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牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析
被引量：
4
1
作者
高小艳
王长法
+5 位作者
刘顺德
李秋玲
杨宏军
杨少华
仲跻峰
何洪彬
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期1166-1171,共6页
本文旨在对牛气管抗菌肽(tracheal antimicrobial peptide,TAP)基因进行原核表达,以及研究重组蛋白的抗菌活性,并分析TAP在各组织的表达分布情况,为开展转TAP基因抗乳腺炎奶牛研究提供技术资料。作者采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增TAP...
本文旨在对牛气管抗菌肽(tracheal antimicrobial peptide,TAP)基因进行原核表达,以及研究重组蛋白的抗菌活性,并分析TAP在各组织的表达分布情况,为开展转TAP基因抗乳腺炎奶牛研究提供技术资料。作者采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增TAP基因,分析其序列后根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏好性,人工合成牛TAP基因,构建pET32a(+)-TAP重组质粒;然后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并纯化。对表达蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot鉴定;在线软件分析目的蛋白表达量。采用滤纸片法测定重组牛TAP的体外抗菌活性,并用RT-PCR法分析牛各组织中TAP表达情况。测序结果表明,扩增到114bp目的基因片段,可编码含38个氨基酸残基的成熟蛋白。SDS-PAGE分析表达的融合蛋白相对分子质量为24ku,重组蛋白以可溶性方式存在,表达量占菌体总蛋白的52.1%。Western Blot检测只出现单一条带。抗菌效价分析表明0.115μg·μL-1重组蛋白对牛源金黄色葡萄球菌有一定的抗菌活性。TAP基因在奶牛咽喉、肺、气管、小肠、肝、心脏及口腔黏膜中均有表达,在鼻黏膜和舌黏膜中微量表达,在皮肤中几乎不表达。作者成功表达了牛TAP基因,重组牛TAP蛋白在大肠杆菌中实现高效表达,并具有一定的抗奶牛乳腺炎致病菌的活性,为未来培育抗乳腺炎转基因奶牛及相关基因工程产品的开发奠定了基础。
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关键词
牛气管抗菌肽
表达
抗
菌
活性
组织分布
乳腺炎
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职称材料
牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达与鉴定
被引量：
4
2
作者
王安平
李哲峰
+6 位作者
朱善元
王永娟
吴双
黄文强
左伟勇
洪伟鸣
孙怀昌
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2011年第6期1316-1320,共5页
为了在毕赤酵母中获得牛气管抗菌肽(bTAP)的表达,根据已发表的牛气管抗菌肽序列和毕赤酵母对密码子的偏爱性设计2对引物,采用重叠延伸PCR法获得bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母(Pichia pastoris)pPIC9K质粒连接,构建表达载体pPIC9K-bTAP。...
为了在毕赤酵母中获得牛气管抗菌肽(bTAP)的表达,根据已发表的牛气管抗菌肽序列和毕赤酵母对密码子的偏爱性设计2对引物,采用重叠延伸PCR法获得bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母(Pichia pastoris)pPIC9K质粒连接,构建表达载体pPIC9K-bTAP。用SalⅠ酶切线性化pPIC9K-bTAP质粒后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导其表达。SDS-PAGE分析结果表明表达的重组蛋白质分子量正确,抑菌试验结果表明表达的重组蛋白质bTAP对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。
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关键词
牛气管抗菌肽
毕赤酵母
表达
抗
菌
活性
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职称材料
题名
牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析
被引量：
4
1
作者
高小艳
王长法
刘顺德
李秋玲
杨宏军
杨少华
仲跻峰
何洪彬
机构
山东省农业科学院奶牛研究中心
宁夏大学农学院动物科学系动物遗传育种与繁殖实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期1166-1171,共6页
基金
转基因重大专项重大课题"抗病转基因牛新品种培育"(2008ZX08007-004)
现代农业产业技术体系建设(Nycytx-10)
+1 种基金
山东省自然基金(Y2007D10)
山东省中青年科学家基金(2006BS06010)
文摘
本文旨在对牛气管抗菌肽(tracheal antimicrobial peptide,TAP)基因进行原核表达,以及研究重组蛋白的抗菌活性,并分析TAP在各组织的表达分布情况,为开展转TAP基因抗乳腺炎奶牛研究提供技术资料。作者采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增TAP基因,分析其序列后根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏好性,人工合成牛TAP基因,构建pET32a(+)-TAP重组质粒;然后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并纯化。对表达蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot鉴定;在线软件分析目的蛋白表达量。采用滤纸片法测定重组牛TAP的体外抗菌活性,并用RT-PCR法分析牛各组织中TAP表达情况。测序结果表明,扩增到114bp目的基因片段,可编码含38个氨基酸残基的成熟蛋白。SDS-PAGE分析表达的融合蛋白相对分子质量为24ku,重组蛋白以可溶性方式存在,表达量占菌体总蛋白的52.1%。Western Blot检测只出现单一条带。抗菌效价分析表明0.115μg·μL-1重组蛋白对牛源金黄色葡萄球菌有一定的抗菌活性。TAP基因在奶牛咽喉、肺、气管、小肠、肝、心脏及口腔黏膜中均有表达,在鼻黏膜和舌黏膜中微量表达,在皮肤中几乎不表达。作者成功表达了牛TAP基因,重组牛TAP蛋白在大肠杆菌中实现高效表达,并具有一定的抗奶牛乳腺炎致病菌的活性,为未来培育抗乳腺炎转基因奶牛及相关基因工程产品的开发奠定了基础。
关键词
牛气管抗菌肽
表达
抗
菌
活性
组织分布
乳腺炎
Keywords
bovine tracheal antimicrobial peptide
expression
antibacterial activity
tissue distribution
mastitis
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达与鉴定
被引量：
4
2
作者
王安平
李哲峰
朱善元
王永娟
吴双
黄文强
左伟勇
洪伟鸣
孙怀昌
机构
江苏畜牧兽医职业技术学院
苏州国家高新技术产业开发区通安镇动物防疫站
扬州大学兽医学院
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2011年第6期1316-1320,共5页
基金
江苏省自然科学基金项目(BK2011536)
泰州市科技计划项目(TG0904)
文摘
为了在毕赤酵母中获得牛气管抗菌肽(bTAP)的表达,根据已发表的牛气管抗菌肽序列和毕赤酵母对密码子的偏爱性设计2对引物,采用重叠延伸PCR法获得bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母(Pichia pastoris)pPIC9K质粒连接,构建表达载体pPIC9K-bTAP。用SalⅠ酶切线性化pPIC9K-bTAP质粒后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导其表达。SDS-PAGE分析结果表明表达的重组蛋白质分子量正确,抑菌试验结果表明表达的重组蛋白质bTAP对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。
关键词
牛气管抗菌肽
毕赤酵母
表达
抗
菌
活性
Keywords
bTAP
Pichia pastoris
expression
antibacterial activity
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析
高小艳
王长法
刘顺德
李秋玲
杨宏军
杨少华
仲跻峰
何洪彬
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
在线阅读
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职称材料
2
牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达与鉴定
王安平
李哲峰
朱善元
王永娟
吴双
黄文强
左伟勇
洪伟鸣
孙怀昌
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2011
4
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职称材料
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