联合应用活体染料CFDA-SE和SNARF-1检测混合淋巴细胞反应 被引量：8

1

作者 肇静娴 曾耀英 +1 位作者 刘毅 何贤辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期382-384,387,共4页

目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进... 目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进行混合培养。混合培养96h后收获细胞,用流式细胞术进行检测,分析SNARF-1-CFSE+应答细胞的增殖情况,并用ModFitTM软件拟和以获得更多增殖相关指数。结果随着应答细胞分裂代数的增加,CFSE荧光强度逐渐减弱直至与刺激细胞无法分开,通过划除SNARF-1阳性细胞以确定应答细胞,解决了这一问题。应用ModFitTM软件,获得应答细胞的前体频率和增殖指数等多项重要的增殖相关指标。结论联合应用CFSE和SNARF-1染色,结合流式细胞术,可作为评价混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度的有力工具。 展开更多

关键词 CFDA-SE SNARF-1 混合淋巴细胞反应 增殖

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HCV C-Fc基因转染的小鼠树突状细胞促进混合淋巴细胞反应的作用 被引量：3

2

作者 王全楚 冯志华 +2 位作者 周永兴 聂青和 白雪帆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期301-303,共3页

目的 :观察HCVC Fc基因电穿孔法转染的小鼠树突状细胞(DC)功能的改变。方法 :分离小鼠骨髓单个核细胞与rmGM CSF和rmIL 4培养 1wk,对培养的细胞进行形态学观察 ,并用FACS检测细胞表面DEC2 0 5的表达。以通过质粒pcD NA3HCVC Fc电穿孔法... 目的 :观察HCVC Fc基因电穿孔法转染的小鼠树突状细胞(DC)功能的改变。方法 :分离小鼠骨髓单个核细胞与rmGM CSF和rmIL 4培养 1wk,对培养的细胞进行形态学观察 ,并用FACS检测细胞表面DEC2 0 5的表达。以通过质粒pcD NA3HCVC Fc电穿孔法转染培养的DC ,用间接免疫荧光染色测定转染细胞中HCVC Fc的水平 ;用混合淋巴细胞反应检测电穿孔法转染细胞的功能。结果 :培养 1wk后 ,得到具有典型DC形态的细胞 ,以质粒pcDNA3HCVC Fc为载体电穿孔法转染DC后 ,转染细胞中可检测到较高水平的HCVC Fc。与对照组相比较以电穿孔法转染的细胞能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论 :小鼠骨髓单个核细胞加GM CSF和IL 4培养 1wk ,可生成大量的DC。质粒pcDNA3HCVC Fc转染培养的DC对T细胞刺激作用显著增强。 展开更多

关键词 小鼠树突状细胞 电转染 混合淋巴细胞反应 HCV C—Fc基因

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小鼠骨髓来源树突状细胞培养鉴定和诱导T淋巴细胞增殖 被引量：8

3

作者 吴昆 拜合提亚.阿扎提 +2 位作者 王文光 安尼瓦尔.牙生 王玉杰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1128-1133,共6页

目的:建立一种体外诱导培养小鼠树突状细胞(DCs)的方法,并观察其不同生长阶段生物学形态及刺激淋巴细胞增殖的能力。方法:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)诱导培养小鼠骨髓单个核细胞向DCs分化,并从... 目的:建立一种体外诱导培养小鼠树突状细胞(DCs)的方法,并观察其不同生长阶段生物学形态及刺激淋巴细胞增殖的能力。方法:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)诱导培养小鼠骨髓单个核细胞向DCs分化,并从形态学、表型及功能方面对其加以检测。结果:用GM-CSF和IL-4诱导培养小鼠骨髓来源的单核细胞,3 d后可见细胞形态改变,并呈集簇生长,培养至5 d可见典型的树突状突起,体外诱导培养8 d后获得大量成熟的DCs,扫描电镜可见典型的树突状细胞形态,高表达骨髓来源DCs特异性标记CD11c和共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ,成熟DC具有很强的刺激同基因型和同种异基因型T淋巴细胞增殖的能力。结论:小鼠骨髓来源的单个核细胞体外诱导培养可生成大量成熟的DCs,为进一步抗肿瘤疫苗的实验研究奠定了基础。 展开更多

关键词 树突状细胞 细胞培养 混合淋巴细胞反应 肿瘤疫苗

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染料木黄酮与环孢菌素A联合用药对小鼠淋巴细胞体外免疫应答的影响 被引量：1

4

作者 叶雪仪 曾耀英 +4 位作者 肇静娴 狄静芳 贺芳 周建国 赵令斋 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期322-326,共5页

研究染料木黄酮(Gen)与环孢菌素A(CsA)联合用药对小鼠体外淋巴细胞增殖、周期及混合淋巴细胞反应的影响,从而为将Gen开发为免疫干预药物以降低CsA的临床用量提供理论依据.以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠淋巴细胞增殖,通过CFDA-SE染色流式细... 研究染料木黄酮(Gen)与环孢菌素A(CsA)联合用药对小鼠体外淋巴细胞增殖、周期及混合淋巴细胞反应的影响,从而为将Gen开发为免疫干预药物以降低CsA的临床用量提供理论依据.以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠淋巴细胞增殖,通过CFDA-SE染色流式细胞术检测荧光强度的变化,用相关软件分析其增殖指数;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期的分布情况;MTT法测定体外混合淋巴细胞反应(MLR).结果显示,细胞培养48 h后,ConA诱导下小鼠淋巴细胞与空白对照组相比有明显增殖(P<0.01),5、10μmol/L Gen以及0.02μmol/L CsA均可抑制这种增殖作用,二者联合用药后,这种抑制增殖的作用加强(P<0.01).对细胞周期分析显示,Gen和CsA抑制细胞由G0/G1期向S期转化.MTT法测定的结果显示,二者联合用药后Q值分别为1.82、1.39,对MLR呈协同抑制效应.以上结果表明与单剂量Gen、CsA相比,二者联合使用对ConA诱导的淋巴细胞增殖、细胞周期的阻滞、体外混合淋巴细胞反应的抑制作用更加明显,呈协同效应. 展开更多

关键词 染料木黄酮 环孢菌素A 增殖 周期 混合淋巴细胞反应

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重组人CTLA4Ig融合蛋白体外对人T淋巴细胞功能的影响 被引量：1

5

作者 周倩 钱卫珠 +6 位作者 寇庚 王皓 刘彦君 李晓冬 吴孟超 郭亚军 陈列平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期165-168,共4页

目的　研究重组人CTIA4Ig对人T淋巴细胞功能的影响。方法　采用初次混合淋巴细胞培养、再次混合淋巴细胞培养及细胞毒实验的方法。结果　CTLA4Ig在浓度高于3mg·L-1时能有效地抑制初次混合淋巴细胞反应 (P <0 0 5 ) ,其在作用 2... 目的　研究重组人CTIA4Ig对人T淋巴细胞功能的影响。方法　采用初次混合淋巴细胞培养、再次混合淋巴细胞培养及细胞毒实验的方法。结果　CTLA4Ig在浓度高于3mg·L-1时能有效地抑制初次混合淋巴细胞反应 (P <0 0 5 ) ,其在作用 2 4h内不能发挥有效的抑制作用 ,72h能达最大抑制效率 ;在再次混合淋巴细胞反应实验中CT LA4Ig作用后的T淋巴细胞对同一供者的外周血单核细胞的刺激表现出特异性无反应 ,而对无关供者的外周血单核细胞的刺激能产生正常的应答反应。结论　CTLA4Ig在体外能抑制T细胞的增殖 。 展开更多

关键词 CTLA4IG 人T细胞 混合淋巴细胞反应

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骨髓间充质干细胞对致敏小鼠淋巴细胞增殖的影响及其作用方式

6

作者 洪冬玲 吴燕峰 +1 位作者 许吕宏 方建培 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期1209-1213,共5页

本研究探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)在体外对致敏小鼠淋巴细胞增殖的影响及其作用方式,以便进一步了解MSC对致敏小鼠影响的可能机制。建立致敏模型后,将应用贴壁培养法体外培养的正常小鼠骨髓MSC或其培养上清液作... 本研究探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)在体外对致敏小鼠淋巴细胞增殖的影响及其作用方式,以便进一步了解MSC对致敏小鼠影响的可能机制。建立致敏模型后,将应用贴壁培养法体外培养的正常小鼠骨髓MSC或其培养上清液作为免疫细胞或免疫因子,致敏小鼠的淋巴细胞作为效应细胞,用植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激淋巴细胞增殖,在体外应用MTT法检测两者的混合淋巴细胞增殖反应。结果表明,正常小鼠骨髓MSC在体外能很好地抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖,同时在MSC培养上清液也能观察到类似现象,而且随着两者细胞比例或浓度比的增大,抑制作用有所加大,当两者比例为1∶1时抑制作用最大(有明显的统计学意义)。结论:MSC能在体外明显抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖,该作用可以通过细胞与细胞(MSC和淋巴细胞)直接接触抑制,也可通过细胞与细胞的间接作用(如MSC的培养上清液与淋巴细胞)方式发挥作用。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 致敏小鼠 混合淋巴细胞反应

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自体树突状细胞疫苗诱导胃癌患者术后肿瘤特异性免疫反应的作用 被引量：7

7

作者 汪灏 余佩武 +4 位作者 赵永亮 石彦 吴淼 曾冬竹 蔡志民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期408-410,共3页

目的探讨胃癌术后患者应用树突状细胞(dendriticcells,DCs)疫苗治疗后机体肿瘤特异性免疫反应的变化。方法采用外周血单个核细胞及自体肿瘤抗原在体外制备DCs疫苗,皮下注射胃癌术后患者,每周1次,共治疗4次。在治疗前后相应各时相点检测... 目的探讨胃癌术后患者应用树突状细胞(dendriticcells,DCs)疫苗治疗后机体肿瘤特异性免疫反应的变化。方法采用外周血单个核细胞及自体肿瘤抗原在体外制备DCs疫苗,皮下注射胃癌术后患者,每周1次,共治疗4次。在治疗前后相应各时相点检测针对自体肿瘤抗原的迟发性超敏反应(delayedtypehypersensitivity,DTH),外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应(mixedlymphocytereacion,MLR)及细胞上清IFNγ及IL4的水平。结果疫苗治疗后可以明提高外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应的强度。治疗前及治疗后第2、4、8周患者外周血单核细胞(peripheralbloodmonocytecell,PBMC)分泌IFNγ的水平分别为(184±20)、(467±55)、(700±88)、(257±38)pg/ml,各组差异显著;而分泌IL4的水平分别为(66±8)、(69±9)、(66±7)、(61±7)pg/ml。各组之间无明显变化。有16例疫苗注射后患者DTH反应呈阳性。结论树突状细胞疫苗可改善胃癌术后患者免疫功能状态,并诱导出了肿瘤特异性的免疫反应。 展开更多

关键词 树突状细胞 胃肿瘤 混合淋巴细胞反应

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人外周血单核细胞体外诱导树突状细胞及鉴定 被引量：14

8

作者 谢芳艺 姚堃 +2 位作者 王胜军 彭光勇 季晓辉 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期111-114,共4页

目的 :建立从人外周血单核细胞体外诱导培养树突状细胞 ( dendritic cell,DC)的方法。方法 :分离人外周血单个核细胞 ,以细胞因子粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 ( GM- CSF)、白细胞介素 - 4 ( IL- 4 )、肿瘤坏死因子 α( TNF- α)诱导... 目的 :建立从人外周血单核细胞体外诱导培养树突状细胞 ( dendritic cell,DC)的方法。方法 :分离人外周血单个核细胞 ,以细胞因子粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 ( GM- CSF)、白细胞介素 - 4 ( IL- 4 )、肿瘤坏死因子 α( TNF- α)诱导培养获得 DC,电镜及共聚焦显微镜观察其形态 ,流式细胞术检测细胞表面抗原 ,体外同种混合淋巴细胞反应检测 DC刺激 T细胞的增殖活性。结果 :从正常外周血分离得到的单核细胞 ,体外经重组人 GM- CSF、IL - 4、TNF-α的共同诱导培养 ,得到大量成熟 DC。形态学观察可见典型 DC特征 ;荧光激活细胞分离器 ( FACS)检测表明 ,诱导的 DC高表达 HL A- DR( 96 % )、CD83( 94.2 % )、CDla( 94.2 % )分子 ,同时也高表达 CD40 ( 97.7% )、CD80 ( 98.2 % )分子。同种混合淋巴细胞反应显示 ,诱导的 DC具有很强的激发同种 T细胞增殖的能力。结论 :人外周血单核细胞体外经细胞因子贯序诱导培养 ,可以生成大量功能成熟的 DC,为进一步开展 DC的基础研究和临床应用提供了可能。 展开更多

关键词 树突状细胞 单核细胞 细胞因子 混合淋巴细胞反应 鉴定

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IKK2dn体外转染对大鼠树突状细胞成熟度的影响 被引量：3

9

作者 欧阳骏 樊一笋 +4 位作者 樊彩斌 温端改 侯建全 严春寅 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期745-747,750,共4页

目的:探讨腺病毒介导IKK2dn基因(Adv-IKK2dn)体外转染大鼠树突状细胞(DCs)对其生物学行为的影响。方法:将含有IKK2dn基因的腺病毒载体转染大鼠骨髓源性DCs,获得稳定高表达IKK2dn的DCs。流式细胞术(FCM)分析转染IKK2dn基因DCs的表型变化... 目的:探讨腺病毒介导IKK2dn基因(Adv-IKK2dn)体外转染大鼠树突状细胞(DCs)对其生物学行为的影响。方法:将含有IKK2dn基因的腺病毒载体转染大鼠骨髓源性DCs,获得稳定高表达IKK2dn的DCs。流式细胞术(FCM)分析转染IKK2dn基因DCs的表型变化,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激同种T细胞增殖的能力,ELISA测定MLR上清IL-10和IFN-γ水平。结果:Westernblot结果显示,转染pAdxsi-GFP-IKK2dn病毒质粒的DCs稳定表达IKK2dn。转染IKK2dn基因的DCs与未转基因的DCs相比,表面CD86和MHC-II的表达水平无显著差异。和负载BN大鼠抗原的未转染IKK2dn的DCs相比,转染IKK2dn并负载BN抗原的DCs刺激同种T细胞增殖能力显著下降(P<0.01),MLR上清中IL-10水平升高(P<0.01),而IFN-γ水平降低(P<0.01)。结论:IKK2dn基因的转染能使DCs维持于未成熟状态。同时,负载BN抗原的转IKK2dn基因的DCs可以抑制同种T细胞增殖反应,为诱导体内免疫耐受提供了实验依据。 展开更多

关键词 IKK2dn 树突状细胞 混合淋巴细胞反应 BN抗原

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应用流式细胞术动态观测小鼠树突状细胞诱导的T细胞增殖的变化 被引量：3

10

作者 崔自由 黄幼田 +5 位作者 赵继敏 赵军 路静 赵国强 赵明耀 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第5期822-824,共3页

目的:运用流式细胞术(FCM)分析小鼠混合淋巴细胞反应(MLR)中T细胞增殖的动态变化。方法:把分别经脂多糖(LPS)和生理盐水(NS)刺激的小鼠树突状细胞(DC)经H22肿瘤细胞抗原肽冲击后,以1:50的比例与小鼠T细胞(TC)进行同种MLR,分别作为LPS+DC... 目的:运用流式细胞术(FCM)分析小鼠混合淋巴细胞反应(MLR)中T细胞增殖的动态变化。方法:把分别经脂多糖(LPS)和生理盐水(NS)刺激的小鼠树突状细胞(DC)经H22肿瘤细胞抗原肽冲击后,以1:50的比例与小鼠T细胞(TC)进行同种MLR,分别作为LPS+DC+TC组和NS+DC+TC组,同时设LPS+TC组和空白TC对照组。经体外培养,分别于反应的第0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d收集TC,FCM检测TC细胞周期。结果:随培养时间的延长,LPS+DC+TC组、NS+DC+TC组S期细胞及细胞增殖指数均先增后减、LPS+TC组和空白TC对照组则呈下降趋势(P<0.05),各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FCM可以从单细胞水平客观、准确地反映淋巴细胞增殖的动态变化。 展开更多

关键词 混合淋巴细胞反应 流式细胞术 细胞周期 树突状细胞 小鼠

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树突状细胞与血液系统肿瘤免疫治疗研究进展 被引量：4

11

作者 邓旻 窦晓兵 史亦谦 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期185-188,共4页

关键词 树突状细胞 肿瘤免疫治疗 血液系统 混合淋巴细胞反应 抗原提呈细胞 抗肿瘤免疫 cell 小鼠脾脏

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酪蛋白糖巨肽通过树突细胞发挥免疫调节作用的初步研究 被引量：5

12

作者 李荣华 庞广昌 陈庆森 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第21期233-242,共10页

研究用酪蛋白糖巨肽(CGMP)刺激体外培养的小鼠骨髓源树突细胞,观察CGMP对树突细胞成熟的影响,初步探讨CGMP作为功能性食品对免疫的调节作用。实验选用6～8周雄性C57BL/6小鼠,分离培养小鼠骨髓细胞,用重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)、重... 研究用酪蛋白糖巨肽(CGMP)刺激体外培养的小鼠骨髓源树突细胞,观察CGMP对树突细胞成熟的影响,初步探讨CGMP作为功能性食品对免疫的调节作用。实验选用6～8周雄性C57BL/6小鼠,分离培养小鼠骨髓细胞,用重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)、重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导其分化,在培养的第6天,分别加入RPMI1640完全培养基作为空白对照,脂多糖(LPS)为阳性对照和0.1、1、10μg/mL的CGMP 3个实验剂量。培养至第8天收集细胞,进行三色荧光标记,用流式细胞仪检测细胞表面标志:CD11c、CD80、CD86、MHC-Ⅱ。另一方面将第8天的树突状细胞(DCs)和T淋巴细胞共孵育进行混合淋巴细胞反应,96h后用CellCounting Kit-8(CCK-8)检测T淋巴细胞的增殖。结果表明:3个剂量的CGMP均具有刺激DCs成熟的作用,其中CGMP为1μg/mL时,DCs的各种成熟标志均达到最高水平,其中,CGMP对MHC-Ⅱ的刺激作用最为强烈,而MHC-Ⅱ在DCs对外源抗原的提呈中发挥重要作用;混合淋巴细胞反应结果显示各个不同浓度CGMP作用的DCs均具有不同程度的刺激T淋巴细胞增殖的能力,并且DCs:T为1:10时T淋巴细胞的增殖作用最明显。 展开更多

关键词 酪蛋白糖巨肽 树突状细胞 流式细胞仪 抗原提呈 混合淋巴细胞反应

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树突状细胞表面共刺激分子在哮喘小鼠中的作用研究 被引量：2

13

作者 吴剑卿 许伟 +1 位作者 孙芸 殷凯生 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期31-35,共5页

目的:研究哮喘小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)的表型及共刺激分子在哮喘发病中的影响。方法:用卵清蛋白建立哮喘模型,利用rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导骨髓细胞分化为DCs,流式细胞仪检测DCs表面共刺激分子的表达,混合淋巴细胞反应检测DCs刺... 目的:研究哮喘小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)的表型及共刺激分子在哮喘发病中的影响。方法:用卵清蛋白建立哮喘模型,利用rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导骨髓细胞分化为DCs,流式细胞仪检测DCs表面共刺激分子的表达,混合淋巴细胞反应检测DCs刺激同种异体的T淋巴细胞增殖的能力。结果:在两种细胞因子的作用下,从骨髓中可以诱导出大量的DCs;且均表达DCs的表面标志(33D1)。哮喘组DCs表达CD86分子的水平高于对照组,而CD40、CD80在两组之间没有差异;哮喘组与对照组DCs均能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的增殖,哮喘组DCs的刺激能力明显强于对照组。结论:哮喘组DCs的抗原递呈能力增强,表明DCs在哮喘的发病中可能起着重要作用。 展开更多

关键词 哮喘 树突状细胞 B7 CD40 混合淋巴细胞反应

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大鼠骨髓来源树突状细胞体外培养体系的优化 被引量：2

14

作者 汪国营 张琪 +5 位作者 刘炜 陈文捷 李敏如 李团结 陈伟 陈规划 《器官移植》 CAS 2011年第3期135-140,共6页

目的探讨优化大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)体外培养体系的方法。方法应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant rat GM-CSF,rrGM-CSF)20μg/L和重组大鼠白介素(recombinant rat interleukin,rrIL)-410μg/L诱导分化Lewis大... 目的探讨优化大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)体外培养体系的方法。方法应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant rat GM-CSF,rrGM-CSF)20μg/L和重组大鼠白介素(recombinant rat interleukin,rrIL)-410μg/L诱导分化Lewis大鼠骨髓单个核细胞,获得未成熟DC(immature DC,imDC)。第6日加入终含量为100μg/L的脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激细胞成为成熟DC(mature DC,mDC)。用倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术鉴定细胞表型、双抗夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测DC培养上清液中白介素(IL)-12、IL-10的含量,并以Brown Norway大鼠脾脏T淋巴细胞为反应细胞,做混合淋巴细胞反应检测,观察DC刺激T淋巴细胞增殖能力。结果经细胞形态学、流式细胞术及混合淋巴细胞反应三方面鉴定,证实所培养细胞为DC。体外培养第6日,见大量增殖细胞集落,细胞高表达OX62。LPS刺激细胞后,细胞伪足样突起明显增多,细胞逐渐呈半悬浮、悬浮生长,细胞表面高表达主要组织相容性抗原复合体(MHC)Ⅱ类分子和共刺激分子(CD40、CD86)。与imDC比较,mDC分泌IL-10和IL-12显著增加,刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力显著提高。结论通过采用调整rrGM-CSF和rrIL-4的用量等方法优化体外培养体系诱导大鼠骨髓单个核细胞,可分化出大量骨髓源性DC。 展开更多

关键词 树突状细胞 重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 重组大鼠白介素-4 脂多糖 混合淋巴细胞反应 细胞培养

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大鼠骨髓来源树突状细胞外泌体的提取及功能研究 被引量：2

15

作者 孟松 杨晓俊 +3 位作者 徐皓 朱春富 姜红 吴文溪 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期324-327,333,共5页

目的:探讨在不同成熟状态下树突状细胞(dendritic cell,DC)分泌的外泌体(exosomes,Dex)的制备、提取及体外功能鉴定。方法:F344大鼠骨髓来源DC培养6后分为2组,一组为未成熟树突状细胞组(immature DC,imDC):直接收集上清;一组为成熟树突... 目的:探讨在不同成熟状态下树突状细胞(dendritic cell,DC)分泌的外泌体(exosomes,Dex)的制备、提取及体外功能鉴定。方法:F344大鼠骨髓来源DC培养6后分为2组,一组为未成熟树突状细胞组(immature DC,imDC):直接收集上清;一组为成熟树突状细胞组(mature DC,mDC):每孔加入终浓度为1μg/ml的LPS培养48h后,收集上清。然后用多步离心法分离得到Dex,流式细胞术检测两组Dex的表型,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测两组Dex与Wistar大鼠骨髓来源的imDC共培养上清的白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12p70)的含量,混合淋巴细胞实验(MLR)检测共培养DCs刺激T细胞增殖能力。结果:与mDC分泌的exosomes相比,imDC分泌的exosomes表面中度表达MHC-Ⅱ类分子、低表达CD80、CD86、CD40共刺激分子,而且与Wistar大鼠骨髓来源的imDC共培养后刺激IL-12p70分泌能力较低(P<0.05),刺激T淋巴细胞增殖的能力也较mDC分泌的exosomes组弱(P<0.05)。结论:不同成熟状态下的DC分泌的exosomes功能各异,可能在宿主的免疫反应中发挥不同的作用。 展开更多

关键词 树突状细胞 外泌体 混合淋巴细胞反应 免疫反应

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未成熟树突细胞诱导同种免疫低应答性的研究 被引量：5

16

作者 叶闻斐 何球藻 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期578-580,共3页

目的 :证实缺少辅助刺激分子的未成熟树突细胞 (DC)在体外诱导同种T细胞的低应答性。方法 :应用骨髓微血管内皮细胞作为饲养细胞扩增同品系小鼠骨髓细胞 ,经不同浓度GM CSF作用 ,在体外培养出不同发育阶段的DC。采用初次和再次单向混合... 目的 :证实缺少辅助刺激分子的未成熟树突细胞 (DC)在体外诱导同种T细胞的低应答性。方法 :应用骨髓微血管内皮细胞作为饲养细胞扩增同品系小鼠骨髓细胞 ,经不同浓度GM CSF作用 ,在体外培养出不同发育阶段的DC。采用初次和再次单向混合淋巴细胞培养方法观察Balb c小鼠脾脏T细胞对同种未成熟DC或脾细胞的应答能力。结果 :在初次MLR试验中 ,Balb cT细胞对C5 7BL 6小鼠未成熟DC刺激只呈现出微弱的增殖反应 ,SI =2 84± 0 6 0 ,明显低于对相应品系鼠成熟DC或脾细胞的增殖反应 (SI分别为 15 72± 6 49,6 5 7± 2 85 ) ;在再次MLR系统中 ,经未成熟DC预处理的Balb cT细胞对C5 7BL 6来源的脾脏细胞只发生低应答反应 (SI=1 2 9± 0 19) ,而对无关品系AKR的脾脏细胞仍显示较高的增殖能力 (SI=10 6 4±1 89)。结论 :缺乏辅助刺激分子的未成熟DC在体外MLR系统中诱导出同种Balb c小鼠T细胞免疫低应答性。 展开更多

关键词 树突细胞 同种免疫 低应答性 混合淋巴细胞反应

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蛋白酶体抑制剂MG132诱导髓系白血病细胞HL-60细胞凋亡机制的研究 被引量：1

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作者 周咏明 余美霞 +3 位作者 邱宇珍 刑晓磊 姚春红 白如君 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期911-915,共5页

本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞的凋亡、凋亡途径及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞术检测MG132诱导HL-60细胞凋亡、阻断caspase-8和caspase-9通路、MG132诱导HL-60细胞凋亡的变化;Western blot检测MG132作用于HL-6... 本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞的凋亡、凋亡途径及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞术检测MG132诱导HL-60细胞凋亡、阻断caspase-8和caspase-9通路、MG132诱导HL-60细胞凋亡的变化;Western blot检测MG132作用于HL-60细胞后P21、P27和P53蛋白的表达;应用75 Gy照射经MG132作用的HL-60细胞,然后用CCK-8检测HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果表明:大剂量MG132可诱导HL-60细胞凋亡;阻断caspase-8和caspase-9通路后MG132诱导HL-60细胞的凋亡无明显变化,P21蛋白、P27蛋白在MG132作用于HL-60细胞后表达升高,小剂量MG132诱导的HL-60细胞对健康人单个核细胞有增殖作用。结论:大剂量MG132诱导HL-60细胞凋亡,对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导的HL-60细胞凋亡不通过caqspase-8和caspase-9途径,P21和P27蛋白可能参与了MG132诱导的HL-60细胞凋亡,小剂量MG132促进健康人单个核细胞的增殖作用,提高机体的免疫性。 展开更多

关键词 蛋白酶体抑制剂 MG132 P21蛋白 P27蛋白 P53蛋白 混合淋巴细胞反应

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食管癌组织微环境对树突状细胞的影响 被引量：1

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作者 路静 刘康栋 +5 位作者 赵明耀 杨洪艳 黄幼田 秦珍珠 白睿华 董子明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1055-1058,共4页

目的:探讨食管癌组织匀浆上清液体外模拟肿瘤微环境对人树突状细胞(DC)分化发育的影响,揭示肿瘤免疫逃逸机制,为DC疫苗的应用提供理论基础。方法:制备新鲜食管癌及癌旁组织匀浆上清液,ELISA检测其VEGF-A含量。密度梯度离心法分离人外周... 目的:探讨食管癌组织匀浆上清液体外模拟肿瘤微环境对人树突状细胞(DC)分化发育的影响,揭示肿瘤免疫逃逸机制,为DC疫苗的应用提供理论基础。方法:制备新鲜食管癌及癌旁组织匀浆上清液,ELISA检测其VEGF-A含量。密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,含rhGM-CSF和rhIL-4RPMI1640培养液诱导DC,第2天在继续诱导DC基础上设食管癌匀浆上清组、癌旁匀浆上清组、VEGF-A组,均隔天半量换液,第4天加入食管癌细胞株EC9706抗原,第6天加入脂多糖,第8天收集各组细胞。观察DC形态,流式细胞术(FCM)检测免疫表型,RT-PCR检测CD1a表达,CCK-8检测T细胞增殖率及杀伤率。结果:食管癌组织匀浆上清VEGF-A含量[(0.987±0.319)μg/L]明显高于癌旁[(0.152±0.105)μg/L,P<0.05];食管癌匀浆上清组细胞形态明显受到抑制,CD86分子阳性率(%)与正常DC相比由69±8降为42±11、CD1a由56±12降为27±12、CD11c由21±13降为18±13(P<0.01),CD1a基因几乎无表达,刺激T细胞增殖率(%)由112.5±7.2降为70.2±3.5(P<0.01),杀伤率(%)由62.4±0.6降为46.8±1.6(P<0.01);癌旁匀浆上清液组、VEGF-A组结果与正常DC组无统计学意义。结论:食管癌组织匀浆上清液所模拟的微环境对DC的诱导分化及其功能有明显的抑制作用,在该抑制作用中VEGF-A并不起主要作用。 展开更多

关键词 食管肿瘤 树突状细胞 匀浆上清 混合淋巴细胞反应 细胞毒性T细胞

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人K562白血病细胞来源的树突状细胞低温冻存方法的研究 被引量：1

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作者 孟冬梅 赵春亭 +2 位作者 王宝中 杨颉 陈兵 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期788-792,共5页

本研究的目的是探讨经低温保存的树突状细胞 (dendriticcell,DC)的生物学特性 ,寻找一种较为简便有效的冻存方式 ,为DC的临床过继回输提供保存方法。将由K5 62细胞诱导培养产生的DC(K5 62 DC) ,用含 10 %二甲亚砜 (DMSO)及 2 0 %胎牛血... 本研究的目的是探讨经低温保存的树突状细胞 (dendriticcell,DC)的生物学特性 ,寻找一种较为简便有效的冻存方式 ,为DC的临床过继回输提供保存方法。将由K5 62细胞诱导培养产生的DC(K5 62 DC) ,用含 10 %二甲亚砜 (DMSO)及 2 0 %胎牛血清 (FCS)的RPMI 1640作为冻存剂 ,利用分步法分别将其冻存于 - 80℃冰箱及- 196℃液氮中 ,然后于不同时间将K5 62 DC复苏 ,复苏后检测两组细胞的存活率、表面分子表达、刺激指数及其介导CTL对K5 62细胞的杀伤率 ,比较冻存前后及两组间的差异。结果发现 ,冻存前后K5 62 DC (K5 62 DC于- 80℃或液氮冻存 1月 )细胞形态无明显变化 ,表面分子表达及刺激T细胞增殖的能力无明显差别 (P >0 .0 5 )。此外 ,在 - 80℃冰箱及 - 196℃液氮中冻存的K5 62 DC ,在冻存后 1月以内复苏 ,细胞的存活率、刺激T细胞增殖的能力及其介导的杀伤效应无差别 ;但当冻存时间超过 1月时 ,两组间有明显差别。结论 ,两种冻存方式冻存K5 62 DC ,冻存时间较短时 ( 1月以内 ) ,其刺激淋巴细胞及其介导CTL的杀伤能力相同 ;冻存时间较长时 ( >1月 ) ,- 196℃液氮效果明显优于 - 80℃超低温冰箱。 展开更多

关键词 K562细胞 树突状细胞 冷冻保存 混合淋巴细胞反应

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骨髓增生异常综合征患者的间充质干细胞具有免疫抑制作用 被引量：1

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作者 张翼鷟 达万明 +2 位作者 黄文荣 高春记 郭博 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期302-305,共4页

本研究探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者间充质干细胞(MSC)的免疫抑制作用。采集MDS患者的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC,观察细胞形态并进行表型鉴定;将不同数量的细胞加入单相混合淋巴细胞反应(MLR),检测MSC对自体及采自健康供者的异... 本研究探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者间充质干细胞(MSC)的免疫抑制作用。采集MDS患者的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC,观察细胞形态并进行表型鉴定;将不同数量的细胞加入单相混合淋巴细胞反应(MLR),检测MSC对自体及采自健康供者的异体外周血淋巴细胞(PBL)增殖水平的影响。结果发现:3×103-1×105个源于MDS患者的MSC可将自体PBL的增殖抑制到最大反应的(66.9±20.1)% -(30.2±5.9)%,将异体PBL的增殖抑制到最大反应的(56.6±14.7)% -(20.5±9.7)%,与培养自健康供者MSC的抑制作用相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论: MDS患者的MSC和健康者的MSC具有相似的免疫抑制功能。 展开更多

关键词 骨髓增生异常综合征 间充质干细胞 免疫抑制 混合淋巴细胞反应

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