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Agtpbp1基因敲除小鼠模型的构建及初步表型分析
1
作者
常越
宋婧源
+5 位作者
杨晨曦
宋呼德尔
鲁厚可
张传领
任建军
肖瑞
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第7期1449-1456,共8页
目的:采用CRISPR/Cas9技术构建并繁育出携带ATP/GTP结合羧肽酶1(Agtpbp1)基因敲除纯合子(Agtpbp1-/-)不育模型小鼠,为后续探究Agtpbp1基因在雄性不育中的发病机制提供动物模型。方法:采用CRISPR/Cas9技术,根据Agtpbp1基因的主要蛋白功...
目的:采用CRISPR/Cas9技术构建并繁育出携带ATP/GTP结合羧肽酶1(Agtpbp1)基因敲除纯合子(Agtpbp1-/-)不育模型小鼠,为后续探究Agtpbp1基因在雄性不育中的发病机制提供动物模型。方法:采用CRISPR/Cas9技术,根据Agtpbp1基因的主要蛋白功能区域的数据结果并结合Cas9核酸酶以此获取Agtpbp1基因敲除杂合子(Agtpbp1^(+/-))小鼠。将所获得杂合子小鼠雌雄交配,对其后代使用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。利用RT-PCR、Western blot和免疫组化染色检测Agtpbp1在不同水平上的表达情况,佐证鉴定结果。HE染色观察小鼠小脑及眼球结构以此来分析Agtpbp1基因敲除对浦肯野细胞和光感受器细胞的影响。结合行为学测试观察小鼠的共济失调症状。观察小鼠生长情况,分析雄性小鼠睾丸组织体积及重量变化,HE染色观察睾丸结构变化,PAS染色观察睾丸生殖细胞周期变化,最后利用精子分析仪分析小鼠精子活力,以此来分析小鼠的生长发育情况。结果:杂合子雌雄小鼠可继续交配,后代可获得3种基因型:Agtpbp1野生型(Agtpbp1+/+)、Agtpbp1^(+/-)和Agtpbp1-/-,用PCR成功鉴定出子代小鼠的基因型。RT-PCR、Western blot和免疫组化染色分别在不同水平验证Agtpbp1-/-小鼠模型构建成功(P<0.05)。HE染色结果显示,Agtpbp1-/-小鼠小脑中丢失浦肯野细胞且眼球中感光细胞数量减少。行为学测试证实,Agtpbp1-/-小鼠存在运动功能障碍、动作不协调等共济失调症状。与对照组相比,Agtpbp1-/-小鼠睾丸体积和重量均显著降低。HE染色观察到Agtpbp1-/-小鼠睾丸中极少量精子出现,结合精子分析仪观察到该小鼠精子无论是活率、活力还是运动速率,均显著低于对照组。睾丸切片PAS染色结果显示,Agtpbp1-/-小鼠精子发生周期发生阻滞。结论:本研究成功繁育出Agtpbp1全身敲除模型小鼠。Agtpbp1的缺失引起成年雄性小鼠生精细胞分化阻滞,精子活力降低而出现不育。本研究为进一步探究Agtpbp1引起雄性不育的分子机制提供了新的实验工具。
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关键词
Agtpbp1基因
浦肯野细胞变性
CRISPR/Cas9技术
精子发生
雄性不育
在线阅读
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职称材料
usp9y与Nna1基因的相互作用及对精子发生的影响
被引量：
3
2
作者
李文秀
高迎春
+4 位作者
李蕊秀
刘静
吴家栋
边艳超
肖瑞
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2019年第8期1222-1226,共5页
目的探究usp9y与引起该小鼠不育表型的突变基因Nna1之间的关系,以及该基因在精子发生中的影响。方法用分子克隆法构建pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)真核表达载体,转染到HEK293T细胞中,检测其表达;将pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)和pCMV-Myc-N...
目的探究usp9y与引起该小鼠不育表型的突变基因Nna1之间的关系,以及该基因在精子发生中的影响。方法用分子克隆法构建pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)真核表达载体,转染到HEK293T细胞中,检测其表达;将pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)和pCMV-Myc-Nna1共转染至HEK293T细胞中,通过免疫共沉淀法分析usp9y和Nna1蛋白之间的相互作用;运用单基因表达谱法研究浦肯野细胞变性(pcd)小鼠中usp9y基因、与精子发生相关基因和信号通路关键因子的表达。结果 usp9y与Nna1可形成免疫沉淀复合物;pcd3J突变型小鼠睾丸组织中Nna1表达下调,usp9y表达量明显增高。结论二者之间存在一定的相互作用,可能共同参与小鼠的精子发生,但作用方式不明确;NF-κB细胞信号通路等可能参与了pcd小鼠的精子发生。
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关键词
usp9y基因
Nna1基因
浦肯野细胞变性
小鼠
雄性不育
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职称材料
题名
Agtpbp1基因敲除小鼠模型的构建及初步表型分析
1
作者
常越
宋婧源
杨晨曦
宋呼德尔
鲁厚可
张传领
任建军
肖瑞
机构
内蒙古医科大学内蒙古自治区分子病理学重点实验室
内蒙古医科大学药学院
内蒙古医科大学附属医院肝胆胰脾外科
出处
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第7期1449-1456,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.31760304)
内蒙古医科大学校级重点项目(No.YKD2022ZD018)。
文摘
目的:采用CRISPR/Cas9技术构建并繁育出携带ATP/GTP结合羧肽酶1(Agtpbp1)基因敲除纯合子(Agtpbp1-/-)不育模型小鼠,为后续探究Agtpbp1基因在雄性不育中的发病机制提供动物模型。方法:采用CRISPR/Cas9技术,根据Agtpbp1基因的主要蛋白功能区域的数据结果并结合Cas9核酸酶以此获取Agtpbp1基因敲除杂合子(Agtpbp1^(+/-))小鼠。将所获得杂合子小鼠雌雄交配,对其后代使用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。利用RT-PCR、Western blot和免疫组化染色检测Agtpbp1在不同水平上的表达情况,佐证鉴定结果。HE染色观察小鼠小脑及眼球结构以此来分析Agtpbp1基因敲除对浦肯野细胞和光感受器细胞的影响。结合行为学测试观察小鼠的共济失调症状。观察小鼠生长情况,分析雄性小鼠睾丸组织体积及重量变化,HE染色观察睾丸结构变化,PAS染色观察睾丸生殖细胞周期变化,最后利用精子分析仪分析小鼠精子活力,以此来分析小鼠的生长发育情况。结果:杂合子雌雄小鼠可继续交配,后代可获得3种基因型:Agtpbp1野生型(Agtpbp1+/+)、Agtpbp1^(+/-)和Agtpbp1-/-,用PCR成功鉴定出子代小鼠的基因型。RT-PCR、Western blot和免疫组化染色分别在不同水平验证Agtpbp1-/-小鼠模型构建成功(P<0.05)。HE染色结果显示,Agtpbp1-/-小鼠小脑中丢失浦肯野细胞且眼球中感光细胞数量减少。行为学测试证实,Agtpbp1-/-小鼠存在运动功能障碍、动作不协调等共济失调症状。与对照组相比,Agtpbp1-/-小鼠睾丸体积和重量均显著降低。HE染色观察到Agtpbp1-/-小鼠睾丸中极少量精子出现,结合精子分析仪观察到该小鼠精子无论是活率、活力还是运动速率,均显著低于对照组。睾丸切片PAS染色结果显示,Agtpbp1-/-小鼠精子发生周期发生阻滞。结论:本研究成功繁育出Agtpbp1全身敲除模型小鼠。Agtpbp1的缺失引起成年雄性小鼠生精细胞分化阻滞,精子活力降低而出现不育。本研究为进一步探究Agtpbp1引起雄性不育的分子机制提供了新的实验工具。
关键词
Agtpbp1基因
浦肯野细胞变性
CRISPR/Cas9技术
精子发生
雄性不育
Keywords
Agtpbp1 gene
Purkinje cell degeneration
CRISPR/Cas9 system
spermatogenesis
male sterility
分类号
R698.2 [医药卫生—泌尿科学]
R363.2 [医药卫生—病理学]
Q754 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
usp9y与Nna1基因的相互作用及对精子发生的影响
被引量：
3
2
作者
李文秀
高迎春
李蕊秀
刘静
吴家栋
边艳超
肖瑞
机构
内蒙古医科大学内蒙古自治区分子病理重点实验室
内蒙古自治区赤峰市医院病理科
出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2019年第8期1222-1226,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:31260260
31760304)
内蒙古自治区自然科学基金项目(编号:2015MS0372)
文摘
目的探究usp9y与引起该小鼠不育表型的突变基因Nna1之间的关系,以及该基因在精子发生中的影响。方法用分子克隆法构建pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)真核表达载体,转染到HEK293T细胞中,检测其表达;将pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)和pCMV-Myc-Nna1共转染至HEK293T细胞中,通过免疫共沉淀法分析usp9y和Nna1蛋白之间的相互作用;运用单基因表达谱法研究浦肯野细胞变性(pcd)小鼠中usp9y基因、与精子发生相关基因和信号通路关键因子的表达。结果 usp9y与Nna1可形成免疫沉淀复合物;pcd3J突变型小鼠睾丸组织中Nna1表达下调,usp9y表达量明显增高。结论二者之间存在一定的相互作用,可能共同参与小鼠的精子发生,但作用方式不明确;NF-κB细胞信号通路等可能参与了pcd小鼠的精子发生。
关键词
usp9y基因
Nna1基因
浦肯野细胞变性
小鼠
雄性不育
Keywords
usp9y gene
Nna1 gene
pcd mouse
male sterility
分类号
R698.2 [医药卫生—泌尿科学]
R-332 [医药卫生]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Agtpbp1基因敲除小鼠模型的构建及初步表型分析
常越
宋婧源
杨晨曦
宋呼德尔
鲁厚可
张传领
任建军
肖瑞
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
usp9y与Nna1基因的相互作用及对精子发生的影响
李文秀
高迎春
李蕊秀
刘静
吴家栋
边艳超
肖瑞
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2019
3
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职称材料
已选择
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