成年版纳微型猪近交系克隆猪的制备 被引量：11

1

作者 叶雷 李红 +13 位作者 魏红江 许成盛 卿玉波 潘伟荣 李鸿辉 成文敏 富国文 信吉阁 李思 魏太云 李小兵 张崇义 汪霞 曾养志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1491-1498,共8页

本研究以版纳微型猪近交系成年母猪为材料,采用冷胰酶消化法获得成年猪成纤维细胞后,进行细胞的生物学特征检测,研究其作为供体细胞对体细胞核移植效果的影响。结果表明,版纳微型猪近交系成年猪的成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,细... 本研究以版纳微型猪近交系成年母猪为材料,采用冷胰酶消化法获得成年猪成纤维细胞后,进行细胞的生物学特征检测,研究其作为供体细胞对体细胞核移植效果的影响。结果表明,版纳微型猪近交系成年猪的成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,细胞冻存前和复苏后存活率分别为97.2%和92.6%(P>0.05),生长曲线呈"S"形,细胞群体倍增时间为36h,体外培养14代后仍能保持正常核型。以其作为核移植供体细胞,核移植重构胚卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数分别为61.9%、13.0%和37枚,移植了重构胚的3头代孕母猪均妊娠,并且有1头母猪产下1头正常的克隆猪。综上所述,利用版纳微型猪近交系成年猪能建立稳定的成纤维细胞系,该细胞系作为核移植供体细胞可获得版纳微型猪近交系克隆猪。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 成年猪成纤维细胞 细胞培养 生物学特征 体细胞核移植

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版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞的体外培养及其生物学特征研究 被引量：7

2

作者 许成盛 魏红江 +6 位作者 李红 汪霞 杨朝霞 卿玉波 潘伟荣 信吉阁 曾养志 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期323-327,共5页

试验以版纳微型猪近交系新生猪耳部皮肤组织为材料,采用胰蛋白酶消化法培养成纤维细胞,并对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测。结果表明:版纳微型猪近交系新生猪成纤... 试验以版纳微型猪近交系新生猪耳部皮肤组织为材料,采用胰蛋白酶消化法培养成纤维细胞,并对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测。结果表明:版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后存活率分别为98.0%和94.07%;生长曲线呈"S"型,倍增时间为33 h;对所制备的染色体核型分析显示2n=38(XY),并在体外培养14代后仍能保持正常核型。本研究建立了稳定的版纳微型猪近交系新生猪成纤维细胞的培养方法,将为体细胞克隆、转基因和异种器官移植等相关的研究提供技术基础。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 成纤维细胞 细胞培养 生物学特征

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版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特征 被引量：5

3

作者 李红 魏红江 +3 位作者 许成盛 汪霞 卿玉波 曾养志 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期678-682,共5页

以版纳微型猪近交系妊娠47d的胎儿为材料,采用胰蛋白酶消化法消化培养胎儿成纤维细胞,对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测.结果表明,培养的版纳微型猪近交系胎儿成纤... 以版纳微型猪近交系妊娠47d的胎儿为材料,采用胰蛋白酶消化法消化培养胎儿成纤维细胞,对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测.结果表明,培养的版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后的存活率分别为98.06%和92.12%;生长曲线呈"S"形,倍增时间为36h;对所制备染色体核型进行分析,显示2n=38,XY,并在体外培养14个代次后仍能保持正常核型. 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 胎儿成纤维细胞 细胞培养 生物学特征

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版纳微型猪近交系精子冷冻保存研究 被引量：4

4

作者 查星琴 肖晶 +5 位作者 成文敏 霍金龙 王淑燕 王配 潘伟荣 曾养志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第1期167-172,共6页

在版纳微型猪近交系(BMI)公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油,并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究,对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率,优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明,解冻后,甘油浓度为2%和3%组的精子... 在版纳微型猪近交系(BMI)公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油,并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究,对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率,优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明,解冻后,甘油浓度为2%和3%组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于1%、4%和5%组(P<0.05);Ⅰ号解冻液解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率均显著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ号解冻液(P<0.05);在活力、质膜完整率和顶体完整率方面,40℃6s和50℃6s这两种程序的解冻效果都显著优于38℃30s(P<0.05)。由此可见,2%或3%的甘油作为抗冻保护剂、Ⅰ号解冻液解冻、40℃6s或50℃6s水浴解冻是较为理想的BMI公猪精液冷冻保存方法。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 猪精液 冷冻保存 解冻液

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版纳微型猪近交系性别决定基因(SRY)原核表达载体的构建及蛋白高效表达 被引量：2

5

作者 霍金龙 王配 +2 位作者 成文敏 王淑燕 曾养志 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期198-202,共5页

为了构建版纳微型猪近交系SRY的原核表达载体pET-32a(+)-SRY,并通过诱导使其在大肠杆菌中获得高效表达,研究采用添加限制性内切酶位点的引物特异性扩增SRY,连入pMD19-T simple载体,转化入大肠杆菌DH5α,克隆后提取pMD19-T-SRY阳性重组质... 为了构建版纳微型猪近交系SRY的原核表达载体pET-32a(+)-SRY,并通过诱导使其在大肠杆菌中获得高效表达,研究采用添加限制性内切酶位点的引物特异性扩增SRY,连入pMD19-T simple载体,转化入大肠杆菌DH5α,克隆后提取pMD19-T-SRY阳性重组质粒,使用相同的内切酶同时对pMD19-T-SRY质粒和原核表达pET-32a(+)载体进行酶切,连接后使SRY定向克隆到pET-32a(+)表达载体中。经PCR、酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌感受态DH5α,提取质粒后再次转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并通过15%SDS-PAGE鉴定。结果显示,不同浓度IPTG诱导的SRY均在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 Y染色体性别决定基因 SRY 原核表达

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版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列扩增及生物信息学分析 被引量：3

6

作者 成文敏 潘伟荣 +4 位作者 尹俊芳 黄言 查星琴 肖晶 曾养志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1706-1712,共7页

本试验旨在扩增版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列,为进一步研究DLDH基因的表达信号通路及与精子获能和顶体反应发生相关基因的表达调控提供必要的基础。通过提取版纳微型猪近交系睾丸组织RNA,经反转录后获得cDNA,设计特异性引物以扩... 本试验旨在扩增版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列,为进一步研究DLDH基因的表达信号通路及与精子获能和顶体反应发生相关基因的表达调控提供必要的基础。通过提取版纳微型猪近交系睾丸组织RNA,经反转录后获得cDNA,设计特异性引物以扩增DLDH基因的编码区序列,经测序后采用生物信息学软件对编码区序列及氨基酸序列进行生物信息学分析和结构预测。结果表明,版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列全长1 530bp,编码509个氨基酸。生物信息学分析表明,不同物种DLDH基因编码区核苷酸序列和氨基酸序列具有较强的保守性,DLDH蛋白中存在丰富的磷酸化位点,空间结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 DLDH基因 编码区 蛋白质结构预测

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版纳微型猪近交系生长激素基因克隆及原核表达研究 被引量：1

7

作者 王淑燕 霍金龙 +2 位作者 王配 潘伟荣 曾养志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1669-1676,共8页

本研究旨在获得版纳微型猪近交系(BMI)生长激素基因编码区序列,揭示其原核表达规律。采用RT-PCR方法从版纳微型猪近交系(BMI)脑垂体中克隆生长激素(GH)基因,并将其连接到pMD 18-T载体进行测序和生物信息学分析。克隆得到的GH基因cDNA序... 本研究旨在获得版纳微型猪近交系(BMI)生长激素基因编码区序列,揭示其原核表达规律。采用RT-PCR方法从版纳微型猪近交系(BMI)脑垂体中克隆生长激素(GH)基因,并将其连接到pMD 18-T载体进行测序和生物信息学分析。克隆得到的GH基因cDNA序列长690bp,其中CDS长651bp,编码216个氨基酸,前26个氨基酸为信号肽序列。多猪种GH氨基酸序列比对表明其在各猪种中高度保守,版纳微型猪近交系的GH氨基酸序列与五指山猪和宁香猪的相似性均为100%,与藏猪、香猪、大乌猪、太湖猪、成华猪、内江猪、荣昌猪、长白猪、约克夏的相似性均为99%,与雅南猪、杜洛克的相似性均为98%。扩增GH成熟肽区编码序列,定向克隆至表达载体pET-32a(+),转化入大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达蛋白。SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,重组质粒在大肠杆菌中获得了高效表达,融合蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为40.6ku。以上结果为进一步探究GH基因对BMI矮小性状的影响奠定了基础。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 生长激素 矮小性状 原核表达

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版纳微型猪近交系KITLG基因克隆、组织表达及功能特性分析 被引量：1

8

作者 张霞 王淑燕 +3 位作者 王配 查星琴 潘伟荣 霍金龙 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第2期255-261,共7页

【目的】研究KITLG基因在猪生殖细胞发育过程中的作用。【方法】从Gen Bank下载猪KITLG序列作为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(BMI)附睾组织中扩增KITLG基因完全编码序列及部分侧翼序列;应用半定量PCR技术检测BMI 10个重要... 【目的】研究KITLG基因在猪生殖细胞发育过程中的作用。【方法】从Gen Bank下载猪KITLG序列作为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(BMI)附睾组织中扩增KITLG基因完全编码序列及部分侧翼序列;应用半定量PCR技术检测BMI 10个重要组织的KITLG m RNA转录表达水平,并对KITLG翻译的蛋白质序列进行多种功能生物信息学分析,预测KITLG蛋白质的功能,最后构建KITLG的多物种氨基酸系统进化树。【结果】扩增得到BMI KITLG编码区序列长825 bp,编码274个氨基酸,序列已提交Gen Bank,基因登录号KU705624,对应的氨基酸登录号AOC89042。多组织相对半定量表达分析表明:KITLG基因在附睾、心、脾、肺、肾、胃中高表达,在大脑、肝、小肠和睾丸中低表达。功能生物信息学分析表明:KITLG存在1个保守结构域SCF,有1个跨膜螺旋结构,存在N端信号肽序列,N末端和C末端均亲水,二级结构以α螺旋为主,有5类功能活性位点。系统进化分析表明:KITLG在进化中高度保守,且与牛、羊的亲缘关系最近。【结论】研究结果为探索BMI KITLG基因在生殖细胞发育过程中的作用及功能奠定基础。 展开更多

关键词 干细胞因子 版纳微型猪近交系 组织表达 生物信息学

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版纳微型猪近交系成纤维细胞系的建立及冻存方法研究 被引量：1

9

作者 查星琴 潘伟荣 +5 位作者 肖晶 成文敏 信吉阁 卿玉波 刘海京 曾养志 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期661-665,共5页

本试验旨在观察胶原酶对版纳微型猪近交系（Banna mini-pig inbred line,BMI）耳组织的消化效果,探讨不同冻存方法对耳组织成纤维细胞存活率的影响.用胶原酶Ⅳ消化法培养BMI 60日龄仔猪原代耳组织成纤维细胞,建立耳组织成纤维细胞系,比... 本试验旨在观察胶原酶对版纳微型猪近交系（Banna mini-pig inbred line,BMI）耳组织的消化效果,探讨不同冻存方法对耳组织成纤维细胞存活率的影响.用胶原酶Ⅳ消化法培养BMI 60日龄仔猪原代耳组织成纤维细胞,建立耳组织成纤维细胞系,比较-80℃条件下分别保存3,5,7,30 d后冻存效果.结果表明：BMI仔猪成纤维细胞具有典型的成纤维细胞特征;生长曲线呈“S”形,倍增时间为37.1h;-80℃冻存3,5,7d的成纤维细胞存活率与液氮保存（93.74％）差异不显著（P＞0.05）,冻存30 d的存活率（79.38％）显著低于其他各组（P＜0.05）,但经48 ～ 72 h培养后仍能贴壁生长.因此,可得出此结论：采用胶原酶Ⅳ消化法可消化BMI耳组织成纤维细胞,而且该细胞在-80℃条件下能进行短期保存. 展开更多

关键词 BMI(版纳微型猪近交系) 成纤维细胞 胶原酶Ⅳ 冷冻保存

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版纳微型猪近交系AO血型A基因的克隆及生物信息学分析 被引量：1

10

作者 潘伟荣 查星琴 +5 位作者 成文敏 卿玉波 肖晶 魏红江 曾养志 霍金龙 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第1期56-62,共7页

【目的】扩增版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】提取版纳微型猪近交系猪组织的RNA,反转录成为cDNA,利用RT-PCR方法扩增AO血型A基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化... 【目的】扩增版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】提取版纳微型猪近交系猪组织的RNA,反转录成为cDNA,利用RT-PCR方法扩增AO血型A基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他12种物种构建系统进化树。【结果】版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长1 095 bp,编码364个氨基酸,氨基酸序列与GenBank上登录的猪AO基因氨基酸序列相似性为99.5%。【结论】版纳微型猪近交系的AO血型A基因除了与黑猩猩、人和小鼠亲缘关系较远外,与牦牛、藏羚羊、水牛、小须鲸、绵羊、羊驼、野骆驼、山羊的关系都较为接近,其中与山羊的亲缘关系最为接近。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 AO血型A基因 克隆测序 生物信息学

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版纳微型猪近交系白细胞介素6基因克隆、生物信息学及组织表达分析 被引量：1

11

作者 王配 陈园园 +6 位作者 霍金龙 霍海龙 王淑燕 潘伟荣 成文敏 查星琴 曾养志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1925-1934,共10页

白细胞介素6(IL-6)是机体重要的免疫调节因子,在佐剂的应用方面具有很好的发展前景。本研究以版纳微型猪近交系(BMI)为实验动物,通过PCR法获得IL-6基因编码区序列,提交GenBank数据库,登录号为JQ839263。对BMI IL-6基因和相应的蛋白序列... 白细胞介素6(IL-6)是机体重要的免疫调节因子,在佐剂的应用方面具有很好的发展前景。本研究以版纳微型猪近交系(BMI)为实验动物,通过PCR法获得IL-6基因编码区序列,提交GenBank数据库,登录号为JQ839263。对BMI IL-6基因和相应的蛋白序列进行了生物信息学分析,结果显示该基因编码212个氨基酸,分子质量为23.88ku,等电点(pI)为6.66,存在一个保守结构域,一个跨膜结构,N端和C端均疏水,且在N端存在信号肽,有89%的可能性定位于细胞核。将BMI的IL-6基因编码区序列与NCBI下载到的4条猪IL-6基因序列进行比对,结果显示BMI IL-6与GenBank登录号为NM_214399和DQ832259的核苷酸序列完全相同,与GenBank登录号为AF309651和AF518322的核苷酸序列各存在1处碱基差异;多物种氨基酸序列比对及系统进化分析结果表明,BMI与骆驼亲缘关系最近。同时利用半定量PCR法确定了IL-6基因mRNA在BMI 12个组织中的表达量,结果发现在肺脏、皮肤、肌肉中表达量较高。本研究为进一步研究猪IL-6基因的表达调控奠定了理论基础。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 白细胞介素6 免疫调节 基因克隆 组织表达

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版纳微型猪近交系ARRDC5基因亚细胞定位研究

12

作者 王配 王淑燕 +7 位作者 霍金龙 张霞 高林青 赵慧敏 霍海龙 曾日彬 李罗刚 滕晓红 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2020年第1期33-39,共7页

【目的】抑制蛋白5(ARRDC5)的功能尚不清楚,前期发现其可能与公猪繁殖力有关,本研究旨在克隆猪ARRDC5基因以及确定猪ARRDC5蛋白的亚细胞定位。【方法】通过NCBI下载猪近缘物种ARRDC5基因序列,在线BLAST比对获得猪EST序列,电子克隆猪ARR... 【目的】抑制蛋白5(ARRDC5)的功能尚不清楚,前期发现其可能与公猪繁殖力有关,本研究旨在克隆猪ARRDC5基因以及确定猪ARRDC5蛋白的亚细胞定位。【方法】通过NCBI下载猪近缘物种ARRDC5基因序列,在线BLAST比对获得猪EST序列,电子克隆猪ARRDC5基因编码区及部分侧翼序列。构建真核融合表达载体并瞬时转染猪睾丸细胞系ST,利用倒置荧光显微镜检测蛋白表达。【结果】获得版纳微型猪近交系(BMI)ARRDC5基因的cDNA序列1045 bp,包含1014 bp的CDS区,编码337个氨基酸,与牛及人的同源性高。成功构建了表达载体pEGFP-C1-ARRDC5,ARRDC5蛋白主要定位于细胞质中,部分细胞核中也有分布。【结论】研究结果为进一步研究该蛋白功能奠定基础。 展开更多

关键词 抑制蛋白5 基因克隆 版纳微型猪近交系 载体构建 亚细胞定位

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版纳微型猪近交系细胞色素P450家族基因CYP1A1克隆及生物信息学分析

13

作者 王淑燕 王配 +4 位作者 霍金龙 查星琴 潘伟荣 张霞 王雪飞 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第3期442-449,共8页

【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,... 【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,构建系统进化树。【结果】获得的BMI CYP1A1 CDS长度为1551 bp,编码516个氨基酸,蛋白质分子量为58.39 ku,等电点为7.83,位于内质网的概率是94.1%。CYP1A1蛋白质含有1个细胞色素P450半胱氨酸血红素配体位点,1个N-豆蔻酰化位点,1个酰胺化作用位点,2个N-糖基化位点、6个蛋白酶C磷酸化位点和5个蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。11个物种构建的系统进化分析表明,BMI(猪)CYP1A1与牛和山羊的关系最近。【结论】以上结果将为进一步研究版纳微型猪近交系CYP1A1基因功能奠定基础。 展开更多

关键词 细胞色素P450家族 CYPIAI基因 编码区序列 版纳微型猪近交系 生物信息学 药物代谢

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版纳微型猪近交系GOT1基因克隆、序列分析及表达分析

14

作者 王配 张霞 +5 位作者 霍金龙 霍海龙 王淑燕 潘伟荣 滕晓红 程霞 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第1期29-36,共8页

【目的】细胞质型天冬氨酸氨基转移酶又称谷草转氨酶,由细胞核GOT1基因编码,催化天冬氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸形成草酰乙酸和谷氨酸,在物质代谢调控中起重要作用。本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为材料... 【目的】细胞质型天冬氨酸氨基转移酶又称谷草转氨酶,由细胞核GOT1基因编码,催化天冬氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸形成草酰乙酸和谷氨酸,在物质代谢调控中起重要作用。本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为材料,克隆GOT1基因,并对其进行生物信息学及组织mRNA表达分析。【方法】利用RT-PCR技术扩增猪GOT1基因,并进行生物信息学分析,同时应用半定量RT-PCR技术明确其mRNA的组织表达特征。【结果】获得了BMI GOT1基因全长1 484 bp的cDNA序列(GenBank登录号:KU705636.1),包含1 242 bp的开放阅读框。生物信息学分析表明:猪GOT1基因位于14号染色体,包含9个外显子和8个内含子;猪GOT1蛋白无信号肽,无跨膜螺旋,有36个磷酸化位点和1个O连接的糖基化位点,定位于细胞质的概率是94.1%,与水牛、黄牛、黑猩猩、人、食蟹猴、大鼠和小鼠的GOT1蛋白依次有95.6%、95.4%、93.0%、92.7%、92.5%、90.3%和90.1%的同源性;二级结构中以α螺旋为主,无规则卷曲和延伸链含量中等,β转角只在局部出现;三级结构同源建模成功。组织表达分析表明:GOT1 mRNA在检测的15个组织中差异表达,肌肉中表达量最高。【结论】为进一步了解该基因的生理功能及调控机制积累了资料。 展开更多

关键词 细胞质型谷草转氨酶 版纳微型猪近交系 组织表达 生物信息学

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版纳微型猪近交系TSARG7基因克隆及功能生物信息学分析

15

作者 王淑燕 张霞 +4 位作者 霍金龙 王配 张永云 李卫真 姚茂东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1637-1644,共8页

为获得版纳微型猪近交系(Banna Mini-pig inbred line,BMI)TSATG7基因序列并分析组织表达情况,本研究以GenBank中猪及近缘物种的TSARG7基因mRNA序列为参考序列,设计特异引物扩增BMI TSARG7基因,半定量分析10个重要组织的表达谱,并对蛋... 为获得版纳微型猪近交系(Banna Mini-pig inbred line,BMI)TSATG7基因序列并分析组织表达情况,本研究以GenBank中猪及近缘物种的TSARG7基因mRNA序列为参考序列,设计特异引物扩增BMI TSARG7基因,半定量分析10个重要组织的表达谱,并对蛋白质序列进行功能生物信息学分析。结果显示,获得了BMI TSARG7基因1 371bp的编码区序列(GenBank登录号:KU950831,对应的氨基酸登录号:AMY60405),编码456个氨基酸,蛋白质分子质量为52.05ku,等电点(pI)为9.28。多组织表达分析表明,TSARG7基因在睾丸中高表达,在其他组织中呈中、低表达。功能生物信息学分析表明,TSARG7蛋白质存在1个保守结构域,有3个跨膜螺旋结构,无信号肽序列;N末端疏水,C末端亲水;有5类功能活性位点,位于细胞质的概率是94.1%。本试验结果为进一步研究TSARG7基因在猪精子发生和性成熟方面的作用及功能奠定基础。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 酰基转移酶 组织表达 生物信息学

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版纳微型猪近交系LRWD1基因克隆及功能生物信息学分析

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作者 张霞 王配 +5 位作者 霍金龙 王淑燕 查星琴 潘伟荣 丁贤群 陈园园 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第1期63-69,共7页

LRWD1基因在精子形成过程中起重要作用。从Gen Bank下载猪及近缘物种的LRWD1 mRNA序列作为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(BMI)LRWD1基因。对蛋白质序列进行功能生物信息学分析,构建多物种系统进化树。研究获得了BMI LRWD1 ... LRWD1基因在精子形成过程中起重要作用。从Gen Bank下载猪及近缘物种的LRWD1 mRNA序列作为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(BMI)LRWD1基因。对蛋白质序列进行功能生物信息学分析,构建多物种系统进化树。研究获得了BMI LRWD1 1 944 bp的编码区序列(Gen Bank登录号:KU705639,对应的氨基酸登录号:AOC89057),编码647个氨基酸,蛋白质分子量(Mw)为71.40 k D,等电点(p I)为7.52。功能生物信息学分析表明LRWD1蛋白质存在2个保守结构域,无跨膜结构,无信号肽序列;N末端和C末端均疏水;有6类功能活性位点,位于细胞质的概率是70.6%。系统进化分析表明,BMI与狗、大熊猫的亲缘关系最近。研究结果将为进一步研究LRWD1基因在猪精子发生方面的作用及功能奠定基础。 展开更多

关键词 富含亮氨酸的重复序列(LRR) 色氨酸-天冬氨酸重复序列(WD) 版纳微型猪近交系 生物信息学

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版纳微型猪近交系STRA8基因克隆及功能生物信息学分析 被引量：1

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作者 李罗刚 王淑燕 +4 位作者 潘伟荣 王配 张霞 王雪飞 霍金龙 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第3期432-439,共8页

【目的】以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为材料,初步研究STRA8基因的功能,为该基因在猪精子形成过程的作用研究奠定基础。【方法】以GenBank下载的猪STRA8基因序列JQ965783及多条猪EST序列为参考序列,设计特异性... 【目的】以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为材料,初步研究STRA8基因的功能,为该基因在猪精子形成过程的作用研究奠定基础。【方法】以GenBank下载的猪STRA8基因序列JQ965783及多条猪EST序列为参考序列,设计特异性引物扩增版纳微型猪近交系(BMI) STRA8基因。对STRA8蛋白质进行理化特性和功能生物信息学分析,包括二级结构、蛋白功能域、疏水性、跨膜结构、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点以及蛋白质功能分析;搜索并下载其他物种的STRA8蛋白质序列构建多物种系统进化树。应用实时荧光定量PCR技术检测BMI STRA8在版纳微型猪近交系15个组织中的mRNA转录表达水平。【结果】获得了包含编码序列1 101 bp的全长序列1 316 bp,编码366个氨基酸,序列已提交GenBank,基因登录号KU705622,蛋白质分子量(Mw) 41.06 ku,等电点(pI) 4.52。STRA8二级结构中α螺旋含量最高,占52.19%;含有1个蛋白功能域;在氨基端有1个HLH结构域和1个卷曲螺旋区域,在羧基端有2个低复杂度区域;疏水性结果表明STRA8基因N末端、C末端均亲水;无跨膜结构,无信号肽序列;该蛋白质位于细胞核中的概率是56.5%;STRA8蛋白共有34个磷酸化位点;系统进化结果表明:BMI与羊、水牛的相似度最高。STRA8基因mRNA在检测的BMI 15个组织中呈现差异表达现象,睾丸中表达量最高。【结论】结果将为进一步研究STRA8基因在猪精子发生方面的作用及功能提供参考。 展开更多

关键词 STRA8 版纳微型猪近交系 生物信息学

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版纳微型猪近交系用于镇痛类经皮吸收药物体外渗透性评价

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作者 王晶 史海琼 +5 位作者 程雯 张大妹 师亚玲 高艺 柴文英 魏红江 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期929-936,共8页

【目的】通过比较版纳微型猪近交系皮肤(以下简称“猪皮肤”)和人皮肤的组织形态学以及镇痛类经皮吸收药物的体外渗透试验,验证猪皮肤在镇痛类经皮吸收药物评价方面的应用价值。【方法】通过HE染色、Masson染色、弹力纤维染色和透射电... 【目的】通过比较版纳微型猪近交系皮肤(以下简称“猪皮肤”)和人皮肤的组织形态学以及镇痛类经皮吸收药物的体外渗透试验,验证猪皮肤在镇痛类经皮吸收药物评价方面的应用价值。【方法】通过HE染色、Masson染色、弹力纤维染色和透射电镜观察比较2种皮肤组织结构形态;选择水杨酸溶液、双氯酚酸二乙胺乳膏和利多卡因凝胶贴膏3种药物作为模型药物,通过Franz扩散池进行药物渗透试验,采用酶标仪和高效液相色谱仪检测透过皮肤的药物质量浓度。【结果】HE染色、Masson染色以及透射电镜结果显示:猪皮肤与人皮肤的分层和细胞构成相似,但是猪皮肤的表皮层极显著厚于人皮肤表皮层(P<0.01),人皮肤的真皮层极显著厚于猪皮肤真皮层(P<0.01)。版纳微型猪身体各部位皮肤从厚到薄依次是肩胛、臀部、背部和腹部。3种药物渗透的0~24 h内,大部分时间点3种药物透过猪皮肤和人皮肤的药物质量浓度均无显著差异(P>0.05)。【结论】猪皮肤和人皮肤组织结构相似,3种镇痛药物在2种皮肤中的渗透性相似,猪皮肤可用于镇痛类经皮吸收药物的体外渗透性评估。 展开更多

关键词 镇痛类经皮吸收药物 版纳微型猪近交系 猪皮肤 皮肤渗透试验

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云南：世界首只近交系克隆猪出生

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《中国畜禽种业》 2010年第3期151-151,共1页

近日一只以高代近交系猪作为供体培育的克隆猪，在云南农业大学顺利出生。这只近交系克隆猪的供体来自于世界首个大型哺乳类实验动物近交系——版纳微型猪近交系，是一头连续20代在猪母子或同一窝公母猪之间进行交配而诞生的纯种小黑公... 近日一只以高代近交系猪作为供体培育的克隆猪，在云南农业大学顺利出生。这只近交系克隆猪的供体来自于世界首个大型哺乳类实验动物近交系——版纳微型猪近交系，是一头连续20代在猪母子或同一窝公母猪之间进行交配而诞生的纯种小黑公猪，它身上近99％的基因相同。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 云南农业大学 克隆猪 世界 实验动物 哺乳类 供体 公猪

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猪类无精症缺失基因DAZL的cDNA全长克隆、组织表达和亚细胞定位 被引量：2

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作者 王配 王丽娜 +4 位作者 霍海龙 张霞 赵筱 王雪飞 霍金龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期683-692,共10页

旨在获得猪类无精症缺失基因DAZL cDNA全长序列,阐明该基因的序列、mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征及亚细胞定位情况。本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)10月龄成年公猪为研究对象,屠宰收集组织样,利用RACE... 旨在获得猪类无精症缺失基因DAZL cDNA全长序列,阐明该基因的序列、mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征及亚细胞定位情况。本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)10月龄成年公猪为研究对象,屠宰收集组织样,利用RACE和RT-PCR技术获得DAZL基因cDNA全长序列;使用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测其mRNA多组织表达谱;在线分析蛋白质的结构特点和保守结构域;用体外细胞转染技术鉴定其在ST猪睾丸细胞中的定位。结果表明,BMI DAZL cDNA全长2985 bp(KU705632),包含888 bp的CDS区,编码295个氨基酸(AOC89050);该基因位于猪13号染色体,含11个外显子。qPCR结果显示,DAZL mRNA在睾丸中特异高表达。生物信息学分析表明,猪DAZL蛋白含有哺乳动物RMP和DAZ同源区,无规则卷曲在二级结构中超过50%。进化分析表明,BMI DAZL氨基酸序列高度保守,与牛科的亲缘关系最为接近。pEGFP-C1-DAZL转染ST细胞后的荧光共定位结果显示,DAZL蛋白主要分布在细胞核中。本研究分别从DNA、mRNA和蛋白质层面阐明了BMI DAZL基因的序列特征、表达、蛋白质结构和定位,为进一步研究DAZL在BMI精子发生方面的功能奠定基础。 展开更多

关键词 版纳微型猪近交系 类无精症缺失基因(DAZL) 基因克隆 cDNA末端快速克隆(RACE) 组织表达 亚细胞定位

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