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LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴促进类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的恶性病理学过程
1
作者 曹周芳 汪元 +2 位作者 王梦娜 孙玥 刘菲菲 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第2期371-378,共8页
目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)病理学过程的影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和RA-FLS,构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中,实验分为对照组(FLS)、... 目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)病理学过程的影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和RA-FLS,构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中,实验分为对照组(FLS)、模型组(RA-FLS)、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-LINC00837组、siRNA-NC组、siRNA-LINC00837组。采用双荧光素酶验证LINC00837靶向miR-671-5p及miR-671-5p靶向SERPINE2关系;使用qRT-PCR实验检测各组细胞LINC00837、miR-671-5p、SERPINE2表达量;Edu法检测细胞增殖情况,划痕愈合实验检测RA-FLS迁移数,Western blotting法检测细胞增殖、迁移相关蛋白表达水平;ELISA法检测炎性细胞因子分泌情况。结果双荧光素酶报告基因结果显示,LINC00837与miR-671-5p的3'非翻译区(3'UTR)结合,而miR-671-5p与SERPINE2的3'非翻译区(3'UTR)结合,两两之间具有结合位点(P<0.01)。同一时间段,与对照组相比,模型组LINC00837和SERPINE2表达量升高,而miR-671-5p表达量降低,细胞增殖、迁移能力提高,促炎细胞因子表达升高,抑炎细胞因子表达降低(P<0.01);与模型组相比,pcDNA-LINC00837组细胞增殖、迁移活跃,促炎细胞因子表达升高,抑炎细胞因子表达降低(P<0.01);与模型组相比,siRNA-LINC00837组细胞增殖、迁移能力下降,促炎细胞因子表达下降,抑炎细胞因子水平升高(P<0.01)。结论RA-FLS中存在LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴,该功能轴促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌等恶性病理学过程,干预LINC00837有望成为调控RA-FLS病理学过程的潜在策略。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维细胞样滑膜细胞 LINC00837 增殖迁移 炎症因子
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基于miR-223-3p/NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴探讨新风胶囊对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞焦亡的影响
2
作者 王梦娜 汪元 +4 位作者 曹周芳 黄旦 孙艳秋 孙玥 王露琳 《中成药》 北大核心 2025年第5期1680-1687,共8页
目的 探讨新风胶囊对脂多糖(LPS)诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)的影响。方法 构建LPS诱导的RA-FLS炎症模型;SD大鼠灌胃给药制备新风胶囊含药血清;双荧光素酶报告分析miR-223-3p和NLRP3的靶向关系;构建miR-223-3p抑制表达质... 目的 探讨新风胶囊对脂多糖(LPS)诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)的影响。方法 构建LPS诱导的RA-FLS炎症模型;SD大鼠灌胃给药制备新风胶囊含药血清;双荧光素酶报告分析miR-223-3p和NLRP3的靶向关系;构建miR-223-3p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至RA-FLS中;分为LPS组、mimics NC组、mimics组、inhibitor NC组、inhibitor组;同时设置NC-FLS组、RA-FLS组、LPS组、新风胶囊组、新风胶囊+inhibitor-NC组、新风胶囊+inhibitor组、新风胶囊+inhibitor+MCC950组。采用CCK-8试剂盒法检测细胞增殖,流式细胞术检测RA-FLS细胞焦亡的改变;ELISA法检测IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8水平;RT-qPCR法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA及miR-223-3p miRNA表达;Western blot法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达。结果 筛选得出20%新风胶囊为最佳含药血清浓度。双荧光素酶报告基因说明miR-223-3p与NLRP3存在结合位点。与NC-inhibitor比较,转染miR-223-3p inhibitor后细胞焦亡增多,IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8水平升高,同时NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白及mRNA表达升高;与NC-mimics比较,转染miR-223-3p mimics后则出现相反的结果。与模型组比较,新风胶囊含药血清组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8水平降低,miR-223-3p miRNA表达升高,同时NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白及mRNA表达降低,细胞焦亡改善。结论 新风胶囊能够减轻炎症反应,减少细胞焦亡,其机制可能与调控miR-223-3p/NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴有关。 展开更多
关键词 新风胶囊 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 miR-223-3p/NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴 细胞焦亡
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类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分泌的HAPLN1促进巨噬细胞向M1型极化
3
作者 罗成根 黄坤 +5 位作者 潘小丽 陈永 陈艳娟 陈云廷 贺漭 田梅 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期413-419,共7页
目的探讨类风湿关节炎(RA)中滑膜成纤维细胞(FLS)分泌的透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1(HAPLN1)对巨噬细胞(MΦ)极化的影响。方法将人单核细胞白血病细胞(THP-1)诱导成MΦ,采用重组HAPLN1(rHAPLN1)干预MΦ。分别将HAPLN1基因过表达质粒(HA... 目的探讨类风湿关节炎(RA)中滑膜成纤维细胞(FLS)分泌的透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1(HAPLN1)对巨噬细胞(MΦ)极化的影响。方法将人单核细胞白血病细胞(THP-1)诱导成MΦ,采用重组HAPLN1(rHAPLN1)干预MΦ。分别将HAPLN1基因过表达质粒(HAPLN1^(OE))或沉默HAPLN1的小干扰RNA(si-HAPLN1)转染RA-FLS,构建RA-FLS与MΦ共培养细胞模型。使用CCK-8法检测MΦ活力,流式细胞术检测促炎M1型及抑炎M2型MΦ比例,实时定量PCR、Western blot法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平。结果与对照组相比,rHAPLN1组MΦ活力增加,rHAPLN1组和HAPLN1^(OE)组M1/MΦ比例、炎症因子水平均升高。在si-HAPLN1组M1/MΦ比例及炎症因子表达均下降,而挽救实验中加用rHAPLN1后同样促进MΦ向M1型极化。结论RA-FLS分泌的HAPLN1可促进MΦ向M1型极化。 展开更多
关键词 类风湿关节炎(RA) 滑膜成纤维细胞(fls) HAPLN1 巨噬细胞极化
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缺氧微环境下补阳还五汤通过抑制BNIP3-PI3K/Akt通路抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的线粒体自噬
4
作者 展俊平 黄硕 +4 位作者 孟庆良 范围 谷慧敏 崔家康 王慧莲 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第1期35-42,共8页
目的在低氧微环境下,以BNIP3-PI3K/Akt信号通路为核心,研究补阳还五汤参与FLS-RA线粒体自噬的调控机制。方法将成纤维样滑膜细胞(FLS)体外培养,分为正常对照组(FLS-RA正常培养)、模型对照组(IL-1β诱导)、补阳还五汤含药血清低、中、高... 目的在低氧微环境下,以BNIP3-PI3K/Akt信号通路为核心,研究补阳还五汤参与FLS-RA线粒体自噬的调控机制。方法将成纤维样滑膜细胞(FLS)体外培养,分为正常对照组(FLS-RA正常培养)、模型对照组(IL-1β诱导)、补阳还五汤含药血清低、中、高干预组(IL-1β诱导+浓度分别为5%、10%、20%含药血清),除正常对照组外,其余组细胞按照10%O2浓度低氧处理。AnnexinV-APC/7-AAD双染测定细胞凋亡和T-AOC试剂盒检测细胞总抗氧化能力。探针分子测定细胞ROS,ATP试剂盒测定细胞ATP水平、线粒体膜电位(Δψm)、细胞Ca^(2+)平衡稳态的变化。Western blotting法检测BNIP3、PI3K、AKT蛋白表达水平,RT-q PCR法检测BNIP3、PI3K、AKT及自噬相关因子LC3、Beclin-1、P62 mRNA的表达。结果补阳还五汤组能够降低细胞的凋亡百分比(P<0.05),且呈浓度依赖性。补阳还五汤组总抗氧化力降低,T-AOC浓度(U/mL)降低,ROS产生增加。观察到自噬小体的形成,ATP酶水平释放量增加(P<0.05);线粒体膜电位、Ca^(2+)水平均呈下降趋势。补阳还五汤组BNIP3蛋白表达升高,PI3K、AKT表达降低;与模型组相比,补阳还五汤组BNIP3、P62、mRNA表达升高(P<0.05);PI3K、AKT、LC3、Beclin-1、mRNA表达降低,Beclin-1的表达差异无统计学意义(P>0.05);LC3的表达仅在中药小剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论在低氧环境下,补阳还五汤可能通过抑制BNIP3介导的PI3K/AKT通路,从而抑制了自噬因子的表达。 展开更多
关键词 低氧 补阳还五汤 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 BNIP3-PI3K/Akt 线粒体自噬
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姜黄素对LPS诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化的影响 被引量：3
5
作者 宋亚丽 秦凯丽 +4 位作者 公慧萍 来晓炜 原子琦 田吉梅 宋秀珍 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1356-1359,共4页
目的 探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化的影响。方法 0、5、10、20、40、80、160μmol/L姜黄素作用小鼠滑膜成纤维细胞24 h, MTT法检测细胞增殖情况,筛选最佳作用浓度。将细胞分为对照组、模型组(10μg/mL L... 目的 探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化的影响。方法 0、5、10、20、40、80、160μmol/L姜黄素作用小鼠滑膜成纤维细胞24 h, MTT法检测细胞增殖情况,筛选最佳作用浓度。将细胞分为对照组、模型组(10μg/mL LPS)、姜黄素组(20μmol/L)、SB-431542组(100μmol/L)和姜黄素+SB-431542组(20μmol/L+100μmol/L)。ELISA法检测IL-1β、TNF-α、IL-6水平,Western blot法检测COL1A1、TIMP1、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组滑膜成纤维细胞IL-1β、TNF-α、IL-6水平,以及COL1A1、TIMP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素组和SB-431542组滑膜成纤维细胞IL-1β、TNF-α、IL-6水平,以及COL1A1、TIMP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达降低(P<0.05);与SB-431542组比较,姜黄素+SB-431542组滑膜成纤维细胞IL-1β、TNF-α、IL-6水平,以及COL1A1、TIMP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 姜黄素通过抑制TGF-β1/Smad信号通路,从而抑制LPS诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化。 展开更多
关键词 姜黄素 滑膜成纤维细胞 炎症 纤维化 TGF-Β1/SMAD信号通路
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新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡
6
作者 李舒 万磊 +6 位作者 刘健 黄传兵 李方泽 程静 胡赛赛 陈莹莹 朱子衡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期792-799,共8页
目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子... 目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 新风胶囊(XFC) 环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB) 成纤维细胞样滑膜细胞(fls) 细胞增殖 细胞凋亡 细胞因子
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湖北枫杨总黄酮通过调控PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞样滑膜细胞的迁移和侵袭 被引量：3
7
作者 吴昊 陈国庆 +5 位作者 卢曼 高瑛 江蕲玲 罗豪楠 袁林 向阳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期134-140,共7页
目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂... 目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂量(25 mg/L)PHSTF组、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激动剂740Y-P(10μmol/L)组和740Y-P(10μmol/L)+高剂量(25 mg/L)PHSTF组。采用CCK-8法检测MH7A细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测MH7A细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:与对照组相比,各剂量PHSTF组MH7A细胞活力显著降低(P<0.05),划痕愈合面积显著减小(P<0.01),迁移和侵袭至下室的细胞显著减少(P<0.01),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低(P<0.01)。与高剂量PHSTF组相比,PI3K激动剂740Y-P显著提高了PHSTF处理下MH7A细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01),也使得MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著升高(P<0.01)。结论:PHSTF能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制MH7A细胞迁移和侵袭。 展开更多
关键词 湖北枫杨总黄酮 成纤维细胞样滑膜细胞 类风湿关节炎 PI3K/AKT信号通路
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lncRNA-H19通过促进成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)活性参与胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠滑膜炎症进展 被引量：5
8
作者 杨羽淇 刘楠楠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期865-871,共7页
目的探讨长链非编码RNA H19(lncRNA-H19)对成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)功能及对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠模型的影响。方法分离并培养类风湿性关节炎(RA)患者FLS,利用过表达腺病毒和小干扰RNA(siRNA),分别上调和下调RA FLS的H19表达水... 目的探讨长链非编码RNA H19(lncRNA-H19)对成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)功能及对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠模型的影响。方法分离并培养类风湿性关节炎(RA)患者FLS,利用过表达腺病毒和小干扰RNA(siRNA),分别上调和下调RA FLS的H19表达水平,通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)检测RA FLS增殖、Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭、细胞划痕实验检测RA FLS迁移能力;建立小鼠CIA模型,关节局部注射H19短发夹RNA慢病毒(LV-sh-H19),通过测量足厚度、关节炎指数和HE染色评价疾病进展。结果H19促进FLS的增殖、侵袭和迁移能力;注射LV-sh-H19的模型小鼠踝关节结构良好,关节局部有较少免疫细胞浸润和滑膜增生,敲低H19能够缓解CIA小鼠的关节炎症。结论H19通过促进FLS活化参与CIA小鼠滑膜炎症和疾病进展。 展开更多
关键词 长链非编码RNA H19(lncRNA-H19) 类风湿性关节炎 成纤维细胞样滑膜细胞 胶原蛋白诱导关节炎(CIA)
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芍药苷上调lncRNA MALAT1抑制Wnt1/β-catenin通路促进人类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞凋亡 被引量：8
9
作者 杨帆 沈俊逸 蔡辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期692-698,共7页
目的探讨芍药苷(PAE)对体外培养类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养RA-FLS,噻唑蓝(MTT)法检测(20、40、80)μmol/L PAE培养24、48、72 h的细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;合成3条... 目的探讨芍药苷(PAE)对体外培养类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养RA-FLS,噻唑蓝(MTT)法检测(20、40、80)μmol/L PAE培养24、48、72 h的细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;合成3条长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1的小干扰RNA(si-MALAT1)片段,脂质体转染48 h后,实时定量PCR检测筛选出敲除效果最佳si-MALAT1。将细胞分对照组、PAE组、si-NC组、si-MALAT1组、PAE联合si-MALAT1组。敲低MALAT1表达后,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测各组Wnt1、β联蛋白(β-catenin)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的mRNA表达;Western blot法检测各组Wnt1、β-catenin、caspase-3、caspase-9、Bcl2、BAX的蛋白表达。结果不同浓度PAE对RA-FLS均有抑制作用,相同浓度RA-FLS活力呈时间依赖性下降;与FLS对照组相比,RA-FLS组MALAT1表达下调,经PAE处理后细胞凋亡率增加;RA-FLS中si-MALAT1组细胞凋亡率最低,而PAE联合si-MALAT1组显著增高;PAE组较对照组Bcl2、Wnt1、β-catenin的mRNA表达降低,caspase-3、caspase-9、BAX的mRNA表达则升高;si-MALAT1组的Bcl2表达显著增高,PAE联合si-MALAT1组的Bcl2表达则显著下调,BAX、caspase-3、caspase-9表达显著升高。结论PAE通过上调MALAT1抑制Wnt1/β-catenin通路促进RA-FLS凋亡。 展开更多
关键词 芍药苷 长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1) WNT1 β联蛋白(β-catenin) 成纤维细胞样滑膜细胞(fls) 细胞凋亡
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雷公藤红素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中RANKL、OPG及炎性因子表达的影响 被引量：20
10
作者 冯小可 谈文峰 +3 位作者 王芳 甘可 张缪佳 张前德 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期759-765,共7页
目的:观察雷公藤红素(Celastrol,Cel)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)表达的影响。方法:以白细胞介素-1... 目的:观察雷公藤红素(Celastrol,Cel)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)表达的影响。方法:以白细胞介素-1β(IL-1β)刺激MH7A,不同浓度的Cel(0.1、0.5、1.0、2.0μmol/L)干预细胞24 h后,采用real-time PCR和免疫荧光的方法检测RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8的表达。结果:IL-1β刺激MH7A细胞系24 h后,RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8mRNA及RANKL免疫荧光明显增强,Cel呈剂量依赖性抑制MH7A中IL-1β诱导的RANKL、OPG、IL-6、TNF-α及IL-8 mRNA水平(P<0.05)和MH7A中RANKL免疫荧光表达,显著上调OPG/RANKL轴比值。结论:Cel能调节滑膜成纤维细胞中OPG/RANKL轴和抑制促炎因子、趋化因子的表达,可能在阻止类风湿关节炎"炎症"和"骨侵蚀"中发挥重要作用。 展开更多
关键词 雷公藤红素 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 核因子ΚB受体活化因子配体
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类风湿性关节炎及骨关节炎患者外周血单个核细胞及滑膜成纤维细胞中白细胞介素27水平增高 被引量：10
11
作者 冯佳 夏燕 +4 位作者 袁林 陈安平 杨年安 向阳 向诗非 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1673-1676,共4页
目的检测类风湿性关节炎(RA)及骨关节炎(OA)外周血单个核细胞(PBMC)和滑膜成纤维细胞(FLS)白细胞介素27(IL-27)及其受体的水平。方法收集20例RA、20例OA、20例正常人PBMC和4例RA及4例OA患者滑膜组织,培养FLS,采用实时荧光定量PCR法检测P... 目的检测类风湿性关节炎(RA)及骨关节炎(OA)外周血单个核细胞(PBMC)和滑膜成纤维细胞(FLS)白细胞介素27(IL-27)及其受体的水平。方法收集20例RA、20例OA、20例正常人PBMC和4例RA及4例OA患者滑膜组织,培养FLS,采用实时荧光定量PCR法检测PBMC和FLS中IL-27 mRNA的水平;采用免疫细胞化学法检测RA、OA患者FLS IL-27Rα的表达。结果 RA及OA患者PBMC中IL-27 mRNA水平分别是正常人的1.81倍及2.07倍;RA患者和OA患者PBMC中IL-27mRNA水平无明显差异,但RA患者FLS中IL-27 mRNA是OA患者的3.74倍;RA组FLS的IL-27Rα较OA组水平增高。结论 RA、OA患者IL-27水平增加,且RA患者FLS中IL-27水平高于PBMC。 展开更多
关键词 白细胞介素27 类风湿性关节炎 骨关节炎 滑膜成纤维细胞
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丹酚酸B对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制 被引量：7
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作者 王慧莲 展俊平 +2 位作者 苗喜云 孟庆良 马俊福 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期334-339,共6页
目的探讨丹酚酸B对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度的丹酚酸B(0、1、10、20、30、40和50μmol/L)处理人RA滑膜成纤维细胞MH7A,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,... 目的探讨丹酚酸B对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度的丹酚酸B(0、1、10、20、30、40和50μmol/L)处理人RA滑膜成纤维细胞MH7A,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,筛选丹酚酸B的最适作用浓度。取MH7A细胞,设置对照组(正常培养)、丹酚酸B组(加入丹酚酸B培养)与丹酚酸B+3-MA组(加入丹酚酸B和5 mmol/L自噬抑制剂3-MA共培养)。采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况;qRT-PCR检测caspase-3 mRNA相对表达水平;Western blotting检测caspase-3、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1和p62蛋白相对表达水平。结果与0μmol/L丹酚酸B组比较,30、40和50μmol/L丹酚酸B处理的MH7A细胞增殖率明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),据此选择50μmol/L丹酚酸B进行后续实验。与对照组比较,丹酚酸B组细胞增殖率、p62蛋白相对表达水平明显降低,细胞凋亡率、caspase-3 mRNA和蛋白以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05);与丹酚酸B组比较,丹酚酸B+3-MA组细胞增殖率(63.47%±1.94%vs.51.33%±4.67%)、p62蛋白相对表达水平(0.97±0.06 vs.0.20±0.02)明显升高,细胞凋亡率(21.4%±1.8%vs.30.4%±0.6%)、caspase-3 mRNA(0.83±0.06 vs.1.27±0.15)和蛋白(0.64±0.05 vs.1.10±0.09)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(0.29±0.07 vs.1.23±0.21)、Beclin-1(0.36±0.05 vs.1.05±0.08)蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。结论丹酚酸B可能通过诱导自噬抑制人RA滑膜成纤维细胞的增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 丹酚酸B 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 自噬
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青藤碱通过miR-23b-3p/FGF9诱导人类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞凋亡 被引量：14
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作者 李嘉 付婷婷 +2 位作者 张光峰 刘向前 陈民 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1653-1660,共8页
目的:研究青藤碱(SIN)对人类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响及分子机制。方法:分离培养人RA FLS,用100 mg/L的脂多糖(LPS)处理记为LPS组;3.2 mmol/L SIN和100 mg/L LPS共同处理细胞,记为LPS+SIN组;不作任何处理的... 目的:研究青藤碱(SIN)对人类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响及分子机制。方法:分离培养人RA FLS,用100 mg/L的脂多糖(LPS)处理记为LPS组;3.2 mmol/L SIN和100 mg/L LPS共同处理细胞,记为LPS+SIN组;不作任何处理的细胞作为空白(blank)组。将miR-con、miR-23b-3p、si-con和si-成纤维细胞生长因子9(FGF9)转染至RA FLS中再用100 mg/L LPS处理,分别记为LPS+miR-con组、LPS+miR-23b-3p组、LPS+si-con组和LPS+si-FGF9组;将anti-miR-con、anti-miR-23b-3p、pcDNA和pcDNA-FGF9转染至RA FLS中,再用3.2 mmol/L SIN和100 mg/L LPS共同处理,分别记为LPS+SIN+anti-miR-con组、LPS+SIN+anti-miR-23b-3p组、LPS+SIN+pcDNA组和LPS+SIN+pcDNA-FGF9组。CCK-8法检测细胞活力;集落形成实验检测细胞的集落形成数;West⁃ern blot法检测FGF9、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白水平;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-23b-3p和FGF9 mRNA的表达水平;双萤光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和FGF9的靶向关系。结果:SIN促进LPS诱导的RA FLS凋亡,抑制细胞增殖,上调miR-23b-3p表达,下调FGF9表达。miR-23b-3p靶向调控FGF9,过表达miR-23b-3p或沉默FGF9抑制LPS诱导的RA FLS增殖并促进细胞凋亡。干扰miR-23b-3p或过表达FGF9逆转了SIN对LPS诱导的RA FLS增殖和凋亡的影响。结论:青藤碱可通过miR-23b-3p/FGF9轴诱导RA FLS凋亡,抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 青藤碱 微小RNA-23b-3p 成纤维细胞生长因子9 类风湿关节炎 滑膜细胞 细胞凋亡
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miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB信号通路的影响 被引量：14
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作者 范文强 马玲 +3 位作者 吴洁 杨学华 付冬冬 王培山 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2020年第5期705-710,共6页
目的:探讨miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎性因子分泌的调控机制。方法:将体外培养的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A分为对照组(未处理)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-708-5p组(转染miR-708-5p模拟物)。采用qRT-PCR... 目的:探讨miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎性因子分泌的调控机制。方法:将体外培养的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A分为对照组(未处理)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-708-5p组(转染miR-708-5p模拟物)。采用qRT-PCR法检测转染48 h后各组细胞中miR-708-5p的表达,CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表达。结果:与对照组相比,miR-708-5p组细胞中miR-708-5p的表达水平、细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平均升高,而细胞存活率、细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量以及TLR4、p-NF-κB p65蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论:miR-708-5p可诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡并减轻细胞炎症损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化有关。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 miR-708-5p 滑膜成纤维细胞 炎性因子 TLR4/NF-κB信号通路
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类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的差异蛋白质谱分析 被引量：6
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作者 柏干苹 周丽娜 +7 位作者 贺伟峰 罗高兴 陈烯伟 陈光兴 胡晓红 石东文 方勇飞 吴军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期166-169,共4页
目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异，探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度（immobilized pH gradient，IPG）双向凝胶电泳... 目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异，探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度（immobilized pH gradient，IPG）双向凝胶电泳（two—dimensional gel eleetrophoresis，2-DE）分离正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质，银染显色，PDQuest软件分析图像，比较两种细胞蛋白质组表达差异，对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定，并用Western blot验证部分表达差异蛋白质。结果①采用窄范围的pH4～7IPG胶条进行2-DE分析，正常人及RA患者滑膜细胞蛋白胶图上分别平均显示852、837个点。有49个蛋白点在正常、RA滑膜细胞问有2倍以上的显著性量变。②分别在胶图上共选取40个表达水平存在明显差异的蛋白质点进行质谱鉴定，鉴定出23个在RA患者滑膜细胞中表达上调蛋白质。Western blot验证Enolase α、Annexin I、CathepsinD、SOD2、Peroxiredoxin2在RA滑膜细胞中表达显著升高。结论正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与类风湿关节炎的发病。 展开更多
关键词 滑膜成纤维细胞 蛋白质组 双向电泳 类风湿关节炎
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肿瘤坏死因子-α对人滑膜成纤维细胞白细胞介素-37表达的影响 被引量：8
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作者 柯庆喜 张志伟 +2 位作者 赵付前 何玲鸽 陈章权 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期691-693,共3页
目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人滑膜成纤维细胞(human fibroblast-like synovicyte,HFLS)白细胞介素-37(IL-37)表达的影响。方法:不同浓度TNF-α与HFLS作用,作用不同时间后,用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应,检测HFLS中IL-37m... 目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人滑膜成纤维细胞(human fibroblast-like synovicyte,HFLS)白细胞介素-37(IL-37)表达的影响。方法:不同浓度TNF-α与HFLS作用,作用不同时间后,用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应,检测HFLS中IL-37mRNA的表达。结果:TNF-α上调HFLS的IL-37mRNA表达,并呈一定的时间、剂量依赖关系。结论:TNF-α诱导HFLS的IL-37上调表达,为进一步探索HFLSIL-37参与类风湿关节炎的炎症反应提供了实验依据。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α IL-37 滑膜成纤维细胞
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HMGB1促进类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞表达基质金属蛋白酶-13 被引量：6
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作者 贺琤雯 戴生明 +1 位作者 秦阳华 沈茜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1097-1100,共4页
目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)能否激活类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)表达基质金属蛋白酶-13(MMP-13)。方法:HMGB1与RASF共孵育后,采用流式细胞术、实时RT-PCR、ELISA分别检测细胞周期和MMP-13的基因表达量以及蛋白表达水平。... 目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)能否激活类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)表达基质金属蛋白酶-13(MMP-13)。方法:HMGB1与RASF共孵育后,采用流式细胞术、实时RT-PCR、ELISA分别检测细胞周期和MMP-13的基因表达量以及蛋白表达水平。结果:1μg/ml HMGB1刺激滑膜成纤维细胞3小时,MMP-13 mRNA的表达明显增加;HMGB1刺激滑膜成纤维细胞48小时后MMP-13蛋白分泌增高,并且滑膜成纤维细胞增殖周期速度加快。结论:HMGB1可以激活滑膜成纤维细胞,使其增殖周期速度加快,MMP-13表达增加,提示HMGB1通过作用于滑膜成纤维细胞表达MMP-13加强关节结构破坏。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 高迁移率族蛋白1 滑膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶-13
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Sonic Hedgehog(SHH)促进胶原蛋白诱导关节炎大鼠滑膜成纤维细胞的增殖 被引量：2
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作者 李慧 秦苏萍 +5 位作者 孙德旭 潘伟 李向阳 孔凡运 郑葵阳 汤仁仙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期630-634,共5页
目的探讨Sonic Hedgehog(SHH)在滑膜成纤维细胞增殖中的作用。方法收集类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎(AS)患者及健康正常人血清样本各(30例),ELISA检测上述血清SHH的含量。SD大鼠皮内注射2型胶原蛋白(Col2)诱... 目的探讨Sonic Hedgehog(SHH)在滑膜成纤维细胞增殖中的作用。方法收集类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎(AS)患者及健康正常人血清样本各(30例),ELISA检测上述血清SHH的含量。SD大鼠皮内注射2型胶原蛋白(Col2)诱导RA大鼠模型(CIA),取其滑膜组织原代培养滑膜成纤维细胞(SF)。免疫荧光细胞化学染色法检测vimentin表达鉴定SF,并检测SHH在SF中的表达。培养SF给予SHH-胶质瘤相关癌基因1(Gli-1)通路特异性阻断剂GANT61处理72 h,Western blot法检测SF表达SHH的变化情况,CCK-8法检测SF的增殖情况。结果 RA患者血清中SHH的含量较SLE、AS患者及正常组含量升高。成功建立CIA模型及分离培养SF;CIA-SF表达SHH较正常组SF高。给予GANT61处理72 h,CIA-SF中SHH蛋白表达降低且细胞增殖水平下降。结论 SHH参与RA发病与CIA-SF增殖有关。 展开更多
关键词 滑膜成纤维细胞 细胞增殖 SHH
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MicroRNA-16对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响 被引量：9
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作者 史栋梁 史桂荣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1868-1872,共5页
目的:研究microRNA-16(miR-16)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RASFs)增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响。方法:体外分离培养RASFs,脂质体转染化学合成的miR-16 m... 目的:研究microRNA-16(miR-16)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RASFs)增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响。方法:体外分离培养RASFs,脂质体转染化学合成的miR-16 mimic或miR-16抑制剂,分别采用MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测其对RASFs增殖、侵袭及凋亡的影响;RT-PCR和Western blotting检测miR-16对RASFs基质金属蛋白酶3/13(matrix metalloproteinase 3/13,MMP3/13)及白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)表达的影响。结果:增殖实验结果表明miR-16可显著抑制RASFs的增殖;细胞侵袭结果表明miR-16可显著抑制RASFs的侵袭;流式细胞术检测发现miR-16对RASFs凋亡无显著影响;miR-16可下调MMP3/13及IL-1β的表达水平。结论:miR-16在RA的发生中起着重要作用,它可能通过下调MMP3/13及IL-1β的表达抑制RASFs增殖和侵袭。这为进一步研究miR-16在RA中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 MicroRNA-16 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 细胞因子类
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人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析 被引量：2
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作者 柏干苹 周丽娜 +8 位作者 贺伟峰 罗高兴 陈烯伟 易绍萱 胡晓红 石东文 陈光兴 方勇飞 吴军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1221-1223,共3页
目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度(immob ilized pH grad ient,IPG)双向凝胶电泳(two-d imensional g... 目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度(immob ilized pH grad ient,IPG)双向凝胶电泳(two-d imensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-DE软件分析图像,比较2种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定。结果胶图差异分析显示36个表达水平存在明显差异的蛋白质,选取15个点进行质谱鉴定,鉴定出6个表达上调蛋白质。结论正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与骨关节炎的发病。 展开更多
关键词 骨关节炎 滑膜成纤维细胞 蛋白质组 双向电泳
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