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牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
被引量:
1
1
作者
庞峰
史巧芸
+7 位作者
朱华培
徐开莲
赵天靖
李亚颖
彭冬梅
李国华
周海龙
王凤阳
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015年第5期1088-1092,共5页
基于海口市动物基因工程重点实验室获得的牛乳状瘤病毒13型(BPV-13)基因组序列信息(GenBank登录号:KM258443.2),以基因组为模板,扩增E5基因片段,将其连入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-E5-N1,测序正确后瞬时转染HEK293细胞,应用荧光...
基于海口市动物基因工程重点实验室获得的牛乳状瘤病毒13型(BPV-13)基因组序列信息(GenBank登录号:KM258443.2),以基因组为模板,扩增E5基因片段,将其连入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-E5-N1,测序正确后瞬时转染HEK293细胞,应用荧光显微镜、流式细胞仪、Western blotting鉴定融合蛋白的表达。结果显示,E5片段大小为135bp;重组质粒pEGFP-E5-N1构建正确;荧光显微镜下观察转染重组质粒pEGFP-E5-N1的HEK293细胞,可见明亮的绿色荧光;流式细胞术分析结果显示,转染重组质粒pEGFP-E5-N1 48h后,约55.59%的细胞表达绿色荧光蛋白;Western blotting结果表明,表达的融合蛋白大小约为32ku。本试验结果为下一步研究E5基因的作用机理奠定了基础。
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关键词
牛乳
状
瘤
病毒
13
型
(
bpv-
13
)
E5
EGFP
融合蛋白
真核表达
在线阅读
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职称材料
牛乳头状瘤病毒13型L1基因的克隆及原核表达
被引量:
2
2
作者
赵天靖
贾晓晓
+8 位作者
史巧芸
郭莳雨
庞峰
朱华培
徐开莲
李亚颖
彭冬梅
李国华
王凤阳
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015年第9期2286-2291,共6页
本研究旨在克隆并表达牛乳头状瘤病毒13型(BPV13)L1基因。以BPV13基因组为模板,通过PCR技术扩增得到大小1 494bp的目的片段,同时用BamHⅠ和HindⅢ分别对目的片段和pET28a(+)载体进行双酶切,将双酶切后的L1基因片段克隆至原核表达载体pET...
本研究旨在克隆并表达牛乳头状瘤病毒13型(BPV13)L1基因。以BPV13基因组为模板,通过PCR技术扩增得到大小1 494bp的目的片段,同时用BamHⅠ和HindⅢ分别对目的片段和pET28a(+)载体进行双酶切,将双酶切后的L1基因片段克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-L1重组质粒,双酶切和测序鉴定正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌中,筛选出最佳IPTG浓度和最佳诱导时间后进行诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,L1基因正确插入到原核表达载体pET28a(+)中;IPTG诱导后含重组质粒pET28a-L1的表达菌成功表达了带His标签的融合蛋白;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白分子质量为60ku,与预期大小一致,超声破菌后,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白存在于沉淀中;Western blotting验证为带His标签的融合蛋白。本试验为进一步研究BPV13 L1基因的功能及为BPV13有效DNA疫苗的研制奠定基础。
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关键词
牛乳
头
状
瘤
病毒
13
型
(BPV
13
)
L1
克隆
原核表达
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职称材料
题名
牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
被引量:
1
1
作者
庞峰
史巧芸
朱华培
徐开莲
赵天靖
李亚颖
彭冬梅
李国华
周海龙
王凤阳
机构
海南大学农学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015年第5期1088-1092,共5页
基金
海南大学"中西部"重点学科项目(ZXBJH-XK002)
文摘
基于海口市动物基因工程重点实验室获得的牛乳状瘤病毒13型(BPV-13)基因组序列信息(GenBank登录号:KM258443.2),以基因组为模板,扩增E5基因片段,将其连入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-E5-N1,测序正确后瞬时转染HEK293细胞,应用荧光显微镜、流式细胞仪、Western blotting鉴定融合蛋白的表达。结果显示,E5片段大小为135bp;重组质粒pEGFP-E5-N1构建正确;荧光显微镜下观察转染重组质粒pEGFP-E5-N1的HEK293细胞,可见明亮的绿色荧光;流式细胞术分析结果显示,转染重组质粒pEGFP-E5-N1 48h后,约55.59%的细胞表达绿色荧光蛋白;Western blotting结果表明,表达的融合蛋白大小约为32ku。本试验结果为下一步研究E5基因的作用机理奠定了基础。
关键词
牛乳
状
瘤
病毒
13
型
(
bpv-
13
)
E5
EGFP
融合蛋白
真核表达
Keywords
bovine papillomavirus type
13
(
bpv-
13
)
ES
EGFP
fusion protein
eukaryotic ex- pression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
牛乳头状瘤病毒13型L1基因的克隆及原核表达
被引量:
2
2
作者
赵天靖
贾晓晓
史巧芸
郭莳雨
庞峰
朱华培
徐开莲
李亚颖
彭冬梅
李国华
王凤阳
机构
海南大学农学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015年第9期2286-2291,共6页
基金
海南大学中西部计划项目(ZXBJH-XK002)
文摘
本研究旨在克隆并表达牛乳头状瘤病毒13型(BPV13)L1基因。以BPV13基因组为模板,通过PCR技术扩增得到大小1 494bp的目的片段,同时用BamHⅠ和HindⅢ分别对目的片段和pET28a(+)载体进行双酶切,将双酶切后的L1基因片段克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-L1重组质粒,双酶切和测序鉴定正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌中,筛选出最佳IPTG浓度和最佳诱导时间后进行诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,L1基因正确插入到原核表达载体pET28a(+)中;IPTG诱导后含重组质粒pET28a-L1的表达菌成功表达了带His标签的融合蛋白;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白分子质量为60ku,与预期大小一致,超声破菌后,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白存在于沉淀中;Western blotting验证为带His标签的融合蛋白。本试验为进一步研究BPV13 L1基因的功能及为BPV13有效DNA疫苗的研制奠定基础。
关键词
牛乳
头
状
瘤
病毒
13
型
(BPV
13
)
L1
克隆
原核表达
Keywords
bovine papillomavirus genotype
13
(BPV
13
) L1 clone prokaryotic expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
庞峰
史巧芸
朱华培
徐开莲
赵天靖
李亚颖
彭冬梅
李国华
周海龙
王凤阳
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
牛乳头状瘤病毒13型L1基因的克隆及原核表达
赵天靖
贾晓晓
史巧芸
郭莳雨
庞峰
朱华培
徐开莲
李亚颖
彭冬梅
李国华
王凤阳
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015
2
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