人参皂苷CK对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡/自噬的调控作用

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作者 王颖 张韩梦 +6 位作者 鲍秀蓉 王亚婷 江婷婷 温婧依 刘勤伟 宋宜宁 魏芳 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第3期332-339,共8页

目的基于PKM2/mTOR信号通路探讨人参皂苷CK(ginsenoside compound K,CK)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡/自噬的调控作用和机制。方法将SD大鼠分为正常组(n=10)、模型组(n=10),CK组(n=10)和甲氨蝶呤(meth... 目的基于PKM2/mTOR信号通路探讨人参皂苷CK(ginsenoside compound K,CK)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡/自噬的调控作用和机制。方法将SD大鼠分为正常组(n=10)、模型组(n=10),CK组(n=10)和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组(n=10)。大鼠右后足跖皮内注射10 mg/mL弗氏完全佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)0.1 mL,制备大鼠AA模型。注射免疫后第15天开始,CK组每天灌胃给药80 mg/kg CK,连续18 d;MTX组每天灌胃给药0.5 mg/kg MTX,每3 d给药一次。每3 d记录大鼠体质量,全身关节炎评分,关节炎指数和足爪肿胀度;计算脾脏和胸腺指数;Western blot检测FLS凋亡和自噬相关蛋白及PKM2和mTOR通路相关蛋白的表达;过表达质粒试剂盒检测FLS自噬流;流式细胞术检测FLS凋亡。结果与AA组比较,CK组和MTX组全身炎症评分、关节炎指数、足爪肿胀度和脾脏指数明显降低(P<0.05),Bax、p62和p-mTOR/mTOR的蛋白水平显著上调(P<0.05),Beclin1、Bcl-2和PKM2的蛋白水平显著下调(P<0.05),FLS凋亡率升高(P<0.05),自噬小体减少。MTX组和CK组全身炎症评分、关节炎指数、足爪肿胀度和脾脏指数的差异无统计学意义(P>0.05)。结论CK可能通过PKM2/mTOR信号通路调节大鼠FLS凋亡/自噬缓解AA大鼠关节炎症。 展开更多

关键词 人参皂苷CK 成纤维样滑膜细胞 佐剂性关节炎 PKM2/mTOR信号通路 自噬 凋亡

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丹参诱导类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞凋亡 被引量：6

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作者 刘青松 凡瞿明 +3 位作者 蒋红 朱兴春 邢艳 唐中 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期763-765,共3页

目的探讨丹参对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞凋亡的影响。方法类风湿关节炎患者关节滑液经原代培养,应用3～5代传代的成纤维样滑膜细胞,分为3组,分别为高剂量丹参组(丹参终浓度为50 mg/mL)、低剂量丹参组(丹参终浓度为0.39 mg/mL)... 目的探讨丹参对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞凋亡的影响。方法类风湿关节炎患者关节滑液经原代培养,应用3～5代传代的成纤维样滑膜细胞,分为3组,分别为高剂量丹参组(丹参终浓度为50 mg/mL)、低剂量丹参组(丹参终浓度为0.39 mg/mL)和溶剂对照组,采用流式细胞术结合Annexin V/FITC和PI双标记染色检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,高剂量丹参组和低剂量丹参组细胞凋亡率均较对照组明显增加(P<0.05),并且高剂量丹参组细胞凋亡率明显大于低剂量丹参组(P<0.05)。结论丹参能有效诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡。 展开更多

关键词 丹参 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 凋亡

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青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-3表达的影响 被引量：22

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作者 张娟 李娟 +1 位作者 赵毅 余克强 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2008年第3期23-25,共3页

目的观察青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖以及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)mRNA含量的影响。方法培养人成纤维样滑膜细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组,经青藤碱干预后,用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖情... 目的观察青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖以及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)mRNA含量的影响。方法培养人成纤维样滑膜细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组,经青藤碱干预后,用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖情况,用半定量RT-PCR方法检测成纤维细胞中MMP-3mRNA的表达。结果经青藤碱干预后的人成纤维样滑膜细胞的增殖率受到显著抑制(P<0.05),其中高剂量组的改变差异尤为显著(P<0.01)。MMP-3的mRNA表达水平较之空白对照组有显著下降(P<0.05),且高剂量组的差异尤为显著(P<0.01)。结论青藤碱可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的增殖并下调MMP-3的表达,推断这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎的一种机理。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 青藤碱 成纤维样滑膜细胞 基质金属蛋白酶-3

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类风湿关节炎患者关节成纤维样滑膜细胞差异表达的基因分析 被引量：8

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作者 张宇 王海永 +6 位作者 管晓龙 李玲慧 王菲 赵琴飞 虞伟 赵建宁 李晓军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第6期598-604,共7页

目的成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)的异常增生是造成类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)关节组织损伤和畸变的主要原因之一。文中用基因表达谱芯片筛选RA患者关节FLSs中表达差异有统计学意义的基因,探索其... 目的成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)的异常增生是造成类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)关节组织损伤和畸变的主要原因之一。文中用基因表达谱芯片筛选RA患者关节FLSs中表达差异有统计学意义的基因,探索其与RA发病机制的关系。方法原代培养手术切取的膝关节滑膜组织中FLSs至第3代,用Agilent人基因表达谱芯片对3例RA患者和3例外伤患者的FLSs进行初筛,并对表达差异有统计学意义的基因进行基因本体(gene ontology)和信号通路(pathway)分析。随后用实时定量PCR在15例RA患者FLSs和15例外伤患者FLSs中验证可能与RA发病机制有关的表达差异有统计学意义的基因。结果与外伤患者FLSs相比,RA患者FLSs共检出103个表达差异有统计学意义的基因转录本(差异倍数>2,P<0.05),其中36个表达上调,67个表达下调。实时定量PCR结果显示,外伤患者FLSs与RA患者FLSs,速激肽前体1α型(TAC1)基因、wnt诱导分泌蛋白3(WISP3)基因、血管内皮生长因子基因表达水平明显降低,分别为[(6.65±1.81)vs(1.00±0.20)]、[(18.45±3.67)vs(1.00±0.31)]、[(3.11±0.36)vs(1.00±0.13),P<0.05],肿瘤坏死因子超家族成员15基因表达水平明显升高[(0.15±0.08)vs(1.00±0.35),P<0.05]。结论 TAC1、WISP3、VEGFA和TNFSF15基因在RA患者FLSs中异常表达,这些基因的异常表达可能参与了RA的发生发展。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 基因芯片

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成纤维样滑膜细胞Toll样受体在类风湿性关节炎的研究进展 被引量：5

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作者 唐媚 胡松 +3 位作者 唐信威 刘阳 王衍堂 邹强 《成都医学院学报》 CAS 2014年第2期217-221,共5页

Toll样受体（toll-like receptor，TLRs）是一种I型跨膜蛋白受体，可识别微生物上特定结构的病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）和宿主自身损伤细胞产生的损伤相关分子模式（damage-associated molecul... Toll样受体（toll-like receptor，TLRs）是一种I型跨膜蛋白受体，可识别微生物上特定结构的病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）和宿主自身损伤细胞产生的损伤相关分子模式（damage-associated molecular patterns，DAMPs），在天然免疫中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 类风湿性关节炎 TOLL样受体 成纤维样滑膜细胞

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佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞的体外培养与鉴定 被引量：3

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作者 毛伟 李培锋 +1 位作者 刘明强 关红 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期78-82,共5页

探讨佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的体外培养及鉴定方法,制备AA大鼠模型,采用组织块培养法培养AA大鼠FLS,并通过形态学、透射电镜及RT-PCR方法对FLS进行鉴定。结果表明,培养的滑膜细胞具有成纤维细胞的形态和特征,呈长梭... 探讨佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的体外培养及鉴定方法,制备AA大鼠模型,采用组织块培养法培养AA大鼠FLS,并通过形态学、透射电镜及RT-PCR方法对FLS进行鉴定。结果表明,培养的滑膜细胞具有成纤维细胞的形态和特征,呈长梭形极向生长,RT-PCR方法检测波形蛋白表达较高。本研究成功地培养出了AA大鼠滑膜细胞,可作为进一步研究的靶细胞。 展开更多

关键词 佐剂性关节炎 成纤维样滑膜细胞 体外培养

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小鼠成纤维样滑膜细胞原代培养的影响因素研究 被引量：1

7

作者 唐媚 常山 +6 位作者 曹宗锐 罗兴燕 胡松 唐信威 王衍堂 刘阳 邹强 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第8期789-792,共4页

目的基因敲除小鼠已广泛用于关节疾病的研究中。文中探讨小鼠关节处理方式、消化酶种类及胶原酶消化时间3种因素对获取原代成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLSs）数量的影响。方法将12只雄性SPF级小鼠,采用打开关节（... 目的基因敲除小鼠已广泛用于关节疾病的研究中。文中探讨小鼠关节处理方式、消化酶种类及胶原酶消化时间3种因素对获取原代成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLSs）数量的影响。方法将12只雄性SPF级小鼠,采用打开关节（6只）与不打开关节（6只）的方法处理双后肢,使用Ⅳ、Ⅱ型胶原酶消化分离原代细胞,差速消化法逐代纯化FLSs。倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞种类、活力与纯度。结果不打开关节处理获得的FLSs数量[（24933±503）个]显著高于打开关节处理获得的数量[（19133±115）个],差异有统计学意义（P〈0.05）;连续收集消化单支后肢1~7h细胞悬液,FLSs数分别为（700±300）、（600±100）、（15200±900）、（5100±800）、（2700±300）、（900±200）、（300±100）个,以3 h的FLSs数量最多。Ⅳ型胶原酶消化所得FLSs细胞总数[（24900±500）个]明显高于Ⅱ型胶原酶[（18100±400）个],差异有统计学意义（P〈0.05）。结论消化培养小鼠原代FLSs,建议不打开关节,使用Ⅳ型胶原酶消化,取2~6h消化的细胞悬液进行后续培养。 展开更多

关键词 成纤维样滑膜细胞 体外培养 细胞鉴定 小鼠

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牛磺鹅去氧胆酸对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞脂皮素-1基因表达的影响 被引量：2

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作者 关红 毛伟 +1 位作者 李培锋 刘明强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期17-21,共5页

观察牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型成纤维样滑膜(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞脂皮素-1(lipocortin 1,LC-1)基因表达的影响,并探讨TCDCA对AA大鼠FLS的作... 观察牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型成纤维样滑膜(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞脂皮素-1(lipocortin 1,LC-1)基因表达的影响,并探讨TCDCA对AA大鼠FLS的作用机制。制备AA大鼠模型,采用组织块培养法分离培养AA大鼠FLS,应用荧光定量RT-PCR技术检测TCDCA对AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA表达的影响。与模型组相比,TCDCA作用组AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA的表达显著高于模型组(P<0.05)。说明TCDCA能显著促进AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA的表达。 展开更多

关键词 牛磺鹅去氧胆酸 脂皮素-1 荧光定量RT-PCR 成纤维样滑膜细胞

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AMCV-IC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响 被引量：1

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作者 徐敏 张宇 +5 位作者 王菲 赵琴飞 郭耀蔓 严孝岭 虞伟 李晓军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第9期928-932,共5页

目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者体内自身抗体及其抗体免疫复合物直接参与RA的发生发展。有关抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体免疫复合物(anti-mutated citrulline vimentin antibodies contained immune complex,AMCV-IC... 目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者体内自身抗体及其抗体免疫复合物直接参与RA的发生发展。有关抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体免疫复合物(anti-mutated citrulline vimentin antibodies contained immune complex,AMCV-IC)对成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)功能的影响尚不清楚。文中旨在探讨RA患者血清AMCV-IC对RA FLSs增殖功能的影响。方法 RA患者血清标本、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清标本、健康人血清分别取自2012年3月至2013年3月南京军区南京总医院门诊及住院RA患者(包括血清AMCV+的RA患者10例,AMCV-的RA患者10例)、SLE患者(10例)、健康献血者(10例)。SLE患者及健康人血清AMCV均为阴性。用G蛋白免疫亲和层析法中提取血清IC,并分为AMCV+-IC组、AMCV--IC组、SLE-IC组和对照组。用ELISA法检测IC中AMCV水平;体外培养RA患者关节FLSs,分别将各组(50、100、200、400μg/m L)的IC刺激FLSs,用CCK-8法检测IC对FLSs增殖功能的影响。结果 50、100μg/m L的IC与RA-FLSs共培养24 h后,AMCV+-IC组A值(1.53±0.11、1.58±0.05)较AMCV--IC组(1.37±0.86、1.31±0.10)、SLE-IC组(1.36±0.06、1.38±0.03)、对照组(1.08±0.02、1.04±0.06)明显增高(P<0.05);200、400μg/m L IC时,AMCV+-IC组A值(1.53±0.16、1.57±0.06)较AMCV--IC组(1.32±0.04、1.38±0.07)、SLE-IC组(1.31±0.10、1.29±0.01)、对照组(1.13±0.06、1.03±0.09)亦明显升高(P<0.05)。各浓度IC中,AMCV--IC组、SLE-IC组A值较对照组均明显升高(P<0.05)。结论在不同IC浓度下,AMCV+-IC较AMCV--IC、SLE-IC和对照组能更为有效地刺激RA-FLSs增殖,参与RA的发病过程。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体 免疫复合物 成纤维样滑膜细胞

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BRMS1通过下调NF-κB核转位抑制成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β

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作者 钟浩博 孙春汉 +5 位作者 马晋 郑少伟 陈楚群 赖伟强 杨剑锋 孙江森 《分子影像学杂志》 2015年第1期58-61,共4页

目的探讨乳腺癌转移抑制蛋白1(BRMS1)对人类风湿性关节炎(RA)的成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌IL-1β的影响和机制。方法分别取4例RA患者膝关节滑膜组织及1例正常人(normal)膝关节滑膜组织,采用组织贴壁法分离FLS。用慢病毒法过表达BRMS1蛋... 目的探讨乳腺癌转移抑制蛋白1(BRMS1)对人类风湿性关节炎(RA)的成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌IL-1β的影响和机制。方法分别取4例RA患者膝关节滑膜组织及1例正常人(normal)膝关节滑膜组织,采用组织贴壁法分离FLS。用慢病毒法过表达BRMS1蛋白。Western blot检测BRMS1蛋白及核蛋白NF-κB水平,Elisa法检测细胞培养基中IL-1β水平,免疫荧光检测NF-κB核转位。结果 RA组FLS的BRMS1蛋白表达较N组明显下调,但NF-κB核转位明显增加、IL-1β分泌明显增加。RA组FLS过表达BRMS1后,FLS核蛋白中NF-κB表达明显减少、IL-1β分泌下降。LPS诱导的NF-κB核转位和IL-1β表达增加被过表达BRMS1明显抑制。结论 BRMS1可以抑制NF-κB核转位,从而减少成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β。 展开更多

关键词 类风湿性关节炎 乳腺癌转移抑制蛋白1 成纤维样滑膜细胞 NF-k B IL-1Β

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过表达lncRNA HOTAIR基因的风湿关节炎成纤维样滑膜细胞稳定株构建与筛选 被引量：4

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作者 丁明辉 郑炜 +4 位作者 王玉天 胡胜华 刘小平 侯秀娟 朱跃兰 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第3期235-240,共6页

目的 HOTAIR基因与类风湿关节炎(RA)血管翳的形成紧密相关。文中旨在建立并筛选过表达lncRNA HOTAIR的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)稳定株,为进一步研究lncRNA HOTAIR在RA发病中的作用奠定基础。方法采用PCR扩增lncRNA HOT... 目的 HOTAIR基因与类风湿关节炎(RA)血管翳的形成紧密相关。文中旨在建立并筛选过表达lncRNA HOTAIR的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)稳定株,为进一步研究lncRNA HOTAIR在RA发病中的作用奠定基础。方法采用PCR扩增lncRNA HOTAIR目的基因,连接到BamHI-HF-HF和XhoI酶切后的PMT406载体上,构建好的质粒经测序鉴定后,转染293T细胞包装慢病毒,分别用重组质粒及空载体慢病毒感染HFLS-RA,构建和筛选稳转株;采用Trizol法分别提取空白细胞、阴性转染细胞和过表达细胞的总RNA后,反转录得到cDNA进行qPCR扩增,根据检测结果进行相对表达量的计算。结果过表达细胞的lncRNA HOTAIR相对表达量(30.329±3.860)较空白细胞和阴性转染细胞(1.001±0.048、0.892±0.247)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);空白细胞和阴性转染细胞差异无统计学意义(P>0.05)。说明过表达lncRNA HOTAIR的HFLS-RA细胞稳定株构建成功。结论成功构建了过表达lncRNA HOTAIR的HFLS-RA细胞稳定株,为进一步探究lncRNA HOTAIR在RA发生发展中的作用提供了实验材料。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 长链非编码HOTAIR 过表达 慢病毒

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自拟和痹方对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子分泌的影响及其机制探讨 被引量：2

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作者 姜萍 邢洁 +3 位作者 纪淳望 刘英 马洪美 姜月华 《山东医药》 CAS 2019年第3期39-42,共4页

目的观察和痹方剂对人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)炎症因子分泌的影响,并探讨其机制。方法取FLS,并随机分为6组。激动剂组每孔加含10%PNU-282987药物血清的DMEM培养液,MTX组加含10%甲氨蝶呤(MTX)药物血清的DMEM培养液,低剂... 目的观察和痹方剂对人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)炎症因子分泌的影响,并探讨其机制。方法取FLS,并随机分为6组。激动剂组每孔加含10%PNU-282987药物血清的DMEM培养液,MTX组加含10%甲氨蝶呤(MTX)药物血清的DMEM培养液,低剂量组加含10%低剂量和痹方剂药物血清的DMEM培养液,中剂量组加含10%中剂量和痹方剂药物血清的DMEM培养液,高剂量组加含10%高剂量和痹方剂药物血清的DMEM培养液,模型组加10%DMEM血清的培养液。24 h后取细胞上清液及滑膜细胞。采用ELISA法检测细胞上清液IL-17、高迁移率组蛋白1(HMGB1),Western blotting法检测细胞α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)、核转录因子-κB亚基p65(NF-κB p65),RT-PCR法检测细胞α7nAchR mRNA。结果与模型组比较,激动剂组、MTX组、中剂量组IL-17、HMGB1表达降低(P均<0.05);与激动剂组比较,MTX组、低剂量组、中剂量组、高剂量组IL-17表达及高剂量组HMGB1表达升高(P均<0.05);与MTX组比较,中剂量组IL-17表达降低(P均<0.05)。与模型组比较,α7nAChR蛋白、mRNA表达升高,p65蛋白表达降低(P均<0.05);与激动剂组比较,低剂量组p65蛋白及中剂量组α7nAChR蛋白、p65蛋白表达升高,低剂量组、高剂量组α7nAChR蛋白及低剂量组、中剂量组、高剂量组α7nAChR mRNA表达降低(P均<0.05);与MTX组比较,低剂量组p65蛋白及中剂量组α7nAChR蛋白、NF-kBp65蛋白、α7nAChR mRNA表达升高(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组α7nAChR蛋白、mRNA表达升高,中剂量组p65蛋白及高剂量组α7nAChR蛋白、p65蛋白表达降低(P均<0.05);与中剂量组比较,高剂量组α7nAChR、NF-kBp65蛋白表达降低(P均<0.05)。结论中等浓度和痹方剂能抑制RA FLS分泌炎症因子,进而起到治疗作用,机制可能为上调α7nAChR mRNA、蛋白表达,激活CAP,进而调节NF-kB信号通路。 展开更多

关键词 和痹方剂 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 炎症因子

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中性粒细胞胞外陷阱对类风湿关节炎成纤维化样滑膜细胞mRNA表达谱的影响 被引量：1

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作者 孙玥 黄赛赛 +2 位作者 耿林玉 丁从珠 王红 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第9期909-913,共5页

目的中性粒细胞胞外陷阱(NETs)与RA疾病的发生发展密切相关。文章旨在研究NETs对RA成纤维化样滑膜细胞(FLS)基因表达谱的影响。方法收集RA患者8例以及8例健康志愿者外周血5 mL分别作为RA组和对照组。分离RA患者与健康对照者的外周血中... 目的中性粒细胞胞外陷阱(NETs)与RA疾病的发生发展密切相关。文章旨在研究NETs对RA成纤维化样滑膜细胞(FLS)基因表达谱的影响。方法收集RA患者8例以及8例健康志愿者外周血5 mL分别作为RA组和对照组。分离RA患者与健康对照者的外周血中性粒细胞,免疫荧光法检测NETs的生成。同时ELISA检测RA组与对照组血清中游离核小体的水平。体外分离健康供者的中性粒细胞,以PMA诱导NETs生成。将FLS以1×10~6的数量接种在6孔板中,以含10%FBS的DMEM培养基培养,加或不加所分离的NETs刺激,分为未刺激的FLS组和NETs刺激后的FLS组。全基因组分析NETs对RA FLS基因表达谱的影响。结果与对照组外周血中NETs形成数量(6.67±1.45)相比,RA组(18.67±2.33)显著增多(P<0.05);与对照组(0.11±0.02)相比,RA组血清中NETs组分游离核小体的水平(0.20±0.02)也显著升高(P<0.05)。基因芯片结果进一步提示与未刺激的FLS对比,NETs刺激培养后的FLS共有差异表达mRNA469个,其中mRNA上调257个,下调212个。全基因组学分析显示NETs可以作用于RA FLS,上调炎性反应、细胞增殖、细胞迁移、蛋白酶等相关基因的表达,下调细胞程序性死亡、细胞生长阻滞、DNA损伤相关基因的表达。结论NETs诱导RA FLS的侵袭表型和炎症反应,NETs可通过影响FLS的生物学功能参与RA滑膜炎。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 中性粒细胞胞外陷阱 成纤维化样滑膜细胞

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类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞lncRNA-miRNA-mRNA网络构建及关键基因预测 被引量：5

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作者 周新朋 金晔华 +1 位作者 张润润 何东仪 《中国医药导报》 CAS 2021年第9期12-16,F0003,共6页

目的探索类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中长链非编码RNA(lncRNA)-微小RNA(miRNA)-mRNA网络及关键lncRNA,揭示lncRNA在RA中的作用。方法在美国国立生物技术信息中心的基因表达数据库(GEO)中获取相关的数据集GSE103578、GSE83147... 目的探索类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中长链非编码RNA(lncRNA)-微小RNA(miRNA)-mRNA网络及关键lncRNA,揭示lncRNA在RA中的作用。方法在美国国立生物技术信息中心的基因表达数据库(GEO)中获取相关的数据集GSE103578、GSE83147、GSE128813,每个数据集中对照组含有3个健康人滑膜分离的FLS,RA组含有3个RA患者的FLS。使用R语言程序,idmap3包进行探针注释,limma包对数据进行标准化、去除批次效应及基因差异表达分析,以logFC>1.0且P<0.05作为差异表达的标准。对差异表达的lncRNA及mRNA进行相关性分析,在lncbase、starBase、miRcode数据库中,获得与lncRNA相关的miRNA,在miRWalk、TargetScan数据库中寻找与mRNA相关的miRNA,二者取交集,通过Cytoscape软件,构建lncRNA-miRNA-mRNA网络,将网络中的lncRNA作为关键lncRNA。结果GEO数据集进行标准化、去除批次效应及注释后,最终得到mRNA有14760条,lncRNA有5290条。与对照组比较,RA组上调的mRNA有31条,下调56条,lncRNA中上调的基因有9条,下调14条。以Pearson相关系数R>0.85且P<0.05作为lncRNA-mRNA共表达基因的标准,得到共表达lncRNA有18条,mRNA有51条。与共表达的lncRNA、mRNA有结合位点的miRNA有26条。构建的lncRNA-miRNA-mRNA共表达网络中lncRNA有13条,包括lncRNA XIST、NR2F2-AS1、LINC01018等,miRNA有26条,mRNA有46条。结论lncRNA XIST、NR2F2-AS1、LINC01018等13条lncRNA在RA-FLS中差异表达,并通过竞争内源性RNA机制调节miRNA及mRNA的表达,形成lncRNA-miRNA-mRNA调节网络,可作为进一步验证的目标lncRNA。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 长链非编码RNA 竞争内源性RNA

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TNF-α对类风湿性关节炎患者滑膜成纤维细胞RUNX3表达的影响及意义 被引量：19

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作者 王春亮 王林 潘继红 《山东医药》 CAS 2018年第20期21-24,共4页

目的探讨TNF-α对类风湿性关节炎患者滑膜成纤维细胞RUNX3表达的影响及意义。方法从类风湿性关节炎患者滑膜组织中分离并培养原代成纤维细胞,加入不同浓度(0、0.1、1、10、50 ng/m L)TNF-α分别作用0、3、6、12、24 h,采用实时荧光定量... 目的探讨TNF-α对类风湿性关节炎患者滑膜成纤维细胞RUNX3表达的影响及意义。方法从类风湿性关节炎患者滑膜组织中分离并培养原代成纤维细胞,加入不同浓度(0、0.1、1、10、50 ng/m L)TNF-α分别作用0、3、6、12、24 h,采用实时荧光定量PCR法检测RUNX3 mRNA相对表达量。取传3~8代成纤维细胞,随机分为RUNX3过表达组和对照组,分别感染人源RUNX3腺病毒、绿色荧光蛋白(GFP)对照腺病毒,感染24 h两组均加入50 ng/m L TNF-α再刺激24 h;采用实时荧光定量PCR法检测两组炎性因子[IL-6、前列腺素E2(PGE-2)、趋化因子CXC基序配体9(CXCL-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-13]表达,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。取传3~8代成纤维细胞,随机分为RUNX3沉默组和对照组,分别采用脂质体转染法转染siRUNX3、NC-control siRNA,转染24 h两组均加入50 ng/m L TNF-α再刺激24 h;采用实时荧光定量PCR法检测IL-6、PGE-2、CXCL-9、MMP-2及MMP-13 mRNA表达。结果成纤维细胞RUNX3 mRNA相对表达量随着TNF-α浓度升高及作用时间延长而逐渐升高,呈浓度和时间依懒性,以TNF-α浓度50 ng/m L、作用时间24 h时RUNX3 mRNA相对表达量上调最为显著(P均<0.05)。RUNX3过表达组和对照组穿膜细胞数分别为(56±4)、(20±3)个,两组比较P<0.01。RUNX3过表达组IL-6、PGE-2、MMP-13 mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.05或<0.01),两组CXCL-9、MMP-2mRNA相对表达量比较P均>0.05。RUNX3沉默组IL-6、CXCL-9、MMP-2及MMP-13 mRNA相对表达量均低于对照组(P均<0.05),两组PGE-2 mRNA相对表达量比较P>0.05。结论 TNF-α可促进成纤维细胞RUNX3表达,并呈浓度和时间依赖性;RUNX3表达升高可通过调控IL-6、MMP-13表达而促进成纤维细胞的侵袭能力。 展开更多

关键词 类风湿性关节炎 滑膜成纤维样细胞 肿瘤坏死因子α RUNT相关转录因子3 炎性因子

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LYVE1+巨噬细胞在RA患者关节滑膜组织中表达变化及对RA-FLS细胞迁移、侵袭、FMT的抑制作用

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作者 李骁瀚 王洪星 +3 位作者 王玺龙 赵娜 刘治璞 张义 《山东医药》 CAS 2024年第6期34-38,共5页

目的观察淋巴管内皮受体-1(LYVE1)+巨噬细胞在类风湿性关节炎(RA)患者关节滑膜组织中的表达变化及对RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)迁移、侵袭、向肌成纤维细胞转化(FMT)的抑制作用。方法采用免疫荧光染色法对45例RA患者及45例骨关节炎(OA... 目的观察淋巴管内皮受体-1(LYVE1)+巨噬细胞在类风湿性关节炎(RA)患者关节滑膜组织中的表达变化及对RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)迁移、侵袭、向肌成纤维细胞转化(FMT)的抑制作用。方法采用免疫荧光染色法对45例RA患者及45例骨关节炎(OA)患者滑膜组织LYVE1、CD68进行定性、定量检测。取对数生长期人单核白血病细胞THP-1,在培养液中加入LYVE1过表达慢病毒,培养48 h获得表达LYVE1的THP-1细胞,在表达LYVE1的THP-1细胞中加入100 ng/mL的佛波酯(PMA)诱导培养48 h,获得LYVE1+巨噬细胞;另取部分THP-1细胞,仅加入100 ng/mL的PMA诱导培养48 h获得LYVE1-巨噬细胞。取对数生长期人类风湿性关节炎成纤维细胞MH7A分为LYVE1+巨噬细胞组、LYVE1-巨噬细胞组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,另将仅含培养基的小室设为空白对照组,采用划痕实验观察各组细胞的迁移能力。取MH7A细胞分为A组、B组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,将仅含培养基小室设为C组,采用Transwell侵袭实验观察各组细胞的侵袭能力。取MH7A细胞分为一组、二组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,将仅含培养基小室设为空白组,培养48 h时采用实时定量PCR法检测各组MH7A细胞FMT相关基因(COL1A1、fibronectin、α-SMA)的mRNA。结果RA与OA患者滑膜组织中LYVE1、CD68表达位置基本重叠;RA与OA患者滑膜组织LYVE1相对表达量分别为0.319±0.033、1.000±0.159,二者比较,P<0.05。与LYVE1-巨噬细胞组、空白对照组比较,培养24、48 h时LYVE1+巨噬细胞组细胞划痕愈合比低(P均<0.05);与B组、C组比较,培养24 h时A组细胞穿膜细胞数少(P均<0.05);与二组、空白组比较,培养48 h时一组细胞COL1A1 mRNA、fibronectin mRNA、α-SMA mRNA相对表达量少(P均<0.05)。结论RA患者关节滑膜组织中LYVE1+巨噬细胞低表达。LYVE1+巨噬细胞可抑制RA-FLS的迁移、侵袭及FMT。 展开更多

关键词 淋巴管内皮受体-1 LYVE1+巨噬细胞 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 细胞侵袭 细胞迁移 成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

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针刀疏筋解结术对类风湿关节炎家兔滑膜炎症的影响及作用机制研究 被引量：2

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作者 陈平 王海东 +4 位作者 杜小正 井维尧 刘翠 李浩林 陶鹏飞 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2024年第7期91-99,共9页

目的观察针刀疏筋解结术对类风湿关节炎(RA)模型家兔膝关节滑膜组织NF-κB/Bcl-2通路活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、Bax、caspase-3表达的影响,探讨其抑制RA滑膜炎症的作用机制。方法24只新西兰白兔随机分... 目的观察针刀疏筋解结术对类风湿关节炎(RA)模型家兔膝关节滑膜组织NF-κB/Bcl-2通路活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、Bax、caspase-3表达的影响,探讨其抑制RA滑膜炎症的作用机制。方法24只新西兰白兔随机分为正常组、模型组、药物组和针刀组,每组6只,除正常组外,其余组采用卵蛋白+弗氏完全佐剂膝关节腔注射复制RA模型,分别予相应干预,连续18 d。测定家兔膝关节痛阈、膝关节周径,超声观察关节腔积液、滑膜厚度及内部血流信号,HE染色观察膝关节滑膜组织形态,TUNEL染色观察滑膜组织成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡情况,免疫组化检测滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-6表达,RT-PCR检测滑膜组织核因子(NF)-κBp65、Bcl-2mRNA表达,Westernblot检测滑膜组织NF-κBp65、p-NF-κBp65、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达。结果与正常组比较,模型组家兔膝关节痛阈降低、膝关节周径增加,超声评分和滑膜组织病理评分增加;滑膜组织FLS凋亡率降低,TNF-α、IL-1β、IL-6表达升高,NF-κBp65、Bcl-2 mRNA和蛋白及p-NF-κBp65蛋白表达升高,Bax、caspase-3蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,药物组和针刀组家兔膝关节痛阈增加、膝关节周径减小,超声评分和滑膜组织病理评分减少;滑膜组织FLS凋亡率升高,TNF-α、IL-1β、IL-6表达降低,NF-κBp65、Bcl-2m RNA和蛋白及p-NF-κBp65蛋白表达降低,Bax、caspase-3蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论针刀疏筋解结术可能通过降低滑膜组织NF-κB/Bcl-2通路活性,促进FLS凋亡,减少TNF-α、IL-1β、IL-6产生,抑制RA滑膜炎症,减轻膝关节肿胀、提升痛阈。 展开更多

关键词 针刀疏筋解结术 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 滑膜炎症 兔

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白芍总苷对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖、凋亡和炎性因子的影响 被引量：14

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作者 马运锋 韩小飞 +1 位作者 苏国磊 邓素玲 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期677-683,共7页

目的探讨白芍总苷(total glucosides of paeony TGP)对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎性因子的影响及分子机制。方法分离培养FLS,实验分为对照(NC)组(不作任何处理)、不同浓度白芍总苷组(0.5、1.0、1.5 mg·mL^... 目的探讨白芍总苷(total glucosides of paeony TGP)对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎性因子的影响及分子机制。方法分离培养FLS,实验分为对照(NC)组(不作任何处理)、不同浓度白芍总苷组(0.5、1.0、1.5 mg·mL^(-1)白芍总苷)、miR-NC组(转染miR-34a模拟物对照)、miR-34a组(转染miR-34a模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-34a抑制剂对照)、anti-miR-34a组(转染miR-34a抑制剂)、白芍总苷+anti-miR-NC组(1.5 mg·mL^(-1)白芍总苷+转染miR-34a抑制剂对照)、白芍总苷+anti-miR-34a组(1.5 mg·mL^(-1)白芍总苷+转染miR-34a抑制剂)。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki67)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、磷酸化p65(p-p65)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IкBα)蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-34a表达水平。结果与对照组相比,不同浓度白芍总苷组Ki67表达水平降低,Cleaved-caspase-3表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05);白芍总苷组IL-6、TNF-α含量显著降低,miR-34a表达水平显著升高,p-p65、p-IкBα蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-34a抑制FLS增殖和炎性因子释放,诱导细胞凋亡;而抑制miR-34a表达作用相反。且抑制miR-34a表达逆转了白芍总苷对FLS细胞增殖、凋亡、炎症因子释放及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。结论白芍总苷可能通过上调miR-34a表达抑制NF-κB信号通路抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和炎性因子释放,并诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 白芍总苷 MIR-34A 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 增殖 凋亡 炎性因子

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三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及分泌作用的影响 被引量：2

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作者 高冠民 蒋莉 +2 位作者 刘升云 刘章锁 郑朝晖 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第19期19-21,共3页

目的观察三氧化二砷(As2O3)对体外培养的RA滑膜成纤维细胞的增殖及分泌功能的影响。方法体外培养RA滑膜成纤维细胞,用含As2O3浓度分别为0、0.5、2、5μmol/L的培养液分别作用于培养细胞,24 h后检测上清液TNF-α和IL-1的水平;采用TUNEL... 目的观察三氧化二砷(As2O3)对体外培养的RA滑膜成纤维细胞的增殖及分泌功能的影响。方法体外培养RA滑膜成纤维细胞,用含As2O3浓度分别为0、0.5、2、5μmol/L的培养液分别作用于培养细胞,24 h后检测上清液TNF-α和IL-1的水平;采用TUNEL法和流式细胞仪测定细胞增殖情况。结果As2O3作用组TNF-α及IL-1水平均较对照组降低(P<0.05),随浓度梯度的增加作用增强。TUNEL法检测细胞增殖,As2O3作用第3天后各实验组均明显低于对照组(P<0.05),且其作用呈剂量依赖性。滑膜细胞细胞周期在As2O3作用组均与对照组有明显差异,其变化亦呈剂量依赖性。结论As2O3可促进RA滑膜B型细胞增殖,抑制TNF-α及IL-1的表达。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 成纤维样滑膜细胞 三氧化二砷 细胞因子

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抗炎口服液对改良弗氏完全佐剂诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响 被引量：2

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作者 马玉琛 段斐 +3 位作者 孟明 郭晓燕 寇素茹 马幼敏 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第43期31-32,共2页

60只SD雄性大鼠,随机分为正常对照组(A组),模型组(B组),雷公藤组(C组)及抗炎止痛口服液高(D组)、中(E组)、低(F组)剂量组。除A组外,其余各组均建立改良弗氏完全佐剂诱导性关节炎(AIA)模型,在造模39d行滑膜病理检查,应用免疫组化ABC法检... 60只SD雄性大鼠,随机分为正常对照组(A组),模型组(B组),雷公藤组(C组)及抗炎止痛口服液高(D组)、中(E组)、低(F组)剂量组。除A组外,其余各组均建立改良弗氏完全佐剂诱导性关节炎(AIA)模型,在造模39d行滑膜病理检查,应用免疫组化ABC法检测滑膜组织中Bax、Bcl-2的表达,并进行滑膜细胞培养。结果B组滑膜组织高度增生,大量的炎性细胞浸润,软骨面破坏。D、E组滑膜组织可见轻度增生,少量炎性细胞浸润,无血管翳形成,关节软骨表面光滑,未见破坏。AIA大鼠的滑膜细胞培养3～5代,形成成纤维样滑膜细胞(FLS)。与B组比较,C、D、E组Bax的表达显著增加,Bcl-2表达显著减少(P均<0.05)。认为抗炎止痛口服液有明显的促进FLS凋亡,防止类肿瘤样增生作用,从而达到治疗RA的目的。 展开更多

关键词 抗炎止痛口服液 成纤维样滑膜细胞 类肿瘤样增生 BAX蛋白 BCL-2蛋白 细胞凋亡

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