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海蓬子盐胁迫初期抑制消减杂交cDNA文库的构建 被引量：9
1
作者 张大栋 马鸿翔 +4 位作者 吉晓佳 周春霖 王茂文 汤日圣 杨永华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第2期113-116,共4页
为提高缩叶肉质盐生植物海蓬子总RNA和mRNA的质量，将改良CTAB法与Tripure试剂盒方法相结合，从300mg海蓬子发芽后20d的幼苗中成功分离和纯化了高纯度的总RNA和mRNA。并以无NaCl处理为Driver，以200mmol／LNaCl处理24h、48h、72h的幼苗... 为提高缩叶肉质盐生植物海蓬子总RNA和mRNA的质量，将改良CTAB法与Tripure试剂盒方法相结合，从300mg海蓬子发芽后20d的幼苗中成功分离和纯化了高纯度的总RNA和mRNA。并以无NaCl处理为Driver，以200mmol／LNaCl处理24h、48h、72h的幼苗为Tester，通过cDNA双链的合成及两次PCR扩增，富集到两组处理中差异表达的大小在200～1300bp的cDNA序列，pGEM-T的连接和蓝白斑筛选表明杂交文库滴度和重组率分别达到2，6×10^7和96％，共收集阳性克隆12000个，形成了抑制消减杂交的质粒cDNA文库。随机挑取酶切质粒的电泳分析表明，载体中均有插入片段。两种RNA提取方法的结合有效提高了多汁多色素海蓬子RNA的质量，高效抑制消减杂交文库的建立为进一步分析基因的差异表达及分离抗盐基因奠定了基础。 展开更多
关键词 盐生植物海蓬子 抑制消减抑制杂交 CDNA文库 RNA分离
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应用抑制消减杂交技术构建肝癌差异表达基因消减cDNA文库 被引量：13
2
作者 李靖 韩本立 +5 位作者 黄桂君 钱桂生 徐晓霞 杨彤翰 梁平 陈杰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期698-701,共4页
目的　构建肝癌及癌旁肝组织差异表达基因的消减cDNA文库。方法　采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,以肝癌组织及癌旁肝组织作为对比材料 ,分离肝癌组织中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ,将连接产物用电穿孔... 目的　构建肝癌及癌旁肝组织差异表达基因的消减cDNA文库。方法　采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,以肝癌组织及癌旁肝组织作为对比材料 ,分离肝癌组织中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ,将连接产物用电穿孔法转化大肠杆菌进行文库扩增后 ,随机挑取 1 0 0个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。结果　扩增消减cDNA文库获得 30 0 0余个白色阳性克隆 ,随机挑取 1 0 0个白色克隆用PCR进行扩增 ,95%的克隆中均有 1 0 0～ 6 0 0bp的插入片段 ,这些片段可能是肝癌差异表达基因的cDNA片段。结论　用SSH法及T/A克隆技术成功构建了肝癌与癌旁肝组织差异表达基因消减cDNA文库 ,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆肝癌差异表达的新基因奠定了基础。 展开更多
关键词 肝肿瘤 抑制消减杂交 基因文库 CDNA
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茶树休眠芽与萌动芽抑制消减杂交文库的构建与初步分析 被引量：14
3
作者 王新超 杨亚军 +2 位作者 陈亮 马春雷 姚明哲 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期129-135,共7页
为了解茶树越冬芽休眠及其解除的分子机理,以休眠芽和萌动芽为材料,构建了茶树休眠芽与萌发芽的正、反向抑制消减杂交文库,并从两个文库各随机挑选96个阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。建库质量分析结果表明,所构建的正、反向消... 为了解茶树越冬芽休眠及其解除的分子机理,以休眠芽和萌动芽为材料,构建了茶树休眠芽与萌发芽的正、反向抑制消减杂交文库,并从两个文库各随机挑选96个阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。建库质量分析结果表明,所构建的正、反向消减文库有效富集了差异基因,消减效率达到要求,插入片段集中于250-750bp之间,文库质量较好。对正、反向文库随机挑选的阳性克隆测序和分析结果表明,正、反向文库在基因表达谱上存在一定的差异,萌动芽文库在亚细胞器形成、转运载体等方面的基因与休眠芽文库有较大差异,而休眠芽文库在抗氧化、翻译调控以及胁迫响应等方面的基因与萌动芽文库有较大差异。这两个文库的建立为进一步了解茶树芽休眠与解除的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树(Camellia sinensis) 芽休眠 表达序列标签 抑制消减杂交
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用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因 被引量：8
4
作者 邓柳红 罗明武 +2 位作者 曾会才 杨卫帆 张春发 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期32-36,共5页
采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段... 采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过NorthernBlot杂交及RT-PCR进一步验证。随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 抑制消减杂交法 胶乳 反式Northern Dot—Blot
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利用抑制消减杂交技术筛选鹅就巢行为相关基因 被引量：6
5
作者 郭军 汤青萍 +6 位作者 章双杰 马月辉 陆火林 苏建东 邹剑敏 陈宽维 李慧芳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1477-1484,共8页
旨在利用抑制消减杂交技术构建鹅就巢与产蛋cDNA基因文库,筛选就巢母鹅上调与下调表达的基因。以就巢期和产蛋期鹅卵巢组织互为检测子和驱动子,进行正反双向消减杂交,获得鹅卵巢差异表达基因文库。从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证... 旨在利用抑制消减杂交技术构建鹅就巢与产蛋cDNA基因文库,筛选就巢母鹅上调与下调表达的基因。以就巢期和产蛋期鹅卵巢组织互为检测子和驱动子,进行正反双向消减杂交,获得鹅卵巢差异表达基因文库。从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析,获得641条表达序列标签(ESTs)。对ESTs进行去除载体序列、质量检测、聚类及拼接,经BLASTn比对,有166条ESTs找到与之匹配的同源序列,其中92个是功能基因。比较就巢与产蛋SSH文库,发现就巢SSH库中参与细胞凋亡、信号转导及细胞结构的基因出现频率较高;产蛋特异性基因文库中参与物质能量代谢、细胞防御的基因较多;尚有许多差异片段属于未知功能蛋白或理论推定蛋白。结果提示,催乳素受体、抗苗勒管激素以及雌激素受体基因在就巢期上调表达可能与鹅就巢行为的启动与维持有关。该结果为进一步研究鹅就巢行为分子调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 鹅 就巢行为 卵巢 抑制消减杂交技术 表达序列标签
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大豆再生抑制消减杂交文库的构建 被引量：6
6
作者 武小霞 孙晶 +5 位作者 苏安玉 李静 刘明 张彬彬 李冬梅 李文滨 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期38-44,共7页
大豆再生受基因型限制，高效稳定再生体系建立难、遗传转化效率低，影响生物技术的应用。为获得与大豆再生相关基因，解析大豆再生基因分子机制，从而建立高效、稳定再生体系，为生物技术在大豆分子育种中的应用奠定基础。文章利用抑制... 大豆再生受基因型限制，高效稳定再生体系建立难、遗传转化效率低，影响生物技术的应用。为获得与大豆再生相关基因，解析大豆再生基因分子机制，从而建立高效、稳定再生体系，为生物技术在大豆分子育种中的应用奠定基础。文章利用抑制性消减杂交技术（Suppression subtractive hybridization，SSH），以东农50子叶节为材料构建消减杂交cDNA文库，从文库中随机挑取917个阳性克隆，PCR鉴定插入片段大部分集中在100~750 bp，利用BLAST在GenBank数据库进行序列相似性比对，经过同源性比对归并后得到411个高质量ESTs片段，功能分析表明，这些基因与信号转导、葡萄糖、蛋白质大分子生物合成代谢，光、叶形态发生相关；调控细胞凋亡、细胞自身防御、细胞壁分化；参与各种激素及细胞分裂素介导的信号通路。 展开更多
关键词 大豆 抑制消减杂交(SSH) CDNA文库 再生
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应用抑制消减杂交克隆内皮细胞内毒素刺激后相关基因 被引量：10
7
作者 梁自文 罗向东 杨宗城 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期336-338,共3页
提取人脐静脉内皮细胞经内毒素刺激 6h后的mRNA并合成cDNA ,与对照组进行抑制消减杂交 ,经菌落斑点杂交筛选出阳性克隆 ,进行测序和同源性分析 ,并采用Northern杂交验证新的cDNA序列。共获得 2 5条差异表达基因 ,涉及与编码炎症介质、... 提取人脐静脉内皮细胞经内毒素刺激 6h后的mRNA并合成cDNA ,与对照组进行抑制消减杂交 ,经菌落斑点杂交筛选出阳性克隆 ,进行测序和同源性分析 ,并采用Northern杂交验证新的cDNA序列。共获得 2 5条差异表达基因 ,涉及与编码炎症介质、胞内信号传导、细胞骨架、细胞凋亡和能量代谢相关的基因 ,其中 3条为新基因序列。结果表明 ,抑制消减杂交技术有效地克隆了内皮细胞内毒素刺激后相关基因 ,有助于阐明内毒素激活血管内皮细胞的机制 。 展开更多
关键词 抑制消减杂交 克隆 内皮细胞 内毒素 相关基因 分子机制
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抑制性消减杂交方法克隆棉属突变材料腺体发育相关的cDNAs 被引量：9
8
作者 蔡应繁 莫剑川 +5 位作者 曾宇 任薇薇 苗琛 徐莺 王胜华 陈放 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期6-10,共5页
该文采用抑制性消减杂交方法 (SSH)构建了棉属突变材料“湘棉 18”种子萌发过程中腺体发育形成前后的两个不同时期的SSH差减文库 .通过差示筛选及反式Northern检测 ,获得了色素腺体形成时期特异表达或优势表达的cDNA片段 .结果表明 ,这... 该文采用抑制性消减杂交方法 (SSH)构建了棉属突变材料“湘棉 18”种子萌发过程中腺体发育形成前后的两个不同时期的SSH差减文库 .通过差示筛选及反式Northern检测 ,获得了色素腺体形成时期特异表达或优势表达的cDNA片段 .结果表明 ,这些cDNA所涉及的基因 ,多数是棉属中新发现的 ,它们与发育调控、细胞凋亡、蛋白质合成等密切相关 . 展开更多
关键词 抑制性消减杂交(SSH) 色素腺体 发育 克隆 棉属 差示筛选 反式Northem
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应用抑制消减杂交(SSH)克隆肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因 被引量：8
9
作者 陈杰 钱桂生 +3 位作者 黄桂君 熊玮 李靖 LI Jing 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期131-134,共4页
目的　克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法　将肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)作为实验组 ,肺腺癌细胞 (SPC A 1)作为对照组 ,应用抑制消减杂交技术 ,构建实验组特异表达cDNA消减文库 ;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库... 目的　克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法　将肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)作为实验组 ,肺腺癌细胞 (SPC A 1)作为对照组 ,应用抑制消减杂交技术 ,构建实验组特异表达cDNA消减文库 ;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库后 ,将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析 (Genebank)。结果　建立了一个肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)特异表达cDNA消减文库 ,斑点杂交初步筛选显示 2 3个克隆中有SPC A 1/CDDP特异表达cDNA片断 ,测序和同源性分析表明 2个cDNA片断为新序列 ,其余cDNA片断与已知基因有 96%～ 10 0 %的同源性。结论　 2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列 ;抑制消减杂交是克隆特异表达基因的有效方法。 展开更多
关键词 人肺腺癌细胞 多药耐药相关基因 抑制消减杂交 SSH
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应用抑制性消减杂交技术筛选膦甲酸钠免疫调节基因 被引量：5
10
作者 刘妍 成军 +4 位作者 陆荫英 王刚 王建军 张喜全 王祥建 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期527-529,共3页
目的　应用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建膦甲酸钠 (PFA)处理的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库 ,筛选并克隆PFA免疫调节相关基因 ,阐明PFA免疫调节的分子生物学机制。方法　以PFA处理Jurkat细胞 ,同时以生理盐水处理的相... 目的　应用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建膦甲酸钠 (PFA)处理的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库 ,筛选并克隆PFA免疫调节相关基因 ,阐明PFA免疫调节的分子生物学机制。方法　以PFA处理Jurkat细胞 ,同时以生理盐水处理的相同细胞作为对照 ;2 4h后制备细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行 2次消减杂交及 2次抑制性多聚酶链反应 (PCR)扩增 ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　成功构建了PFA处理淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到 4 6个阳性克隆 ,进行菌落PCR分析 ,均得到 2 0 0～ 1 0 0 0bp插入片段。挑取含有插入片段的 1 4个克隆进行测序 ,并通过生物信息学分析获得 1 1种已知基因序列和 3个未知基因。结论　应用SSH技术成功构建了PFA处理的淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库 。 展开更多
关键词 膦甲酸钠 免疫调节 抑制性消减杂交 基因克隆
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应用抑制性消减杂交技术研究甘草甜素免疫调节靶基因 被引量：4
11
作者 刘妍 成军 +5 位作者 白桂芹 张黎颖 纪冬 郭江 周静 肖炜 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期329-330,共2页
目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建甘草甜素刺激的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆甘草甜素免疫调节靶基因,阐明甘草甜素免疫调节的分子生物学机制。方法以甘草甜素刺激Jurkat细胞,同时以生理盐水刺激的相... 目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建甘草甜素刺激的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆甘草甜素免疫调节靶基因,阐明甘草甜素免疫调节的分子生物学机制。方法以甘草甜素刺激Jurkat细胞,同时以生理盐水刺激的相同细胞作为对照;24h后提取mRNA并逆转录为cDNA,进行抑制性消减杂交分析并构建cDNA消减文库,随机挑选文库克隆,PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果文库扩增后得到28个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1000bp插入片段。挑取含有插入片段的22个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得11种已知蛋白基因编码序列。主要包括IL-12、IL-18、胸腺素等免疫调节基因。结论应用SSH技术成功构建了甘草甜素处理的淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库。为进一步阐明甘草甜素的免疫调节机制及深入了解甘草甜素用于防治病毒性肝炎的药理作用机制提供了依据。 展开更多
关键词 甘草甜素 免疫调节 抑制性消减杂交 基因克隆
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应用抑制性消减杂交筛选大鼠不同程度肝纤维化的上调基因 被引量：5
12
作者 何天霖 吴志勇 +1 位作者 罗蒙 邱江锋 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期828-830,844,共4页
目的应用抑制消减杂交技术,筛选大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化和重度肝纤维化组织中差异表达的上调基因。方法利用抑制消减杂交技术,构建大鼠轻度肝纤维化和重度肝纤维化2个差异cDNA文库,并挑选36条上调显著的基因进行测序鉴定。结果... 目的应用抑制消减杂交技术,筛选大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化和重度肝纤维化组织中差异表达的上调基因。方法利用抑制消减杂交技术,构建大鼠轻度肝纤维化和重度肝纤维化2个差异cDNA文库,并挑选36条上调显著的基因进行测序鉴定。结果获得1152个克隆,其中有1036个含有插入片段。挑选32个克隆测序,与GenBank数据库进行初步比较,其中28条与已知基因的部分序列高度同源。结论应用抑制消减杂交技术成功构建了轻度肝纤维化和重度肝纤维化差异表达基因的cDNA削减文库,为进一步研究肝纤维化发生、发展和逆转的机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 抑制消减杂交 肝纤维化 基因
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应用抑制性消减杂交分离板栗短雄花序芽变相关基因 被引量：7
13
作者 朱晓琴 沈元月 +1 位作者 冯永庆 秦岭 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期340-343,共4页
利用抑制性消减杂交技术分离了板栗正常花序与芽变花序之间表达的差异cDNA片段。以芽变板栗雄花序cDNA为试验方(tester),以对照板栗雄花序cDNA为驱动方(driver),构建了一个板栗芽变花序消减文库。菌落PCR显示插入片段主要在100～1000 bp... 利用抑制性消减杂交技术分离了板栗正常花序与芽变花序之间表达的差异cDNA片段。以芽变板栗雄花序cDNA为试验方(tester),以对照板栗雄花序cDNA为驱动方(driver),构建了一个板栗芽变花序消减文库。菌落PCR显示插入片段主要在100～1000 bp,文库质量良好。通过对文库阳性克隆随机测序共得到了30个有效EST序列。利用Blast同源性比较,其中一些EST可能与板栗雄花序发育中变短的生物学形态形成密切相关,为后续板栗短雄花序芽变相关基因的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 板栗 短雄花序 抑制性消减杂交 CDNA文库 差异筛选
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黄瓜芽黄突变体抑制消减杂交文库的构建及初步分析 被引量：5
14
作者 李娟娟 陈福龙 +5 位作者 李鑫 王蕾 贾俊忠 陈远良 陈芳 高剑峰 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期905-910,共6页
利用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）分离了黄瓜芽黄突变体及其野生型之间差异表达的cDNA片段.以突变体和野生型分别作检测子和驱赶子,建立正向和反向两个消减杂交cDNA文库;经阳性克隆鉴定,在正向文库... 利用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）分离了黄瓜芽黄突变体及其野生型之间差异表达的cDNA片段.以突变体和野生型分别作检测子和驱赶子,建立正向和反向两个消减杂交cDNA文库;经阳性克隆鉴定,在正向文库中获得特异表达的阳性克隆有133个,在反向文库中得到的阳性克隆有73个.测序后将所得到的159条非重复且非黄瓜的ESTs（登录号：GH270133~GH270291）进行序列同源性比对分析,发现这些ESTs分别与叶绿素合成、光合系统、信号转导、转录因子、氨基酸代谢、糖类代谢、脂类代谢等相关酶及蛋白基因高度同源. 展开更多
关键词 黄瓜 芽黄突变体 抑制消减杂交 差异表达基因
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应用抑制性消减杂交技术分析涎腺腺样囊性癌转移相关基因 被引量：5
15
作者 秦兴军 张恩礁 +4 位作者 杨捷琳 王绪凯 孙长伏 李瑞武 关晓峰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期392-394,共3页
目的:克隆涎腺腺样囊性癌转移相关的基因。方法:应用mRNA抑制性消减杂交技术,研究涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达上的差异。结果:以高转移细胞ACC-M为测试子,低转移细胞ACC-2为驱赶子,获得高表达的基因序列有7个,均为已知序列... 目的:克隆涎腺腺样囊性癌转移相关的基因。方法:应用mRNA抑制性消减杂交技术,研究涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达上的差异。结果:以高转移细胞ACC-M为测试子,低转移细胞ACC-2为驱赶子,获得高表达的基因序列有7个,均为已知序列同源基因。其中XAGE-1b基因为肿瘤睾丸抗原家族中的一个重要基因。结论:与ACC-2相比ACC-M中部分基因的高表达与涎腺腺样囊性癌高转移特性的获得有关,此结果为进一步探索腺样囊性癌肿瘤转移分子机理以及肿瘤转移控制和基因治疗提供了重要的依据。 展开更多
关键词 涎腺腺样囊性癌 抑制性消减杂交 肿瘤转移
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应用抑制性消减杂交法筛选与红曲菌产桔霉素相关的基因 被引量：8
16
作者 赖卫华 许杨 +1 位作者 熊勇华 李燕萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第3期63-66,共4页
为了筛选与红曲菌产桔霉素相关的基因,应用抑制性消减杂交(SSH)构建了两个红曲菌的cDNA消减文库。利用分子生物学软件从这两个文库中找出八条同源序列,通过Blast软件对这八条序列进行分析,结果显示,它们可能是新的基因片段,递交后被Genb... 为了筛选与红曲菌产桔霉素相关的基因,应用抑制性消减杂交(SSH)构建了两个红曲菌的cDNA消减文库。利用分子生物学软件从这两个文库中找出八条同源序列,通过Blast软件对这八条序列进行分析,结果显示,它们可能是新的基因片段,递交后被Genbank接收。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 基因 Blast软件 筛选 CDNA消减文库 红曲 分子生物学 桔霉素
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应用抑制性消减杂交技术筛选XTP3的反式激活基因 被引量：3
17
作者 王春花 成军 +3 位作者 闫惠平 闫杰 石英 程胜禹 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期127-129,共3页
目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库 ,克隆XTP3反式激活相关基因。方法　以XTP3表达质粒pcDNA3 1(- ) XTP3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ;制备转染后的细胞裂... 目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库 ,克隆XTP3反式激活相关基因。方法　以XTP3表达质粒pcDNA3 1(- ) XTP3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaⅠ酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　文库扩增后得到 30个白色克隆 ,经菌落PCR分析 ,得到 2 3个 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。对所得片段测序 ,并进行同源性分析 ,共得到 2 0种已知基因序列和 2种未知功能基因序列 ,可能是XTP3反式激活靶基因。结论　成功构建了乙型肝炎病毒XTP3反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 克隆 XTP3 反式激活
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应用抑制消减杂交技术构建耐多药结核杆菌差异表达基因消减cDNA文库 被引量：4
18
作者 张运玲 郑改焕 +4 位作者 刘芮汐 彭哲 李奇志 幸琳琳 朱朝敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期868-872,共5页
目的:构建结核杆菌耐多药株与敏感株的差异表达消减cDNA文库,进一步探索结核杆菌耐多药的分子机制。方法:以耐多药菌株cDNA为实验组(Tester),敏感株cDNA为驱动组(Driver)应用抑制消减杂交(Suppression subtractive hybridiza-tion,SSH)... 目的:构建结核杆菌耐多药株与敏感株的差异表达消减cDNA文库,进一步探索结核杆菌耐多药的分子机制。方法:以耐多药菌株cDNA为实验组(Tester),敏感株cDNA为驱动组(Driver)应用抑制消减杂交(Suppression subtractive hybridiza-tion,SSH)技术结合T/A克隆技术构建结核杆菌耐多药株与敏感株的差异表达消减cDNA文库。结果:成功构建了耐多药结核菌株差异表达消减cDNA文库,获得113个差异表达cDNA片段。结论:研究表明SSH技术是筛选新功能基因的有效方法;多种已知或未知基因均参与了结核杆菌耐多药的调节,大规模筛选与克隆这些基因为进一步研究结核杆菌耐多药机制的产生奠定了必要的理论基础。 展开更多
关键词 结核杆菌 抑制消减杂交 耐多药 差异表达基因
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谷子十里香抗锈抑制消减杂交文库构建及初步分析 被引量：3
19
作者 李志勇 贾丽霞 +5 位作者 董立 王楠 白辉 全建章 刘磊 董志平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期126-130,共5页
为了研究十里香抗锈分子机理及其调控机制。以谷子抗锈十里香接种12,24,48,72,96 h叶片为材料,利用抑制差减杂交技术,构建了谷锈菌诱导的SSH文库,筛选十里香接种与未接种锈菌差异表达的基因片段,通过GenBank进行同源比对,对差异表达基... 为了研究十里香抗锈分子机理及其调控机制。以谷子抗锈十里香接种12,24,48,72,96 h叶片为材料,利用抑制差减杂交技术,构建了谷锈菌诱导的SSH文库,筛选十里香接种与未接种锈菌差异表达的基因片段,通过GenBank进行同源比对,对差异表达基因进行功能注释,并利用荧光定量PCR技术对部分差异表达片段进行表达分析。随机挑取差减文库中阳性克隆测序,共获得368个EST序列,插入片段大小为200-750 bp,通过网上Gen Bank非冗余数据库比对分析,发现其中32个EST与抗病相关。对与抗病相关的EST分析,推测WRKY转录因子、MAPK信号途径、钙信号途径、谷胱甘肽-S-转移酶、细胞色素P450、病程相关蛋白等可能参与了十里香与谷锈菌非亲和互作。进一步利用荧光定量PCR技术对SSH文库中4个基因做了表达分析,结果表明这些基因均受锈菌诱导表达。通过构建十里香受锈菌诱导的SSH文库,初步明确了十里香参与抗锈相关的基因,为下步谷子抗锈分子育种奠定基础。 展开更多
关键词 抑制消减杂交 谷锈 谷子 表达序列标签
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抑制消减杂交技术筛选鹅产蛋期差异表达基因 被引量：5
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作者 郭军 章双杰 +3 位作者 邹剑敏 陆火林 苏建东 汤青萍 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第8期4710-4713,共4页
[目的]鉴定筛选鹅产蛋与就巢差异表达基因。[方法]应用抑制消减杂交技术构建鹅产蛋与就巢鹅卵巢组织双向cDNA文库,获得差异表达基因。[结果]从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析... [目的]鉴定筛选鹅产蛋与就巢差异表达基因。[方法]应用抑制消减杂交技术构建鹅产蛋与就巢鹅卵巢组织双向cDNA文库,获得差异表达基因。[结果]从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好。选取654个阳性克隆进行测序分析,获得641条表达序列标签(ESTs)。对ESTs进行去除载体序列、质量检测、聚类及拼接,经Blast比对,有166条ESTs找到与之匹配的同源序列,其中92个是功能基因。[结论]比较就巢与产蛋SSH文库,发现产蛋特异性基因文库中参与物质能量代谢、细胞防御的基因较多,而在就巢SSH库中参与细胞凋亡、信号转导及细胞结构的基因出现频率较高。该结果对进一步研究鹅卵泡发育及繁殖力分子标记筛选打下了基础。 展开更多
关键词 鹅 繁殖性能 卵巢 抑制消减杂交技术 表达序列标签
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