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TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究 被引量：6
1
作者 郝峰 白雪松 +6 位作者 鞠晓红 方芳 藏雨轩 朱杭飞 向国艳 张雲乔 袁忠海 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1633-1639,共7页
目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效... 目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效率和表达效果,杀稻瘟菌素(blasticidin)进行抗生素筛选,获取稳定表达TMEM16A的FRT细胞株。RT-PCR和免疫荧光检测TMEM16A于FRT细胞的表达情况;倒置荧光显微镜下观察TMEM16A在FRT细胞中的表达和定位;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFPH148Q/I152L检测TMEM16A钙激活氯离子通道的功能。结果:BamHⅠ和XbaⅠ双酶切的琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表达载体pUB6/V5中;RT-PCR和免疫荧光实验结果表明经杀稻瘟菌素筛选后的FRT细胞在mRNA和蛋白水平表达TMEM16A,倒置显微镜下观察结果表明TMEM16A在FRT细胞膜上有表达;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L证实稳定表达于FRT细胞的TMEM16A具有经典的钙激活氯离子通道特性。结论:FRT细胞可高效表达TMEM16A。TMEM16A是钙激活氯离子通道的分子基础。 展开更多
关键词 跨膜蛋白16A 钙激活氯离子通道 膜片钳术 Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞
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玉郎伞多糖通过调控Caveolin-1表达对脂多糖诱导的甲状腺滤泡上皮细胞炎症损伤和凋亡的影响 被引量：4
2
作者 辛思源 杨志新 +2 位作者 柳金英 刘慧 郭建恩 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第14期1759-1765,1772,共8页
目的探讨玉郎伞多糖(YLSPS)对脂多糖(LPS)诱导的人甲状腺滤泡上皮细胞炎症损伤和凋亡的影响及作用机制。方法不同浓度的YLSPS处理LPS诱导的人甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori3-1后,转染Caveolin-1过表达载体至Nthy-ori3-1细胞;酶联免疫吸附... 目的探讨玉郎伞多糖(YLSPS)对脂多糖(LPS)诱导的人甲状腺滤泡上皮细胞炎症损伤和凋亡的影响及作用机制。方法不同浓度的YLSPS处理LPS诱导的人甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori3-1后,转染Caveolin-1过表达载体至Nthy-ori3-1细胞;酶联免疫吸附法检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Caveolin-1 mRNA表达水平,蛋白印迹(Western Blot)法检测Caveolin-1蛋白表达。YLSPS处理甲状腺炎模型小鼠,显微镜观察各组小鼠甲状腺组织形态变化。结果YLSPS可降低LPS诱导的Nthy-ori3-1细胞中IL-1β、IL-6和MCP-1水平、细胞凋亡率(P<0.05),促进细胞中Caveolin-1的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),且具有剂量依赖性。过表达Caveolin-1也可降低LPS诱导的Nthy-ori3-1细胞中IL-1β、IL-6和MCP-1水平及细胞凋亡率。YLSPS可改善甲状腺炎模型小鼠甲状腺组织形态,降低小鼠血清中IL-1β、IL-6和MCP-1水平,促进甲状腺组织中Caveolin-1蛋白表达。结论YLSPS可抑制LPS诱导的Nthy-ori3-1细胞炎症损伤和凋亡,其作用机制与上调Caveolin-1表达有关。 展开更多
关键词 玉郎伞多糖 CAVEOLIN-1 甲状腺滤泡上皮细胞 炎症 细胞凋亡
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龟纹瓢虫生长发育及卵巢与滤泡上皮细胞的研究 被引量：2
3
作者 皇甫宁博 高雪珂 +6 位作者 王丽 朱香镇 张开心 李东阳 姬继超 雒珺瑜 崔金杰 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2021年第4期328-336,共9页
【目的】龟纹瓢虫是农田害虫的重要捕食性天敌。明确龟纹瓢虫生长发育、卵子发生和滤泡上皮细胞发育规律对于解决人工扩繁龟纹瓢虫的难题至关重要。【方法】对龟纹瓢虫生长发育和生殖相关参数进行了测定,并通过细胞核和细胞骨架染色对... 【目的】龟纹瓢虫是农田害虫的重要捕食性天敌。明确龟纹瓢虫生长发育、卵子发生和滤泡上皮细胞发育规律对于解决人工扩繁龟纹瓢虫的难题至关重要。【方法】对龟纹瓢虫生长发育和生殖相关参数进行了测定,并通过细胞核和细胞骨架染色对龟纹瓢虫卵巢小管和滤泡上皮细胞形态进行系统观察。【结果】(1)龟纹瓢虫1龄、2龄、3龄、4龄幼虫、蛹、雌成虫、雄成虫平均历期分别为1.13 d±0.09 d、1.48 d±0.11 d、1.34 d±0.08 d、2.34 d±0.06 d、2.81 d±0.08 d、51.08 d±1.13 d、48.36 d±1.29 d。在2~3龄幼虫期体长增加最快,4龄幼虫体长达到最长9.32 mm±0.27 mm,成虫体宽达到最宽3.70 mm±0.05 mm;(2)单雌日均产卵量最高为14.42粒±2.36粒,单雌累计产卵量为414粒±41.27粒,最高可达654粒。(3)明确了卵泡和卵母细胞动态变化,并观察到在卵黄沉积期滤泡上皮细胞间隙的形成,主要用于卵母细胞摄取卵黄原蛋白。【结论】本研究明确了龟纹瓢虫体长、体宽和卵子发生规律、滤泡上皮细胞发育规律,为进一步探索龟纹瓢虫生殖调控分子机制、解决人工扩繁难题提供理论依据。 展开更多
关键词 龟纹瓢虫 卵巢管 滤泡上皮细胞 细胞染色 卵黄原蛋白
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正常人和自身免疫性甲状腺疾病患者甲状腺细胞对碘致抗原表达的不同敏感性 被引量：1
4
作者 刘东方 邓华聪 +3 位作者 许改平 雄波 侯平 程伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第22期2272-2275,共4页
目的探讨碘对体外培养的G raves病(GD)、桥本甲状腺炎(HT)、正常人甲状腺滤泡上皮细胞(TEC)抗原表达的影响。方法分离培养正常、GD和HT TEC,给予不同浓度NaI干预,免疫组化检测各组TEC CD54、HLA-DR表达的水平,流式细胞仪检测各组细胞CD8... 目的探讨碘对体外培养的G raves病(GD)、桥本甲状腺炎(HT)、正常人甲状腺滤泡上皮细胞(TEC)抗原表达的影响。方法分离培养正常、GD和HT TEC,给予不同浓度NaI干预,免疫组化检测各组TEC CD54、HLA-DR表达的水平,流式细胞仪检测各组细胞CD80水平的变化,同时放免测定培养液中细胞因子TNF-α、IL-1β水平;观察加碘前后抗原表达的变化。结果NaI可以使GD、HT患者TEC表达的CD54和HLA-DR增加HT的CD80表达增加(P<0.05),并使培养液中细胞因子TNF-α、IL-1β分泌增加(P<0.05);但NaI不能使正常TEC表达上述抗原(P>0.05)。结论CD54、CD80和HLA-DR在AITD的免疫学发病机制中起重要作用;碘可以作为一个重要的环境因子,通过与局部环境中的细胞因子及其它免疫炎症介质的协同作用间接影响作为抗原提呈细胞(antigen present cell,APC)而激活的TEC,碘不是AITD的始发因素,但在AITD的易感个体或者已有早期免疫功能紊乱的隐性患者,碘可能增加甲状腺局部细胞因子如IL-1β等分泌,使相应抗原表达上调,导致AITD的发生。 展开更多
关键词 自身免疫性甲状腺疾病 甲状腺滤泡上皮细胞 碘 IL-1β 表面抗原
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ANO1稳定转染细胞模型的构建及生理特性
5
作者 徐连秀 狄文慧 +4 位作者 吴明达 刘雪莹 王国庆 胡江 郝峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期52-57,共6页
为了构建稳定转染钙激活氯离子通道(CaCCs)细胞模型并研究其生理特性,本试验采用脂质体转染和抗生素筛选获取共表达阴离子通道1(ANO1)蛋白和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞;用倒置荧光显微... 为了构建稳定转染钙激活氯离子通道(CaCCs)细胞模型并研究其生理特性,本试验采用脂质体转染和抗生素筛选获取共表达阴离子通道1(ANO1)蛋白和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞;用倒置荧光显微镜观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在FRT细胞的表达情况;用流式细胞仪检测细胞模型纯度;用荧光淬灭动力学试验检测细胞模型功能;用细胞模型或膜片钳技术研究ANO1生理特性,包括转运阴离子的特性、不同激活剂及抑制剂对ANO1的调控作用、ANO1电流受Ca^(2+)调控作用等。结果显示,倒置荧光显微镜下可观察到清晰的荧光信号;荧光淬灭动力学试验证明,此细胞模型可用于ANO1生理特性的研究;ANO1具有转运阴离子的特性;钙激活氯离子通道激活剂可以使ANO1开放且呈剂量依赖关系;钙激活氯离子通道抑制剂可抑制ANO1开放且具有剂量依赖关系;ANO1电流呈现钙依赖的特性;高浓度Ca^(2+)引起Run-down现象。结果表明,本试验成功构建ANO1细胞模型,ANO1具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性。 展开更多
关键词 阴离子通道1 细胞模型 膜片钳 大鼠甲状腺滤泡上皮细胞 钙激活氯离子通道
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pEGFP-N1脂质体转染方法的优化及其应用 被引量：5
6
作者 李凤娥 向国艳 +4 位作者 孔繁利 郝峰 杨紫嫣 郑岩 方芳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期612-616,I0004,共6页
目的:应用脂质体介导的转染方法将pEGFP-N1转染入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中,并获得较佳的优化方案,阐明该优化条件在转染其他目的基因时的适用性。方法:分别选取不同配比的质粒和脂质体,将pEGFP-N1转入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮... 目的:应用脂质体介导的转染方法将pEGFP-N1转染入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中,并获得较佳的优化方案,阐明该优化条件在转染其他目的基因时的适用性。方法:分别选取不同配比的质粒和脂质体,将pEGFP-N1转入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞。转染后36h,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况和转染效率;台盼蓝染色法检测细胞存活率,以此获得优化的转染条件。同时将pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5分别以上述条件转染,并获取相应优化的转染条件。结果:在质粒质量固定的条件下,随着脂质体质量的增加,其转染效率和细胞存活率升高;但是当质粒∶脂质体>1∶4时,转染效率和细胞存活率下降。在质粒和脂质体比例固定而质量增加时,其转染效率和细胞存活率下降;当质粒∶脂质体>3.2μg∶12.8μL时,转染效率降低。应用脂质体介导的方法转染pEGFP-N1和转染pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5时,在质粒与脂质体的配比为1∶4(3.2μg∶12.8μL)时,转染效率达最高。结论:在应用脂质体介导的目的基因转染时,pEGFP-N1优化的转染条件具有较为广泛的适用性,可用作后续目的基因高效转染优化条件。 展开更多
关键词 脂质体 PEGFP-N1 转染 甲状腺滤泡上皮细胞
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FNA-Tg辅助甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移癌诊治的研究进展 被引量：7
7
作者 章帅 张杰 +1 位作者 王义增 何向辉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期1714-1715,共2页
分化型甲状腺癌（differentiated thyroid cancer,DTC）由滤泡上皮细胞衍生而来,由甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancers,PTC）和滤泡状癌（follicular thyroid cancers,FTC）组成[1],其中PTC最常见,占70%~80%。
关键词 FNA-Tg thyroid 甲状腺乳头状癌 分化型甲状腺癌 滤泡状癌 滤泡上皮细胞 PAPILLARY FOLLICULAR 放射性碘治疗 颈淋巴结清扫
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北京油葫芦卵子发生的观察 被引量：5
8
作者 郎冬梅 奚耕思 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期90-93,共4页
对北京油葫芦 (TeleogryllusemmaOhmachi&Matsuura )卵子发生过程进行了系统观察和研究 .结果表明 ,成虫期卵子发生可明显的分为卵母细胞分化、生长及卵黄形成三个时期 ,并可分为七个阶段 .第一阶段 ,卵母细胞位于卵原区 ,进行第一... 对北京油葫芦 (TeleogryllusemmaOhmachi&Matsuura )卵子发生过程进行了系统观察和研究 .结果表明 ,成虫期卵子发生可明显的分为卵母细胞分化、生长及卵黄形成三个时期 ,并可分为七个阶段 .第一阶段 ,卵母细胞位于卵原区 ,进行第一次减数分裂的前期 .第二阶段 ,卵母细胞核内核仁消失 ,滤泡上皮细胞开始分化 .第三阶段 ,滤泡上皮细胞有丝分裂形成单细胞层包围在卵母细胞外 ,之后滤泡上皮细胞形成双核的柱状体 .第四阶段 ,卵母细胞胞质的周缘有泡状小体出现 ,随后卵黄小颗粒开始在胞质周缘沉积 .第五阶段 ,卵母细胞积累大量卵黄物质 ,胚泡膜界限变的模糊 .第六阶段 ,卵黄积累完成 ,胚泡消失 ,滤泡上皮细胞又成为扁圆形 .第七阶段 ,卵黄膜和卵壳形成 。 展开更多
关键词 蟋蟀 卵子发生 滤泡上皮细胞 北京油葫芦 卵母细胞 细胞分化 细胞生长 卵黄形成
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番鸭(Cairina moschata)甲状腺的显微与亚微结构
9
作者 罗克 林树根 《福建农学院学报》 CSCD 1992年第2期194-197,共4页
番鸭甲状腺实质由大小不一、近似球形的滤泡组成,其上皮细胞呈低立方形至扁平形.电镜下的滤泡上皮细胞,胞质内存在多量由被吞饮的胶状质与溶酶体相结合的胶质滴,线粒体外围有以核糖体规律排列的粗面内质网,网腔内多被低密度的无定形内... 番鸭甲状腺实质由大小不一、近似球形的滤泡组成,其上皮细胞呈低立方形至扁平形.电镜下的滤泡上皮细胞,胞质内存在多量由被吞饮的胶状质与溶酶体相结合的胶质滴,线粒体外围有以核糖体规律排列的粗面内质网,网腔内多被低密度的无定形内容物所扩大.番鸭甲状腺实质存在滤泡旁细胞(C细胞).经Ehrlich苏木素染色的滤泡旁细胞呈球形、体积大、染色较浅,单个散在或2个并列位于滤泡外围的结缔组织内,不与滤泡腔接触,可明显与滤泡上皮细胞相区别. 展开更多
关键词 甲状腺 滤泡 滤泡上皮细胞 番鸭
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