床特征和诊断措施,同时给出了中西医结合治疗牛病毒性腹泻-黏膜病的理论依据和治疗方案,以期促进牛群的健康生长,为畜牧业的可持续发展贡献力量。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻-黏膜病 临床症状 诊断 中西医治疗 防控措施
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牛病毒性腹泻黏膜病的诊断及中西医治疗
8
作者 倪长伟 《中国畜牧业》 2025年第18期105-106,共2页
随着我国养牛业不断向规模化和集约化发展,各种牛病受到普遍关注。牛病毒性腹泻黏膜病作为一种全球性流行的牛类传染病,具有较高的传染率和死亡率,对养殖业造成了较大的威胁,引起各国和社会广泛重视。为了更好地保护养殖牛的健康生长,... 随着我国养牛业不断向规模化和集约化发展,各种牛病受到普遍关注。牛病毒性腹泻黏膜病作为一种全球性流行的牛类传染病,具有较高的传染率和死亡率,对养殖业造成了较大的威胁,引起各国和社会广泛重视。为了更好地保护养殖牛的健康生长,提高养殖户的经济收益。越来越多的学者围绕牛病毒性腹泻黏膜病的诊断、预防和中西医治疗问题展开研究。运用临床观察、实验室检测和流行病学调查的方法对牛病毒性腹泻黏膜病进行研究,结果表明临床症状的观察对牛病毒性腹泻黏膜病的诊断具有重要的意义。该病的研究结果表明,采取综合防治措施有利于提高牛病毒性腹泻病防治水平。笔者主要从牛病毒性腹泻黏膜病的病原体、流行病学、诊断、预防及中西医治疗等几方面进行简要综述,以期为今后在养牛业中更好地诊断、预防和治疗牛病毒性腹泻黏膜病提供参考价值,促进牛养殖业的绿色健康可持续化发展。 展开更多
关键词 中西医治疗 牛病毒性腹泻黏膜病 诊断
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牛病毒性腹泻-黏膜病的诊断及预防
9
作者 李莹 陈宁 《畜牧兽医科技信息》 2025年第7期89-91,共3页
牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的重要传染病,对全球养牛业造成显著经济损失。该病的诊断目前依赖于临床观察、剖检变化和实验室检测,如病毒分离、电镜观察、血清学诊断和分子生物学技术;预防措施主要包括... 牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD-MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的重要传染病,对全球养牛业造成显著经济损失。该病的诊断目前依赖于临床观察、剖检变化和实验室检测,如病毒分离、电镜观察、血清学诊断和分子生物学技术;预防措施主要包括强化环境管理、优化饲养管理、规范疫苗接种、推行自繁自养、增强防疫意识、加强疫情监测与上报以及落实生物安全措施等。通过这些综合措施的应用,可以有效控制BVD-MD的传播,保障养牛业的健康和可持续发展。本文旨在探讨BVD-MD的诊断技术和预防策略,为养殖业者和兽医专业人员提供参考。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻-黏膜病 诊断技术 预防策略
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环介导等温扩增技术在牛病毒性腹泻检测中的应用
10
作者 周娴 陈文钦 +5 位作者 王雯熙 孙智武 张苗苗 郭妮妮 宋先荣 吴修竹 《养殖与饲料》 2025年第5期41-46,共6页
[目的]基于环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)技术,研究1种快速、灵敏检测牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)检测方法,为牛病毒性腹泻的快速诊治提供参考。[方法]参考GenBank上BVDV序列,... [目的]基于环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)技术,研究1种快速、灵敏检测牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)检测方法,为牛病毒性腹泻的快速诊治提供参考。[方法]参考GenBank上BVDV序列,依据BVDV的结构蛋白5'-UTR保守序列设计出多组引物探针,从中优选出1组扩增效果最佳的引物探针,经过优化反应体系和退火温度,建立BVDV的环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法。随后对该方法的敏感性、特异性进行了评估,并应用该检测方法进行临床样品检测。[结果]所建立的LAMP方法展现出高度特异性,仅对BVDV产生扩增信号,与牛常见病原(如口蹄疫、沙门氏菌等)无交叉反应;通过梯度稀释重组质粒验证,其检测灵敏度为102 copies/μL,较常规PCR提升10倍;临床样本检测结果与PCR法完全一致(符合率100%)。[结论]本研究建立的BVDV LAMP检测方法敏感性高、特异性强,适用于牛病毒性腹泻病的临床诊治。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 环介导等温扩增技术 快速检测 临床诊治 应用
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牛病毒性腹泻-黏膜病的诊断技术与综合防控策略研究
11
作者 商静静 《畜牧兽医科技信息》 2025年第6期86-88,共3页
牛病毒性腹泻-黏膜病是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种重要传染病,其发病率与死亡率较高,对养牛业及畜牧业的健康发展构成严重威胁,直接损害从业者的经济利益。本文重点对牛病毒性腹泻-黏膜病的临床诊断方法及养殖环节中的综合防... 牛病毒性腹泻-黏膜病是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种重要传染病,其发病率与死亡率较高,对养牛业及畜牧业的健康发展构成严重威胁,直接损害从业者的经济利益。本文重点对牛病毒性腹泻-黏膜病的临床诊断方法及养殖环节中的综合防控措施进行详细分析与深度探讨,对实际养殖生产具有重要指导意义和研究价值,有助于促进畜牧业的绿色健康可持续发展。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻 诊断方法 防治策略 生物安全措施
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连云港地区养殖场中牛病毒性腹泻病原检测与分析
12
作者 朱爱华 武倩茹 韩婷 《今日畜牧兽医》 2025年第8期12-14,共3页
为了解牛病毒性腹泻病原的流行情况,笔者采集了中小规模养殖场中腹泻牛的粪便、肛拭子及血液等病料组织样本共计717份,采用RT-PCR对采集的病料组织样本进行牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛星状病毒(BastV)、牛轮... 为了解牛病毒性腹泻病原的流行情况,笔者采集了中小规模养殖场中腹泻牛的粪便、肛拭子及血液等病料组织样本共计717份,采用RT-PCR对采集的病料组织样本进行牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛星状病毒(BastV)、牛轮状病毒(BRV)四种病毒性腹泻病原检测与分析。结果显示,BVDV、BCoV、BRV、BastV的阳性率分别为5.8%、4.6%、3.9%、1.7%。经过分析,四种牛病毒性腹泻病毒存在混合感染情况,以二重感染(7.9%)、三重感感染(4.2%)为主,且检测出2份四重感染。本研究将为牛主要病毒性腹泻的流行病学调查与防控提供参考。 展开更多
关键词 牛 病毒性腹泻 检测与分析
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青海海北地区牦牛病毒性腹泻病毒流行病学调查及5′-UTR遗传进化分析 被引量：2
13
作者 林伟山 马豆豆 +6 位作者 雷萌桐 魏斌 李国才 王光华 王戈平 简莹娜 李秀萍 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1241-1249,共9页
【目的】了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征。【方法】对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA,以其为模板扩增BVDV 5′-UT... 【目的】了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征。【方法】对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA,以其为模板扩增BVDV 5′-UTR保守区域,建立特异性检测牦牛BVDV的实时荧光定量PCR方法,并以该方法对青海海北地区牦牛养殖场BVDV感染情况进行检测。选取4份BVDV阳性样品,对BVDV 5′-UTR区域序列进行PCR扩增和测序,与NCBI中不同亚型BVDV以及同属病毒毒株进行相似性比对,并基于BVDV 5′-UTR区域进行遗传进化分析。【结果】本研究基于BVDV 5′-UTR成功建立实时荧光定量PCR检测方法,标准曲线相关系数(R^(2))为0.997,标准品浓度为2.69×10^(2)~2.69×10^(9)拷贝/μL时具有良好的线性关系,最小检出限为2.69×10^(2)拷贝/μL。重复性试验结果显示,变异系数均<1.7%,具有良好的重复性和稳定性。采用建立的实时荧光定量PCR方法对青海省海北地区门源县、祁连县、海晏县和湟源县的腹泻牦牛粪便样品进行检测,结果显示,BVDV阳性率分别为45.00%、36.00%、30.77%和29.00%。BVDV 5′-UTR序列比对结果显示,分离获得的4株牦牛源BVDV与伊朗、美国的BVDV-1a亚型毒株聚集在同一个独立分支,核苷酸序列相似性为76.6%~99.7%。【结论】本研究明确了BVDV-1a型是导致青海省海北地区牦牛腹泻的重要病原之一,为该地区牦牛养殖场及时、有效地采取防控措施提供了科学依据,同时丰富了当地BVDV的分子流行病学调查数据,为该地区牛病毒性腹泻病的防控及疫苗研发提供了理论基础。 展开更多
关键词 牦牛 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 流行病学 实时荧光定量PCR 遗传进化分析
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牛病毒性腹泻病毒1型E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法的建立 被引量：1
14
作者 刘鑫欢 张纹纹 +8 位作者 程子龙 金前跃 郭志睿 郭大伟 龙云凤 杨蕾蕾 刘茂军 白娟 李文良 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1100-1107,共8页
[目的]本研究旨在使用金-银纳米颗粒标记纯化的牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)重组E2蛋白,建立基于金-银纳米颗粒的E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法。[方法]对金-银纳米颗粒标记条件进行优化,选取2 mg·mL^(-1)的金黄色葡萄球菌A蛋白(... [目的]本研究旨在使用金-银纳米颗粒标记纯化的牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)重组E2蛋白,建立基于金-银纳米颗粒的E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法。[方法]对金-银纳米颗粒标记条件进行优化,选取2 mg·mL^(-1)的金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A,SPA)和BVDV-1单克隆抗体1E2B3包被于硝酸纤维素(NC)膜上,分别作为检测线(test line,T线)和质控线(control line,C线),对反应条件进行优化后建立侧流免疫层析检测方法。[结果]金-银纳米颗粒最佳标记条件:以pH7.4的硼酸-硼砂缓冲液作为金-银纳米颗粒的溶剂;最佳标记蛋白浓度为10μg·mL^(-1)。优化后的侧流免疫层析检测方法的反应条件:2 mg·mL^(-1)的SPA作为T线,0.6 mg·mL^(-1)的1E2B3作为C线,待检血清稀释度为1∶50。特异性试验结果表明建立的金-银纳米颗粒免疫层析试纸条不与猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛支原体和布鲁氏菌阳性血清发生交叉反应。敏感性试验结果显示,将BVDV阳性血清(中和抗体效价为1∶2048)稀释512倍时金-银纳米颗粒免疫层析试纸条仍可检出。使用金-银纳米颗粒免疫层析试纸条检测125份牛血清,并与中和试验结果比较,两者阴性血清符合率为100%,阳性血清符合率为96.04%,总体符合率为96.80%。[结论]本试验基于金-银纳米颗粒建立的免疫层析抗体检测方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便快捷的特点,为快速检测BVDV-1抗体提供了有力的技术支撑。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 抗体 金-银纳米颗粒 侧流免疫层析方法
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牛病毒性腹泻亚单位疫苗制备研究进展 被引量：1
15
作者 张乐 于航 +1 位作者 刘磊 肖定福 《动物医学进展》 北大核心 2025年第7期120-126,共7页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作为影响全球养牛业的重要病原体,其引起的产奶量下降、生长缓慢、繁殖障碍、体重减轻等症状,给全球养牛业带来巨大的经济损失。治疗尚无特效药,疫苗是主要的预防办法。因灭活苗和活疫苗存在各自的缺点,并且无法... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作为影响全球养牛业的重要病原体,其引起的产奶量下降、生长缓慢、繁殖障碍、体重减轻等症状,给全球养牛业带来巨大的经济损失。治疗尚无特效药,疫苗是主要的预防办法。因灭活苗和活疫苗存在各自的缺点,并且无法区分野毒感染还是免疫接种引起的感染,故而开始探究新型亚单位疫苗来预防BVD。亚单位疫苗能够区分野毒感染还是免疫接种引起的感染,并能诱导机体产生较高水平的抗体且副作用更少、安全性更高。目前尚未有BVD的商品化亚单位疫苗。论文对BVDV结构和分型、国内外流行情况、BVD亚单位疫苗研究进行综述,以期为研制新型疫苗预防BVD提供参考。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻 亚单位疫苗 蛋白表达系统
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河南省种公牛牛病毒性腹泻的血清学调查 被引量：1
16
作者 马超锋 马宝刚 左春生 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第2期103-106,共4页
为了解河南省种公牛牛病毒性腹泻流行情况,于2020年9月-2021年12月,采用ELISA方法对采自河南省6个地区367份种公牛血清样品的牛病毒性腹泻阳性情况进行检测。结果显示,牛病毒性腹泻阳性场点6个,阳性场率达100%;检出阳性样品共258份,种... 为了解河南省种公牛牛病毒性腹泻流行情况,于2020年9月-2021年12月,采用ELISA方法对采自河南省6个地区367份种公牛血清样品的牛病毒性腹泻阳性情况进行检测。结果显示,牛病毒性腹泻阳性场点6个,阳性场率达100%;检出阳性样品共258份,种公牛个体阳性率为70.3%;不同生长阶段公牛群的阳性率差异极显著(P<0.01),采精公牛(14月龄以上)的牛病毒性腹泻阳性率最高(84.3%),犊牛(0~6月龄以下)阳性率最低(43.5%);不同年份种公牛的牛病毒性腹泻阳性率差异不显著(P>0.05)。 展开更多
关键词 种公牛 牛病毒性腹泻 酶联免疫吸附试验 阳性率 河南省
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牛病毒性腹泻病毒1型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立与应用
17
作者 刘飞飞 杨澳飞 +7 位作者 贾东鹭 韩新雨 陈慧敏 陈建 魏颖 丁轲 张春杰 陈松彪 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期363-369,共7页
为建立牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法,本研究参考GenBank中的不同BVDV-1序列,设计并合成Npro基因保守区域特异性引物,以重组质粒标准品作为模板对反应体系进行优化,初步建立一种BVDV-1特异性SYBR GreenⅠ... 为建立牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法,本研究参考GenBank中的不同BVDV-1序列,设计并合成Npro基因保守区域特异性引物,以重组质粒标准品作为模板对反应体系进行优化,初步建立一种BVDV-1特异性SYBR GreenⅠRT-qPCR方法,结果显示,RT-qPCR方法的最适退火温度为55℃,最佳引物终浓度为0.4μmol/L;质粒标准品浓度在5.46×10^(1)拷贝/μL~5.46×10^(7)拷贝/μL之间与各自的Ct值具有良好的线性关系,线性方程为:y=-3.2011x+33.6,R^(2)=0.9975,熔解曲线为单一峰值;以BVDV-1、牛病毒性腹泻病毒2型、牛病毒性腹泻病毒3型、边界病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒等的RNA反转录所得cDNA以及大肠杆菌和鼠伤寒沙门菌总DNA为模板,采用本研究建立的RT-qPCR方法检测,评估该方法的特异性;分别以10倍倍比稀释(10^(1)~10^(9))的pMD19-T-Npro重组质粒标准品作为模板,利用本研究建立的方法与普通RT-PCR方法检测,比较所建方法的敏感性;以5个不同浓度的重组质粒标准品pMD19-T-Npro作为模板,利用RT-qPCR方法分别于同一时间和不同时间分别进行批内和批间重复性试验,评估该方法的重复性。特异性试验结果显示,该方法仅对BVDV-1有特异性扩增曲线,牛病毒性腹泻病毒2型、牛病毒性腹泻病毒3型、边界病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对质粒标准品的检测限为5.46×10^(1)拷贝/μL,敏感性高;对重组质粒标准品的批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。采用本研究建立的RT-qPCR方法和文献中的BVDV-1 RT-qPCR方法分别对50份腹泻牛粪便样品检测,结果显示,两种方法的阳性检出率均为16%(8/50),总符合率达100%。本研究建立的RT-qPCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为BVDV临床快速检测、流行病学调查及疫病防控工作提供了新的技术支撑和思路。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒1型 Npro基因 荧光定量RT-PCR 应用
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2022—2024年中国部分地区牛病毒性腹泻病毒分子检测及基因分型
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作者 安乐乐 任晓婷 +5 位作者 蓝秋菊 莫永利 曹小安 丁玉林 马忠仁 马晓霞 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5328-5334,共7页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛群中重要经济损失的病毒之一,尤其对幼牛的健康和发展造成了严重影响。本试验旨在建立通用型BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(BVDV SYBR GreenⅠqPCR)方法并对中国部分地区散养牛群样本进行病原学检测... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛群中重要经济损失的病毒之一,尤其对幼牛的健康和发展造成了严重影响。本试验旨在建立通用型BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(BVDV SYBR GreenⅠqPCR)方法并对中国部分地区散养牛群样本进行病原学检测,掌握中国部分地区散养牛群BVDV感染情况、流行基因型及亚型。依据GenBank不同基因亚型BVDV 5′UTR序列建立通用型BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法。使用该方法对2022年6月—2024年12月采集的712份散养牛血清样本及咳嗽、发烧、拉稀症状犊牛组织样本进行检测及遗传进化分析,同时对犊牛样本进行病毒分离、间接免疫荧光(IFA)鉴定和苏木精-伊红染色法(HE染色)观察。结果显示,建立的BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法标准曲线的线性关系良好、敏感性高、特异性强和重复性好。散养牛血清样本阳性率为19.10%,并成功分离BVDV-24GS毒株。在5′UTR基因系统进化树分析中,BVDV基因亚型包括1c、1m、1o、1i、1q、1b和2。以上结果表明,成功建立通用型BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法并实施初步检测,中国部分地区散养牛群中均存在不同程度BVDV感染,病毒基因分型鉴定丰富了BVDV的分子流行病学基础数据,为BVDV的科学防控、疫苗研制和免疫策略优化提供了依据。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 分子检测 基因分型鉴定
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宁夏地区部分规模化牛场牛病毒性腹泻病毒分离鉴定
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作者 王雅诗 张祥胤 +5 位作者 张冯禧 舒金琪 王向阳 高娟 赵晓民 常玲玲 《动物医学进展》 北大核心 2025年第8期127-132,共6页
牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种传染病。为了解宁夏地区规模化牛场BVD的流行情况,2023年采集了宁夏地区53个牛场的血液及肛拭子样品共计963份,进行RT-PCR检... 牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种传染病。为了解宁夏地区规模化牛场BVD的流行情况,2023年采集了宁夏地区53个牛场的血液及肛拭子样品共计963份,进行RT-PCR检测,然后利用MDBK细胞对阳性样品分离纯化病毒。结果显示,宁夏地区BVDV的核酸阳性率为2.81%(27/963),牛场感染率为11.32%(6/53);5′UTR遗传进化分析结果显示主要有BVDV-1a、BVDV-1h、BVDV-1r和BVDV-1l共4种基因亚型。RT-PCR阳性样品经MDBK细胞盲传8代未出现细胞病变,荧光定量PCR测定病毒液Ct值,代入制定的BVDV标准曲线测得拷贝数为1.136×10^(6)copies/mL,间接免疫荧光呈BVDV E2蛋白抗原阳性。研究明确了宁夏地区牛场BVDV流行的主要基因亚型,并获得1株纯化的非细胞病变型BVDV-1a野毒株,为后续深入BVDV致病机制研究提供基础资料。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 分离 鉴定 规模化牛场
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及捕获ELISA检测方法的建立
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作者 宋京格 周佳莹 +5 位作者 夏欣悦 王孟孟 李园 宋厚辉 徐义刚 王静 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第5期473-479,共7页
为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测方法,本研究采用纯化的BVDV作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5C7,采用抗体分型试剂盒鉴定其亚类为IgG2α,经IFA鉴定显示MAb 5C7能够特异性... 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测方法,本研究采用纯化的BVDV作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5C7,采用抗体分型试剂盒鉴定其亚类为IgG2α,经IFA鉴定显示MAb 5C7能够特异性识别BVDV,利用间接ELISA测定其抗体效价为1:10^(6)。利用该BVDV特异性MAb作为检测抗体,兔源BVDV E2蛋白多克隆抗体(PAb)作为捕获抗体,经各反应条件的优化,建立了检测BVDV的抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。采用该方法分别检测BVDV、牛传染性鼻气管炎病毒、牛细小病毒、牛轮状病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型等病毒,分析该方法的特异性;将10^(6.7)TCID_(50)的BVDV 10倍倍比稀释(10^(0)~10^(6)倍)稀释后,采用建立的AC-ELISA检测,评估该方法的敏感性;利用同一批次和不同批次E2蛋白PAb包被的酶标板,采用建立的AC-ELISA方法检测BVDV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅能检测到BVDV,与其余病毒均无交叉反应;对病毒BVDV的检测限为10~2TCID_(50);批内、批间重复性试验的变异系数均小于5%。利用该方法对618份牛血清和352份腹泻犊牛粪便样品检测,结果显示两种样品的阳性检出率分别为25.7%(159/618)和38.9%(137/352),与RT-PCR方法检测结果的符合率均达100%。此外,RT-PCR分析显示,阳性样品中BVDV-1的检出率为29.6%,为主要流行基因型,BVDV-2的检出率为0.9%。本研究建立的AC-ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可有效用于BVDV的检测,为BVDV的流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 抗原捕获ELISA E2蛋白 单克隆抗体
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