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重组慢病毒载体的构建及其感染人脐带间充质干细胞的研究
1
作者
刘思征
赖秀蓝
+9 位作者
陈元国
贺谷雨
Martín Maldonado
林丽敏
谢丽春
吴卫照
黄天华
蔡志伟
刘必刚
马廉
《中国小儿血液与肿瘤杂志》
CAS
2014年第1期14-20,共7页
目的 利用包装制备的重组慢病毒载体感染人脐带间充质干细胞,为后续的细胞重编程奠定基础.方法 利用组织块贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞（HUMSC）.携带目的基因（oct4、sox2、klf4、c-myc）及绿色荧光蛋白的质粒经验证...
目的 利用包装制备的重组慢病毒载体感染人脐带间充质干细胞,为后续的细胞重编程奠定基础.方法 利用组织块贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞（HUMSC）.携带目的基因（oct4、sox2、klf4、c-myc）及绿色荧光蛋白的质粒经验证、扩增后,转染HEK-293T细胞,制备携带上述基因的慢病毒上清液.荧光显微镜下梯度稀释法检测病毒滴度.慢病毒液感染3～5代生长良好的HUMSC,荧光显微镜及流式细胞术检测病毒感染力,RT-PCR及定量PCR检测目的基因mRNA水平.结果 成功验证、扩增携带目的基因的质粒.制备的新鲜病毒液滴度达5×108U/mL,冻存后降为5×106 U/ml.重组慢病毒感染HUMSC的感染力高于80％,4种目的基因的表达均明显高于对照.结论 重组慢病毒载体可以在体外高效的转染HUMSC,并稳定表达目的基因,是HUMSC重编程的有效基因转移载体.
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关键词
重组慢病毒载体
基因转染
人脐带间充质干细胞
绿色荧光蛋白
浓度梯度稀释法
细胞重编程
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职称材料
题名
重组慢病毒载体的构建及其感染人脐带间充质干细胞的研究
1
作者
刘思征
赖秀蓝
陈元国
贺谷雨
Martín Maldonado
林丽敏
谢丽春
吴卫照
黄天华
蔡志伟
刘必刚
马廉
机构
汕头大学医学院第二附属医院儿科
汕头大学医学院第二附属医院转化医学中心
出处
《中国小儿血液与肿瘤杂志》
CAS
2014年第1期14-20,共7页
基金
国家自然科学基金(81070478)
文摘
目的 利用包装制备的重组慢病毒载体感染人脐带间充质干细胞,为后续的细胞重编程奠定基础.方法 利用组织块贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞（HUMSC）.携带目的基因（oct4、sox2、klf4、c-myc）及绿色荧光蛋白的质粒经验证、扩增后,转染HEK-293T细胞,制备携带上述基因的慢病毒上清液.荧光显微镜下梯度稀释法检测病毒滴度.慢病毒液感染3～5代生长良好的HUMSC,荧光显微镜及流式细胞术检测病毒感染力,RT-PCR及定量PCR检测目的基因mRNA水平.结果 成功验证、扩增携带目的基因的质粒.制备的新鲜病毒液滴度达5×108U/mL,冻存后降为5×106 U/ml.重组慢病毒感染HUMSC的感染力高于80％,4种目的基因的表达均明显高于对照.结论 重组慢病毒载体可以在体外高效的转染HUMSC,并稳定表达目的基因,是HUMSC重编程的有效基因转移载体.
关键词
重组慢病毒载体
基因转染
人脐带间充质干细胞
绿色荧光蛋白
浓度梯度稀释法
细胞重编程
Keywords
Recombinant lentiviral vector
Gene transfection
Human umbilical cord mesenchymalstem cells
Green fluorescent protein
Cell reprogramming
分类号
R725 [医药卫生—儿科]
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发文年
被引量
操作
1
重组慢病毒载体的构建及其感染人脐带间充质干细胞的研究
刘思征
赖秀蓝
陈元国
贺谷雨
Martín Maldonado
林丽敏
谢丽春
吴卫照
黄天华
蔡志伟
刘必刚
马廉
《中国小儿血液与肿瘤杂志》
CAS
2014
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