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靶向淋巴细胞激活基因3(LAG-3)纳米抗体的筛选与活性分析 被引量:2
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作者 文蕊鑫 陈玥雯 +3 位作者 杨紫薇 闫凤英 李卿 武卫党 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1024-1031,共8页
目的建立淋巴细胞激活基因3(LAG-3)免疫噬菌体纳米抗体文库,获得高特异性和亲和力的抗LAG-3纳米抗体,并鉴定其功能活性。方法采用人LAG-3蛋白免疫羊驼,获取外周血cDNA;通过巢式PCR获得纳米抗体基因,构建至pComb3XSS质粒,电转至大肠杆菌X... 目的建立淋巴细胞激活基因3(LAG-3)免疫噬菌体纳米抗体文库,获得高特异性和亲和力的抗LAG-3纳米抗体,并鉴定其功能活性。方法采用人LAG-3蛋白免疫羊驼,获取外周血cDNA;通过巢式PCR获得纳米抗体基因,构建至pComb3XSS质粒,电转至大肠杆菌XL1-Blue中构建纳米抗体噬菌体免疫文库,并对文库进行质量分析。通过噬菌体展示技术筛选抗LAG-3特异性纳米抗体,通过第二代基因测序技术获得纳米抗体的基因序列。将目的序列构建到大肠杆菌BL21(DE3)周质表达载体pET-22b(+)中进行抗体表达,Prism A柱进行纯化,通过高效液相色谱-质谱分析(HPLC-MS)、ELISA、Western blot法和表面等离子共振技术(SPR)进行抗体性质和功能分析。结果构建的纳米抗体噬菌体免疫文库的库容为7.20×10^(8)菌落形成单位(CFU),序列分析文库多样性良好,经过4轮淘筛后获得3条具有不同氨基酸序列的抗LAG-3纳米抗体,分别为重链抗体重链可变区结构域-L1-3(VHH-L1-3)、VHH-L3-2和VHH-L13-2,纳米抗体表达纯化后纯度在95%以上,三种抗体均可以与重组人LAG-3蛋白进行特异性结合;其中VHH-L13-2抗体的亲和力指数KD值为3.971×10^(-9)mol/L,且对于LAG-3和纤维蛋白原样蛋白1(FGL-1)的结合具有抑制作用,半数抑制浓度(IC_(50))值为15.58 nmol/L。结论成功构建了LAG-3纳米抗体噬菌体免疫文库,筛选获得了特异性好、亲和力高的LAG-3纳米抗体,且对于LAG-3与其配体的结合具有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 纳米抗体 淋巴细胞激活基因3(lag-3) 噬菌体展示技术 原核表达
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抗淋巴细胞激活基因3(LAG-3)全人源抗体的制备 被引量:4
2
作者 陈秀秀 于晓杰 +3 位作者 刘剑飞 吴成林 钦可为 周丽君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期451-456,共6页
目的淋巴细胞激活基因3(LAG-3)是一个极具潜力的肿瘤治疗靶点。本研究旨在从大容量全人源噬菌体抗体库中筛选抗LAG-3的单链抗体(scFv),将其转化为完整的全人源抗体。方法从全人源噬菌体抗体库,筛选抗LAG-3全人源噬菌体scFv,ELISA鉴定噬... 目的淋巴细胞激活基因3(LAG-3)是一个极具潜力的肿瘤治疗靶点。本研究旨在从大容量全人源噬菌体抗体库中筛选抗LAG-3的单链抗体(scFv),将其转化为完整的全人源抗体。方法从全人源噬菌体抗体库,筛选抗LAG-3全人源噬菌体scFv,ELISA鉴定噬菌体scFv的特异性,采用表面等离子共振技术(SPR)测定其亲和力,再通过真核表达系统获得抗LAG-3全人源完整抗体。结果通过3轮筛选富集,获得了4个具有特异结合活性的scFv。亲和力测定最高的达到3.48×10-10。再通过构建完整的抗LAG-3全人源抗体表达载体,经真核细胞表达、纯化后,获得了3株特异性抗LAG-3全人源抗体。结论利用大容量全人源噬菌体抗体库,成功筛选并表达出3种高亲和力和特异性的抗LAG-3全人源抗体。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 淋巴细胞激活基因3(lag-3) 人源抗体
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新型全人源LAG-3单克隆抗体LBL-007联合PD-1抗体通过NF-κB信号通路抑制肿瘤细胞增殖和侵袭迁移
3
作者 周慧男 刘剑飞 +2 位作者 吴成林 钦可为 周丽君 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期398-405,共8页
目的探究新型全人源淋巴细胞激活基因3(LAG-3)单克隆抗体LBL-007与程序性死亡蛋白1(PD-1)抗体对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法将活化的人淋巴细胞系Jurkat细胞与肿瘤细胞系A549、MGC803细胞共培养,并加入同型对照抗体人源... 目的探究新型全人源淋巴细胞激活基因3(LAG-3)单克隆抗体LBL-007与程序性死亡蛋白1(PD-1)抗体对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法将活化的人淋巴细胞系Jurkat细胞与肿瘤细胞系A549、MGC803细胞共培养,并加入同型对照抗体人源IgG、LBL-007、抗PD-1抗体BE0188以及核因子κB(NF-κB)信号通路激动剂肿瘤坏死因子α(TNF-α)进行干预。通过克隆形成实验检测各组肿瘤细胞增殖能力;Transwell^(TM)实验检测共培养后肿瘤细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测肿瘤细胞迁移能力;Western blot法检测肿瘤细胞NF-κB信号通路相关蛋白κB抑制因子激酶α(IKKα)、磷酸化的IKKα(p-IKKα)、核因子κB亚基(p65)、磷酸化的核因子κB亚基(p-p65)、人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化的IκBα(p-IκBα)和基质金属蛋白酶9(MMP9)、MMP2表达水平。结果与对照组和IgG同型对照组相比,LBL-007和BE0188显著降低共培养体系中肿瘤细胞增殖和侵袭迁移能力以及p-IKKα、p-p65、p-IKBα蛋白磷酸化水平和MMP9、MMP2表达水平,联合使用能增强抑制效果。NF-κB信号通路激动剂TNF-α处理可逆转LBL-007和BE0188对肿瘤细胞NF-κB信号通路和细胞的增殖和侵袭迁移能力的抑制作用。结论LBL-007和抗PD-1抗体通过阻断NF-κB信号通路联合抑制A549和MGC803肿瘤细胞侵袭迁移和增殖能力。 展开更多
关键词 免疫检查点 淋巴细胞激活基因3(lag-3) 核因子κB(NF-κB) 侵袭迁移
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LAG3分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响 被引量:1
4
作者 郑旭然 邓冰清 +9 位作者 康雪娇 李寅时 阿比旦·艾尼瓦尔 余倩 孜比姑·肉素 阿迪莱·多力坤 王茂林 王慧 张传山 李静 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期529-536,共8页
目的 探究淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyte activation gene-3,LAG3)分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响。方法 将野生型(C57-wild-type, WT)和LAG3基因敲除(LAG3-knockout, LAG3-KO)小鼠经肝门静脉注射泡球蚴原头节,... 目的 探究淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyte activation gene-3,LAG3)分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响。方法 将野生型(C57-wild-type, WT)和LAG3基因敲除(LAG3-knockout, LAG3-KO)小鼠经肝门静脉注射泡球蚴原头节,感染12周免疫组织化学染色观察小鼠肝脏CD19和α-SMA表达及定位,流式细胞术检测小鼠肝脏B细胞及其各亚群和表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子的表达情况。结果 泡球蚴感染12周小鼠肝脏LAG3-KO组CD19阳性区及面积占比略高于WT组,但差异均无统计学意义。α-SMA在LAG3-KO组阳性区及面积占比显著高于WT组(t=-3.224、-3.227,P均<0.05)。LAG3-KO组肝脏B细胞表达CD80和MHC-Ⅱ分子的比例显著上调,差异具有统计学意义(t=-2.379、-3.321,P均<0.05)。LAG3-KO组B2细胞占比显著高于WT组,差异有统计学意义(t=-2.695,P<0.05)。LAG3-KO组B1b细胞表达CD80比例亦显著上调,差异具有统计学意义(t=-5.315,P<0.001),而B2细胞表达CD80比例显著低于WT组,且差异具统计学意义(t=2.806,P<0.05)。LAG3-KO组B2细胞表达MHC-Ⅱ分子显著上调,且具统计学差异(t=-4.227,P<0.01)。结论 泡球蚴感染中期12周,LAG3分子影响小鼠肝脏B细胞亚群及功能,并以B2型淋巴细胞尤为显著,LAG3对B细胞的活化以及MHC-Ⅱ类分子表达产生抑制作用,提示其可能参与泡球蚴感染下的B细胞耗竭。 展开更多
关键词 泡球蚴 淋巴细胞活化基因-3 B细胞 B细胞亚群
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淋巴细胞活化基因-3敲除(Lag-3-/-)小鼠构建及初步表型分析 被引量:3
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作者 万颖寒 慈磊 +7 位作者 王珏 龚慧 万志鹏 奚骏 何敏珠 孙瑞林 费俭 沈如凌 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期49-57,共9页
目的构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析Lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续Lag-3体内功能研究提供动物模型。方法利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR... 目的构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析Lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续Lag-3体内功能研究提供动物模型。方法利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR和流式检测方法进一步验证Lag-3基因敲除小鼠体内Lag-3基因敲除效果;通过建立Con A诱导的肝损伤模型研究Lag-3基因在体内的功能。结果PCR和产物测序结果显示,获得了exon 2缺失的Lag-3基因敲除小鼠;该基因敲除纯合子小鼠(Lag-3-/-)经刀豆蛋白(Con A)刺激后,小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到Lag-3 mRNA本底表达信号,小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的Lag-3阳性细胞。表型分析发现,Lag-3基因的缺失显著减少了Con A诱导的小鼠外周血、骨髓和脾CD3+T细胞的数量,减轻了Con A诱发的急性肝损伤情况。结论成功构建Lag-3基因敲除小鼠模型,肝损伤过程中的体内功能研究显示,Lag-3缺失可以显著缓解Con A引发的肝损伤的发生。 展开更多
关键词 lag-3 CRISPR/Cas9 基因敲除 刀豆蛋白
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淋巴细胞活化基因3(LAG-3)在肿瘤免疫治疗与寄生虫病中的研究进展 被引量:3
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作者 李德伟 张传山 李静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期661-665,共5页
淋巴细胞活化基因3(LAG-3)为新型免疫检查点分子,主要表达于活化的T细胞与调节性T细胞(Treg)。受T细胞受体(TCR)和细胞因子诱导,LAG-3与主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)、纤维蛋白原样蛋白1等配体结合而激活,进而上调Treg功能、负调控TC... 淋巴细胞活化基因3(LAG-3)为新型免疫检查点分子,主要表达于活化的T细胞与调节性T细胞(Treg)。受T细胞受体(TCR)和细胞因子诱导,LAG-3与主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)、纤维蛋白原样蛋白1等配体结合而激活,进而上调Treg功能、负调控TCR信号转导并影响细胞因子分泌等降低机体免疫力,使病原体发生免疫逃逸。近年来,LAG-3因配体多样、表达广泛及作用突出而成为免疫治疗中较有潜力的新靶点。我们主要总结了LAG-3的结构、配体、作用以及在肿瘤免疫治疗及寄生虫病中的研究进展。 展开更多
关键词 淋巴细胞活化基因3(lag-3) 肿瘤 寄生虫 综述
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慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血CD8^+ T淋巴细胞表面淋巴细胞活化基因3水平升高 被引量:10
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作者 马晨芸 陆志成 +2 位作者 王克翔 别立翰 沈茜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期532-537,共6页
目的观察慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染处于不同自然史患者外周血T淋巴细胞表面淋巴细胞活化基因3(LAG-3)表达的变化,探讨抑制性受体LAG-3在T细胞的表达变化与处于不同自然史慢性HBV感染者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乙型肝炎病毒(HBV)e抗... 目的观察慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染处于不同自然史患者外周血T淋巴细胞表面淋巴细胞活化基因3(LAG-3)表达的变化,探讨抑制性受体LAG-3在T细胞的表达变化与处于不同自然史慢性HBV感染者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乙型肝炎病毒(HBV)e抗原(HBe Ag)和HBV DNA水平的关系。方法选取处于慢性HBV感染自然史为免疫耐受期(IT)患者24例、免疫清除期(IC)32例和非活动或低复制期(LR)患者31例,健康体检者30例为正常对照(HC)。应用流式细胞术检测外周血CD8+T细胞和CD4+T细胞表达LAG-3的比例;免疫分析法、生化分析法和PCR分别检测患者肝脏功能、HBV血清学标志物和HBV DNA水平。采用Mann-Whitney U检验分析各组间T细胞LAG-3表达率的差异;Spearman等级相关性分析各期慢性HBV感染患者外周血T细胞LAG-3表达阳性率与血清ALT、HBV DNA和HBe Ag水平的相关性。结果慢性HBV感染者外周血LAG-3+CD8+T细胞的比例较HC组显著增高,且处于IT期的患者外周血LAG-3+CD8+T细胞的比例明显高于IC期或LR期患者及HC组。处于IC期患者外周血LAG-3+CD8+T细胞和LAG-3+CD4+T细胞比例与患者血清中ALT水平呈显著负相关;IT组患者外周血LAG-3+CD8+T细胞和LAG-3+CD4+T细胞比例与血清中HBe Ag呈正相关。然而,不同自然史慢性HBV感染患者外周血LAG-3+CD4+T细胞比例和LAG-3+CD8+T细胞比例与血清HBV DNA水平无相关性。结论 LAG-3在慢性HBV感染患者外周血CD8+T细胞高表达,尤其是IT期患者CD8+T细胞高表达,可能是造成CD8+T细胞功能低下、HBV在肝脏长期复制的重要因素之一。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎病毒 淋巴细胞活化基因3(lag-3) T淋巴细胞 自然病程
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Bag3基因在慢性淋巴细胞白血病的表达及其与预后关系的研究 被引量:4
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作者 陈浩月 刘澎 +7 位作者 孙淼 吴玲玉 朱华渊 乔纯 董华洁 朱丹霞 徐卫 李建勇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期838-842,共5页
本研究旨在探索bag3基因在慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)中的表达及与患者预后的关系。通过实时定量PCR技术,采用SYBR Green荧光染料法对46例CLL患者外周血标本bag3 mRNA表达水平进行相对定量检测,并分析CLL患... 本研究旨在探索bag3基因在慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)中的表达及与患者预后的关系。通过实时定量PCR技术,采用SYBR Green荧光染料法对46例CLL患者外周血标本bag3 mRNA表达水平进行相对定量检测,并分析CLL患者bag3基因异常表达和临床预后指标的相关性。结果表明,46例CLL患者bag3表达水平中位数为0.021(0.0007-1.124),明显高于正常人群[0.0025(0.0005-0.014)];耐药CLL患者的bag3表达水平明显高于治疗有效患者的bag3表达水平;bag3的表达与性别、年龄、淋巴细胞数、临床分期、IgVH基因突变、染色体异常、CD38、ZAP70无明显相关。结论:bag3基因在CLL中的表达水平明显高于正常人群,可能与白血病细胞耐药相关,而与CLL患者临床分期及临床常规预后因素无明显相关。 展开更多
关键词 bag3基因 慢性淋巴细胞白血病 预后因素
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淋巴细胞白血病患者CD3基因表达模式的变化 被引量:3
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作者 沈琦 陈少华 +3 位作者 杨力建 李萡 闫小娟 李扬秋 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期131-135,共5页
目的:了解T细胞受体信号传导分子CD3γδεζ基因在T和B细胞白血病病人中的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测32例淋巴细胞肿瘤病人:急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)12例、慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)9例、急... 目的:了解T细胞受体信号传导分子CD3γδεζ基因在T和B细胞白血病病人中的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测32例淋巴细胞肿瘤病人:急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)12例、慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)9例、急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)11例及10例健康人外周血单个核细胞中CD3各亚单位表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2-△Ct×100%计算CD3分子γ、δ、ε和ζ链表达水平。结果:B-ALL病人的CD3分子γ、δ和ε链表达中位数水平分别为4.29%,0.67%,17.8%,与健康对照组相比,无显著性差异(P>0.05);而CD3γ链表达水平为0.99%,与健康对照组相比,显著降低(P=0.02)。B-CLL病人的CD3δ、ε基因的表达分别为0.52%,6.72%,与健康对照组相比,无显著性差异(P>0.05);而CD3γ、ζ基因(2.72%,0.77%)则比健康人明显下降(P<0.05)。在T-ALL病人中,CD3分子γ、δ和ε的表达(32.99%,12.9%,61.56%)与健康对照组相比,均明显上升(P<0.05),而CD3ζ的表达量为4.17%,与健康人无显著性差异(P=0.44)。B-ALL、B-CLL病人和健康对照组的CD3分子各链的表达模式依次为CD3ε,CD3γ,CD3ζ,CD3δ,而T-ALL病人的表达模式顺序为CD3ε,CD3γ,CD3δ,CD3ζ。结论:在B细胞白血病中CD3各基因的表达水平多为降低,其变化可能与机体T细胞免疫缺陷相关。而在T细胞白血病中CD3各基因表达水平增加可能是白血病性T细胞一个特点。 展开更多
关键词 CD3基因 基因表达 实时定量PCR 淋巴细胞白血病 免疫缺陷
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人淋巴细胞-NT3基因工程细胞的建立及鉴定
10
作者 麻晓峰 陈杰 +2 位作者 徐琳 顾香芳 高下 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2007年第5期394-396,399,I0002,共5页
目的建立能够存活较长时间并稳定表达神经营养素-3(neurotrophin-3,NT3)的人淋巴细胞株,为后续的动物和人体耳蜗内基因转染实验奠定基础。方法从正常人全血中通过Ficoll液提取人淋巴细胞,并在其完全血清培养基中加入白细胞介素-2(IL-2)... 目的建立能够存活较长时间并稳定表达神经营养素-3(neurotrophin-3,NT3)的人淋巴细胞株,为后续的动物和人体耳蜗内基因转染实验奠定基础。方法从正常人全血中通过Ficoll液提取人淋巴细胞,并在其完全血清培养基中加入白细胞介素-2(IL-2)使其良好生长。通过RT-PCR得到人胎肝组织的NT3cDNA,以T4DNA连接酶和真核表达载体pIRES-DsRed2相连接。以阳离子脂质体作为载体,将pIRES-DsRed2-NT3转染人淋巴细胞,进行RT-PCR及Western Blot分析鉴定。结果建立了一种能使体外培养淋巴细胞成活时间延长的新方法,成功转染NT3基因至淋巴细胞中,并能继续存活相对较长时间,Western Blot证明细胞上清液中有NT3,构建了稳定表达NT3的人基因工程淋巴细胞。结论构建重组质粒pIRES-DsRed2-NT3,利用淋巴细胞作为中介宿主,进而表达、分泌NT3,为进一步NT3基因转染致聋动物耳蜗实验奠定了基础,并有可能为人体基因转染治疗耳聋找到很好的中介细胞。 展开更多
关键词 神经营养素-3 基因克隆 淋巴细胞 转染
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PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义(英文)
11
作者 徐兵 李琳 +1 位作者 唐家宏 周淑芸 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第10期1207-1210,共4页
目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果63例ALL患者经PCR... 目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果63例ALL患者经PCR扩增发现41例(65.1%)FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为93.3%(14/15),77.8%(14/18),41.7%(5/12)和28.6%(4/14);前前B细胞ALL和前B细胞患者ALLFLT3基因检测阳性率84.8%,显著高于成熟B细胞ALL(41.7%,P<0.005);B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为73.3%,显著高于T细胞系ALL患者(28.6%,P<0.001)。63例ALL患者中仅有2例(3.2%)出现FLT3/ITD基因突变,均为伴有两种髓系抗原表达、免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例,预后较差。结论B细胞系ALL和T细胞系ALL患者DNA水平均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低。ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 FLT3基因 FLT3/ITD基因突变 多聚酶链反应
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3型腺病毒对B淋巴细胞激活途径的研究
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作者 王群 陈远耀 尹鸿轸 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1991年第6期533-535,共3页
本实验利用新生普系小鼠24h内去胸腺的方法或用注射抗淋巴细胞血清的方法制成“B”小鼠模型,造成其体内缺乏成熟的T细胞,使它无法进行与T细胞有关的B细胞产生抗体的反应,来研究腺病毒对B淋巴细胞的激活途径,从而确定腺病毒抗原为胸腺依... 本实验利用新生普系小鼠24h内去胸腺的方法或用注射抗淋巴细胞血清的方法制成“B”小鼠模型,造成其体内缺乏成熟的T细胞,使它无法进行与T细胞有关的B细胞产生抗体的反应,来研究腺病毒对B淋巴细胞的激活途径,从而确定腺病毒抗原为胸腺依赖性抗原。 展开更多
关键词 3 腺病毒 B淋巴细胞 抗原 B细胞激活途径
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反复自发性流产患者外周血CD14~+细胞表面CD49b和淋巴细胞活化基因3表达水平降低 被引量:4
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作者 曾汉玉 刘媛 +2 位作者 郭雯娓 王晓红 陈丽华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期369-372,377,共5页
目的观测黏附分子CD49b和负性调节分子淋巴细胞活化基因3(LAG-3)在反复自发性流产(RSA)患者CD14+细胞上的表达。方法收集7例正常对照者和12例RSA患者外周血5 m L,分离外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,流式细胞术检测PBMC中CD14+细胞表面CD... 目的观测黏附分子CD49b和负性调节分子淋巴细胞活化基因3(LAG-3)在反复自发性流产(RSA)患者CD14+细胞上的表达。方法收集7例正常对照者和12例RSA患者外周血5 m L,分离外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,流式细胞术检测PBMC中CD14+细胞表面CD49b和LAG-3的表达;ELISA检测血浆中细胞因子白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的水平。结果 RSA患者外周血中,单核细胞的比例与正常对照组相比无显著性差异;CD14+CD49b+、CD14+LAG-3+、CD14+CD49b+LAG-3+细胞的百分比均低于正常对照组。血浆中,TGF-β的水平低于正常对照组;IL-10的水平无显著差异。结论 RSA患者外周血CD14+细胞表面CD49b和LAG-3的表达和血浆中TGF-β的水平均显著降低。 展开更多
关键词 反复自发性流产 单核细胞 CD49b 淋巴细胞活化基因3(lag-3) 转化生长因子Β IL-10
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人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的制备及其抗肿瘤作用 被引量:4
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作者 王康馨 赵阳 +3 位作者 苏舒 邵洁 魏嘉 刘宝瑞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期374-380,共7页
目的:通过CRISPR-Cas9基因编辑技术及质粒电转染技术制备T细胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)基因敲除的人外周血T淋巴细胞,探讨敲除TIM3基因后能否增强T细胞免疫功能及其抗肿瘤作用。方法:通过电转染法将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒共转染EBV阳... 目的:通过CRISPR-Cas9基因编辑技术及质粒电转染技术制备T细胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)基因敲除的人外周血T淋巴细胞,探讨敲除TIM3基因后能否增强T细胞免疫功能及其抗肿瘤作用。方法:通过电转染法将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒共转染EBV阳性胃癌患者外周血T淋巴细胞,电转24 h后流式细胞术检测转染效率并利用荧光显微镜观察;体外培养过程中观察基因敲除后T细胞增殖活性,流式细胞术验证TIM3基因敲除效率以及细胞表型的变化。用肿瘤抗原肽活化T细胞检测TIM3基因敲除后T细胞分泌细胞因子水平及体外杀伤胃癌AGS-EBV细胞的能力。结果:电转染法能够有效地将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒敲除体系转入人外周血T淋巴细胞,其转染效率平均达(41.5±3.6)%,基因敲除效率波动在40.0%~50.0%(均P<0.01);经抗原活化后的基因敲除组T细胞的增殖活性和免疫表型未见明显变化,表面活化分子中仅见HLA-DR较对照组明显提高(P<0.05);TIM3基因敲除T细胞分泌TNF-α、IFN-γ的水平显著增高(P<0.01或P<0.05),体外杀伤胃癌AGS-EBV细胞的能力也明显增强(均P<0.05)。结论:用CRISPR-Cas9基因编辑及质粒电转染技术制备人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的方法简易可行,在体外的扩增活化中保持TIM3基因水平下调并具有更高的免疫应答水平以及更强的抗肿瘤作用。这一新技术的研发为基因工程化细胞免疫治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas9 T细胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)基因 T淋巴细胞 细胞治疗 抗肿瘤作用
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急性淋巴细胞白血病FLT3基因突变的发现及临床意义 被引量:2
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作者 赵欣 唐克晶 +3 位作者 田征 陈礼平 秘营昌 王建祥 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期522-526,共5页
目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变情况。方法采用PCR方法检测61例ALL患者的FLT3基因内部串联重复突变(FLT3-ITD)与ASP835突变(FLT3-TKD),并以7名健康志愿者为对照,对检测结果进行分析并探讨其临床意... 目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变情况。方法采用PCR方法检测61例ALL患者的FLT3基因内部串联重复突变(FLT3-ITD)与ASP835突变(FLT3-TKD),并以7名健康志愿者为对照,对检测结果进行分析并探讨其临床意义。结果61例ALL患者中,2例出现FLT3-ITD,1例出现FLT3-TKD。结论少数ALL患者体内存在FLT3突变。 展开更多
关键词 FLT3基因 内部串联重复 ASP835突变 急性淋巴细胞白血病
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LAG-3与PD-1的联合治疗与肿瘤免疫 被引量:1
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作者 彭鹏 白丽 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第4期355-362,共8页
程序性死亡受体1(PD-1)及其配体(PD-L1)作为癌症免疫治疗的重要靶点,其抑制剂显著改善了许多恶性肿瘤患者的预后。然而,单药治疗的耐药性和总体反应率有限的问题依然普遍存在。作为新一代免疫检查点的淋巴细胞活化基因3(LAG-3),其在多... 程序性死亡受体1(PD-1)及其配体(PD-L1)作为癌症免疫治疗的重要靶点,其抑制剂显著改善了许多恶性肿瘤患者的预后。然而,单药治疗的耐药性和总体反应率有限的问题依然普遍存在。作为新一代免疫检查点的淋巴细胞活化基因3(LAG-3),其在多种癌症中与PD-1协同增强对T细胞的抑制作用。联合阻断PD-1和LAG-3能够产生比单独阻断其中一种更强的抗肿瘤免疫效果,从而逆转肿瘤微环境的免疫抑制状态,减少耐药性的发生。本文综述了LAG-3的结构特点,并揭示了其与PD-1在多种癌症中的特殊相互作用,为克服单药治疗的局限性提供了一种新的参考。 展开更多
关键词 程序性死亡受体1(PD-1) 淋巴细胞活化基因3(lag-3) 癌症免疫治疗 综述
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肿瘤转移相关基因1 HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的预测与鉴定 被引量:1
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作者 韩艳林 翟明霞 +2 位作者 吴亚红 高艳锋 祁元明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第6期773-775,共3页
目的:鉴定肿瘤转移相关基因1(MTA1)的HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR方法检测MTA1mRNA在肿瘤细胞系EC-1、EC-109和T-47D中的表达情况。然后通过BIMAS、SY-FPEITHI、NetCTL1.2及IEDB4个软件预测筛选MTA1HL... 目的:鉴定肿瘤转移相关基因1(MTA1)的HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR方法检测MTA1mRNA在肿瘤细胞系EC-1、EC-109和T-47D中的表达情况。然后通过BIMAS、SY-FPEITHI、NetCTL1.2及IEDB4个软件预测筛选MTA1HLA-A3限制性的候选表位。候选表位通过标准Fmoc化学法合成,通过结合力实验检测表位与T2A3细胞表面HLA-A3分子的结合力水平,通过体外细胞毒实验检测候选肽诱导CTL的能力。结果:MTA1mRNA在EC-1、EC-109和T-47D细胞中均有表达。候选表位P130与HLA-A3分子有弱结合力,P294、P559与HLA-A3分子有中等结合力。细胞毒实验结果显示多肽P130、P294和P559对EC-1细胞均有一定的杀伤作用(F细胞=176.107,F效靶比=48.306,F交互=35.686,P均<0.001)。结论:多肽P130、P294、P559能够诱导体外抗肿瘤免疫反应,可能成为新的抗肿瘤多肽疫苗的候选表位。 展开更多
关键词 肿瘤转移相关基因1 HLA-A3 细胞毒性T淋巴细胞
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淋巴细胞活化基因3分子生物学功能及其抗体药物临床应用研究进展 被引量:1
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作者 刘昊 李新颖 +1 位作者 罗龙龙 马远方 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期70-78,共9页
淋巴细胞活化基因3(LAG-3,CD223)是一类免疫抑制性受体,主要表达在活化的T细胞和自然杀伤细胞等细胞表面。与程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)和T细胞免疫球蛋白及黏蛋白分子3(TIM-3)等免疫检查点分子类似,LAG-3分子在活化的T细胞中表达上调,... 淋巴细胞活化基因3(LAG-3,CD223)是一类免疫抑制性受体,主要表达在活化的T细胞和自然杀伤细胞等细胞表面。与程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)和T细胞免疫球蛋白及黏蛋白分子3(TIM-3)等免疫检查点分子类似,LAG-3分子在活化的T细胞中表达上调,抑制T细胞过度活化以防止自身免疫性疾病的发生。而在肿瘤微环境中,抗原的持续刺激使T细胞过度表达LAG-3等抑制性分子,造成局部肿瘤微环境的免疫抑制状态。LAG-3发挥抑制作用的下游信号通路及其与其他抑制性分子相互作用的机制尚不清楚。初步临床数据证实,抗LAG-3和抗PD-1抗体具有协同治疗肿瘤的效果。然而,值得一提的是,LAG-3具有与其他任何免疫负性调控分子完全不同的胞内结构域,表明LAG-3分子具有独特的分子机制。目前,至少有7种靶向LAG-3的抗体药物和1种LAG-3-Fc融合蛋白进入临床研究。可以预见,针对LAG-3分子的靶向药物具有广阔的临床应用前景。 展开更多
关键词 淋巴细胞活化基因3 免疫抑制性分子 癌症 免疫治疗 单克隆抗体
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IKZF3基因单核苷酸多态性与儿童急性淋巴细胞白血病的关系 被引量:2
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作者 洪燕 王强 +3 位作者 宋永玲 刘光明 杨旭 颜慕霞 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期690-695,共6页
目的:探讨IKAROS家族锌指蛋白3(IKZF3)基因单核苷酸多态性与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)发病风险的关系。方法:收集286例ALL患儿以及382例健康儿童的外周血样本,分别作为ALL组和对照组。采用Taq Man探针实时定量PCR技术检测IKZF3基因rs... 目的:探讨IKAROS家族锌指蛋白3(IKZF3)基因单核苷酸多态性与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)发病风险的关系。方法:收集286例ALL患儿以及382例健康儿童的外周血样本,分别作为ALL组和对照组。采用Taq Man探针实时定量PCR技术检测IKZF3基因rs62066988 C> T和rs12946510 C> T两个单核苷酸多态性位点的基因型分布情况,并分析二者与ALL的相关性。结果:rs62066988位点的CC、CT和TT基因型在ALL组的分布频率分别为58.39%、37.06%和4.55%,在对照组的分布频率分别为69.19%、27.68%和3.13%。rs12946510位点的基因型CC、CT和TT在ALL组的分布频率分别为58.16%、34.75%和7.09%,在对照组的分布频率分别为55.76%、37.43%和6.81%。与对照组相比,rs62066988位点的CT/TT基因型在ALL组中的分布频率显著增加(CT/TT vs CC:校正后OR=1.59,95%CI:1.16-2.19,P=0.004),而rs12946510 C> T的多态性分布在ALL组和对照组之间并无显著差异。结论:IKZF3基因rs62066988位点的CT/TT基因型与儿童ALL发病风险的增加有关。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 单核苷酸多态性 IKZF3基因 儿童
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不同分期慢性淋巴细胞白血病患者外周血T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA的表达变化 被引量:7
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作者 余静静 陈刚 +5 位作者 庞楠楠 郭新红 王蕾 赵芳 谭明芳 曲建华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期45-49,共5页
目的:研究特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA在不同分期慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达情况并探讨其在CLL发病机制中可能的作用及临床意义。方法:选择46例初诊未治疗CLL患者为病例组(其中Binet A期15例,Bine... 目的:研究特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA在不同分期慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达情况并探讨其在CLL发病机制中可能的作用及临床意义。方法:选择46例初诊未治疗CLL患者为病例组(其中Binet A期15例,Binet B期16例,Binet C期15例),20名健康人作为对照组,通过荧光实时定量PCR方法分别检测各组外周血单个核细胞(PBMNC)中T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA的表达。结果:1 CLL患者外周血中T-bet mRNA表达低于正常对照组(P<0.05),GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA的表达均高于正常对照组(P值均<0.05),T-bet/GATA-3与RORγt/Foxp3比值均低于正常对照组(P值均<0.05);2分期越晚,GATA-3 mRNA和Foxp3 mRNA的表达量越高,其中B期和C期的GATA-3 mRNA表达高于A期(P<0.05),C期的Foxp3 mRNA表达高于A期和B期(P<0.05);分期越晚,T-bet/G ATA-3和RORγt/Foxp3比值越低。其中A期的T-bet/GATA-3比值高于C期(P<0.05),A期与B期的RORγt/Foxp3比值均高于C期(P<0.05)。结论:本研究从转录因子层面发现在CLL患者中,随着病程的进展,Th1/Th2和Th17/Treg平衡分别向Th2和Treg偏移,Treg细胞可能在CLL的发生发展中起着重要的免疫抑制作用。 展开更多
关键词 慢性淋巴细胞白血病 T-BET基因 GATA-3基因 RORγt基因 FOXP3基因
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