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基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立被引量：1: 1; 作者王雪妍靳双媛 +3 位作者杜家伟温宏武李永琴许立华《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4429-4439,共11页; 【目的】建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产... 展开更多; 关键词牛流行热病毒(befv) G蛋白原核表达蛋白纯化免疫胶体金; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛流行热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立: 2; 作者李志郑福英 +3 位作者王积栋高闪电李有全殷宏《中国奶牛》 2015年第8期28-30,共3页; 牛流行热(BEF)是由牛流行热病毒(BEFV)引起的一种急性、热性传染病,是一种牛非接触性的虫媒病毒性疾病。该病发生于夏末秋初,给养殖业造成了重大损失。目前,国内外并没有针对该病的血清学检测方法。本研究针对BEFV的免疫保护基因——G基... 展开更多; 关键词牛流行热病毒(befv) ELISA 流行病学; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛流行热病毒山东分离株α3基因序列分析及原核表达与纯化: 3; 作者朱鸿超何畅 +4 位作者侯佩莉王洪梅李雪漫唐文娟何洪彬《山东农业科学》北大核心 2021年第7期107-112,共6页; 为深入研究牛流行热病毒(BEFV)编码的α3非结构蛋白的功能及其在研发新型BEFV疫苗和诊断试剂上的应用,本研究对本实验室分离保存的BEFV采用RT-PCR法对其α3基因进行扩增;用DNAStar软件对序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析;用ProtParam... 展开更多; 关键词牛流行热病毒(befv) α3蛋白序列分析原核表达纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

哈兽研所积极开展学术活动: 4; 作者初秀《畜牧兽医科技信息》 1997年第22期12-12,共1页; 应中国农业科学院哈尔滨兽医研究所学委会的邀请,严隽端副研究员和宁希德副研究员,于1997年10月15日在该所分别作了“牛流行热病的预防和诊断”、“; 关键词牛流行热病副研究员弱毒疫苗中国农业科学院开展学术活动基因克隆马传贫病毒兽医研究所哈尔滨应用情况; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立被引量：1: 1; 作者王雪妍靳双媛杜家伟温宏武李永琴许立华; 机构宁夏大学动物科技学院宁夏吴忠市盐池县农业农村局畜牧技术推广服务中心; 出处《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4429-4439,共11页; 基金宁夏奶牛育种专项“优质高产奶牛安全健康养殖技术研究与示范”(2019NYYZ0503) 宁夏动物疫病净化科技创新团队项目(2020CXTDLX05)。; 文摘【目的】建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western blotting鉴定。以纯化后的蛋白作为特异性抗原包被检测线,以链球菌G蛋白作为金标抗原,与金纳米颗粒结合后标记在金标垫上,用羊抗鼠IgG作为质控线,通过优化不同的反应条件,建立检测BEFV的免疫胶体金检测方法,并对试纸条进行敏感性、特异性和重复性检测。【结果】SDS-PAGE结果显示,在IPTG终浓度为0.75 mmol/L时,37℃诱导8 h的条件下重组BEFV G蛋白表达量最大,且以包涵体形式表达,分子质量约为46 ku。Western blotting结果显示,浓缩纯化后的重组BEFV G蛋白具有较好的反应原性,可作为包被抗原用于免疫胶体金试纸条的建立。在质控线包被的抗体羊抗鼠IgG浓度为2 mg/mL,BEFV G蛋白包被浓度为0.6 mg/mL,喷金量为2.5μL/cm的条件下,3~5 min就可完成检测。制备的试纸条有较高的敏感性和特异性,血清稀释倍数为40倍的时候显色接近消线,且试纸条仅与BEFV阳性血清发生显色反应,与牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等其他病毒阳性血清均无交叉反应,阳性血清样本重复性试验证明试纸条的重复性较高,成功建立了免疫胶体金检测方法。【结论】本研究以原核表达的G蛋白为抗原成功制备了检测BEFV的新型免疫胶体金试纸条,该检测试纸条特异性强、稳定性好,适合用于临床快速检测BEF。; 关键词牛流行热病毒(befv) G蛋白原核表达蛋白纯化免疫胶体金; Keywords Bovine epidemic fever virus(befv) G protein prokaryotic expression protein purification immunocolloid gold; 分类号 S852.63 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛流行热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立: 2; 作者李志郑福英王积栋高闪电李有全殷宏; 机构中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省寄生虫病重点实验室; 出处《中国奶牛》 2015年第8期28-30,共3页; 文摘牛流行热(BEF)是由牛流行热病毒(BEFV)引起的一种急性、热性传染病,是一种牛非接触性的虫媒病毒性疾病。该病发生于夏末秋初,给养殖业造成了重大损失。目前,国内外并没有针对该病的血清学检测方法。本研究针对BEFV的免疫保护基因——G基因(包含有G1基因的片段),设计引物,构建了表达载体,表达了该基因,利用此蛋白作为抗原,建立了牛流行热病毒抗体间接ELISA检测方法。本方法为牛流行热病毒的检测提供了有效的检测手段,也为我国制定牛流行热病毒的防控战略提供一定的理论依据。; 关键词牛流行热病毒(befv) ELISA 流行病学; 分类号 S858.23 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛流行热病毒山东分离株α3基因序列分析及原核表达与纯化: 3; 作者朱鸿超何畅侯佩莉王洪梅李雪漫唐文娟何洪彬; 机构山东师范大学生命科学学院/反刍动物疾病研究中心山东师范大学附属中学国际部; 出处《山东农业科学》北大核心 2021年第7期107-112,共6页; 基金国家自然科学基金项目“牛流行热病毒α3基因负调控MAVS的分子机制研究”(31972665) 大学生创新训练项目(S202010445057,S202010445196)。; 文摘为深入研究牛流行热病毒(BEFV)编码的α3非结构蛋白的功能及其在研发新型BEFV疫苗和诊断试剂上的应用,本研究对本实验室分离保存的BEFV采用RT-PCR法对其α3基因进行扩增;用DNAStar软件对序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析;用ProtParam和抗原表位分析生物信息学软件研究α3蛋白的亲水性、优势抗原表位区;分别用限制性内切酶双酶切目的基因α3和pGEX-4T-1载体,构建pGEX-4T-1-α3原核表达载体,并进行诱导表达。结果表明,成功扩增出156bp的α3基因序列;该α3基因序列与参考毒株的核苷酸序列同源性为98.0%~100.0%,氨基酸序列的同源性也为98.0%~100.0%,表明α3蛋白具有较高的保守性;BEFV的α3蛋白抗原表位分析表明3~5、9~47aa是α3蛋白的优势抗原表位区段,总平均疏水性为-0.737,说明该蛋白以可溶性形式存在;构建的pGEX-4T-1-α3原核表达质粒在大肠杆菌中成功表达,应用可溶性蛋白纯化的方法获得较高纯度的α3蛋白。本研究为该蛋白的免疫原性验证以及新型牛流行热病毒疫苗研发提供了数据参考。; 关键词牛流行热病毒(befv) α3蛋白序列分析原核表达纯化; Keywords Bovine epidemic fever virus(befv) α3 Protein Sequence analysis Prokaryotic expres-sion Purification; 分类号 S858.23 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名哈兽研所积极开展学术活动: 4; 作者初秀; 出处《畜牧兽医科技信息》 1997年第22期12-12,共1页; 文摘应中国农业科学院哈尔滨兽医研究所学委会的邀请,严隽端副研究员和宁希德副研究员,于1997年10月15日在该所分别作了“牛流行热病的预防和诊断”、“; 关键词牛流行热病副研究员弱毒疫苗中国农业科学院开展学术活动基因克隆马传贫病毒兽医研究所哈尔滨应用情况; 分类号 S852-2 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立	王雪妍靳双媛杜家伟温宏武李永琴许立华	《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心	2024	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	牛流行热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立	李志郑福英王积栋高闪电李有全殷宏	《中国奶牛》	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	牛流行热病毒山东分离株α3基因序列分析及原核表达与纯化	朱鸿超何畅侯佩莉王洪梅李雪漫唐文娟何洪彬	《山东农业科学》北大核心	2021	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	哈兽研所积极开展学术活动	初秀	《畜牧兽医科技信息》	1997	0	在线阅读下载PDF 职称材料