猪源大肠杆菌热稳定肠毒素的检测 被引量：1

1

作者 崔德凤 张永红 +2 位作者 李焕荣 孙英健 田洁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期17-20,共4页

关键词 猪 热稳定肠毒素 肠毒素型大肠杆菌 腹泻 菌毛

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热不稳定大肠杆菌肠毒素B亚单位免疫调节功能的实验研究 被引量：5

2

作者 王静 郑瑾 +4 位作者 杨筱凤 孔令洪 来宝长 司履生 王一理 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期112-114,共3页

目的 :探讨大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LTB)的免疫调节功能及其可能的机制。方法 :用SephacrylS 10 0凝胶柱层析纯化LTB蛋白。选用BALB/c小鼠 ,以鸡溶菌酶 (HEL)为抗原 ,经鼻黏膜单独免疫 ,或以不同剂量的LTB为佐剂与HEL共免疫。用... 目的 :探讨大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LTB)的免疫调节功能及其可能的机制。方法 :用SephacrylS 10 0凝胶柱层析纯化LTB蛋白。选用BALB/c小鼠 ,以鸡溶菌酶 (HEL)为抗原 ,经鼻黏膜单独免疫 ,或以不同剂量的LTB为佐剂与HEL共免疫。用ELISA法检测血清和肠分泌液中HEL特异性抗体的水平。用3 H TdR掺入法 ,体外测定LTB蛋白对刀豆蛋白A(ConA)及同种异体抗原介导的淋巴细胞增殖反应的影响。结果 :HEL单独免疫组血清中仅有弱的抗HELIgG ,未检测到抗HELIgA ,且其肠分泌液中亦未见HEL特异性IgA抗体。但加用LTB佐剂的 3个组 ,其血清中抗HELIgG、IgA的水平及肠分泌液中抗HELIgA的水平均显著高于HEL单独免疫组 (P <0 .0 0 1)。体外实验显示 ,LTB可明显抑制ConA及同种异体抗原介导的淋巴细胞增殖反应。结论 :我们制备的LTB蛋白对免疫系统具有双向的调节功能 ,既可作为有效的黏膜佐剂 ,辅佐外来抗原刺激机体产生黏膜免疫应答 ,又具免疫抑制效应 ,有效地抑制淋巴细胞活化。LTB免疫调节功能的发挥 。 展开更多

关键词 大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 LTB 免疫调节 黏膜免疫佐剂 鸡溶菌酶

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大肠杆菌热不稳定肠毒素无毒突变体LTR72基因重组质粒的构建

3

作者 葛艳 尤永进 +2 位作者 徐泉兴 陈波 饶忠 《上海农业学报》 CSCD 2003年第4期15-17,共3页

用PCR方法扩增大肠杆菌LT基因 ,将LT基因重组入pET32a质粒载体 ,对构建的重组质粒pET LT进行酶切、核苷酸序列分析 ,结果表明 ,插入片段LT的核苷酸序列与预期一致 ,且阅读框正确。并在影响LT毒性的关键氨基酸位点 ,用PCR方法引入点突变 ... 用PCR方法扩增大肠杆菌LT基因 ,将LT基因重组入pET32a质粒载体 ,对构建的重组质粒pET LT进行酶切、核苷酸序列分析 ,结果表明 ,插入片段LT的核苷酸序列与预期一致 ,且阅读框正确。并在影响LT毒性的关键氨基酸位点 ,用PCR方法引入点突变 (丙氨酸→精氨酸 ) ,成功构建了含有LTR72突变体基因的重组质粒pET LTR72。 展开更多

关键词 大肠杆菌 热不稳定肠毒素 突变体LTR72 基因重组 质粒 免疫原性 佐剂功能 核苷酸序列

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产热敏肠毒素大肠杆菌小鼠攻毒模型的建立 被引量：9

4

作者 刘小宝 孔春梅 +2 位作者 刘彦慈 穆祥 许剑琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第4期75-76,共2页

关键词 产肠毒素大肠杆菌 热敏感 模型 攻毒 小鼠 热稳定肠毒素 体外生长 ETEC

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抗大肠杆菌耐热肠毒素中药方剂的筛选 被引量：3

5

作者 孔春梅 刘小宝 +2 位作者 宋洁 穆祥 许剑琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第11期64-66,共3页

关键词 产肠毒素大肠杆菌 耐热肠毒素 中药方剂 筛选 热稳定肠毒素 鸟苷酸环化酶 幼畜腹泻 微循环障碍

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贵州羔羊致病性大肠杆菌血清型和热稳定性肠毒素的研究 被引量：2

6

作者 谭诗文 艾玉萍 +2 位作者 冉懋韬 肖耀南 范泽明 《贵州畜牧兽医》 2002年第6期4-5,共2页

从腹泻羔羊中分离到大肠杆菌80株,对80株菌株做血清型鉴定,55株为埃希氏大肠杆菌。分属为O119、O34、O8、O78O101、O96种血清型,其中O119、O24为主要“O”类型。每个血清型筛选出的CH9612、SC9938、CH986、CH9817、LL9934、GL988株菌6... 从腹泻羔羊中分离到大肠杆菌80株,对80株菌株做血清型鉴定,55株为埃希氏大肠杆菌。分属为O119、O34、O8、O78O101、O96种血清型,其中O119、O24为主要“O”类型。每个血清型筛选出的CH9612、SC9938、CH986、CH9817、LL9934、GL988株菌6株。用乳鼠胃内投服试验,测定出6株菌具有产生热稳定性肠毒素的特性(ST)。 展开更多

关键词 贵州 羔羊 致病性大肠杆菌 血清型 热稳定性肠毒素

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利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株 被引量：3

7

作者 檀克勤 马现永 +2 位作者 崔艺燕 田志梅 邓盾 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期666-675,共10页

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88的热不稳定性肠毒素(heat-labile toxin,LT)基因进行无痕敲除并获得K88 LT-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列,并... 本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88的热不稳定性肠毒素(heat-labile toxin,LT)基因进行无痕敲除并获得K88 LT-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列,并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段;将供体片段转化至ETEC K88,同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统,对LT基因进行敲除;通过PCR验证获得了K88 LT-缺陷菌株,并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示,λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段,CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除,最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明,K88 LT-缺陷菌株的溶血能力丧失,并且生长速度比野生型菌株减缓,LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) CRISPR/Cas9 λ-Red同源重组系统 热不稳定性肠毒素

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大肠杆菌毒素stx2eB-LTB-ST融合基因的构建与表达 被引量：2

8

作者 齐翀 刘军 +2 位作者 祝令伟 郭学军 冯书章 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期341-345,共5页

利用PCR技术,从病原性大肠杆菌中扩增Stx2e及LT毒素B亚基的基因并扩增ST基因,用复式PCR技术获得了这三段基因的两种融合结构,一种是三段基因直接相连,另一种是在这三段基因之间加入适当的Linker序列。在这两种融合基因两端加入适当的酶... 利用PCR技术,从病原性大肠杆菌中扩增Stx2e及LT毒素B亚基的基因并扩增ST基因,用复式PCR技术获得了这三段基因的两种融合结构,一种是三段基因直接相连,另一种是在这三段基因之间加入适当的Linker序列。在这两种融合基因两端加入适当的酶切位点并分别与pMD18-T载体相连,酶切后以正确的阅读框插入pET28a载体的多克隆位点中,转入受体菌BL21(DE3)进行表达,得到两种约28 Ku的蛋白,表达的融合蛋白均以包涵体的方式存在,约占全菌蛋白表达量的30%,将包涵体初步提纯,为下游工作奠定了基础。 展开更多

关键词 Stx2e 热不稳定肠毒素 热稳定肠毒素 融合基因

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鸟苷素研究进展

9

作者 常英姿 王晓红 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期171-172,共2页

鸟苷素为最近发现的含有１５个氨基酸的肽类，是强大的内源性大肠杆菌热稳定肠毒素（ＳＴａ）受体激活物。它可激活鸟苷酸环化酶，刺激小肠细胞中Ｃｌ－分泌。蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）可能是这种反应的主要介导物，胆囊纤维化跨膜调节物（... 鸟苷素为最近发现的含有１５个氨基酸的肽类，是强大的内源性大肠杆菌热稳定肠毒素（ＳＴａ）受体激活物。它可激活鸟苷酸环化酶，刺激小肠细胞中Ｃｌ－分泌。蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）可能是这种反应的主要介导物，胆囊纤维化跨膜调节物（ＣＦＴＲ）是信号通路的最后共同的效应器。 展开更多

关键词 鸟苷素 热稳定肠毒素 小肠 水盐平衡

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LT-B转基因烟草植株的建立 被引量：4

10

作者 刘红莉 雷霆 +6 位作者 张铮 郑瑾 来宝长 孔令洪 王喆之 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期425-429,共5页

目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启... 目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启动子控制表达 ;将pBI LTB用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4 4 0 4 ;采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 ,获得转基因烟草植株 ;用PCR、Southern、Westernblot和ELISA检测转基因植株。结果　经PCR及Southern杂交分析 ,共发现 12株烟草的基因组中有LT B基因整合 ;Westernblot和ELISA分析表明有 9株转基因烟草能有效表达LT B蛋白 ,其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的 3.36～ 10 .5 6 μg·g-1TSP。结论　建立的LT B转基因烟草植株可成功表达LT B ,并具有五聚体结构 ,为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 转基因烟草 植物疫苗 根瘤农杆菌

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引起羊腹泻的传染病的诊断 被引量：2

11

作者 周洪 《养殖技术顾问》 2014年第10期180-180,共1页

1大肠杆菌病 大肠杆菌可引起羔羊病和败血症两种类型。羔羊病多在出生后48小时即可出现兽医临床症状,大多因母羊乳房被污染,羔羊饮奶被感染的结果。肠杆菌能分泌热稳定肠毒素和K99吸着因子,肠上皮细胞在外毒素作用下迅速被破坏,细菌大... 1大肠杆菌病 大肠杆菌可引起羔羊病和败血症两种类型。羔羊病多在出生后48小时即可出现兽医临床症状,大多因母羊乳房被污染,羔羊饮奶被感染的结果。肠杆菌能分泌热稳定肠毒素和K99吸着因子,肠上皮细胞在外毒素作用下迅速被破坏,细菌大量繁殖,可引起羔羊迅速死亡,或短期内表现腹痛,疲乏无力。 展开更多

关键词 羔羊病 传染病 大肠杆菌病 诊断 腹泻 热稳定肠毒素 肠上皮细胞 临床症状

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疫苗

12

《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第2期67-72,共6页

960592 脑膜炎奈瑟氏球菌5C外膜蛋白的克隆和表达[英]/Guillen, G.…∥Acta Biotechnol.-1995,15(1).-97～106[译自DBA,1995,14(12),95-06948]

关键词 融合蛋白 脑膜炎奈瑟氏球菌 结核分枝杆菌 内皮细胞 抗原决定簇 髓过氧物酶 毒素大肠杆菌 大肠杆菌热稳定肠毒素 重组杆状病毒 口服疫苗

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自释放型细胞内运输载体LCA2结构域的制备与性质研究

13

作者 刘地 武晓英 +4 位作者 王姝慧 乔宏萍 李娜 柴美灵 马兴元 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1366-1376,共11页

蛋白质药物因其独特的优势,在疾病的预防和治疗中发挥了极其重要的作用,但大分子的特性阻碍了其对细胞内靶标的作用。现有的递送策略中,由于穿膜肽更适用于临床研究和治疗,逐渐成为了递送蛋白质药物最主要的工具。因此,开发安全有效的... 蛋白质药物因其独特的优势,在疾病的预防和治疗中发挥了极其重要的作用,但大分子的特性阻碍了其对细胞内靶标的作用。现有的递送策略中,由于穿膜肽更适用于临床研究和治疗,逐渐成为了递送蛋白质药物最主要的工具。因此,开发安全有效的穿膜肽类递送载体对于生物医药的基础研究及临床应用具有重要意义。文中设计了一种基于肠毒素A2结构域的自释放型细胞内运输载体LCA2,该载体由连接子Linker、自释放酶敏感位点Cs与穿膜结构域LTA2三部分组成,并以荧光蛋白质mCherry为模式蛋白质来检测该载体的性质。电泳结果显示,从含有pET24a(+)-ma2重组质粒的工程菌中获得了高纯度的mCherry-LCA2融合蛋白,且低浓度的胰蛋白酶就可将mCherry从LCA2上有效地分离;荧光显微镜下观察到LCA2能将与之连接的mCherry运输到不同类型的细胞中,流式细胞仪检测到LCA2的运输能力具有一定的细胞差异性。共聚焦显微镜的荧光分析和Western印迹结果显示,LCA2载体将mCherry蛋白运送到内质网,Cs酶敏感位点被切开,模式蛋白质mCherry与LCA2分离并释放到细胞内。CCK-8结果表明,在给药剂量5~40μg/mL范围内,细胞增殖活力未见显著变化。上述结果证明,LCA2是一种安全有效的自释放型递送载体,能够将活性蛋白质或蛋白质药物运输到细胞内质网并释放。 展开更多

关键词 自释放型载体 细胞穿膜肽 内质网靶向 热不稳定肠毒素 A2结构域

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