为建立火鸡组织滴虫的检测方法,本研究采用PCR扩增火鸡组织滴虫的18S rRNA基因片段,构建质粒标准品作为模板,建立火鸡组织滴虫的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并进行了初步临床应用。结果显示:所建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测...为建立火鸡组织滴虫的检测方法,本研究采用PCR扩增火鸡组织滴虫的18S rRNA基因片段,构建质粒标准品作为模板,建立火鸡组织滴虫的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并进行了初步临床应用。结果显示:所建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法Cq值与质粒标准品在4.6×106拷贝/μL^4.6×10^10拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9939,斜率为-3.32;该方法对弓形虫、柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、犬巴贝斯虫等常见原虫基因组DNA无扩增,对质粒标准品的检测下限可达4.6×10^2拷贝/μL,组内和组间变异系数分别为0.09%~0.33%和0.08%~0.21%,敏感性、特异性和重复性均较好。该方法对147份临床疑似火鸡组织滴虫感染样品的虫体总检出率高于普通PCR方法,其中对靶器官肝脏和盲肠的检出率(71.4%、66.7%)明显高于普通PCR方法的检出率(57.1%、52.4%)。本研究建立的火鸡组织滴虫SYBR Green I荧光定量PCR检测方法为临床开展组织滴虫病的诊断和流行病学调查提供了检测手段。展开更多
文摘为建立火鸡组织滴虫的检测方法,本研究采用PCR扩增火鸡组织滴虫的18S rRNA基因片段,构建质粒标准品作为模板,建立火鸡组织滴虫的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并进行了初步临床应用。结果显示:所建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法Cq值与质粒标准品在4.6×106拷贝/μL^4.6×10^10拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9939,斜率为-3.32;该方法对弓形虫、柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、犬巴贝斯虫等常见原虫基因组DNA无扩增,对质粒标准品的检测下限可达4.6×10^2拷贝/μL,组内和组间变异系数分别为0.09%~0.33%和0.08%~0.21%,敏感性、特异性和重复性均较好。该方法对147份临床疑似火鸡组织滴虫感染样品的虫体总检出率高于普通PCR方法,其中对靶器官肝脏和盲肠的检出率(71.4%、66.7%)明显高于普通PCR方法的检出率(57.1%、52.4%)。本研究建立的火鸡组织滴虫SYBR Green I荧光定量PCR检测方法为临床开展组织滴虫病的诊断和流行病学调查提供了检测手段。
