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琼脂磁珠消减SELEX技术筛选HIV gp41抗原适配体（英文）
被引量：
3
1
作者
栗坤
修尘林
+2 位作者
高立明
石明
翟越
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1592-1598,共7页
目的通过消减SELEX技术筛选得到高特异性、强亲和力的HIV gp41抗原适配体,为HIV的早期诊断提供了新的检测技术。方法以琼脂磁珠为载体,HIV gp41抗原为靶标分子,利用消减SELEX技术和实时定量-PCR技术,筛选得到HIV gp41抗原适配体。结果通...
目的通过消减SELEX技术筛选得到高特异性、强亲和力的HIV gp41抗原适配体,为HIV的早期诊断提供了新的检测技术。方法以琼脂磁珠为载体,HIV gp41抗原为靶标分子,利用消减SELEX技术和实时定量-PCR技术,筛选得到HIV gp41抗原适配体。结果通过6轮筛选,筛选得到的次级ss DNA库通过PCR扩增得到ds DNA,ds DNA与p MDTM 18载体链接,进行克隆、测序,获得4条HIV gp41抗原适配体。获得的4条适配体亲和力(Kd)均在纳摩尔水平,其中15号适配体的亲和力最强,特异性检测表明筛选得到的适配体几乎只与HIV gp41抗原结合,不与其他非特异性蛋白结合。结论利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与HIV gp41抗原特异性结合的适配体,所获得的适配体具有拮抗HIV gp41抗原的能力。
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关键词
HIV
gp41抗原
消减selex技术
DNA适配体识别
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职称材料
改良SELEX技术筛选福氏志贺菌2a特异性适配体
2
作者
王国臻
王玉格
+3 位作者
兰春阳
李翔
李明成
付桂莲
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第10期1226-1230,共5页
目的:构建与福氏志贺菌2a高亲和性、特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库。方法:体外合成76 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNA),运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria SELEX),福氏志贺菌2a作为靶标与文库ssDN...
目的:构建与福氏志贺菌2a高亲和性、特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库。方法:体外合成76 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNA),运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria SELEX),福氏志贺菌2a作为靶标与文库ssDNA反应;通过优化PCR反应,将Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化技术用于次轮反应文库的制备,荧光分光光度计跟踪筛选过程,流式细胞仪克隆测序特异性单链核酸适配体,生物信息学技术分析其一、二级结构。结果:经过PCR技术10轮正向筛选和6轮消减菌筛选,通过Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化,ssDNA平均回收率高达72.33%。依据一级结构的同源序列建立了36个寡核苷酸探针组群。流式细胞仪分析获得1条与福氏志贺菌2a特异性结合的适配体(命名ZH-21)。结论:基于全菌消减SELEX技术,结合Lambda酶外切及凝胶层析纯化技术,建立一种快速、稳定、高效、特异性高和成本低的筛选福氏志贺菌2a特异性单链核酸适配体的方法。
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关键词
全菌
消减selex技术
福氏志贺菌2a
凝胶层析纯化
技术
适配体
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职称材料
癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选
被引量：
3
3
作者
曾家豫
万波
+4 位作者
马瑾
袁红霞
李星
赵运旺
廖世奇
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期782-786,共5页
目的 :筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础。方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过...
目的 :筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础。方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过消减SELEX技术及实时定量PCR技术,从随机ss DNA文库中筛选出与Anti-CEA特异性结合的aptamers,并通过凝胶阻滞实验(EMSA)鉴定筛选到的Anti-CEA-aptamer复合物,然后将得到的第10轮富集文库扩增为双链DNA,通过切胶纯化后,连接PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,同时利用交错PCR技术鉴定阳性克隆,经测序,获得aptamers的序列。结果:经过10轮筛选得到了4条与Anti-CEA结合的aptamers,测序结果显示均为不同序列。结论:验证筛选出的与Anti-CEA结合的aptamer,特异性检测结果表明2号aptamer与靶分子结合的特异性很高,且与非特异蛋白无明显吸附,筛选出的aptamers用于识别Anti-CEA,将为肺癌的早期诊断和早期治疗提供新的突破口。
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关键词
消减selex技术
羧基琼脂磁珠
CEA特异性单克隆抗体
核酸适配体
肺癌
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职称材料
题名
琼脂磁珠消减SELEX技术筛选HIV gp41抗原适配体（英文）
被引量：
3
1
作者
栗坤
修尘林
高立明
石明
翟越
机构
燕山大学环境与化学工程学院
秦皇岛市第一人民医院肿瘤科
燕山大学燕山大学校医院内科
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1592-1598,共7页
基金
Supported by Qinhuangdao Science and Technology Research and Development Plan(201501B034,201502A193)~~
文摘
目的通过消减SELEX技术筛选得到高特异性、强亲和力的HIV gp41抗原适配体,为HIV的早期诊断提供了新的检测技术。方法以琼脂磁珠为载体,HIV gp41抗原为靶标分子,利用消减SELEX技术和实时定量-PCR技术,筛选得到HIV gp41抗原适配体。结果通过6轮筛选,筛选得到的次级ss DNA库通过PCR扩增得到ds DNA,ds DNA与p MDTM 18载体链接,进行克隆、测序,获得4条HIV gp41抗原适配体。获得的4条适配体亲和力(Kd)均在纳摩尔水平,其中15号适配体的亲和力最强,特异性检测表明筛选得到的适配体几乎只与HIV gp41抗原结合,不与其他非特异性蛋白结合。结论利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与HIV gp41抗原特异性结合的适配体,所获得的适配体具有拮抗HIV gp41抗原的能力。
关键词
HIV
gp41抗原
消减selex技术
DNA适配体识别
Keywords
HIV gp41 antigen
subtractive
selex
technique
DNA aptamers
分类号
R512.91 [医药卫生—内科学]
在线阅读
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职称材料
题名
改良SELEX技术筛选福氏志贺菌2a特异性适配体
2
作者
王国臻
王玉格
兰春阳
李翔
李明成
付桂莲
机构
北华大学医学技术学院
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第10期1226-1230,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81541141)
北华大学研究生创新计划(北华研创合字[2018]036)。
文摘
目的:构建与福氏志贺菌2a高亲和性、特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库。方法:体外合成76 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNA),运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria SELEX),福氏志贺菌2a作为靶标与文库ssDNA反应;通过优化PCR反应,将Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化技术用于次轮反应文库的制备,荧光分光光度计跟踪筛选过程,流式细胞仪克隆测序特异性单链核酸适配体,生物信息学技术分析其一、二级结构。结果:经过PCR技术10轮正向筛选和6轮消减菌筛选,通过Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化,ssDNA平均回收率高达72.33%。依据一级结构的同源序列建立了36个寡核苷酸探针组群。流式细胞仪分析获得1条与福氏志贺菌2a特异性结合的适配体(命名ZH-21)。结论:基于全菌消减SELEX技术,结合Lambda酶外切及凝胶层析纯化技术,建立一种快速、稳定、高效、特异性高和成本低的筛选福氏志贺菌2a特异性单链核酸适配体的方法。
关键词
全菌
消减selex技术
福氏志贺菌2a
凝胶层析纯化
技术
适配体
Keywords
Whole-bacteria
selex
Shigella flexneri 2a
Gel chromatography
Aptamers
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选
被引量：
3
3
作者
曾家豫
万波
马瑾
袁红霞
李星
赵运旺
廖世奇
机构
西北师范大学生命科学学院
甘肃省医学科学研究院分子生物中心
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期782-786,共5页
基金
国家自然科学基金(81360333)
文摘
目的 :筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础。方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过消减SELEX技术及实时定量PCR技术,从随机ss DNA文库中筛选出与Anti-CEA特异性结合的aptamers,并通过凝胶阻滞实验(EMSA)鉴定筛选到的Anti-CEA-aptamer复合物,然后将得到的第10轮富集文库扩增为双链DNA,通过切胶纯化后,连接PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,同时利用交错PCR技术鉴定阳性克隆,经测序,获得aptamers的序列。结果:经过10轮筛选得到了4条与Anti-CEA结合的aptamers,测序结果显示均为不同序列。结论:验证筛选出的与Anti-CEA结合的aptamer,特异性检测结果表明2号aptamer与靶分子结合的特异性很高,且与非特异蛋白无明显吸附,筛选出的aptamers用于识别Anti-CEA,将为肺癌的早期诊断和早期治疗提供新的突破口。
关键词
消减selex技术
羧基琼脂磁珠
CEA特异性单克隆抗体
核酸适配体
肺癌
Keywords
subtractive
selex
carboxyl magnetic microspheres
Anti-CEA
aptamer
lung cancer
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
琼脂磁珠消减SELEX技术筛选HIV gp41抗原适配体（英文）
栗坤
修尘林
高立明
石明
翟越
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
改良SELEX技术筛选福氏志贺菌2a特异性适配体
王国臻
王玉格
兰春阳
李翔
李明成
付桂莲
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选
曾家豫
万波
马瑾
袁红霞
李星
赵运旺
廖世奇
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
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