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溶酶体组织蛋白酶B增加自噬保护缺氧诱导的心脏微血管内皮细胞损伤 被引量:6
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作者 高路 姚瑞 +3 位作者 李亚彭 梁翠 肖莉丽 张彦周 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期53-60,共8页
目的探讨CTSB是否参与缺氧诱导的心脏微血管内皮细胞损伤。方法采用缺氧诱导内皮细胞损伤模型;分离CTSB基因敲除小鼠心脏微血管内皮细胞,采用腺病毒过表达CTSB,采用巴弗洛霉素阻断细胞自噬;采用ELISA法检测炎症因子的释放水平;采用TUNE... 目的探讨CTSB是否参与缺氧诱导的心脏微血管内皮细胞损伤。方法采用缺氧诱导内皮细胞损伤模型;分离CTSB基因敲除小鼠心脏微血管内皮细胞,采用腺病毒过表达CTSB,采用巴弗洛霉素阻断细胞自噬;采用ELISA法检测炎症因子的释放水平;采用TUNEL染色法检测细胞凋亡数量;采用caspase-3试剂盒检测细胞caspase-3的活性;细胞感染LC3-GFP-mCherry双标病毒,检测细胞自噬流的水平。结果CTSB基因敲除可明显加重缺氧诱导的内皮细胞炎症、凋亡,增加细胞自噬。CTSB过表达可减轻缺氧诱导的内皮细胞炎症、凋亡,增加细胞自噬。但是巴弗洛霉素处理可明显抵消CTSB过表达对细胞炎症、凋亡的抑制作用和对细胞自噬的保护作用。结论 CTSB基因敲除加重缺氧诱导的内皮细胞炎症和凋亡,而CTSB基因过表达减轻缺氧诱导的内皮细胞损伤。CTSB通过维持内皮细胞正常的自噬降解发挥作用。 展开更多
关键词 心脏缺氧损伤 内皮细胞损伤 溶酶体组织蛋白酶B 自噬 凋亡 炎症
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溶酶体组织蛋白酶参与宰后牛肉AIF介导细胞凋亡研究 被引量:2
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作者 张佳莹 余群力 +3 位作者 韩玲 李航 殷元虎 韩明山 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第3期354-360,共7页
为研究牛肉宰后成熟过程中凋亡诱导因子(AIF)介导细胞凋亡及溶酶体组织蛋白酶参与AIF活化机制,选取6头西门塔尔杂交牛进行屠宰,取其背最长肌于4℃条件下成熟,在不同成熟时间点(0、6、12、24、72、120、168 h)进行活性氧(ROS)相对含量、... 为研究牛肉宰后成熟过程中凋亡诱导因子(AIF)介导细胞凋亡及溶酶体组织蛋白酶参与AIF活化机制,选取6头西门塔尔杂交牛进行屠宰,取其背最长肌于4℃条件下成熟,在不同成熟时间点(0、6、12、24、72、120、168 h)进行活性氧(ROS)相对含量、溶酶体膜稳定性、组织蛋白酶活性、线粒体膜通透性、AIF表达及细胞核形态的测定。结果表明,宰后成熟过程中,牛肉ROS相对含量呈先降低后升高的趋势(P<0.05);溶酶体膜稳定性逐渐降低(P<0.05);组织蛋白酶B、D和L的活性逐渐升高(P<0.05);线粒体膜通透性增大(P<0.05);AIF在线粒体中的表达量于宰后12 h显著升高,在之后的成熟时间降低(P<0.05),AIF在细胞核中的表达呈上升的趋势(P<0.05),与线粒体中的下降趋势相一致;细胞核体积逐渐增大、部分核溶解,并伴随细胞间隙变大的现象。表明牛肉在宰后成熟过程中生成ROS,ROS的累积导致溶酶体膜稳定性失衡,使组织蛋白酶被释放,作用于线粒体,之后线粒体膜通透性发生变化,释放AIF,活化的AIF进入细胞核内诱导凋亡发生。 展开更多
关键词 牛肉 宰后成熟 溶酶体组织蛋白酶 凋亡诱导因子 细胞凋亡
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褐藻多糖硫酸酯对组织蛋白酶B活性影响的实验研究 被引量:3
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作者 张甘霖 朱晓新 李萍 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第3期371-374,共4页
目的研究褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan)对氧化应激损伤及溶酶体组织蛋白酶B活性的影响,探讨Fucoidan用于中枢神经系统疾病的作用机制。方法 50μg.L-1神经生长因子(nerve growth factor,NGF)分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞(differentiate... 目的研究褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan)对氧化应激损伤及溶酶体组织蛋白酶B活性的影响,探讨Fucoidan用于中枢神经系统疾病的作用机制。方法 50μg.L-1神经生长因子(nerve growth factor,NGF)分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞(differentiated PC12,dPC12)7 d,0.5 mmol/L H2O2刺激30 min,给予10 mg.L-1Fucoidan干预。酶标仪检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及活性氧(reactive oxygen species,ROS)活性;荧光底物法检测细胞质中溶酶体组织蛋白酶B的活性;酶-底物法检测不同浓度Fucoidan(0.1、1、10、50、100 mg.L-1)对人肝脏溶酶体组织蛋白酶B活性的影响。结果氧化损伤后细胞中ROS显著升高达正常水平的185.2%,伴有SOD下降,溶酶体组织蛋白酶B活性上升至正常水平的236.7%;Fucoidan对SOD活性没有明显影响,能降低ROS水平,且对细胞质内和人肝脏溶酶体组织蛋白酶B的活性均具有抑制作用。结论 Fucoidan降低活性氧含量抗氧化损伤的作用可能与其抑制溶酶体组织蛋白酶B的活性有关。 展开更多
关键词 褐藻多糖硫酸酯 溶酶体组织蛋白酶B 阿尔茨海默病 氧化应激
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内源性蛋白酶在宰后猪肉成熟过程中的作用 被引量:8
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作者 谢婷 李诚 《肉类研究》 2008年第6期11-14,21,共5页
本文分别阐述了两类内源性蛋白酶,即钙蛋白酶和溶酶体组织蛋白酶的结构、性质、影响酶活性的因素及其在猪肉成熟过程中的作用,认为在猪肉宰后成熟过程中,钙蛋白酶发挥的作用更显著。
关键词 蛋白酶 溶酶体组织蛋白酶 嫩度
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猪CTSD全长cDNA的克隆和表达分析 被引量:7
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作者 梅盈洁 李加琪 +5 位作者 陈瑶生 李晓筠 朱良瑞 凌飞 王翀 张豪 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期432-436,共5页
以人CTSD mRNA全长序列为基序,在db EST库中搜索同源性大于80%、重叠大于40个碱基的猪EST下载经Seqman软件装配后,利用RT-PCR扩增到猪CTSD基因部分cDNA序列,进一步通过RACE技术获得cDNA全长(GenBank登录号为DQ018727),猪CTSD基因cDNA... 以人CTSD mRNA全长序列为基序,在db EST库中搜索同源性大于80%、重叠大于40个碱基的猪EST下载经Seqman软件装配后,利用RT-PCR扩增到猪CTSD基因部分cDNA序列,进一步通过RACE技术获得cDNA全长(GenBank登录号为DQ018727),猪CTSD基因cDNA全长2032 bp包括93 bp 5′UTR区、706 bp 3′UTR区和1 233bp ORF,编码410个氨基酸残基。其编码区与人、鼠、牛、羊CTSD编码区同源性分别为87.9%、78.2%、86.6%和85.0%,其氨基酸序列与人、鼠、牛、羊氨基酸序列同源性分别为86.6%、80.1%、86.0%和84.7%。疏水性分析和信号肽预测发现猪CTSD氨基酸序列存在至少7个疏水性区域,信号肽位点为第1-20个氨基酸残基。在NCBI进行Blast P搜索结果显示猪CTSD氨基酸结构中含有Asn(Asparagine,天门冬酰胺)结构域,与天冬氨酸蛋白酶3D结构同源性高达99.7%,具有真核生物天冬氨酸蛋白酶的典型结构。以猪多组织RNA池为模板,以1026 bp部分cDNA序列作为杂交探针进行Northern杂交,得到一条2000 bp左右特异条带,从而验证了RACE产物为全长cDNA并揭示该基因只有一个转录本。为了研究猪CTSD基因在体内不同组织内表达的特点,采用半定量RT-PCR对CTSD基因在猪10个组织中的表达进行研究,结果表明在10个组织中均有表达,且表达量与-βactin内参接近。 展开更多
关键词 溶酶体组织蛋白酶D 电子克隆 快速扩增CDNA末端 全长CDNA
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水产品腐败机理及控制方法研究进展 被引量:11
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作者 杨帆 万金庆 +1 位作者 张楠 邢娜 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第5期282-285,共4页
酶类的水解作用是水产品贮藏过程中腐败变质的主要因素。本文综述了水产品在低温贮藏中的腐败机理及控制方法,分别对前后两个阶段占主导作用的因素内源酶和胞外酶进行了分析,讨论了控制冰点与气调包装结合法、腌制与低温贮藏法、冰温干... 酶类的水解作用是水产品贮藏过程中腐败变质的主要因素。本文综述了水产品在低温贮藏中的腐败机理及控制方法,分别对前后两个阶段占主导作用的因素内源酶和胞外酶进行了分析,讨论了控制冰点与气调包装结合法、腌制与低温贮藏法、冰温干燥法等延长水产品贮藏期的方法,并对提高水产品品质的方法做出了展望,以期为提高水产品营养价值、延长贮藏期提供指导。 展开更多
关键词 水产品 腐败机理 内源酶 胞外酶 蛋白酶 溶酶体组织蛋白酶 控制方法
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CTSB超表达促进体外培养的猪前体脂肪细胞分化 被引量:2
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作者 张振宇 麦茵 +3 位作者 董培越 杨浩 郑雪莉 杨公社 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期678-684,共7页
为研究溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)对脂肪细胞分化的影响,本实验构建了Ctsb重组腺病毒超表达载体,包装并侵染体外培养的猪前体脂肪细胞,采用油红O染色,油红O提取比色法检测猪前体脂肪细胞分化的情况,并通过real-time PCR法检... 为研究溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)对脂肪细胞分化的影响,本实验构建了Ctsb重组腺病毒超表达载体,包装并侵染体外培养的猪前体脂肪细胞,采用油红O染色,油红O提取比色法检测猪前体脂肪细胞分化的情况,并通过real-time PCR法检测成脂关键基因mRNA水平的变化.结果显示,重组腺病毒Ctsb载体构建成功,转染猪前体脂肪细胞后,使Ctsb的mRNA和蛋白质表达量分别提高了约16倍和12倍.CTSB超表达能促进脂肪细胞的分化和脂质积累,成脂关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)、脂肪酸结合蛋白2(adipocyte protein 2,aP2)的表达量均有显著升高.研究表明,提高Ctsb的表达能促进猪前体脂肪细胞分化,揭示了Ctsb在猪前体脂肪细胞分化过程中可能发挥关键作用.研究结果为进一步研究其作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 溶酶体组织蛋白酶B 重组腺病毒 前体脂肪细胞
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