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制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
1
作者
汪惠
赖百塘
+4 位作者
李伟英
杨学惠
张春燕
韦攀健
李金照
《中国肺癌杂志》
CAS
2010年第5期470-476,共7页
背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺...
背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot,FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)表达。方法利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达。结果测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失。Ad-(empty carrier)无p53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier)。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。
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关键词
野生型P53
缺失C-末端p53
3’端非编码区
重组腺病毒
流式细胞仪散点图
绿荧光蛋白表达
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职称材料
题名
制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
1
作者
汪惠
赖百塘
李伟英
杨学惠
张春燕
韦攀健
李金照
机构
北京市结核病胸部肿瘤研究所
中国科学院生物物理所
出处
《中国肺癌杂志》
CAS
2010年第5期470-476,共7页
基金
北京市科委(No.954830600)资助~~
文摘
背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot,FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)表达。方法利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达。结果测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失。Ad-(empty carrier)无p53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier)。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。
关键词
野生型P53
缺失C-末端p53
3’端非编码区
重组腺病毒
流式细胞仪散点图
绿荧光蛋白表达
Keywords
Wild type p53
Deletion C-terminal p53
3’Untranslation region
Recombinant deficient adenoviruses
Flow cytometry scatter plot
Expression of green fluorescence protein
分类号
R73-3 [医药卫生—肿瘤]
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作者
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1
制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达
汪惠
赖百塘
李伟英
杨学惠
张春燕
韦攀健
李金照
《中国肺癌杂志》
CAS
2010
0
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