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溶组织梭菌胶原酶H在大肠杆菌中的分泌表达
1
作者
赵钱山
刘晓
李素霞
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期797-805,共9页
溶组织梭菌Clostridium histolyticum胶原酶H(ColH)作用于胶原蛋白的Y-Gly处,将其水解成小分子肽。通过在colH基因中融合大肠杆菌外膜蛋白A的信号肽序列,成功构建了分泌高分子量的ColH(116 kDa)的菌株,结果发现信号肽在N端的位置影响其...
溶组织梭菌Clostridium histolyticum胶原酶H(ColH)作用于胶原蛋白的Y-Gly处,将其水解成小分子肽。通过在colH基因中融合大肠杆菌外膜蛋白A的信号肽序列,成功构建了分泌高分子量的ColH(116 kDa)的菌株,结果发现信号肽在N端的位置影响其分泌效果,N端若有多余的氨基酸片段会显著降低信号肽引导胶原酶的分泌功能。通过正交试验与单因素实验对诱导条件和培养基添加剂优化提高其分泌表达量,结果表明:在诱导温度为25℃、诱导菌浓OD=0.9、IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)浓度为0.1 mmol/L、装液量为20%,镁离子浓度为10 mmol/L,诱导2.5 h后添加w为2%甘氨酸、诱导培养20 h,胞外胶原酶活性最高为0.68 U/mL,是优化前酶活的38.1倍,显著提高了分泌表达量。研究结果还表明,镁离子的添加可增加ColH的胞外分泌。
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关键词
溶组织梭菌胶原酶h
正交实验
信号肽
镁离子
分泌表达
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职称材料
题名
溶组织梭菌胶原酶H在大肠杆菌中的分泌表达
1
作者
赵钱山
刘晓
李素霞
机构
华东理工大学生物反应器国家重点实验室
上海雅心生物技术有限公司
出处
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期797-805,共9页
文摘
溶组织梭菌Clostridium histolyticum胶原酶H(ColH)作用于胶原蛋白的Y-Gly处,将其水解成小分子肽。通过在colH基因中融合大肠杆菌外膜蛋白A的信号肽序列,成功构建了分泌高分子量的ColH(116 kDa)的菌株,结果发现信号肽在N端的位置影响其分泌效果,N端若有多余的氨基酸片段会显著降低信号肽引导胶原酶的分泌功能。通过正交试验与单因素实验对诱导条件和培养基添加剂优化提高其分泌表达量,结果表明:在诱导温度为25℃、诱导菌浓OD=0.9、IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)浓度为0.1 mmol/L、装液量为20%,镁离子浓度为10 mmol/L,诱导2.5 h后添加w为2%甘氨酸、诱导培养20 h,胞外胶原酶活性最高为0.68 U/mL,是优化前酶活的38.1倍,显著提高了分泌表达量。研究结果还表明,镁离子的添加可增加ColH的胞外分泌。
关键词
溶组织梭菌胶原酶h
正交实验
信号肽
镁离子
分泌表达
Keywords
Clostridium
h
istolyticum collagenase
h
ort
h
ogonal experiment
signal peptide
magnesium ion
secretory expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
溶组织梭菌胶原酶H在大肠杆菌中的分泌表达
赵钱山
刘晓
李素霞
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022
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