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溶血性曼氏杆菌OmpA的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
1
作者 尚珂 高远集 +9 位作者 刘畅 代静蕾 丁梦豪 聂孟川 王怡轩 陈松彪 贾艳艳 郭荣显 丁轲 余祖华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期376-383,共8页
为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司... 为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司测序及酶切鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导重组OmpA蛋白(r OmpA)的表达,SDS-PAGE检测结果显示,在约57 ku处出现目的条带,且rOmpA主要以为包涵体形式表达。rOmpA表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在57.03 ku处出现特异性条带,表明r OmpA可与MH阳性血清产生良好的反应原性。以rOmpA作为包被抗原,采用方阵法通过对各反应条件的优化,初步建立MH抗体的间接ELISA检测方法。利用该方法检测多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、MH-1、MH CVCC4091(A5型)以及MH-2(A1型)阳性血清,结果显示,除MH-1、CVCC4091以及MH-2检测为阳性外,其他细菌阳性血清均为阴性结果,特异性较强。利用该间接ELISA方法检测2倍倍比稀释的待检阳性血清(1:8000~1:512000),结果显示,阳性血清稀释至1:512000时仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r OmpA包被ELISA板,按照该ELISA方法检测5份MH阳性血清,分析该方法的重复性。结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法重复性好。采用建立的间接ELISA方法和间接血凝试验(IHA),对82份临床动物(羊、兔、鼠)血清样品检测,结果显示,间接ELISA检测方法的阳性率为47.6%,阴性率为52.4%;IHA检测方法的阳性率为45.1%,阴性率为54.9%。二者的阳性符合率为94.9%,阴性符合率为95.6%,总符合率为99.3%。另外,从鼠体内检出MH阳性率最高为75.0%,表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床样品的检测。该检测方法的建立为临床MH抗体的检测提供可靠的技术手段,为MH的流行病学调查等奠定了基础。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌5型 外膜蛋白A 原核表达 小鼠 间接ELISA
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牛源溶血性曼氏杆菌YtfJ蛋白的表达及其对小鼠免疫原性的研究
2
作者 魏京京 许淑芸 +9 位作者 俞杰 魏增科 何白雪 周霞 吴洁 孙志华 王震 王晓兰 张辉 钟发钢 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期731-738,756,共9页
为分析牛源溶血性曼氏杆菌(Mh)YtfJ蛋白的免疫原性,本研究对YtfJ蛋白部分生物信息学特征分析后,利用原核系统表达并纯化重组YtfJ蛋白(rYtfJ),经SDS-PAGE、western blot检测rYtfJ的表达和纯化效果及其反应原性。结果显示YtfJ蛋白具有良... 为分析牛源溶血性曼氏杆菌(Mh)YtfJ蛋白的免疫原性,本研究对YtfJ蛋白部分生物信息学特征分析后,利用原核系统表达并纯化重组YtfJ蛋白(rYtfJ),经SDS-PAGE、western blot检测rYtfJ的表达和纯化效果及其反应原性。结果显示YtfJ蛋白具有良好稳定的理化性质,并含有B细胞抗原表位与T细胞抗原表位,具有外膜蛋白结构特征。SDS-PAGE结果显示,在32.25 ku处出现目的蛋白,且纯化效果较好。Western blot结果显示rYtfJ能与牛源Mh阳性血清反应。将rYtfJ与白油佐剂乳化后以10μg/只、20μg/只和30μg/只经背部皮下注射免疫6周龄BALB/c小鼠,经眼眶采血后分离血清,通过间接ELISA检测不同时期各组小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a抗体水平并计算IgG2a/IgG21比值,以及细胞因子分泌水平。结果显示,3种剂量蛋白免疫小鼠后,小鼠血清中IgG抗体水平逐渐升高,抗体水平于免疫后28 d和35 d达到监测期间内的最高值,整个免疫周期内IgG2a/IgG1均大于1,对照组与白油佐剂组小鼠无抗体产生;免疫后35 d 30μg组小鼠血清中IFN-γ含量极显著高于20μg组和10μg组(P<0.001),30μg组和20μg组小鼠血清中IL-6的含量极显著高于10μg组(P<0.001),21 d时30μg组小鼠血清中TNF-α和IL-10的含量极显著高于20μg组和10μg组(P<0.001)。首免后38 d对小鼠腹腔注射200μL(含3×10~8cfu/只)的Mh,观察15 d内各组小鼠的临床症状及死亡率,并剖杀所有存活小鼠,将肺组织研磨后稀释涂布于牛Mh固体培养基,通过菌落计数法测定小鼠肺脏载菌量。结果显示,攻毒后5 d内对照组和白油佐剂组小鼠全部死亡,眼角出现大量脓性分泌物且被毛凌乱,部分小鼠鼻部出血,30μg组、20μg组和10μg组小鼠的存活率分别为90%(9/10)、80%(8/10)和60%(6/10),死亡小鼠被毛凌乱;各免疫组小鼠肺部载菌量与PBS对照组相比均降低,其中30μg组(P<0.001)和20μg组小鼠肺脏的载菌量(P<0.01)均极显著低于对照组与白油佐剂组。上述结果首次证实YtfJ蛋白能够与牛Mh阳性血清结合,且可以诱导小鼠产生体液免疫与细胞免疫反应,可有效抵抗Mh的感染。本研究为研发牛源Mh亚单位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 YtfJ基因 生物信息学 原核表达 抗原性
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羊呼吸道溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及其致病性和耐药性研究
3
作者 武佳鑫 孙月 +5 位作者 毛伟 刘淑英 尹凯雯 张志丹 韩凯凡 赵红霞 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2421-2431,共11页
【目的】了解内蒙古地区养殖场引起羊呼吸道疾病的主要病原菌,并探究其致病性及耐药性,为相关疾病防治药物的选择提供参考。【方法】对采集的病死羊肺脏组织进行病原菌分离培养、生化鉴定、分子生物学鉴定,并对其进行小鼠致病性试验,采... 【目的】了解内蒙古地区养殖场引起羊呼吸道疾病的主要病原菌,并探究其致病性及耐药性,为相关疾病防治药物的选择提供参考。【方法】对采集的病死羊肺脏组织进行病原菌分离培养、生化鉴定、分子生物学鉴定,并对其进行小鼠致病性试验,采用PCR法检测分离菌株毒力基因携带情况;利用K-B法检测分离菌株的药物敏感性,通过PCR法检测分离菌株耐药基因携带情况;用牛津杯法检测中药单体小檗碱、柠檬醛和百里香酚对分离菌株的体外抑菌效果。【结果】分离菌株在血琼脂平板培养基上形成β-溶血的灰白色菌落,共分离获得2株疑似菌株,分别命名为Mh1-1和Mh1-2。生化鉴定结果显示,分离株麦芽糖、甘露糖、蔗糖、木糖、山梨醇反应均呈阳性。PCR扩增出大小为453 bp的溶血性曼氏杆菌特异性基因及306 bp的荚膜血清A1型条带。相似性比对结果显示,分离株Mh1-1与溶血性曼氏杆菌GDZJcattle2014株(登录号:KM576848.1)的相似性为98.49%,分离株Mh1-2与溶血性曼氏杆菌38599株(登录号:CP017491.1)的相似性为98.14%。经鉴定2株分离株均为血清A1型溶血性曼氏杆菌。小鼠致病性试验结果显示,分离株Mh1-1和Mh1-2对小鼠的半数致死量(LD_(50))分别为2.2×10^(7)和1.0×10^(7)CFU/mL。2株分离菌株均检出毒力基因gs 60、lktC、lktA、tbpB、adh和nmaA。药敏试验结果显示,分离株Mh1-1对四环素、林可霉素表现耐药,对链霉素表现中介;分离株Mh1-2对链霉素和林可霉素表现耐药,对四环素表现中介;2株分离菌株均对氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、复方新诺明、头孢噻肟、氟苯尼考等表现敏感。耐药基因检测结果显示,2株分离株均携带strA、strB、tetA基因。体外抑菌试验结果显示,小檗碱和柠檬醛对分离株均有较好的抑制作用。【结论】本研究从患呼吸道疾病的病死羊肺脏组织中分离获得2株荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,分离株均有致病性并携带多种毒力基因,对抗菌药物林可霉素耐药并携带strA等耐药基因。试验结果为临床科学合理地选择抗菌药物提供参考依据,为后续治疗药物的开发和研究提供思路。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 分离鉴定 致病性 耐药性
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牛溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的PCR检测及分离鉴定
4
作者 耿玉静 龚玲朵 +5 位作者 李玉婉 张斐洋 王留幸 韩妙层 郎洪武 汤承 《现代畜牧兽医》 2025年第2期31-35,共5页
为了解溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在我国牛群中的流行情况,研究对来自四川、宁夏和内蒙古等7个省(自治区)21个牛呼吸道疾病综合征(BRDC)发病牛场的344份鼻腔棉拭子进行分型... 为了解溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在我国牛群中的流行情况,研究对来自四川、宁夏和内蒙古等7个省(自治区)21个牛呼吸道疾病综合征(BRDC)发病牛场的344份鼻腔棉拭子进行分型检测、细菌分离鉴定及毒力测定。结果显示,344份被检样本Mh和Pm的检出率分别为27.3%和14.8%,混合感染率为28.6%;Mh A1型和Mh A6型占比分别为55.9%(38/68)和44.1%(30/68),Pm荚膜A型和荚膜B型占比分别为66.7%(23/34)和33.3%(11/34);分离获得Mh A1型6株和Mh A6型4株,Pm荚膜A型11株和荚膜B型6株。毒力测定结果显示,4株Mh A6型和1株Mh A1型可部分致死小鼠,最高和最低致死剂量分别为10^(10)、10^(5) CFU/mL;17株Pm分离株均能够100%致死小鼠,最高和最低致死剂量分别为10^(6)、10 CFU/mL。研究表明,Mh和Pm是引起当地牛BRDC的重要病原菌,混合感染较为普遍,Mh A1型的流行率高于Mh A6型,但Mh A6型的毒力高于Mh A1型。Pm荚膜A型的检出率高于Pm荚膜B型。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 细菌分离鉴定 血清型 致病性
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A6型牛溶血性曼氏杆菌生物学特性研究及免疫原性评价
5
作者 贾超莹 张华伟 +2 位作者 罗修鑫 刘青芸 王湘如 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2312-2324,共13页
牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是引起牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的最主要病原之一,严重影响牛群的健康养殖及食品安全。本研究采集了伴有发热、流鼻涕等呼吸道症状的犊牛鼻拭子进行细菌分离培养,并... 牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是引起牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的最主要病原之一,严重影响牛群的健康养殖及食品安全。本研究采集了伴有发热、流鼻涕等呼吸道症状的犊牛鼻拭子进行细菌分离培养,并对分离株进行血清型鉴定、16S rRNA测序分析和PCR分型,测试了分离菌株对15种抗生素的耐药表型;同时通过小鼠死亡率以及临床剖检结果对小鼠作为Mh替代动物感染模型的可能性进行评估,构建小鼠细菌感染模型,并评估了分离株的致病性与免疫原性。结果显示:分离株纯化后经鉴定为A6型牛溶血性曼氏杆菌,将其命名为KQ-Mh-1。该菌株对阿米卡星、美洛西林、庆大霉素、链霉素、阿莫西林和磺胺异恶唑等多种药物耐药,对头孢噻肟、诺氟沙星、头孢哌酮、环丙沙星、多黏菌素、新霉素和多西环素表现出较高的敏感性。分离株KQ-Mh-1对BALB/c小鼠的半数致死量(LD50)为7.29×10^(9)CFU·mL^(-1),感染死亡小鼠均表现为肺脏、脾脏严重出血。将KQ-Mh-1制备成不同抗原含量的灭活疫苗进行其免疫原性评估,其中高抗原含量(2.5×1010CFU·mL^(-1))的灭活疫苗免疫小鼠后对于A6型溶血性曼氏杆菌的攻毒具有70%的保护率。本研究成功分离出一株可导致牛BRD的Mh菌株,并对其生物学特性、致病性和免疫原性进行探究,为牛BRD疫苗的研发提供了良好的疫苗候选菌株。 展开更多
关键词 牛呼吸道疾病 溶血性曼氏杆菌 小鼠模型 灭活疫苗
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羊源溶血性曼氏杆菌的血清分型、毒力基因鉴定和耐药性检测
6
作者 李代琦 李远方 +1 位作者 张楠 杨高磊 《青海畜牧兽医杂志》 2025年第2期17-22,69,共7页
本研究旨在对河南省漯河市羊源溶血性曼氏杆菌进行分离鉴定及其生物学特性分析。试验采集漯河市8家养羊场中患有呼吸道疾病的羊鼻咽拭子530份,进行细菌分离培养、生化反应和特异性PCR鉴定,并对分离的菌株溶血性曼氏杆菌进一步进行血清型... 本研究旨在对河南省漯河市羊源溶血性曼氏杆菌进行分离鉴定及其生物学特性分析。试验采集漯河市8家养羊场中患有呼吸道疾病的羊鼻咽拭子530份,进行细菌分离培养、生化反应和特异性PCR鉴定,并对分离的菌株溶血性曼氏杆菌进一步进行血清型PCR鉴定、携带毒力基因、耐药性和动物致病性分析。结果显示,共鉴定出52株溶血性曼氏杆菌,总检出率为9.81%。通过对分离株溶血性曼氏杆菌进行血清分型PCR方法鉴定,结果发现,有17株属于血清型1,占比32.69%;28株属于血清型2,占比53.85%;7株属于其他血清型,占比13.46%。对溶血性曼氏杆菌的毒力基因进行检测,结果显示,gcp、lkt、nanH基因的阳性检出率分别为73.08%、67.31%和65.38%,而irp和fhaC基因未检出。对溶血性曼氏杆菌携带毒力基因进行检测分析,除irp、fhaC未检出外,gcp、lkt、nanH阳性检出率较高,分别为73.08%、67.31%和65.38%,其他毒力基因阳性检出率介于17.31%~51.92%之间。所有菌株对头孢噻肟、头孢氨苄和头孢曲松比较敏感,敏感率分别为86.54%、78.85%和84.62%;对其余药物敏感率比较低,其中,红霉素、庆大霉素和氨苄西林敏感率低于20%。小鼠致病性试验表明,分别属于血清型1、2的2株溶血性曼氏杆菌致病性较强。本研究为漯河市羊源溶血性曼氏杆菌病防治提供了数据支撑。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 分离鉴定 毒力基因 药敏试验
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牛溶血性曼氏杆菌病的诊断及防治
7
作者 王琳 《中国畜牧业》 2025年第7期113-114,共2页
牛溶血性曼氏杆菌病(Bovine Mannheimia haemolytica Disease)是一种由溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)引起的呼吸道疾病,广泛存在于全球范围内的牛群中,尤其是集约化养殖环境中更为常见。溶血性曼氏杆菌在正常情况下是动物上... 牛溶血性曼氏杆菌病(Bovine Mannheimia haemolytica Disease)是一种由溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)引起的呼吸道疾病,广泛存在于全球范围内的牛群中,尤其是集约化养殖环境中更为常见。溶血性曼氏杆菌在正常情况下是动物上呼吸道常在菌,但当存在环境压力或应激(如运输、饲养密度大、气候变化等)时会大量增殖,引发严重的呼吸道感染。 展开更多
关键词 Mannheimia haemolytica 牛溶血性曼氏杆菌病
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羊源溶血性曼氏杆菌SYS-1株分离鉴定及其毒力与耐药性分析
8
作者 刘芳 苗苗 +4 位作者 乌云那日苏 乌志勇 白伟琴 王金玲 格日勒图 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期32-40,共9页
绵羊上呼吸道疾病是兽医临床常见病,常见病因为溶血性曼氏杆菌感染。该菌具有多种血清型且呈区域性流行,造成当地绵羊养殖业严重经济损失。为探究陕西榆林羊场呼吸道疾病发病原因和危害,丰富该病防治措施,试验采集羊场有呼吸道病史的病... 绵羊上呼吸道疾病是兽医临床常见病,常见病因为溶血性曼氏杆菌感染。该菌具有多种血清型且呈区域性流行,造成当地绵羊养殖业严重经济损失。为探究陕西榆林羊场呼吸道疾病发病原因和危害,丰富该病防治措施,试验采集羊场有呼吸道病史的病死羊肺组织进行平板划线,对其分离的菌株进行形态学观察、生化试验及分子生物学鉴定及药敏性和小鼠致病性试验。结果表明,该菌株为A1型溶血性曼氏杆菌SYS-1株,含有毒力因子抗白细胞毒素,具有致死性风险。分离菌可发酵甘露醇和山梨醇,无法发酵甘露糖。吲哚试验结果阴性,过氧化氢试验呈阳性。该菌株生长缓慢,可对恩诺沙星、氟苯尼考等药物敏感,对庆大霉素和红霉素耐药。 展开更多
关键词 绵羊 溶血性曼氏杆菌 遗传进化树 毒力因子
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溶血性曼氏杆菌免疫相关蛋白的研究进展 被引量：2
9
作者 许淑芸 周霞 +5 位作者 吴桐中 孙志华 王震 王晓兰 李劼 张辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期540-545,共6页
牛呼吸道疾病(Bovine respiratory disease,BRD)在世界范围内广泛存在,据统计美国饲养场BRD发病率为16.2%;由BRD引起的成年牛和犊牛死亡数分别占其死亡数的55%和36.3%,该病危害牛健康以及给牛养殖业造成严重的经济损失[1-2]。
关键词 成年牛 溶血性曼氏杆菌 牛呼吸道疾病 免疫相关蛋白 犊牛 死亡数 饲养场 养殖业
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双峰驼感染魏氏梭菌与溶血性曼氏杆菌的防治 被引量：1
10
作者 张学虎 宋福超 +1 位作者 兰喜 张勇 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第1期63-67,共5页
2022年5月以来,甘肃省某养驼场的部分驼羔先后出现阵咳、呼吸急促、步态摇摆等症状,个别伴有腹泻,并在短期内连续死亡。经现场调查及临床检查后,初步怀疑为细菌性病原感染所致。为探明病因并控制病情,现场采集发病驼羔血清及鼻拭子进行... 2022年5月以来,甘肃省某养驼场的部分驼羔先后出现阵咳、呼吸急促、步态摇摆等症状,个别伴有腹泻,并在短期内连续死亡。经现场调查及临床检查后,初步怀疑为细菌性病原感染所致。为探明病因并控制病情,现场采集发病驼羔血清及鼻拭子进行实验室检测;同时对病死驼羔进行解剖观察,无菌采集内脏组织及肠内容物进行实验室检测。剖检发现,病死驼羔胃肠道及肺脏组织病变较为明显;镜检可见革兰阳性菌和革兰阴性菌;实验室检测发现,魏氏梭菌和溶血性曼氏杆菌核酸呈阳性。表明驼羔发病是由于感染了魏氏梭菌和溶血性曼氏杆菌引起的。通过采取紧急免疫、隔离治疗、消毒灭源等综合措施后,驼羔病情逐步好转,养驼场恢复了正常生产。 展开更多
关键词 双峰驼 魏氏梭菌 溶血性曼氏杆菌 诊断 防治
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绵羊源溶血性曼氏杆菌A2型的分离鉴定及耐药性分析 被引量：4
11
作者 梁纤纤 郑启铭 +7 位作者 李晓卓 冯继红 李月 刘文锴 韩翔舒 阿卜杜热合曼·努尔麦麦提 苏战强 夏俊 《草食家畜》 2024年第1期42-46,共5页
【目的】新疆某羊场的羊出现精神沉郁、咳嗽气喘、消瘦等症状,为确定此次发病病原。【方法】该羊场共送检4份病羊肺脏,从肺脏中分离培养了一株细菌并对其进行培养特性观察、PCR鉴定、血清型鉴定、药敏试验和动物致病性试验。【结果】结... 【目的】新疆某羊场的羊出现精神沉郁、咳嗽气喘、消瘦等症状,为确定此次发病病原。【方法】该羊场共送检4份病羊肺脏,从肺脏中分离培养了一株细菌并对其进行培养特性观察、PCR鉴定、血清型鉴定、药敏试验和动物致病性试验。【结果】结果显示分离出的一株革兰氏阴性菌,其形状及大小疑似溶血性曼氏杆菌;PCR鉴定结果显示为溶血性曼氏杆菌,分离菌株血清型为A2型。该分离菌株对青霉素、头孢唑林、氨苄西林等敏感;在致病性试验中,小鼠在15 h内陆续死亡,说明该菌株具有一定致病力。【结论】该病例致病原为A2型溶血性曼氏杆菌,对青霉素、头孢唑林、氨苄西林等敏感。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 绵羊源 血清型
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羊溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立与应用
12
作者 张峰源 夏贵泉 +3 位作者 孟卫芹 邓凤林 王金良 刘建钗 《中国动物检疫》 CAS 2024年第10期102-106,共5页
溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是两种条件性致病菌,可导致多种临床症状,给羊产业造成一定经济损失。为临床上快速、准确地鉴别诊断这两种细菌所导致的疾病,根据Mh的Lkt基因和Pm... 溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是两种条件性致病菌,可导致多种临床症状,给羊产业造成一定经济损失。为临床上快速、准确地鉴别诊断这两种细菌所导致的疾病,根据Mh的Lkt基因和Pm的kmt基因分别设计引物,建立了在一个反应体系中同时鉴别检测这2种细菌的PCR方法。结果显示:建立的PCR鉴别检测方法对Mh、Pm基因组DNA的检测限分别为7.23×10^(-6)、6.99×10^(-5) ng/μL,对羊链球菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、羊支原体核酸检测均为阴性,在多次重复试验中均可检测出阳性样品,其反应试剂均扩增出预期大小的片段。对95份羊源疑似临床样品进行检测,Mh检出率为38.95%(37/95),Pm检出率为53.68%(51/95),混合感染检出率为12.63%(12/95),鉴别检测结果与单重PCR检测结果基本一致。结果表明:该方法具有较好的特异性、敏感性、重复性及稳定性,可用于临床检测,为羊呼吸道疾病的鉴别诊断提供了一种方便、快捷和准确的检测手段,具有良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 PCR 羊
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浅谈牛溶血性曼氏杆菌病的致病特征及防治措施
13
作者 刘宁宁 王浩 《山东畜牧兽医》 2024年第5期79-81,共3页
溶血性曼氏杆菌病是一种主要对牛羊等反刍动物致病的重要呼吸道传染性疾病,当牛羊受到该病原感染时,主要症状为呼吸困难、发热、咳嗽、肺炎和败血症等,症状较重的患病牛羊死亡率较高,给牛羊养殖业造成较大的经济损失。本文从病原学、流... 溶血性曼氏杆菌病是一种主要对牛羊等反刍动物致病的重要呼吸道传染性疾病,当牛羊受到该病原感染时,主要症状为呼吸困难、发热、咳嗽、肺炎和败血症等,症状较重的患病牛羊死亡率较高,给牛羊养殖业造成较大的经济损失。本文从病原学、流行病学、毒力因子、致病机制、诊断技术等方面进行简要概述,有助于深刻了解该菌带来的危害,为牛溶血性曼氏杆菌病的防治提供参考。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 生物学特性 防治措施
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绵羊肺脏中溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及其药物敏感性分析 被引量：20
14
作者 冯旭飞 刀筱芳 +3 位作者 王志敏 汤承 李定霏 杨发龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期224-228,共5页
为了对引起绵羊肺炎的病原进行分离、鉴定和耐药性分析,本研究通过无菌采集绵羊肺脏并对细菌进行分离纯化、生化试验和PCR鉴定,然后对所得到的溶血性曼氏杆菌分离株进行药物敏感性研究。结果显示,分离纯化得到的细菌为革兰氏阴性短杆菌... 为了对引起绵羊肺炎的病原进行分离、鉴定和耐药性分析,本研究通过无菌采集绵羊肺脏并对细菌进行分离纯化、生化试验和PCR鉴定,然后对所得到的溶血性曼氏杆菌分离株进行药物敏感性研究。结果显示,分离纯化得到的细菌为革兰氏阴性短杆菌,具有弱溶血性,经生化试验和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌;耐药性分析显示该菌株对恩诺沙星、庆大霉素、四环素等大部分药物敏感。本研究为绵羊溶血性曼氏杆菌感染的有效防制提供有用的信息和数据。 展开更多
关键词 绵羊 溶血性曼氏杆菌 鉴定 耐药性
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溶血性曼氏杆菌致病机制的研究进展 被引量：30
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作者 陈艳红 颜忠 +2 位作者 查振林 姚晶 盖新娜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第12期153-155,共3页
曼氏杆菌病是牛、羊等反刍动物的重要呼吸道传染病,给养牛和养羊业带来较大的经济损失,溶血性曼氏杆菌是该病的病原,作者对其生物学特性、临床症状、毒力因子、致病机制等进行简要概述,为进一步深入研究提供参考。
关键词 溶血性曼氏杆菌 致病机制 自由基
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1株绵羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及致病性研究 被引量：15
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作者 李基棕 李文良 +4 位作者 毛立 郝飞 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第7期156-158,共3页
为确定导致绵羊细菌性感染死亡的病原,从送检病死绵羊肺脏中分离纯化出1株细菌,并对其进行培养特性观察、生化反应、PCR鉴定、药敏试验和动物致病性试验。结果显示,分离纯化的细菌为革兰氏阴性短杆菌,经生化反应和PCR鉴定为溶血性曼氏杆... 为确定导致绵羊细菌性感染死亡的病原,从送检病死绵羊肺脏中分离纯化出1株细菌,并对其进行培养特性观察、生化反应、PCR鉴定、药敏试验和动物致病性试验。结果显示,分离纯化的细菌为革兰氏阴性短杆菌,经生化反应和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌;该细菌对庆大霉素、头孢噻肟高度敏感;对青霉素、四环素、红霉素、利福平、卡那霉素、恩诺沙星和大观霉素耐药;将1×10~9CFU/m L菌液10倍系列稀释后感染6~8周龄小白鼠,该细菌对小白鼠的半数致死量为1×10^(6.2)CFU/m L;死亡动物的剖检病变与发病绵羊类似,并从病变器官内分离到细菌。本研究为进一步探讨溶血性曼氏杆菌的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊 溶血性曼氏杆菌 分离鉴定 致病性
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溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研制及初步应用 被引量：11
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作者 徐慧 韦莉 +4 位作者 佟瑞平 龚玉梅 王宏俊 孙惠玲 张培君 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第1期13-17,共5页
在溶血性曼氏杆菌PCR检测方法研究的基础上,进行溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研究及初步应用。结果表明,试剂盒特异性好,批内和批间的试剂盒无差异;试剂盒在-20℃可保存30个月,4℃可保存12个月;应用试剂盒从1 000多份临床样品中筛选... 在溶血性曼氏杆菌PCR检测方法研究的基础上,进行溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研究及初步应用。结果表明,试剂盒特异性好,批内和批间的试剂盒无差异;试剂盒在-20℃可保存30个月,4℃可保存12个月;应用试剂盒从1 000多份临床样品中筛选分离到6株溶血性曼氏杆菌。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 PCR 试剂盒
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溶血性曼氏杆菌白细胞毒素研究进展 被引量：11
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作者 张继鑫 彭远义 李能章 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1178-1182,共5页
溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是一种革兰氏阴性短杆菌,可作为常在菌定植于牛羊上呼吸道,但在应激条件下,能够引起牛呼吸道疾病综合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)、羊肺炎和新生羔羊急性败血症等多种牛羊... 溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是一种革兰氏阴性短杆菌,可作为常在菌定植于牛羊上呼吸道,但在应激条件下,能够引起牛呼吸道疾病综合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)、羊肺炎和新生羔羊急性败血症等多种牛羊疾病。溶血性曼氏杆菌病导致的临床病理变化以纤维素性渗出性肺炎、大叶性肺炎、胸膜肺炎为主,对牛羊养殖业造成了重大的经济损失,仅北美,Mh给肉牛养殖业造成的经济损失就高达数十亿美元[1]。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 急性败血症 大叶性肺炎 新生羔羊 胸膜肺炎 肉牛养殖业 白细胞毒素 常在菌
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溶血性曼氏杆菌PCR检测方法的研究 被引量：6
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作者 张培君 Jeanette Miflin +4 位作者 Pat Blackall 陈卓明 孙惠玲 龚玉梅 苗得园 《动物医学进展》 CSCD 2003年第4期73-76,共4页
溶血性曼氏杆菌是导致牛、羊呼吸道传染病的一种病原菌。为快速、准确诊断由本菌导致的疾病 ,从基因库中获得溶血性曼氏杆菌( M.haemolytica )的基因序列 ,再从其基因序列中获得与其它细菌包括 M.annheimiagranulomatis,M.varigena ,M.r... 溶血性曼氏杆菌是导致牛、羊呼吸道传染病的一种病原菌。为快速、准确诊断由本菌导致的疾病 ,从基因库中获得溶血性曼氏杆菌( M.haemolytica )的基因序列 ,再从其基因序列中获得与其它细菌包括 M.annheimiagranulomatis,M.varigena ,M.ruminalis,M.glucosidal ,M.annheimiaspp和多杀性巴氏杆菌等不同的基因片段 ,设计成引物 ,建立了特异性好、敏感性高的 M.haemolytica PCR检测方法。结果表明 ,除溶血性曼氏杆菌为阳性外 ,其余所有细菌均为阴性 ,特异性为 1 0 0 % ,最小检出量为 8× 1 0 2 cfu/ m L 曼氏杆菌或 1 / 1 0个单个菌落。检验人工感染牛 ,检出率为 75%。此PCR检测方法的建立 ,为 M. 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 PCR检测方法 牛 羊 呼吸道 传染病 病原菌 基因序列
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绵羊肺炎支原体和溶血性曼氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用 被引量：9
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作者 冯旭飞 王远微 +1 位作者 李定霏 杨发龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期788-791,共4页
为建立同时检测绵羊肺炎支原体(MO)和溶血性曼氏杆菌(Mh)的方法,本研究根据MO的hsp70基因和Mh的gcp基因分别设计引物,建立了同时检测这两种病原的双重PCR检测方法。实验结果显示该方法能够特异性的扩增MO(135 bp)和Mh(227 bp)DNA片段,... 为建立同时检测绵羊肺炎支原体(MO)和溶血性曼氏杆菌(Mh)的方法,本研究根据MO的hsp70基因和Mh的gcp基因分别设计引物,建立了同时检测这两种病原的双重PCR检测方法。实验结果显示该方法能够特异性的扩增MO(135 bp)和Mh(227 bp)DNA片段,其最低检出量分别为2.06×103拷贝/μL和6.37 cfu/mL,与单一PCR相同。该方法对常见的致病菌无交叉反应。对临床样本的检测结果显示MO和Mh的检出率分别为56.25%和52.50%,与单独PCR符合率为100%。研究结果表明,本研究所建立的双重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高等特点,为临床上MO和Mh混合感染的快速检测、鉴定以及流行病学调查提供了方便、快捷、准确的方法。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 溶血性曼氏杆菌 双重PCR
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