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牛多杀性巴氏杆菌OmpA抗原间接ELISA方法的建立
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作者 王润清 孙航 +4 位作者 孙雨 李歌 李琦 侯晓林 阚威 《中国动物检疫》 2025年第2期87-94,共8页
为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化... 为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,经扩大培养成功诱导表达出了纯度较高的包涵体OmpA蛋白,将OmpA重组蛋白作为诊断抗原,经反应条件优化建立了间接ELISA抗体检测方法。经试验验证,该方法对其他相关的牛类病原无交叉反应,阳性血清稀释度为1:256时仍呈阳性,组内与组间变异系数均低于10%。结果表明,该方法特异性与敏感性较好,且具有良好的重复性与稳定性。本研究为进一步开发成熟的牛多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌 OmpA蛋白 原核表达 蛋白纯化 ELISA
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牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力检验用攻毒菌的研究 被引量:2
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作者 王琦 李建 +3 位作者 刘元杰 刘燕 姚文生 王秀丽 《中国兽药杂志》 2024年第8期9-14,共6页
为提高我国牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力评价方法的稳定性、可靠性及检验效率,研究制备了活菌数定量的攻毒用牛多杀性巴氏杆菌C45-2株的冻干菌。对其性状、纯粹、真空度、剩余水分、均一性、活菌数稳定性及毒力稳定性进行了检验和评价。... 为提高我国牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力评价方法的稳定性、可靠性及检验效率,研究制备了活菌数定量的攻毒用牛多杀性巴氏杆菌C45-2株的冻干菌。对其性状、纯粹、真空度、剩余水分、均一性、活菌数稳定性及毒力稳定性进行了检验和评价。冻干攻毒菌在疫苗效力检验中进行应用,并与-70℃冻存的攻毒菌液进行了比较研究。结果表明,定量冻干菌的性状、纯粹、真空度和剩余水分均符合冻干制品的要求;均一性检查变异系数与低温冻存菌液变异系数均小于6%,均一性良好;保存15个月活菌数稳定性良好,较冻存菌液有明显的优势;保存12个月内毒力略有下降,但不影响疫苗的效力检验,可有效评价疫苗质量。试验表明冻干菌株能满足牛多杀性巴氏杆菌效力检验使用,且简化了细菌培养步骤,提高了检验结果的稳定性和工作效率。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌病疫苗 效力检验 冻干攻毒菌
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牛多杀性巴氏杆菌菌影的制备 被引量:1
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作者 常春龙 王士霞 +1 位作者 翟军军 倪宏波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2017年第3期20-23,共4页
试验以pHH43质粒为模板,通过PCR扩增含噬菌体Phi X174裂解基因E和CI857-PL-PR温控系统的温敏裂解盒CI857-PL-PR-E,再将该裂解盒插入到pPBA1100穿梭载体中,构建裂解质粒pPBA1100-E。利用细菌接合转化法将其转入牛多杀性巴氏杆菌中,通过... 试验以pHH43质粒为模板,通过PCR扩增含噬菌体Phi X174裂解基因E和CI857-PL-PR温控系统的温敏裂解盒CI857-PL-PR-E,再将该裂解盒插入到pPBA1100穿梭载体中,构建裂解质粒pPBA1100-E。利用细菌接合转化法将其转入牛多杀性巴氏杆菌中,通过溶菌动力学试验检测裂解质粒pPBA1100-E对牛多杀性巴氏杆菌的裂解效果并计算裂解效率。结果表明成功构建了裂解质粒pPBA1100-E,并将其成功地转入到牛多杀性巴氏杆菌中,溶菌动力学试验说明裂解质粒pPBA1100-E在牛多杀性巴氏杆菌中具有很高的溶菌效率,裂解效率为99.997%。因此,试验成功地制备了牛多杀性巴氏杆菌菌影,为进一步成功研制牛多杀性巴氏杆菌菌影疫苗奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌 菌影 裂解效率
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不同菌数配苗对牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗生产影响 被引量:2
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作者 何玉仙 苏艳 +4 位作者 黄炯 张读朴 陈宏 余洪磊 周元红 《草食家畜》 2012年第1期50-53,共4页
牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗的生产采用合成培养基通气培养,活菌计数在10亿/ml~30亿/ml、60亿/ml~130亿/ml;活菌计数在60亿/ml~130亿/ml的菌液稀释配苗后,菌数在27亿/ml~50亿/ml之间的各产品,其效力检验和安全检验差异性不明显,均... 牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗的生产采用合成培养基通气培养,活菌计数在10亿/ml~30亿/ml、60亿/ml~130亿/ml;活菌计数在60亿/ml~130亿/ml的菌液稀释配苗后,菌数在27亿/ml~50亿/ml之间的各产品,其效力检验和安全检验差异性不明显,均可达到兽医生物制品制造及检验规程规定。同时培养菌数高的菌液稀释配苗可节约生产成本14.6148元/万ml左右,对降低劳动强度,缩短生产周期,优化生产工艺有重大意义。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌灭活疫苗 菌数 效力检验 安全检验
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牛多杀性巴氏杆菌LolA蛋白的免疫特性 被引量:1
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作者 张春晓 李昕甜 +6 位作者 王娟 王苗 赵奇 王利丽 孙欣艺 侯冠欣 张志强 《中国动物检疫》 CAS 2023年第2期46-50,111,共6页
为研究牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)外膜LolA蛋白的免疫特性,对牛Pm LolA蛋白进行原核表达和纯化,再通过动物模型对重组LolA蛋白(rLolA)的免疫特性进行评估。结果表明:本试验成功表达并纯化出rLolA蛋白,其相对分子质量... 为研究牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)外膜LolA蛋白的免疫特性,对牛Pm LolA蛋白进行原核表达和纯化,再通过动物模型对重组LolA蛋白(rLolA)的免疫特性进行评估。结果表明:本试验成功表达并纯化出rLolA蛋白,其相对分子质量大小约为40 ku;不同动物源性Pm的lolA基因同源性较高,说明该基因高度保守;rLolA蛋白能够引发机体体液免疫,分泌高表达量IgG抗体;rLolA蛋白的免疫原性对小鼠的免疫保护率达55%。本试验明确了牛Pm LolA蛋白的免疫特性,为Pm免疫保护蛋白筛选以及交叉保护性疫苗研发提供了参考。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌 LolA重组蛋白 原核表达 免疫特
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