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dsRNA纳米融合制剂研制及对烟草普通花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的抑制效果
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作者 张盼 郭玉双 +4 位作者 汪汉成 尹国英 曹领改 贾蒙骜 余永旭 《农药学学报》 北大核心 2025年第3期473-483,399,共12页
由烟草普通花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)所致花叶病是烟草上的主要病害,严重威胁烟叶产业的可持续发展。纳米材料介导的RNA干扰(RNAi)是一种新型的绿色、安全、高效防治技术,在植物病毒病防治中有着巨大的应用潜力。本研究... 由烟草普通花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)所致花叶病是烟草上的主要病害,严重威胁烟叶产业的可持续发展。纳米材料介导的RNA干扰(RNAi)是一种新型的绿色、安全、高效防治技术,在植物病毒病防治中有着巨大的应用潜力。本研究旨在筛选出对TMV和TVBMV病毒抑制效果最佳的靶标序列,并通过双链RNA(dsRNA)纳米材料递送体系解析其对TMV和TVBMV的抑制效果。基于TMV基因组的外壳蛋白(CP)和P126基因,以及TVBMV基因组的CP和HC Pro基因设计靶标片段,结合病毒诱导基因沉默(VIGS)试验,明确不同片段对TMV和TVBMV的抑制效果,筛选最佳靶标片段。体外合成dsRNA,并分别与3种纳米材料壳聚糖(CS)、碳量子点(CQD)和石墨烯量子点(GQD)融合,筛选最佳融合比例并制备得到纳米材料-dsRNA制剂,通过激光粒度仪、Zeta电位测试仪和透射电镜对3种纳米制剂进行了表征,验证了3种制剂对TMV和TVBMV的抑制效果。结果表明:VIGS注射P126对TMV的抑制效果较好,平均抑制率为53.96%;VIGS注射V-HC对TVBMV的抑制效果较好,平均抑制率为61.22%;表明P126和HC Pro基因片段为TMV和TVBMV的最佳靶标。dsRNA和纳米材料的融合试验表明,dsRNA和CS的最佳融合质量比为1∶1,dsRNA和CQD的最佳融合质量比为1∶10;dsRNA和GQD的最佳融合质量比为1∶7。纳米制剂的表征结果证明,dsRNA被成功负载在纳米材料上。纳米材料-dsRNA制剂对TMV和TVBMV的病毒抑制验证试验表明,纳米制剂显著提高了dsRNA对TMV和TVBMV的抑制效果,且GQDdsRNA和CQD-dsRNA组合的抑制效果最佳。 展开更多
关键词 烟草普通花叶病毒 烟草脉带花叶病毒 RNA干扰 双链RNA 抑制效果 纳米材料
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烟草脉带花叶病毒试纸条的制作及田间病株的快速检测 被引量:8
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作者 纪玲玲 成巨龙 +5 位作者 朱信宁 吴云锋 张建新 李蓓 侯伟 孙润红 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期180-183,共4页
建立一种快速、特异、简便的烟草脉带花叶病毒检测方法。应用胶体金标记技术和免疫层析原理,在玻璃纤维膜、硝酸纤维膜的检测带和质控带上分别喷上胶体金与烟草脉带花叶病毒兔多克隆抗体的偶联物、烟草脉带花叶病毒兔多克隆抗体和羊抗兔... 建立一种快速、特异、简便的烟草脉带花叶病毒检测方法。应用胶体金标记技术和免疫层析原理,在玻璃纤维膜、硝酸纤维膜的检测带和质控带上分别喷上胶体金与烟草脉带花叶病毒兔多克隆抗体的偶联物、烟草脉带花叶病毒兔多克隆抗体和羊抗兔IgG,研制出烟草脉带花叶病毒快速检测试纸条。病汁液稀释1000倍后仍可快速检出,3-10 min即可显示结果。对烟草上危害严重的4种病毒进行测试,均无非特异性反应。4℃干燥密封保存的试纸条有效期大于2个月。用试纸条对田间病株进行随机检测,结果与RT-PCR检测结果一致。 展开更多
关键词 胶体金免疫层析法 烟草脉带花叶病毒 试纸条
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烟草脉带花叶病毒云南分离物全基因序列分析 被引量:3
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作者 秦西云 卢训 +3 位作者 方琦 尹跃艳 丁铭 张仲凯 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2015年第5期44-46,共3页
应用电子显微镜负染色法在烟草叶片斑驳、脉间褪绿病样中观察到马铃薯Y病毒属病毒粒子,通过马铃薯Y病毒属兼并引物扩增获得目的片段,序列分析表明病样中病原物为TVBMV,命名为YN-YX-TVBMV。根据Gen Bank已知序列,分别合成引物,对YN-YX-TV... 应用电子显微镜负染色法在烟草叶片斑驳、脉间褪绿病样中观察到马铃薯Y病毒属病毒粒子,通过马铃薯Y病毒属兼并引物扩增获得目的片段,序列分析表明病样中病原物为TVBMV,命名为YN-YX-TVBMV。根据Gen Bank已知序列,分别合成引物,对YN-YX-TVBMV进行克隆及测序,得到一条6047 bp的不完整的病毒基因组核苷酸序列,将该序列与国内报道的TVBMV全基因序列进行对比分析发现该分离物与报道的TVBMV其他分离物具有明显的地域分布差异,即云南获得的分离物均独立聚为一簇。 展开更多
关键词 烟草脉带花叶病毒 全基因 分析
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烟草脉带花叶病毒基因组序列分析 被引量:1
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作者 蔡联合 陈媛媛 +10 位作者 谢小东 魏攀 张剑锋 王忠 李锋 魏春阳 王燃 武明珠 罗朝鹏 杨军 林福呈 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第6期113-120,共8页
为了探明烟草脉带花叶病毒危害和流行的机制,使用RT-PCR技术扩增获得TVBMV云南分离物YN9.1基因组全序列,并进行了基因组结构、序列同源性、氨基酸保守基序、系统进化和重组分析。结果表明:(1)YN9.1基因组具有Potyvirus属病毒典型特征,... 为了探明烟草脉带花叶病毒危害和流行的机制,使用RT-PCR技术扩增获得TVBMV云南分离物YN9.1基因组全序列,并进行了基因组结构、序列同源性、氨基酸保守基序、系统进化和重组分析。结果表明:(1)YN9.1基因组具有Potyvirus属病毒典型特征,含有在Potyvirus属病毒中较为少见的NIb/CP切割位点Q/N;(2)YN9.1与其它分离物核苷酸序列同源性为90.5-91.1%,氨基酸序列同源性为95.2-96.2%。与YND核苷酸和氨基酸序列同源性最高;(3)对HC-Pro和CP保守基序进行了分析。YN9.1具有RITC、PTK、DAG等病毒蚜虫传播保守基序,其中RITC在Potyvirus属病毒中常见形式为KITC;(4)系统进化树分析结果显示,TVBMV进化形成2个组,云南分离物独立进化形成一组,TVBMV进化与地域具有明显的相关性;(5)重组分析发现PY为ZC1和YN的组内重组体,重组位点位于HC-Pro 3’末端和NIb 5’端。 展开更多
关键词 烟草脉带花叶病毒 保守基序 序列分析 进化分析 重组分析
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陕西烟区烟草脉带花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和原核表达 被引量:1
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作者 刘萍 纪玲玲 +2 位作者 郝兴安 吴云锋 成巨龙 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2011年第5期87-89,95,共4页
根据烟草脉带花叶病毒(TVBMV)CP序列合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了(TVBMV)CP基因。序列分析表明,TVBMV CP基因全长813nt,编码271个氨基酸;与GenBank中已报道的9个分离CP基因相比,其核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.28%-98.15%... 根据烟草脉带花叶病毒(TVBMV)CP序列合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了(TVBMV)CP基因。序列分析表明,TVBMV CP基因全长813nt,编码271个氨基酸;与GenBank中已报道的9个分离CP基因相比,其核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.28%-98.15%和97.05%-100%。将TVBMV CP基因经BamHI/NotI双酶切定向插入到pET30a载体中,构建了原核表达载体pET30-TVBMV CP,重组质粒经BamHI和NotI双酶切鉴定及基因测序验证正确后,用IPTG进行诱导表达。结果表明:TVBMV CP在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物的分子量为37 kD。用表达产物为抗原免疫家兔制备了特异性抗血清,其效价为1/2048。用Western-blot检测田间样品,其结果表明,制备的抗血清可用于检测田间的发病植株。 展开更多
关键词 烟草脉带花叶病毒 外壳蛋白 原核表达 抗血清
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云南省烟草品种脉带花叶病的症状与抗性 被引量:3
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作者 刘勇 杨华兵 +1 位作者 李梅云 李永平 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第5期62-66,共5页
通过大棚内摩擦接种,研究了20个烟草品种发生烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV)的症状特征和对TVBMV的抗性。TVBMV的症状因品种是否携带抗PVY的va位点和抗TMV的N基因而异。其典型症状为脉带花叶、深绿色斑块。... 通过大棚内摩擦接种,研究了20个烟草品种发生烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV)的症状特征和对TVBMV的抗性。TVBMV的症状因品种是否携带抗PVY的va位点和抗TMV的N基因而异。其典型症状为脉带花叶、深绿色斑块。vava基因型烟草品种(NC55,TN86)耐TVBMV,VaVa基因型品种(K326,云烟87和云烟97等)感TVBMV。供试品种对TVBMV表现为耐病或感病,缺乏持久抗性。 展开更多
关键词 烟草 烟草脉带花叶病毒 症状 抗性评价
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