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红细胞对癌性胸液淋巴细胞扩增及杀伤活性的影响
被引量：
1
1
作者
李丽
张鹏
+1 位作者
刘忠令
张世明
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第1期19-21,共3页
目的：观察目前常规分离纯化步骤对淋巴细胞的影响，研究红细胞对淋巴细胞的体外扩增及杀伤活性的影响。方法：癌性胸液来源的淋巴细胞经分离液离心及洗涤后的纯化组与同源样本未经以上处理的非纯化组比较；纯化淋巴细胞与不同比例的同...
目的：观察目前常规分离纯化步骤对淋巴细胞的影响，研究红细胞对淋巴细胞的体外扩增及杀伤活性的影响。方法：癌性胸液来源的淋巴细胞经分离液离心及洗涤后的纯化组与同源样本未经以上处理的非纯化组比较；纯化淋巴细胞与不同比例的同源红细胞共育，在含ＩＬ－２５００Ｕ／ｍｌ条件下常规培养５ｄ后比较增殖指数及对异体肺腺癌细胞株的杀伤活性；采用成对资料ｔ检验。结果：未纯化组ＬＡＫ活性（３６．９０±０．０７）％高于纯化组（３４．９５±０．０５）％（Ｐ＜０．０５），两组的增殖指数相近；红细胞与纯化淋巴细胞为５０：１的共育组，增殖指数为６．０５±０．２０，ＬＡＫ活性为（５７．２１±０．１８）％，而纯化组分别为１．７５±０．４９（Ｐ＜０．０１）及（３４．９５±０．０５）％（Ｐ＜０．０１）；红细胞对扩增后的效应细胞无增强作用。结论：自体红细胞与淋巴细胞共育可显著促进淋巴细胞的扩增与杀伤活性，用作免疫疗法时，淋巴细胞纯化步骤可以省却。
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关键词
癌性胸液
淋巴细胞扩增
杀伤活性
红
细胞
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职称材料
基于单个B淋巴细胞扩增技术筛选马传染性贫血病毒的囊膜蛋白单克隆抗体
2
作者
张佳琦
王亚玉
+3 位作者
郭兴
林跃智
廖化新
王晓钧
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期307-313,共7页
马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗...
马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用密码子优化后的Gp90基因构建了重组质粒pcDNA3.1-s-gp90-His,按常规方法将该重组质粒免疫小鼠6次后分离脾细胞,利用荧光激活细胞分选(FACS)技术分离免疫小鼠脾细胞中可识别Gp90的单个B淋巴细胞,结果显示,本研究从2×10^(8)个小鼠脾细胞中获得890个识别Gp90的单个B淋巴细胞。通过特异性引物以单个B淋巴细胞的基因组cDNA为模板扩增抗体重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)的可变区基因,利用重叠延伸PCR方法分别将重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)可变区基因克隆至pcDNA3.1中,测序鉴定结果显示分别正确构建了27对匹配的pcDNA3.1-VH和pcDNA3.1-VL表达质粒,将这27对匹配的表达质粒分别按照pcDNA3.1-VH:pcDNA3.1-VL=1:1的比例共转染至HEK293F细胞,收获细胞上清,经Protein A纯化获得Gp90 MAb。通过ELISA和western blot两种方法对纯化的Gp90 MAb进行鉴定,结果显示获得了27株可匹配的抗体基因对,经表达后有4株MAb可与Gp90蛋白结合,且可以识别Gp90蛋白的天然构象。本研究首次采用单个B淋巴细胞扩增技术对Gp90 MAb进行了筛选,获得的Gp90 MAb为Env蛋白检测方法的研究提供了物质基础,同时为深入研究Env蛋白的功能奠定了基础。
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关键词
马传染性贫血病毒
囊膜蛋白
单个B
淋巴细胞扩增
单克隆抗体
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职称材料
题名
红细胞对癌性胸液淋巴细胞扩增及杀伤活性的影响
被引量：
1
1
作者
李丽
张鹏
刘忠令
张世明
机构
第二军医大学长海医院呼吸内科
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第1期19-21,共3页
基金
中国人民解放军"八五"肺癌攻关基金
文摘
目的：观察目前常规分离纯化步骤对淋巴细胞的影响，研究红细胞对淋巴细胞的体外扩增及杀伤活性的影响。方法：癌性胸液来源的淋巴细胞经分离液离心及洗涤后的纯化组与同源样本未经以上处理的非纯化组比较；纯化淋巴细胞与不同比例的同源红细胞共育，在含ＩＬ－２５００Ｕ／ｍｌ条件下常规培养５ｄ后比较增殖指数及对异体肺腺癌细胞株的杀伤活性；采用成对资料ｔ检验。结果：未纯化组ＬＡＫ活性（３６．９０±０．０７）％高于纯化组（３４．９５±０．０５）％（Ｐ＜０．０５），两组的增殖指数相近；红细胞与纯化淋巴细胞为５０：１的共育组，增殖指数为６．０５±０．２０，ＬＡＫ活性为（５７．２１±０．１８）％，而纯化组分别为１．７５±０．４９（Ｐ＜０．０１）及（３４．９５±０．０５）％（Ｐ＜０．０１）；红细胞对扩增后的效应细胞无增强作用。结论：自体红细胞与淋巴细胞共育可显著促进淋巴细胞的扩增与杀伤活性，用作免疫疗法时，淋巴细胞纯化步骤可以省却。
关键词
癌性胸液
淋巴细胞扩增
杀伤活性
红
细胞
Keywords
erythrocytes
lymphocytes
expansion
antitumour cytotoxicity
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
基于单个B淋巴细胞扩增技术筛选马传染性贫血病毒的囊膜蛋白单克隆抗体
2
作者
张佳琦
王亚玉
郭兴
林跃智
廖化新
王晓钧
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队
暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期307-313,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(31672533)
黑龙江省自然科学基金面上项目(C2016064、C2017077、C2017076)
兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金(SKLVBF2017)。
文摘
马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用密码子优化后的Gp90基因构建了重组质粒pcDNA3.1-s-gp90-His,按常规方法将该重组质粒免疫小鼠6次后分离脾细胞,利用荧光激活细胞分选(FACS)技术分离免疫小鼠脾细胞中可识别Gp90的单个B淋巴细胞,结果显示,本研究从2×10^(8)个小鼠脾细胞中获得890个识别Gp90的单个B淋巴细胞。通过特异性引物以单个B淋巴细胞的基因组cDNA为模板扩增抗体重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)的可变区基因,利用重叠延伸PCR方法分别将重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)可变区基因克隆至pcDNA3.1中,测序鉴定结果显示分别正确构建了27对匹配的pcDNA3.1-VH和pcDNA3.1-VL表达质粒,将这27对匹配的表达质粒分别按照pcDNA3.1-VH:pcDNA3.1-VL=1:1的比例共转染至HEK293F细胞,收获细胞上清,经Protein A纯化获得Gp90 MAb。通过ELISA和western blot两种方法对纯化的Gp90 MAb进行鉴定,结果显示获得了27株可匹配的抗体基因对,经表达后有4株MAb可与Gp90蛋白结合,且可以识别Gp90蛋白的天然构象。本研究首次采用单个B淋巴细胞扩增技术对Gp90 MAb进行了筛选,获得的Gp90 MAb为Env蛋白检测方法的研究提供了物质基础,同时为深入研究Env蛋白的功能奠定了基础。
关键词
马传染性贫血病毒
囊膜蛋白
单个B
淋巴细胞扩增
单克隆抗体
Keywords
EIAV
Env
single B lymphocyte PCR
MAb
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
红细胞对癌性胸液淋巴细胞扩增及杀伤活性的影响
李丽
张鹏
刘忠令
张世明
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于单个B淋巴细胞扩增技术筛选马传染性贫血病毒的囊膜蛋白单克隆抗体
张佳琦
王亚玉
郭兴
林跃智
廖化新
王晓钧
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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