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海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析被引量：4: 1; 作者张稚兰刘静雯 +2 位作者董双林苏国成张彦锋《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期152-158,共7页; 在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量... 展开更多; 关键词海洋球石藻病毒(ehv) 病毒主要外壳蛋白(MCP) 基因克隆与序列分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒硫氧还蛋白(TRX)基因的克隆及生物信息学分析被引量：5: 2; 作者张彦锋刘静雯 +1 位作者张稚兰董双林《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期293-300,共8页; 首次从海洋球石藻病毒(Emiliania huxleyi virus-EhV99B1)中克隆了硫氧还蛋白(Trx)基因(该序列已提交GenBank,登录号:GU109280)。系统进化关系分析表明:EhV99B1-Trx与GenBank中已报道的EhV86-Trx(NC_007346)有很高的同源性,核酸及其推... 展开更多; 关键词海洋球石藻病毒(ehv) 硫氧还蛋白(Trx) 基因克隆及生物信息学分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

海洋球石藻病毒(Coccolithovirus)硫氧还蛋白(Trx)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达及其活性分析被引量：1: 3; 作者蔡艺钦张稚兰 +1 位作者罗邦彬刘静雯《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期905-910,共6页; 从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编... 展开更多; 关键词海洋球石藻病毒(ehv) 硫氧还蛋白毕赤酵母分泌表达活性分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

病毒感染海洋球石藻Emiliania huxleyi的转录组分析被引量：2: 4; 作者田雪蔡伟聪 +2 位作者苏金净吴书燕刘静雯《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期103-112,共10页; 海洋球石藻Emiliania huxleyi及其特异性裂解病毒E.huxleyi virus(EhVs)在调节海洋碳、硫循环及全球气候变化中起着重要作用,也是开展真核生物病毒–宿主相互作用研究的良好模型系统之一。为了探究病毒感染条件下E.huxleyi基因表达水平... 展开更多; 关键词海洋球石藻Emiliania huxleyi 病毒感染转录组差异表达基因 QRT-PCR 氧化应激反应; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析被引量：1: 5; 作者李丽华邱健健 +2 位作者蔡艺钦于鹏刘静雯《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期101-110,共10页; 从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重... 展开更多; 关键词海洋球石藻病毒丝氨酸蛋白酶基因克隆重组表达活性分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析被引量：4: 1; 作者张稚兰刘静雯董双林苏国成张彦锋; 机构集美大学生物工程学院中国海洋大学教育部水产养殖重点实验室; 出处《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期152-158,共7页; 基金 “十一五”国家科技支撑计划重大项目子课题,2006BAD09A06号福建省自然科学基金项目,D0710020号厦门大学近海海洋环境科学国家重点实验室开放基金项目,MEL0608号; 文摘在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量高纯度的病毒颗粒。根据已报道的其它EhV株系主要外壳蛋白(MCP)基因内保守片段设计合成一对特异引物,从EhV-99B1病毒基因组中克隆到了长度约为300bp的病毒外壳蛋白基因保守片段。该片段与pBS-T载体连接后转化Escherichia coli DH5α,对筛选到的阳性克隆进行序列测定与分析。结果表明,该克隆片段与GenBank中EhV163(AF453851)分离株的同源性最高,该区域内的核苷酸与对应推导的氨基酸序列同源性均为100%,证实获得的DNA片段是EhV-99B1的外壳蛋白基因;与EhV203(AF453855)分离株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较低,分别为93%和100%。表明该病毒在自然海域中分布广泛并具有一定的多态性,同时在进化上也存在相当的复杂性。因此,MCP基因可以作为一种新的分子遗传标记以区分自然群落中EhV的不同基因型,对于理解海洋球石藻类病毒与宿主之间复杂的相互作用关系将是一个十分有价值的工具。; 关键词海洋球石藻病毒(ehv) 病毒主要外壳蛋白(MCP) 基因克隆与序列分析; Keywords Emiliania huxleyi virus （ehv）, Major capsid protein （MCP）, Gene clone and sequence analysis; 分类号 Q943 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒硫氧还蛋白(TRX)基因的克隆及生物信息学分析被引量：5: 2; 作者张彦锋刘静雯张稚兰董双林; 机构集美大学生物工程学院中国海洋大学教育部水产养殖重点实验室; 出处《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期293-300,共8页; 基金 "十一五"国家科技支撑计划重大项目子课题 2006BAD09A06号 +1 种基金 2008A002号; 文摘首次从海洋球石藻病毒(Emiliania huxleyi virus-EhV99B1)中克隆了硫氧还蛋白(Trx)基因(该序列已提交GenBank,登录号:GU109280)。系统进化关系分析表明:EhV99B1-Trx与GenBank中已报道的EhV86-Trx(NC_007346)有很高的同源性,核酸及其推导的氨基酸序列的同源性分别为98%和100%,而与其它物种的Trx序列同源性仅为9.8%-18.8%。采用生物信息学方法和工具分析了EhV99B1-Trx的生化参数,预测了该蛋白的高级结构。结果表明:(1)EhV99B1-Trx基因的开放阅读框全长591bp,编码196个氨基酸,蛋白的相对分子量为22.1kDa,理论等电点为5.27;(2)EhV-99B1-Trx N端蛋白结构域具有保守的Cys-Gly-Pro-Cys(CGPC)硫氧还蛋白氧化还原活性位点氨基酸基序;(3)对该蛋白二、三级结构分析预测结果进一步证实EhV99B1-Trx基因编码的为一种新型的硫氧还蛋白家族成员。; 关键词海洋球石藻病毒(ehv) 硫氧还蛋白(Trx) 基因克隆及生物信息学分析; Keywords Emiliania huxleyi virus （ehv）, Thioredoxin （Trx）, Gene clone and bioinformatics; 分类号 Q943 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名海洋球石藻病毒(Coccolithovirus)硫氧还蛋白(Trx)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达及其活性分析被引量：1: 3; 作者蔡艺钦张稚兰罗邦彬刘静雯; 机构集美大学生物工程学院; 出处《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期905-910,共6页; 基金福建省自然科学基金项目 2010J01261号 +1 种基金 2010A007号; 文摘从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编码197个氨基酸;在毕赤酵母GS115中成功诱导表达重组EhV-Trx,经SDS-PAGE分析目的蛋白分子量约为27.8kDa;重组EhV-Trx具有二硫键还原酶的活性,能有效打开胰岛素A、B两条链的二硫键,有望开发成一种新型的硫氧还蛋白脱敏制剂应用于食品安全领域。; 关键词海洋球石藻病毒(ehv) 硫氧还蛋白毕赤酵母分泌表达活性分析; Keywords Emiliania huxleyi virus （ehv）, Thioredoxin （Trx）, Pichia pastoris, Secreted expression, Activity analysis; 分类号 Q943 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名病毒感染海洋球石藻Emiliania huxleyi的转录组分析被引量：2: 4; 作者田雪蔡伟聪苏金净吴书燕刘静雯; 机构集美大学食品与生物工程学院福建省食品微生物与酶工程重点实验室; 出处《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期103-112,共10页; 基金国家自然科学基金项目（41576166）福建省自然科学基金项目（2019J01696）; 文摘海洋球石藻Emiliania huxleyi及其特异性裂解病毒E.huxleyi virus(EhVs)在调节海洋碳、硫循环及全球气候变化中起着重要作用,也是开展真核生物病毒–宿主相互作用研究的良好模型系统之一。为了探究病毒感染条件下E.huxleyi基因表达水平的变化,以海洋球石藻E.huxley–BOF 92及其专一性裂解病毒EhV-99B1为研究对象,利用Illumina HiSeq 2000高通量测序技术,分别对E.huxleyi病毒感染组(Exp)和非感染对照组(Con)6 h和45 h的藻细胞样品进行转录组测序分析。共得到32909条平均长度为1153 bp的基因。病毒感染6 h和45 h分别得到2617和5229个差异表达基因,其中共差异表达基因465个。随机选取10条差异表达基因,采用qRT-PCR进行实验验证,结果证实转录组分析可靠。GO功能注释和KEGG通路富集,发现大量基因与氧化应激反应、脂类代谢、碳水化合物代谢及信号转导等代谢过程相关,其中变化最显著的是谷胱甘肽代谢途径。从病毒感染球石藻转录组中筛选出部分与氧化应激反应相关的基因,其中9个基因显著上调,11个基因显著下调,表明宿主能够通过体内的氧化应激反应响应病毒胁迫。; 关键词海洋球石藻Emiliania huxleyi 病毒感染转录组差异表达基因 QRT-PCR 氧化应激反应; Keywords Emiliania huxleyi virus infection transcriptome sequencing differentially expressed genes qRT-PCR oxidative stress; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析被引量：1: 5; 作者李丽华邱健健蔡艺钦于鹏刘静雯; 机构集美大学食品与生物工程学院福建省高校食品微生物与酶工程技术研究中心; 出处《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期101-110,共10页; 基金国家海洋公益性行业专项(201305027); 文摘从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重组 Sp。结果表明：EhV99B1-Sp 基因的 ORF 为1110 bp，编码368个氨基酸，蛋白相对分子质量为39．5 kDa；该基因片段与 GenBank 中 EhV86-Sp 的同源性很高，核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为95％和97％，而与其他物种 Sp 序列的同源性仅为28％～32％，说明其可能是丝氨酸蛋白酶家族中的一个新成员；预测的二级结构特征显示EhV99B1-Sp 的蛋白结构域中具有典型的 LTAGHC （组氨酸活性位点区域）和 AICNGDSGGPLF（丝氨酸活性位点区域）两个丝氨酸蛋白酶催化活性位点的氨基酸基序，是一个两次跨膜蛋白；将该基因在大肠杆菌中进行低温诱导表达，得到分子量为60 kDa 的重组蛋白，经鲤鱼肌肉丝氨酸蛋白酶（MB-SP）抗体检测证实为 Sp，且重组蛋白在大肠杆菌细胞中具有明显的生物学活性。本研究结果为进一步探讨 EhV99B1-Sp 在病毒与宿主相互作用过程中的调节作用及其功能与应用奠定基础。; 关键词海洋球石藻病毒丝氨酸蛋白酶基因克隆重组表达活性分析; Keywords Emiliania huxleyi virus （ehv） serine protease （Sp） gene clone recombinant expression activityanalysis; 分类号 Q939.4 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析	张稚兰刘静雯董双林苏国成张彦锋	《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心	2009	4	在线阅读下载PDF 职称材料
2	海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒硫氧还蛋白(TRX)基因的克隆及生物信息学分析	张彦锋刘静雯张稚兰董双林	《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心	2010	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	海洋球石藻病毒(Coccolithovirus)硫氧还蛋白(Trx)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达及其活性分析	蔡艺钦张稚兰罗邦彬刘静雯	《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	病毒感染海洋球石藻Emiliania huxleyi的转录组分析	田雪蔡伟聪苏金净吴书燕刘静雯	《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心	2019	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析	李丽华邱健健蔡艺钦于鹏刘静雯	《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	1	在线阅读下载PDF 职称材料