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热休克转录因子4b的克隆表达及MAP激酶P38对其磷酸化调控
被引量:
3
1
作者
马增翼
张军
+2 位作者
李雪丽
席子明
胡延忠
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期325-328,共4页
目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用。方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4b cDNA的N-端加入Flag标签。将PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后,与该二酶线性化p...
目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用。方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4b cDNA的N-端加入Flag标签。将PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后,与该二酶线性化pcDNA3.0质粒一起连接获得重组质粒pcDNA-Flag-Hsf4b,将克隆好的pcDNA-flag-Hsf4b转染HEK293T细胞,并用抗Flag抗体进行免疫印迹分析,免疫沉淀实验和体内Pulldown实验证明Hsf4b可与MAP激酶P38结合,激酶实验结果显示P38可体外磷酸化Hsf4b。结果:应用基因克隆技术,将人Hsf4b的cDNA克隆到真核表达质粒pcDNA3.0和pEBG中。pcDNA-Flag-Hsf4b可在真核细胞HEK293T中表达一个相对分子质量(Mr)约为60000的蛋白。进一步研究发现,Hsf4b可与MAP激酶P38结合,Hsf4b的C-端转录调控区参与和P38的结合,P38可体外磷酸化Hsf4b。结论:实验首次证明Hsf4b可结合并被P38磷酸化,为进一步探讨Hsf4b在晶状体发育过程中的作用提供新的信号通路。
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关键词
热休克转录因子4
晶状体
MAP激酶P38
磷酸化
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职称材料
HSF4B通过上调RhoA和Rac1促进晶状体上皮细胞迁移
被引量:
4
2
作者
张军
马增翼
+2 位作者
李淑莲
刘广超
胡延忠
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期377-382,共6页
热休克转录因子4(heat shock transcription factor 4,HSF4)是调控新生儿期晶状体发育的关键转录因子.它参与调控晶状体上皮细胞增生和纤维细胞分化,然而其作用机理仍不清楚.利用鼠晶状体上皮细胞mLEC/HSF4-/-和mLEC/HA-HSF4b细胞为材料...
热休克转录因子4(heat shock transcription factor 4,HSF4)是调控新生儿期晶状体发育的关键转录因子.它参与调控晶状体上皮细胞增生和纤维细胞分化,然而其作用机理仍不清楚.利用鼠晶状体上皮细胞mLEC/HSF4-/-和mLEC/HA-HSF4b细胞为材料,对HSF4在晶状体上皮细胞中的调控作用进行研究.结果发现,重建的mLEC/HA-HSF4b细胞中,高表达热休克蛋白25(Hsp25)和αB晶体蛋白(αB-crystallin).细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验结果表明,mLEC/HSF4-/-细胞明显比mLEC/HA-HSF4b细胞的迁徙速度慢(t检验,P=0.0001).应用免疫印迹和半定量RT-PCR实验发现,HSF4b能上调RhoA,Rac1和CDC42的表达.但后者的表达不受Hsp25和αB-crystallin调控.由此推论,HSF4b通过调控RhoA,Rac1和CDC42的表达参与调控晶状体上皮细胞向后房的迁徙.这一新发现对解释HSF4b调控晶状体发育提供了有力的证据.
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关键词
热休克转录因子4
晶状体上皮细胞
RHOA
RAC1
热
休克
蛋白25
αB-晶体蛋白
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职称材料
我国科学家率先发现儿童白内障致病基因
3
《生物学教学》
北大核心
2003年第1期51-51,共1页
关键词
热
休克
转录
因子
-
4
突变基因
发现
儿童
白内障
致病基因
在线阅读
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职称材料
题名
热休克转录因子4b的克隆表达及MAP激酶P38对其磷酸化调控
被引量:
3
1
作者
马增翼
张军
李雪丽
席子明
胡延忠
机构
河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期325-328,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30871299)
文摘
目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用。方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4b cDNA的N-端加入Flag标签。将PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后,与该二酶线性化pcDNA3.0质粒一起连接获得重组质粒pcDNA-Flag-Hsf4b,将克隆好的pcDNA-flag-Hsf4b转染HEK293T细胞,并用抗Flag抗体进行免疫印迹分析,免疫沉淀实验和体内Pulldown实验证明Hsf4b可与MAP激酶P38结合,激酶实验结果显示P38可体外磷酸化Hsf4b。结果:应用基因克隆技术,将人Hsf4b的cDNA克隆到真核表达质粒pcDNA3.0和pEBG中。pcDNA-Flag-Hsf4b可在真核细胞HEK293T中表达一个相对分子质量(Mr)约为60000的蛋白。进一步研究发现,Hsf4b可与MAP激酶P38结合,Hsf4b的C-端转录调控区参与和P38的结合,P38可体外磷酸化Hsf4b。结论:实验首次证明Hsf4b可结合并被P38磷酸化,为进一步探讨Hsf4b在晶状体发育过程中的作用提供新的信号通路。
关键词
热休克转录因子4
晶状体
MAP激酶P38
磷酸化
Keywords
Hsf
4
b
lens
MAPkinase P38
phosphorylation
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
HSF4B通过上调RhoA和Rac1促进晶状体上皮细胞迁移
被引量:
4
2
作者
张军
马增翼
李淑莲
刘广超
胡延忠
机构
河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室
复旦大学附属华山医院神经外科
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期377-382,共6页
基金
国家自然科学基金资助(No.30871299
No.81270985)~~
文摘
热休克转录因子4(heat shock transcription factor 4,HSF4)是调控新生儿期晶状体发育的关键转录因子.它参与调控晶状体上皮细胞增生和纤维细胞分化,然而其作用机理仍不清楚.利用鼠晶状体上皮细胞mLEC/HSF4-/-和mLEC/HA-HSF4b细胞为材料,对HSF4在晶状体上皮细胞中的调控作用进行研究.结果发现,重建的mLEC/HA-HSF4b细胞中,高表达热休克蛋白25(Hsp25)和αB晶体蛋白(αB-crystallin).细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验结果表明,mLEC/HSF4-/-细胞明显比mLEC/HA-HSF4b细胞的迁徙速度慢(t检验,P=0.0001).应用免疫印迹和半定量RT-PCR实验发现,HSF4b能上调RhoA,Rac1和CDC42的表达.但后者的表达不受Hsp25和αB-crystallin调控.由此推论,HSF4b通过调控RhoA,Rac1和CDC42的表达参与调控晶状体上皮细胞向后房的迁徙.这一新发现对解释HSF4b调控晶状体发育提供了有力的证据.
关键词
热休克转录因子4
晶状体上皮细胞
RHOA
RAC1
热
休克
蛋白25
αB-晶体蛋白
Keywords
heat shock factor
4
( HSF
4
)
mouse lens epithelial cell
RhoA
Racl
heat shock protein25 (Hsp25)
ctB-crystallin
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
我国科学家率先发现儿童白内障致病基因
3
出处
《生物学教学》
北大核心
2003年第1期51-51,共1页
关键词
热
休克
转录
因子
-
4
突变基因
发现
儿童
白内障
致病基因
分类号
R776.1 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
热休克转录因子4b的克隆表达及MAP激酶P38对其磷酸化调控
马增翼
张军
李雪丽
席子明
胡延忠
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
HSF4B通过上调RhoA和Rac1促进晶状体上皮细胞迁移
张军
马增翼
李淑莲
刘广超
胡延忠
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
我国科学家率先发现儿童白内障致病基因
《生物学教学》
北大核心
2003
0
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职称材料
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