RNAi沉默淀粉分支酶sbe3基因对水稻直链淀粉的影响 被引量：10

1

作者 陈忠正 郭健 +2 位作者 李斌 文海涛 赵亮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第7期291-295,共5页

本研究利用RNAi技术,通过RT-PCR方法克隆出水稻淀粉分支酶sbe3基因片断,经两步组装法将sbe3基因片断分别正向、反向组装入pRNAi-ubi,成功构建sbe3基因RNAi转化载体pRNAi-ubi/sbe3。在农杆菌介导下,对粳稻中花11未成熟胚诱导的愈伤组织... 本研究利用RNAi技术,通过RT-PCR方法克隆出水稻淀粉分支酶sbe3基因片断,经两步组装法将sbe3基因片断分别正向、反向组装入pRNAi-ubi,成功构建sbe3基因RNAi转化载体pRNAi-ubi/sbe3。在农杆菌介导下,对粳稻中花11未成熟胚诱导的愈伤组织进行转化,通过PCR、Southern杂交鉴定获得一批转基因植株。半定量RT-PCR鉴定出转化苗T1代种子中sbe3基因表达被明显抑制,但只引起转基因水稻胚乳中直链淀粉含量少量的提高,说明采用RNAi仅沉默sbe3基因对水稻胚乳直链淀粉含量没有显著影响。 展开更多

关键词 水稻 淀粉分支酶3 RNA干涉 直链淀粉

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玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子的克隆与特异表达 被引量：4

2

作者 徐亚维 王丕武 柴晓杰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第36期20538-20541,共4页

[目的]构建玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。[方法]LA-PCR扩增了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子序列,并克隆到pMD18-TVector上。再将启动子克隆到pBI121载体上,构建植物表达载体pBI121-sbeⅡb。把GUS基因连到pBI121-sbeⅡ... [目的]构建玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。[方法]LA-PCR扩增了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子序列,并克隆到pMD18-TVector上。再将启动子克隆到pBI121载体上,构建植物表达载体pBI121-sbeⅡb。把GUS基因连到pBI121-sbeⅡb上构建pSBE-GUS后利用农杆菌介导法转化烟草。分别进行PCR和Southern杂交检测,并对经基因枪轰击和农杆菌介导的烟草种子、根、茎及叶进行GUS组织化学分析和荧光检测。[结果]测序结果与GenBank中发表的玉米sbeⅡb基因启动子同源性达98.52%。共培养和筛选培养后获得4株转pSBE-GUS植株,叶片仅有少量蓝斑出现,而根和茎部未见蓝斑,但烟草种子有大量蓝斑显出,初步推断sbeⅡb基因启动子能启动GUS在种子中特异表达。[结论]成功构建了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。 展开更多

关键词 淀粉分支酶 启动子 扩增 表达

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玉米淀粉分支酶基因启动子的克隆及生物信息学分析 被引量：2

3

作者 朱苏文 韩国民 江腾 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第14期4126-4127,4129,共3页

[目的]为了研究不同淀粉含量的启动子之间是否有差异及对直链淀粉合成途径是否有影响。[方法]以常规玉米叶片基因组DNA为模板,利用NCBI网站公布的高直链玉米淀粉分支酶基因(Zea mays starch branching enzyme IIb,SBEIIb)序列设计引物,... [目的]为了研究不同淀粉含量的启动子之间是否有差异及对直链淀粉合成途径是否有影响。[方法]以常规玉米叶片基因组DNA为模板,利用NCBI网站公布的高直链玉米淀粉分支酶基因(Zea mays starch branching enzyme IIb,SBEIIb)序列设计引物,通过PCR反应扩增出常规玉米淀粉分支酶基因的启动子序列,将该扩增片段与T载体连接后测序,并与高直链玉米淀粉分支酶基因启动子的序列进行比较分析。[结果]结果表明:玉米淀粉分支酶基因启动子与公布的启动子序列同源性高达99.3%,序列差异Pi值为0.007 16,该差异主要是SN(P单核苷酸多态性)和Inde(l插入/缺失)造成的,推测该差异可能会影响到淀粉分支酶基因的表达,是造成玉米直链淀粉含量差异的因素之一。[结论]该研究为深入了解玉米直链淀粉合成机理提供了重要依据。 展开更多

关键词 玉米 淀粉分支酶 启动子 差异

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重组大肠杆菌产淀粉分支酶的发酵条件探索 被引量：4

4

作者 鲍春辉 顾正彪 +2 位作者 李才明 潘思惠 李兆丰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第15期155-158,162,共5页

淀粉分支酶可增加淀粉的α-1,6-糖苷键,从而改善淀粉的理化特性和生理功能。本文以可胞内表达Geobacillus thermoglucosidans淀粉分支酶的重组大肠杆菌BL21(DE3)(pET-20b(+)/be)为研究对象,首先研究了超声波提取胞内淀粉分支酶的条件,... 淀粉分支酶可增加淀粉的α-1,6-糖苷键,从而改善淀粉的理化特性和生理功能。本文以可胞内表达Geobacillus thermoglucosidans淀粉分支酶的重组大肠杆菌BL21(DE3)(pET-20b(+)/be)为研究对象,首先研究了超声波提取胞内淀粉分支酶的条件,结果显示,当超声波输出功率为325W,总工作时间为15min,菌液OD600为1.4时,超声波破壁效果最佳。在此基础上,对重组大肠杆菌产淀粉分支酶的摇瓶发酵条件进行了探索,结果表明,最适发酵培养基为TB,初始pH为7.0,在25℃、IPTG浓度为0.01mmol/L下诱导培养12h,发酵所得菌体经超声后产生的淀粉分支酶总酶活最高为222.4U/mL。 展开更多

关键词 淀粉分支酶 发酵 超声波 表达 提取

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两阶段温度控制策略以及助剂促进淀粉分支酶的胞外表达 被引量：1

5

作者 王驰 李柱 +4 位作者 李才明 顾正彪 洪雁 程力 李兆丰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期19-24,共6页

为了促进重组淀粉分支酶在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis WB600）中的胞外表达，对重组淀粉分支酶在摇瓶水平上进行了发酵优化。首先，以胞外酶活力为指标，先后考察了初始培养基、pH、培养温度和培养时间4种因素对胞外表达的影响；... 为了促进重组淀粉分支酶在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis WB600）中的胞外表达，对重组淀粉分支酶在摇瓶水平上进行了发酵优化。首先，以胞外酶活力为指标，先后考察了初始培养基、pH、培养温度和培养时间4种因素对胞外表达的影响；然后，通过两阶段温度策略和助剂的添加进一步提高胞外表达水平。结果表明，当发酵培养基为TB、pH为7．5时，25℃培养24h后胞外酶活力达到19．9U／mL；同时，菌体生长最适温度和酶分泌的最适温度是不一致的，通过两阶段温度控制策略（即0—12h控制温度30℃，12h后温度调至25℃），胞外酶活力与单一温度条件下的最高水平（25℃）相比提高了1．4倍，达到了47．1U／mL；在此基础上，进一步添加0．05％的吐温-80，将胞外酶活进一步提高40％，达到65．8U／mL。 展开更多

关键词 淀粉分支酶 胞外表达 两阶段温度控制策略 发酵优化

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微生物来源淀粉分支酶异源高效表达策略的研究进展

6

作者 管媛媛 杨婷 +1 位作者 葛雨嘉 黄静 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第16期276-282,共7页

淀粉分支酶(starch-branching enzyme,SBE,EC 2.4.1.18)是一种参与淀粉生物合成的糖基转移酶,能切断淀粉分子中的α-1,4-糖苷键,由此形成的非还原性低聚糖通过α-1,6-糖苷键连接至受体链上,形成α-1,6分支位点,经过"切割-转移-连接... 淀粉分支酶(starch-branching enzyme,SBE,EC 2.4.1.18)是一种参与淀粉生物合成的糖基转移酶,能切断淀粉分子中的α-1,4-糖苷键,由此形成的非还原性低聚糖通过α-1,6-糖苷键连接至受体链上,形成α-1,6分支位点,经过"切割-转移-连接"多次反应获得一种新型生物改性淀粉——高支化淀粉。微生物来源的SBE具有产量高、稳定性好、易于异源表达等优势,是生产大量SBE的研究热点。在众多酶表达宿主中,大肠杆菌和枯草芽孢杆菌是SBE异源表达的最常见宿主菌。该文着重阐述了近年来有关实现微生物来源的SBE在以上2种宿主内异源高效表达策略的研究进展,为深入探究SBE作用机理及改性淀粉的工业化应用提供了重要参考。 展开更多

关键词 淀粉分支酶 异源表达 改性淀粉 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌

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碳源诱导嗜热脂肪芽孢杆菌生产淀粉分支酶的研究

7

作者 张鸣明 马泽业 +2 位作者 张春园 李素岳 胡先望 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第7期111-115,共5页

利用嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)生产淀粉分支酶,研究不同碳源种类及浓度对嗜热脂肪芽孢杆菌产酶性能的影响。结果表明,以0.20%麦芽糊精为碳源时,淀粉分支酶的酶活最高,达20.02U/mL,是其他碳源的2~10倍。采用最优培... 利用嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)生产淀粉分支酶,研究不同碳源种类及浓度对嗜热脂肪芽孢杆菌产酶性能的影响。结果表明,以0.20%麦芽糊精为碳源时,淀粉分支酶的酶活最高,达20.02U/mL,是其他碳源的2~10倍。采用最优培养基在小试试验的基础上进行了扩大培养中试试验,淀粉分支酶酶活稳定,为19.87U/mL,是小试试验的1.1倍。 展开更多

关键词 嗜热脂肪芽孢杆菌 淀粉分支酶 碳源 底物诱导

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高温高湿贮藏对玉米淀粉合成关键酶的影响 被引量：5

8

作者 畅鹏飞 修琳 +2 位作者 郑明珠 蔡丹 刘景圣 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第11期37-41,共5页

选用2013年收获的"农大709"玉米籽粒,根据吉林省夏季平均气温与相对湿度设定玉米的贮藏条件,将玉米籽粒分别贮藏于室温和恒温恒湿培养箱(35℃,75%)中,并测定分析了不同贮藏时间玉米籽粒可溶性淀粉合成酶(SSS)、束缚性淀粉合成... 选用2013年收获的"农大709"玉米籽粒,根据吉林省夏季平均气温与相对湿度设定玉米的贮藏条件,将玉米籽粒分别贮藏于室温和恒温恒湿培养箱(35℃,75%)中,并测定分析了不同贮藏时间玉米籽粒可溶性淀粉合成酶(SSS)、束缚性淀粉合成酶(GBSS)、淀粉分支酶(SBE)以及淀粉脱支酶(DBE)活性的变化,进而分析玉米在不同贮藏条件下淀粉品质的变化。试验结果表明:常温条件下,只有SBE在贮藏第30天时有显著的下降(P<0.05),其余3种淀粉关键酶(SSS、GBSS、DBE)活性均没有发生显著变化(P>0.05)。高温高湿贮藏条件下,SSS、SBE、DBE酶活性均呈极显著下降(P<0.01),且分别下降了42.1%、39.5%和33.7%。而GBSS酶活性则呈先上升后下降的趋势(P<0.01),较常温贮藏,GBSS酶活性总体呈上升趋势。 展开更多

关键词 高温高湿 可溶性淀粉合成酶 束缚性淀粉合成酶 淀粉分支酶 淀粉脱支酶

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植物淀粉品质控制酶基因ISO的分子生物学研究 被引量：2

9

作者 方结红 张明洲 刘军 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第29期14059-14060,14065,共3页

淀粉的合成过程受到一系列酶的调控,淀粉去分支酶是一个重要的调控酶。综述了高等植物中淀粉去分支酶基因ISO的特征、功能和表达调控方面的研究进展,并讨论了ISO基因的研究趋势。

关键词 淀粉生物合成 基因功能 淀粉去分支酶 转录调控

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高温高湿贮藏对玉米淀粉合成关键酶的影响

10

作者 畅鹏飞 修琳 +2 位作者 郑明珠 蔡丹 刘景圣 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第S01期101-105,共5页

选用2013年收获的“农大709”玉米籽粒,根据吉林省夏季平均气温与相对湿度设定玉米的贮藏条件,将玉米籽粒分别贮藏于室温和恒温恒湿培养箱(35℃,75%)中,并测定分析了不同贮藏时间玉米籽粒可溶性淀粉合成酶(SSS)、束缚性淀粉合成酶(GBSS... 选用2013年收获的“农大709”玉米籽粒,根据吉林省夏季平均气温与相对湿度设定玉米的贮藏条件,将玉米籽粒分别贮藏于室温和恒温恒湿培养箱(35℃,75%)中,并测定分析了不同贮藏时间玉米籽粒可溶性淀粉合成酶(SSS)、束缚性淀粉合成酶(GBSS)、淀粉分支酶(SBE)以及淀粉脱支酶(DBE)活性的变化,进而分析玉米在不同贮藏条件下淀粉品质的变化.试验结果表明:常温条件下,只有SBE在贮藏第30天时有显著的下降(P<0.05),其余3种淀粉关键酶(SSS、GBSS、DBE)活性均没有发生显著变化(P>0.05).高温高湿贮藏条件下,SSS、SBE、DBE酶活性均呈极显著下降(P<0.01),且分别下降了42.1%、39.5%和33.7%.而GBSS酶活性则呈先上升后下降的趋势(P<0.01),较常温贮藏,GBSS酶活性总体呈上升趋势. 展开更多

关键词 高温高湿 可溶性淀粉合成酶 束缚性淀粉合成酶 淀粉分支酶 淀粉脱支酶

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浙江大学包劲松教授团队在水稻高抗性淀粉形成机制研究方面取得新进展

11

作者 包劲松 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期F0002-F0002,共1页

近日,浙江大学农业与生物技术学院包劲松教授团队发表3篇研究论文,揭示水稻淀粉分支酶Ⅱb(BEⅡb)突变体(be2b)抗性淀粉含量增加伴随产量下降的分子机制、抗性淀粉精细结构形成机制及抗性淀粉生物合成的分子机制。BEⅡb是影响抗性淀粉含... 近日,浙江大学农业与生物技术学院包劲松教授团队发表3篇研究论文,揭示水稻淀粉分支酶Ⅱb(BEⅡb)突变体(be2b)抗性淀粉含量增加伴随产量下降的分子机制、抗性淀粉精细结构形成机制及抗性淀粉生物合成的分子机制。BEⅡb是影响抗性淀粉含量的重要基因。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得水稻日本晴BEⅡb突变体(be2b),其抗性淀粉含量较野生型(WT)增加了近10倍,直链淀粉含量增加了1.4倍。 展开更多

关键词 淀粉分支酶 淀粉生物合成 生物技术学院 抗性淀粉含量 直链淀粉含量 日本晴 产量下降 分子机制

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影响大米食味性的主要生化和营养指标的比较 被引量：4

12

作者 金红 张斌 +1 位作者 高超 李涵涵 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2012年第5期172-174,共3页

选取6个食味明显不同的大米品种作为材料,通过对它们的食味值、直链淀粉含量、粗淀粉含量、淀粉分支酶活性、粗脂肪含量、粗蛋白含量和可溶性糖含量进行比较研究。结果表明,大米的食味值越高,直链淀粉、粗脂肪和可溶性糖的含量越低,淀... 选取6个食味明显不同的大米品种作为材料,通过对它们的食味值、直链淀粉含量、粗淀粉含量、淀粉分支酶活性、粗脂肪含量、粗蛋白含量和可溶性糖含量进行比较研究。结果表明,大米的食味值越高,直链淀粉、粗脂肪和可溶性糖的含量越低,淀粉分支酶活性越高。而在粗淀粉和粗蛋白的含量上差异不大。 展开更多

关键词 大米食味性 食味值 直链淀粉含量 淀粉分支酶活性

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农杆菌介导的双SBE基因RNAi载体对水稻的遗传转化 被引量：2

13

作者 骆开明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2740-2742,2755,共4页

[目的]提高水稻中直链淀粉的含量,扩大稻米的利用范围。[方法]以水稻中花11品种为材料,通过农杆菌介导法,侵染水稻幼胚诱导出的愈伤组织,将淀粉分支酶基因SBE1和SBE3同时导入受体愈伤组织,经过一系列的共培养、预分化、分化、生根壮苗后... [目的]提高水稻中直链淀粉的含量,扩大稻米的利用范围。[方法]以水稻中花11品种为材料,通过农杆菌介导法,侵染水稻幼胚诱导出的愈伤组织,将淀粉分支酶基因SBE1和SBE3同时导入受体愈伤组织,经过一系列的共培养、预分化、分化、生根壮苗后,获得含有转基因的转化植株,并对转化植株进行PCR鉴定。[结果]通过用根癌农杆菌介导法,侵染由水稻幼胚诱导的274粒愈伤组织,经过共培养、筛选,得到177粒抗性愈伤,然后将抗性愈伤预分化、分化得到103株分化苗,生根壮苗后获得49株转基因植株;从49株转基因植株中随机提取34株的基因组DNA,利用PCR技术从基因组DNA中扩增得到了片段大小约为500 bp的潮霉素基因序列。[结论]初步证实转基因植株的真实性,淀粉分支酶基因SBE1+SBE3成功整合进入水稻基因组中。 展开更多

关键词 水稻 淀粉分支酶 转基因 RNA干涉

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水稻OsSBEⅡb基因的克隆和时空表达特征及SNP位点多态性

14

作者 李辉 龚辉 +1 位作者 唐映红 程新奇 《湖南农业科学》 2022年第1期1-7,共7页

水稻淀粉分支酶(OsSBEⅡb)对水稻支链淀粉的合成至关重要,而水稻支链淀粉的含量与水稻支链淀粉和抗性淀粉的含量密切相关。为了明确OsSBEⅡb基因在水稻淀粉合成中的作用,通过PCR技术扩增获得了湘早籼2号水稻的OsSBEⅡb基因cDNA编码区序... 水稻淀粉分支酶(OsSBEⅡb)对水稻支链淀粉的合成至关重要,而水稻支链淀粉的含量与水稻支链淀粉和抗性淀粉的含量密切相关。为了明确OsSBEⅡb基因在水稻淀粉合成中的作用,通过PCR技术扩增获得了湘早籼2号水稻的OsSBEⅡb基因cDNA编码区序列。生物信息学分析表明,OsSBEⅡb基因具有一个编码825个氨基酸多肽的完整读码框;时空表达特征分析发现,该基因表达具有空间特异性,在根、茎、叶、稻壳的表达量很低,主要在稻米胚乳中表达;不同水稻品种OsSBEⅡb基因的编码区存在15个SNP位点变异,表明该基因在不同水稻品种具有丰富的多态性,这些丰富的变异位点为抗性淀粉水稻品种的选育提供了丰富的基因资源。 展开更多

关键词 水稻 水稻淀粉分支酶 单核苷酸多态性

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