表达牛乳铁蛋白肽的罗伊氏乳杆菌分泌型信号肽的筛选及鉴定

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作者 赵文悦 杨景 +5 位作者 邵怡岚 李佳璇 姜艳平 崔文 王晓娜 唐丽杰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1431-1440,共10页

本研究旨在构建一株高效表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌,通过筛选不同信号肽的方式提高牛乳铁蛋白肽的分泌表达水平,提高重组菌株的应用效率。对实验室分离的一株罗伊氏乳杆菌进行全基因组测序,筛选分泌蛋白的信号肽基因,构建表达... 本研究旨在构建一株高效表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌,通过筛选不同信号肽的方式提高牛乳铁蛋白肽的分泌表达水平,提高重组菌株的应用效率。对实验室分离的一株罗伊氏乳杆菌进行全基因组测序,筛选分泌蛋白的信号肽基因,构建表达牛乳铁蛋白肽(LFCA)的重组菌株,通过Western blot、ELISA、激光共聚焦等技术分析和比较信号肽分泌LFCA的效果,对重组菌分泌的LFCA对金黄色葡萄球菌增殖抑制作用及其半数最低抑菌浓度进行检测。结果显示,A2、A3、A4和A8信号肽能够表达LFCA,其中A3和A8能够使LFCA分泌到培养上清中,且A3信号肽使LFCA的分泌表达水平提高了近2倍,对宿主菌株的生长性能无显著影响,重组菌株分泌的LFCA对金黄色葡萄球菌的半数最低抑菌浓度为97.50μg·mL^(-1)。本研究成功筛选出能够高效分泌牛乳铁蛋白肽的信号肽,重组菌株的抑菌效率得到显著提高。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白肽 罗伊氏乳杆菌 重组蛋白分泌表达信号肽 抑菌活性

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牛乳铁蛋白肽及其衍生肽生物活性与研究进展 被引量：8

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作者 郭爱珍 吕自力 +2 位作者 钟浩 胡曼 王亮 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期22-27,共6页

牛乳铁蛋白肽(Lfcin B)是牛乳铁蛋白N-端在正常的消化环境下水解产生的25个氨基酸残基的短肽,具有广谱高效的抗细菌性,抗病毒,抗肿瘤等多种生物活性。作为一种新型抗菌肽,Lfcin B及其衍生肽具有很大的研究价值和潜在的应用价值。对其结... 牛乳铁蛋白肽(Lfcin B)是牛乳铁蛋白N-端在正常的消化环境下水解产生的25个氨基酸残基的短肽,具有广谱高效的抗细菌性,抗病毒,抗肿瘤等多种生物活性。作为一种新型抗菌肽,Lfcin B及其衍生肽具有很大的研究价值和潜在的应用价值。对其结构及生物学活性进行介绍,并对近年来采用基因工程技术表达Lfcin B及其衍生肽的方法技术进行了综述。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白肽 衍生肽 生物活性 基因工程

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重组牛乳铁蛋白肽包含体的复性与纯化 被引量：4

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作者 林少华 罗红霞 +2 位作者 郭慧媛 任发政 罗云波 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2006年第1期9-12,共4页

通过分析透析液pH值,包含体蛋白浓度,DTT浓度3个参数对复性率的影响,确定了重组牛乳铁蛋白N-末端多肽(pGEX-4T1/rbLF-N)包含体透析复性的最佳条件和复性后蛋白纯化的适宜方法。采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B柱(Glutathione SapharoseTM 4B)... 通过分析透析液pH值,包含体蛋白浓度,DTT浓度3个参数对复性率的影响,确定了重组牛乳铁蛋白N-末端多肽(pGEX-4T1/rbLF-N)包含体透析复性的最佳条件和复性后蛋白纯化的适宜方法。采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B柱(Glutathione SapharoseTM 4B)对复性后的蛋白溶液进行纯化,纯化后的融和蛋白经胃蛋白酶酶解并检测其酶解产物的抗菌活性。试验表明包涵体蛋白可以部分复性。当pH值为8.5,包含体蛋白质量浓度为100mg/L,DTT浓度为24 mmol/L时,包含体的复性率最高。纯化后的融合蛋白酶解产物具有抗菌作用。 展开更多

关键词 重组牛乳铁蛋白肽rbLF—N 包含体 透析复性 纯化

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牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的合成及真核表达载体的构建 被引量：3

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作者 孙东波 林云成 +4 位作者 郭东华 王建发 张敏 林玉才 武瑞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第5期95-98,共4页

根据APD抗菌肽数据库报道的牛乳铁蛋白肽LfcinB氨基酸序列,合成编码LfcinB基因的2条互补的寡核苷酸链,退火后在5′端和3′端分别形成含有BamHI和XhoI位点粘性末端的双链DNA。真核表达载体pcDNA3.1(+)经BamHI和XhoI限制性内切酶双酶切处... 根据APD抗菌肽数据库报道的牛乳铁蛋白肽LfcinB氨基酸序列,合成编码LfcinB基因的2条互补的寡核苷酸链,退火后在5′端和3′端分别形成含有BamHI和XhoI位点粘性末端的双链DNA。真核表达载体pcDNA3.1(+)经BamHI和XhoI限制性内切酶双酶切处理后与合成的LfcinB基因进行连接,连接产物转化E.coliDH5α感受态细胞,提取质粒DNA进行测序。测序结果显示,牛乳铁蛋白肽LfcinB基因成功克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,为进一步表达和抗菌活性研究奠定物质基础。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白 牛乳铁蛋白肽 真核表达载体

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用甲酸水解制备重组牛乳铁蛋白肽LfcinB(17-41) 被引量：2

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作者 沈克飞 王孝友 +5 位作者 曹兰 袁树楷 陈静 彭帅 张素辉 易强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第4期28-31,共4页

根据大肠埃希菌密码子偏嗜性合成了LfcinB(17-41)的基因序列,将该序列亚克隆到pGEX-4T-1载体中,在大肠埃希菌BL21菌株中用IPTG诱导表达。LfcinB与GST融合,两者之间加入了甲酸裂解位点。BL21在30℃下培养融合蛋白GST-LfcinB可溶性表达较... 根据大肠埃希菌密码子偏嗜性合成了LfcinB(17-41)的基因序列,将该序列亚克隆到pGEX-4T-1载体中,在大肠埃希菌BL21菌株中用IPTG诱导表达。LfcinB与GST融合,两者之间加入了甲酸裂解位点。BL21在30℃下培养融合蛋白GST-LfcinB可溶性表达较好。纯化的GST-LfcinB用甲酸水解释放P1-LfcinB。抑菌试验显示P1-LfcinB对兔源致病性大肠埃希菌有抗菌活性。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白肽 融合蛋白 甲酸 水解位点

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牛乳铁蛋白肽的研究现状与应用前景 被引量：4

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作者 李忠清 王亮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第13期369-373,共5页

牛乳铁蛋白肽是牛乳铁蛋白在胃蛋白酶水解作用下释放出的一种含25个氨基酸残基的短肽,具有广泛而高效的抑菌活性,是一种新型的抗菌肽,在医药、食品添加剂乃至饲料业有着巨大的开发潜质。对其结构、理化性质、生物学功能、作用机制及应... 牛乳铁蛋白肽是牛乳铁蛋白在胃蛋白酶水解作用下释放出的一种含25个氨基酸残基的短肽,具有广泛而高效的抑菌活性,是一种新型的抗菌肽,在医药、食品添加剂乃至饲料业有着巨大的开发潜质。对其结构、理化性质、生物学功能、作用机制及应用前景进行详细论述,并对乳铁蛋白肽的衍生肽的研究及策略进行探讨。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白肽 抗菌肽 衍生肽

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重组牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达 被引量：2

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作者 吕自力 张恩鹏 +6 位作者 郭爱珍 罗斌 梁鑫 单旭东 庄静 张霞 王亮 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期24-29,共6页

利用抗菌肽数据库和生物信息学分析工具,基于抗菌肽结构和功能的关系,设计了LFcinB衍生肽LFcinB-W4,10。为了验证衍生肽设计的合理性及表达产物功能正确性,将优化设计的基因序列经限制性内切酶酶切后,用T4DNA连接酶连接到分泌型表达载体... 利用抗菌肽数据库和生物信息学分析工具,基于抗菌肽结构和功能的关系,设计了LFcinB衍生肽LFcinB-W4,10。为了验证衍生肽设计的合理性及表达产物功能正确性,将优化设计的基因序列经限制性内切酶酶切后,用T4DNA连接酶连接到分泌型表达载体pPIC9K中,获得的重组表达载体pPIC9K-LFcinB-W4,10经线性化后电转入毕赤酵母GS115中,经过G418浓度梯度筛选得到高拷贝转化子。经PCR鉴定,目的基因与酵母基因组稳定整合。阳性转化子经体积分数为2.5%的甲醇诱导表达,表达产物用Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量约为3.2kDa的衍生肽LFcinB-W4,10。每24h取样检测发酵上清液抑菌活性,结果表明,抗菌肽LFcinB-W4,10对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性,诱导表达96h时其抑菌圈直径最大。实验为探究牛乳铁蛋白肽功能-结构关系奠定了基础。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白肽 毕赤酵母 抗菌肽 结构设计

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牛乳铁蛋白肽衍生肽结构设计及其在毕赤酵母中表达后的活性分析 被引量：1

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作者 张恩鹏 吕自力 +2 位作者 戴甜 郭爱珍 王亮 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第14期163-169,共7页

本研究通过抗菌肽数据库和生物信息学等工具对牛乳铁蛋白肽衍生肽(LfcinBD)的结构进行优化设计,将衍生肽LfcinB-W4的基因片段在毕赤酵母GS115表达。发酵实验结果表明当甲醇诱导浓度为2.5%,发酵时间为96h时,发酵上清液对金黄色葡萄球菌... 本研究通过抗菌肽数据库和生物信息学等工具对牛乳铁蛋白肽衍生肽(LfcinBD)的结构进行优化设计,将衍生肽LfcinB-W4的基因片段在毕赤酵母GS115表达。发酵实验结果表明当甲醇诱导浓度为2.5%,发酵时间为96h时,发酵上清液对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌具有很强的抑制作用,其效果与50mg/mL的氨苄青霉素抑菌效果相当,高于LFcinB。发酵上清液冷冻干燥浓缩后,10倍的发酵上清浓缩液其抑菌效果为同体积50mg/mL的氨苄青霉素的2.5倍。用Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量约为3.2kDa的衍生肽LFcinB-W4。实验通过生物信息学工具设计得到抑菌活性高于LFcinB的衍生肽,为下一步分析牛乳铁蛋白肽功能与结构关系奠定了基础。 展开更多

关键词 抗菌肽设计 牛乳铁蛋白肽 毕赤酵母 诱导表达

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重组牛乳铁蛋白N末端多肽对真空包装猪肉品质的影响 被引量：2

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作者 罗红霞 林少华 +3 位作者 任发政 陈历水 陈雅松 田寒友 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期237-241,共5页

以Nisin和乳酸作为参照,采用本试验室获得的重组牛乳铁蛋白肽对生鲜猪肉进行保藏试验。生鲜猪肉浸沾并真空包装后置于4℃下存放,测定肉样的微生物数、抗氧化值(TBA)、pH值、肉的红度值(Huntera)及感官评价。结果显示,重组的牛乳铁蛋白... 以Nisin和乳酸作为参照,采用本试验室获得的重组牛乳铁蛋白肽对生鲜猪肉进行保藏试验。生鲜猪肉浸沾并真空包装后置于4℃下存放,测定肉样的微生物数、抗氧化值(TBA)、pH值、肉的红度值(Huntera)及感官评价。结果显示,重组的牛乳铁蛋白肽保鲜效果优于Nisin组,接近乳酸组。其保鲜期可达到19d。 展开更多

关键词 重组牛乳铁蛋白肽 猪肉 真空包装 品质

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牛乳铁蛋白抗菌肽(Lactoferricin)基因的克隆与表达质粒构建 被引量：4

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作者 邓强 王春晓 +3 位作者 鲁建章 朱政 刘承初 刘景晶 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第11期4442-4444,4476,共4页

按大肠杆菌偏爱密码子设计了牛乳铁蛋白肽的3段引物序列,通过PCR合成BeL1-2-3,经双酶切后克隆入pED质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建出牛乳铁蛋白肽的表达载体,转化至E.coliBL-2(1 DE3),获得牛的乳铁蛋白肽基因克隆菌。该克隆菌经诱导... 按大肠杆菌偏爱密码子设计了牛乳铁蛋白肽的3段引物序列,通过PCR合成BeL1-2-3,经双酶切后克隆入pED质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建出牛乳铁蛋白肽的表达载体,转化至E.coliBL-2(1 DE3),获得牛的乳铁蛋白肽基因克隆菌。该克隆菌经诱导后,可表达出可观的融合蛋白,且表达量与诱导时间呈一定相关性。 展开更多

关键词 乳铁蛋白 牛乳铁蛋白肽 基因克隆 融合表达

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新型牛乳铁蛋白衍生肽LFcinB-W的抗感染作用

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作者 闫永平 肖桂然 +1 位作者 吴磊 李广莹 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第9期1292-1296,共5页

抗菌肽有望替代抗生素成为一种安全、绿色、高效的理想抗菌剂,牛乳铁蛋白肽(bovine lactoferricin,LFcinB)是由牛乳铁蛋白经消化酶水解产生的一类具有广谱抑菌活性的短肽。文章以牛乳铁蛋白肽为基础,根据抗菌肽结构与功能的关系,对LFcin... 抗菌肽有望替代抗生素成为一种安全、绿色、高效的理想抗菌剂,牛乳铁蛋白肽(bovine lactoferricin,LFcinB)是由牛乳铁蛋白经消化酶水解产生的一类具有广谱抑菌活性的短肽。文章以牛乳铁蛋白肽为基础,根据抗菌肽结构与功能的关系,对LFcinB的结构进行优化设计得到衍生肽LFcinB-W。将设计得到的LFcinB-W基因片段与pPIC9K质粒构建重组表达载体,转化毕赤酵母细胞GS115诱导表达。对发酵上清液进行分离纯化和活性测试,结果证明该衍生肽对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有更强的抑菌活性;利用病原体Erwinia carotovora carotovora 15(Ecc15)感染模式生物果蝇肠道,进一步探究LFcinB-W对感染模型的保护作用,结果显示LFcinB-W可有效缓解病原体感染对果蝇造成的损伤,在体内表现出比LFcinB更好的抗感染作用,为进一步研究该肽的生物活性及生产应用提供参考。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白肽(LFcinB) 结构设计 果蝇 抗感染作用

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乳铁蛋白肽的作用机制及其转基因研究进展 被引量：3

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作者 林松涛 张居农 王亮 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第3期498-503,共6页

近年来抗菌肽由于自身的优点已成为抗生素的替代品,并已成为研究与开发的热点,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)就是其中的一种,它是乳铁蛋白(LF)经胃蛋白酶在酸性条件下降解所产生的小肽,它构成了完整乳铁蛋白主要功能区的大部分,当它被降解下... 近年来抗菌肽由于自身的优点已成为抗生素的替代品,并已成为研究与开发的热点,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)就是其中的一种,它是乳铁蛋白(LF)经胃蛋白酶在酸性条件下降解所产生的小肽,它构成了完整乳铁蛋白主要功能区的大部分,当它被降解下来后不仅仅保持了原来完整乳铁蛋白的活性甚至比原来完整乳铁蛋白的活性更强,因其具有广谱的抗细菌、抗病毒、抗真菌等多种独特的生物学活性而备受关注。对其结构、作用及作用机制、转基因研究这几方面的最新国内外研究动态进行综述。 展开更多

关键词 乳铁蛋白肽 乳铁蛋白 牛乳铁蛋白肽 人乳铁蛋白肽 结构 活性 表达量

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重组大肠杆菌BL21(DE3)/rbLF-N高密度培养条件优化 被引量：4

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作者 罗红霞 林少华 +3 位作者 任发政 陈历水 陈雅松 田寒友 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2007年第1期10-14,共5页

研究了6种不同培养基,pH值和诱导条件对表达量的影响。结果表明,培养基为2×TY+M9+微量元素溶液,pH值为7.0,在对数生长中后期(OD600=1.96)用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导4 h,rbLF-N的表达量最高,达到25.2%。在此条件下,用Bioengineer... 研究了6种不同培养基,pH值和诱导条件对表达量的影响。结果表明,培养基为2×TY+M9+微量元素溶液,pH值为7.0,在对数生长中后期(OD600=1.96)用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导4 h,rbLF-N的表达量最高,达到25.2%。在此条件下,用Bioengineering 19 L自控式发酵罐,以pH-stat的培养技术,高密度培养重组E.coli BL21(DE3)/pGEX-4T1,生产重组牛乳铁蛋白N末端多肽(recombinant bovine lactoferrin-N polypeptide,rbLF-N)。通过控制pH值、溶解氧以及补料方式,使工程菌E.coli BL21(DE3)/pGEX-4T1的发酵菌体OD600值达到72.6,发酵菌体干重为31.9 g/L,rbLF-N表达量为菌体总蛋白的26.8%。 展开更多

关键词 重组牛乳铁蛋白N末端多肽(rbLF—N) 高密度培养 pH—stat 培养条件 优化

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